המחקר נתמך על ידי מענק פיתוח מדעני מחקר של NHLBI (1K01HL135461-01) לפצ"ר. תודה לדוד קרמונה-בריו, ואיזבל אדרבה-רנגיפו על עזרתם הטכנית.

עכברים שוכנו וטופלו במחלקה לטיפול בבעלי חיים במרכז הרפואי של אוניברסיטת ונדרבילט (VUMC) בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) והמדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, משרד הבריאות ושירותי האנוש של ארה"ב. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של VUMC לפני תחילת הניסויים.
1. הכנת בעלי חיים ודיסקציה
<ol><li>הפעל את הנבט ואת משאבת המים של כרית החימום כ -30 דקות לפני תחילת הניתוח.</li>
	<li>חותכים צינורות פוליאוריתן באורך 0.5 מ"מ עם אזמל חד. הסר 0.2 מ"מ מההיקף על ידי ביצוע חתך לאורך כדי ליצור שרוול. הערה: זהו חלק קריטי בהליך היצרות עורק הכליה הדורש דיוק רב, תשומת לב לפרטים וסבלנות. נסו לחתוך כמה חתיכות של צינורות פוליאוריתן בכל פעם. בצע את כל ההליך הזה תחת מיקרוסקופ.</li>
	<li>לפני שתמשיך הלאה, לבש כפפות סטריליות כירורגיות ומסכה כירורגית.</li>
	<li>השתמש בעכברי C57BL/6 מסוג בר (WT) במשך 6-8 שבועות. השתמש במספר שווה של עכברים זכרים ונקבות כדי למנוע הטיה מינית.</li>
	<li>רשום את משקל העכברים לפני ביצוע הניתוח. המשקל האידיאלי לביצוע היצרות עורק הכליה עם צינור פוליאוריתן הוא 18-22 גרם. טפלו בעכברים בעדינות ואל תתסיסו בזמן הזרקת ההרדמה. יש לתת משכך כאבים טרום ניתוחי (קטופגן, 5 מ"ג/ק"ג גוף). הערה: בעת העברת העכברים מחדר המגורים שלהם לחדר הניתוח, נשא אותם בעדינות רבה ובזהירות רבה כדי למנוע תסיסה. מומלץ מאוד לשאת כלובי עכברים בידיים במקום בעגלה.</li>
	<li>הרדימו את העכברים בתערובת של קטמין (100 מ"ג/ק"ג BW) וקסילזין (10 מ"ג/ק"ג BW) באמצעות זריקות תוך-צפקיות (I.P.).</li>
	<li>החזירו את העכבר לתוך הכלוב עד להרדמה מלאה. זה לוקח בערך 4-5 דקות לפני העכבר הוא מחוסר הכרה מלאה. צבוט את הזנב או הבוהן עם מלקחיים כדי לבדוק אם העכבר מחוסר הכרה לחלוטין ומוכן לניתוח.</li>
	<li>הניחו את העכבר על גבו על מגבת נייר. הסר את שיער הבטן הצדדית באמצעות קוצץ שיער חשמלי בעקבות הכיוון ההפוך של צמיחת השיער. לאחר גילוח האתר הכירורגי, נקו את האזור עם קרצוף כירורגי המכיל יוד (או כלורהקסידין) ואחריו שטיפה עם 70% אתנול (או מלח סטרילי).  חזור על 3 פעמים. הערה: יש לבצע את הליך הסרת השיער במרחק מה או עדיף בספסל שונה מספסל הניתוח כדי למנוע הפרעות שיער וזיהום שיער במהלך הליך הניתוח.</li>
	<li>מכסים את כרית החימום בסדין סטרילי. מביאים את העכבר לספסל הניתוח ומניחים על היריעה הסטרילית, הפונה לצד הימני הצדדי של העכבר לכיוון המיקרוסקופ. לשמור על טמפרטורת כרית קבועה של 37 מעלות צלזיוס עם מים במחזור.</li>
	<li>פתח את השקית המעוקרת המכילה את כל הציוד הכירורגי. באמצעות מיקרוסקופ מנתח ומספריים חדים סטריליים, מבצעים חתך קטן באגף (קרוב לצלע החזהה-13 , הצלע האחרונה בעכבר) ובמרחק של כ-0.5 ס"מ מהחוליות. ממשיכים לאורך החוליות המותניות ומבצעים חתך של 1 אינץ '.</li>
	<li>למשוך בחזרה את העור ואת השרירים כדי לחשוף את הכליה.</li>
	<li>נקו והסירו את השומן שמסביב באמצעות צמר גפן סטרילי כדי לבודד את עורק הכליה. לבודד את עצב הכליה מעורק הכליה באמצעות מלקחיים מעוקלים.</li>
	<li>בעת ביצוע ניתוח הבושה, החל תפרים כדי לסגור את העור ולהחיל אנטיביוטיקה על הפצע הסגור, ולאחר מכן להמשיך לטיפול לאחר הניתוח. אם לא, המשך עם הקטע הבא כדי stenose את העורק. הערה: כל ניסוי צריך לכלול חיות בושה כבקרה על ההליך הכירורגי. חיות שאם מורכבות מעכברים שעברו את ההליך הכירורגי של חשיפת עורק הכליה מבלי להניח עליו שרוול.</li>
