صعوبة ثقافة كامبيلوباكتر منعت الدراسات الأساسية مثل كيفية وجود حاجة قليلة للبكتيريا لإنتاج المرض. ويمكن لهذه العينات التحليلية والمفتعلة المستخدمة هنا أن تعالج هذه المسألة. هذه التقنية تسمح الأعراض السريرية ذات الصلة المريض أن تكون مرتبطة مع نتيجة إيجابية ثقافة البراز وللمرة الأولى، وعدد فعلي من البكتيريا.
إن تعلم عدد البكتيريا المرتبطة بالمرض سيوفر تشخيصًا ، وهو هدف مهم للكشف وطريقة قوية لمقارنة الفوعة بين سلالات أو أنواع Campylobacter. ثقافة Campylobacter واضحة ولكنها تتطلب إعدادًا سريعًا ومنظمًا للحفاظ على الجدوى الكمية. وهناك حاجة أيضا حكم كبير لتحديد مستعمرات Campylobacter بين النباتات البراز المتنافسة على طبق من ذهب.
قبل البدء في ثقافة C.jejuni أو C.coli ، وضع على القفازات ، ومعطف المختبر ، ونظارات السلامة ، ووضع ورقة واقية يمكن التخلص منها داخل غطاء أمان تدفق لارينار المطهر. باستخدام سلسلة تقنية معقمة كل مرطب البكتيريا رطب أو المذاب على لوحة أجار Campylobacter محددة ووضع لوحة في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في جرة لاهوائية تحتوي على غاز الغلاف الجوي ميكروهوائي توليد كيس. بعد 24 ساعة، تغطية فضفاضة قارورة من مرق BHI ووضع قارورة في جرة لاهوائية جديدة مع كيس من شأنها أن تنتج بيئة ميكروهوائية لاحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
في صباح اليوم التالي استخدام ثلاثة ملليلتر من مرق ما قبل تخفيض وحلقة تلقيح لكشط لوحة بداية من ثقافة Campylobacter. نقل الطين إلى أنبوب معقمة، وتطعيم 97 ملليلتر المتبقية من مرق ما قبل تخفيض مع ثلاثة ملليلتر من الطين كشط. ضع المرق في الجرة مع كيس الغاز واحتضان الثقافة عند 37 درجة مئوية و115 ثورة في الدقيقة على حاضنة اهتزاز لمدة 48 إلى 72 ساعة ، حتى تصل الثقافة إلى كثافة بصرية عند 600 نانومتر لا يزيد عن 4.
لتحديد عدد من البكتيريا في هذه الثقافة الأسهم النقية أداء ثمانية 10 أضعاف سلسلة التخفيف من 100 ميكرولتر من مرق في 900 ميكرولترات من التخفيف. باستخدام الخرز الطلاء العقيم، انتشرت 100 ميكرولترات من 10 مرات إلى الخامسة السلبية إلى 10 إلى التخفيفات السابعة السلبية على لوحات كامبيلوباكت مكررة محددة قبل تخفيض ولوحات التسمية مع تركيز التخفيف قبل وضع لوحات في جرة لاهوائية ثانية مع كيس الغاز توليد لمدة 48 إلى 72 ساعة في 37 درجة مئوية. في النهاية من النموّ فترة ينتقي لوحات مع بين 30 إلى 300 مستعمرات لعدّ.
بعد عد استخدام العد لتحديد وحدات تشكيل مستعمرة لكل ملليلتر من الأسهم مرق الثقافة وفقا للصيغة. من المهم أن تكون تعدادات المستعمرة التحليلية دقيقة لأن هذا يدعم جميع الخطوات باستخدام بركة البراز ارتفعت. مباشرة بعد الطلاء للعد كما هو مبين، مزيج كميات متساوية من مرق وكامبيلوباكت حمام البراز السلبية وجعل تسعة اللاحقة اثنين من عمليات التخفيف في بركة البراز السلبية، إضافة لوحة التحكم مع مرق تحتوي على أي Campybacter إلى بركة البراز للمساعدة في تحديد المستعمرات غير Campylobacter.