</ol>2. היצרות עורק הכליה הימני
<ol><li>מניחים שני תפרים מניילון מתחת לעורק הכליה הימני, יוצרים קשרים רופפים, ואז מניחים את השרוול סביב עורק הכליה הראשי בערך שווה בין הכליה לאבי העורקים</li>
	<li>סגרו את השרוול באמצעות תפרים מניילון. הכינו ארבעה קשרים לכל תפר כדי למנוע את ההסתברות לאבד את התפרים לאחר הניתוח.</li>
	<li>סגור את החתך בשריר על ידי החלת תפר רציף פשוט.</li>
	<li>הכינו תפרים פשוטים שנקטעים כדי לסגור את העור.</li>
	<li>מתן משככי כאבים מאושרים על ידי IACUC. הערה: כלי ניתוח אוטוקלאב לפני כל שימוש. אם מבוצע יותר מניתוח אחד בבת אחת, נגבו את כל הכלים המשומשים עם מד אלכוהול סטרילי והכניסו אותם לנביטה חמה למשך 15-30 שניות לאחר כל ניתוח. החלף כפפות סטריליות גם עבור כל עכבר.</li>
</ol>3. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>החזירו עכברים לכלוב שלהם והשאירו את הכלוב חצי דולק, חצי כבוי, כרית חימום מים במחזור למשך 2 - 3 שעות. הוסיפו מזון ג'ל להתאוששות דיאטת בתוך הכלוב.</li>
	<li>יש לתת משכך כאבים (קטופרופן) דרך הצפק (מינון: 5 מ"ג/ק"ג BW) למחרת.</li>
	<li>שקלו את העכברים ביומיים הקרובים; אם חלק מהעכברים מאבדים יותר מ-20% ממשקלם, התייעצו עם הווטרינר והחליטו אם יש צורך להרדים את בעל החיים לאחר ההליך המתאים המאושר על ידי IACUC.</li>
	<li>עקוב אחר העכברים מדי יום כדי להעריך אדמומיות, נפיחות, כאב או זיהום.</li>
	<li>יש לפנות לייעוץ וטרינרי לסיבוכים לאחר הניתוח בהתאם למדיניות IACUC המוסדית..</li>
</ol>4. קציר רקמות
<ol><li>קציר רקמות 3 שבועות לאחר הליך כירורגי. רשום את המשקל של כל עכבר.</li>
	<li>להרדים את העכבר בהליך שאושר על ידי IACUC.</li>
	<li>הנח את העכבר על פלטפורמה סטרילית במצב שכיבה כדי לנתח.</li>
	<li>אבטח והרחב את הגפיים כדי להגביל את התנועה.</li>
	<li>רססו היטב את העכברים ב-70% אתנול.</li>
	<li>בצע חתך בקו האמצע כדי לפתוח את אזור הבטן והחזה באמצעות מספריים חדים.</li>
	<li>משכו לאחור את העור ואת דופן הצפק.</li>
	<li>בזהירות לחשוף את הלב ולנקב את החדר הימני exsanguinate העכבר.</li>
	<li>הסר את שתי הכליות באמצעות מלקחיים. הכליות ממוקמות על גב העכברים. הערה: אין לערבב את שתי הכליות. היו מודעים לכליות היצרניות, הבושה והקונטרלטרליות.</li>
	<li>הסר את כמוסת הכליות, נקה אותם מכל שומן ורשום את המשקל של כל כליה בנפרד.</li>
	<li>חותכים חתך אורך של שתי הכליות ומקובעים ב-4% PFA למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס כדי שיעובדו מאוחר יותר להטמעת פרפין, כדי לבצע הכלאה באתרה (ISH) ואימונוהיסטוכימיה (IHC). עקוב אחר פרוטוקולי ISH ו- IHC כפי שדווחו23,24.</li>
	<li>לבודד את קליפת המוח של הכליה הנותרת ולהקפיא הבזק בחנקן נוזלי כדי לבצע כתם מערבי. יש לאחסן דגימות בטמפרטורה של -80°C עד לניתוח.</li>
	<li>כימות ביטויי רנין, ו-N-GAL עם כתם מערבי כמתואר בספרות23,24.</li>
</ol>5. סטטיסטיקה
<ol><li>השתמש ב- ANOVA חד-כיווני או דו-כיווני לניסויים עם שלושה תנאים או יותר ולאחר מכן מבחני בונפרוני לאחר הוק לצורך השוואה בין קבוצות בודדות. שקול ערך p שווה או קטן מ- 0.05 משמעותי. השתמש בתוכנה (לדוגמה, GraphPad Prism 8.2) כדי לבצע את כל הניתוחים הסטטיסטיים.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+CCR2+reduces+macrophage+influx+and+development+of+chronic+renal+damage+in+murine+renovascular+hypertension.">Blockade of CCR2 reduces macrophage influx and development of chronic renal damage in murine renovascular hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (5), 372-384 (2016).