خط 10 microliters من كل Campylobacter البراز التخفيف على مكررة قبل خفض لوحات أجار كامبيلوباكت محددة واحتضان لوحات في جرة اللاهوائية مع كيس توليد الغاز في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة تقريبا. في نهاية الحضانة فحص بصريا لوحات متشدّد للمستعمرات تشبه تلك من الثقافات كامبيلوباكتر نقية. لتأكيد أن المستعمرات هي في الواقع Campylobacter تحديد Campylobacter متعددة مثل المستعمرات لتلطيخ غرام وتصور منطقة رقيقة من قبل المجهر الخفيف باستخدام عدسة الغمر النفط لتحديد غرام السلبية المنحنية، دوامة، أو السيجار على شكل البكتيريا الصغيرة.
لوحة تحكم سلبية دون إضافة Campylobacter مهم للمساعدة في تحديد النباتات البراز الأخرى. النظر في التخفيف الأخير الذي يحتوي على مستعمرة Visualة مثل Campylobacter سلبية الغرام الحد من الكشف عن الثقافة. واستخدام الصيغة لحساب وحدات تشكيل مستعمرة لكل ملليلتر من التخفيف الإيجابي في عينة البراز السريرية المفتعلة.
لتحديد جدوى Campylobacter المخزنة في المتوسط مزيج النقل ملليلتر واحد من ثقافة مرق Campylobacter مع ملليلتر واحد من تجمع البراز السلبية وإعداد 10 مكررة مزدوجة أضعاف التخفيف المسلسل في بركة البراز السلبية. مزيد من التخفيف كل تخفيف في نسبة إضافية واحدة إلى أربع في المتوسط كاري بلير وتخزين أنابيب التخفيف 20 والسيطرة السلبية في المتوسط كاري بلير في أنابيب الغطاء في درجتين إلى ثماني درجات مئوية لمدة 96 ساعة. بدءا في الوقت صفر وكل 24 ساعة بعد ذلك خط 10 microliter aliquots من كل تخفيف على لوحات أجار كامبيلوباكتر انتقائية واحتضان لوحات في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
كما لا توجد طريقة مستقلة لإنشاء أرقام البكتيريا دقيقة من عينات المريض اثنين من القياسات المتزامنة يمكن إجراء مع مخزون واحد البكتيرية النقية. يتم استخدام اختبار واحد للكشف البصرية من مستعمرات Campylobacter من التخفيفات التسلسلية من البكتيريا الأسهم في مصفوفة البراز، محاكاة العينات السريرية. يتم استخدام الاختبار الآخر تحليليا، وقياس وحدات تشكيل مستعمرة لكل ملليلتر موجودة في نفس ثقافة الأرصدة البكتيريا المستخدمة في ارتفاع.
معلمة رئيسية للنجاح هو تحديد المستعمرات الحجم الدقيق بين النباتات البراز المتنافسة، كما يتضح من هذه اللوحة التمثيلية لثقافة البراز ارتفعت. هنا، يمكن ملاحظة البيانات النموذجية من سبع تجارب مستقلة. ببساطة تحديد المستعمرات التي تشبه Campylobacter داخل الثقافات البراز ليست كافية.
يجب تأكيد جميع المستعمرات مع وصمة عار غرام أو أساليب أكثر تقدما. نحن نستخدم المناعة الانزيمية التي هي أكثر دقة من الثقافة للكشف عن الأنواع غير الشائعة مثل C.upsaliensis أو C.lari، والتي تنمو بشكل سيئ على المضادات الحيوية القياسية التي تحتوي على أجار. هذه التقنية تضع أساسا ضروريا لدراسة أشياء مثل النقل غير أعراض Campylobacter وما إذا كانت الأحمال البكتيرية العالية وضعت المريض في خطر أكبر لعواقب وخيمة للعدوى Campylobacter.
دائما ارتداء معدات الوقاية الشخصية عند العمل مع البكتيريا، والتي غالبا ما تكون معدية ويمكن أن تكون خطرة، ومع بركة البراز السلبية التي قد تحتوي على مسببات الأمراض غير معروف حتى عندما جمعت من متبرعين أصحاء.