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+inflammatory+biomarkers+after+renal+revascularization+in+atherosclerotic+renal+artery+stenosis.">Changes in inflammatory biomarkers after renal revascularization in atherosclerotic renal artery stenosis.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 31 (9), 1437-1443 (2016).</li><li>Yerram, P., Karuparthi, P. R., Chaudhary, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+management+of+renovascular+hypertension+and+ischemic+nephropathy.">Pathogenesis and management of renovascular hypertension and ischemic nephropathy.</a> Minerva Urologica e Nefrologica. 64 (1), 63-72 (2012).</li><li>Covic, A., Gusbeth-Tatomir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+renal+artery+stenosis,+renovascular+hypertension,+and+ischemic+nephropathy:+diagnostic+implications.">The role of the renin-angiotensin-aldosterone system in renal artery stenosis, renovascular hypertension, and ischemic nephropathy: diagnostic implications.</a> Progress in Cardiovascular Diseases. 52 (3), 204-208 (2009).</li><li>Barreras, A., Gurk-Turner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+receptor+blockers.">Angiotensin II receptor blockers.</a> Proceedings. 16 (1), 123-126 (2003).</li><li>Sica, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-converting+enzyme+inhibitors+side+effects--physiologic+and+non-physiologic+considerations.">Angiotensin-converting enzyme inhibitors side effects--physiologic and non-physiologic considerations.</a> Journal of Clinical Hypertension. 6 (7), 410-416 (2004).</li><li>Hill, R. D., Vaidya, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+Receptor+Blockers+(ARB,+ARb).">Angiotensin II Receptor Blockers (ARB, ARb).</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Durante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Role of the renin-angiotensin-aldosterone system in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 18 (7), 981-1004 (2012).</li><li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+reactive+carbonyl+species:+Potential+risk+factor+for+hypertension.">Plasma reactive carbonyl species: Potential risk factor for hypertension.</a> Free Radical Research. 45 (5), 568-574 (2011).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+receptor+blockade+has+protective+effects+on+the+poststenotic+porcine+kidney.">Angiotensin receptor blockade has protective effects on the poststenotic porcine kidney.</a> Kidney International. 84 (4), 767-775 (2013).</li><li>Zou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+scattered+tubular-like+cells+confer+protective+effects+in+the+stenotic+murine+kidney+mediated+by+release+of+extracellular+vesicles.">Renal scattered tubular-like cells confer protective effects in the stenotic murine kidney mediated by release of extracellular vesicles.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1263 (2018).</li><li>Kinra, M., Mudgal, J., Arora, D., Nampoothiri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insight+into+the+role+of+cyclooxygenase+and+lipooxygenase+pathway+in+renal+ischemia.">An insight into the role of cyclooxygenase and lipooxygenase pathway in renal ischemia.</a> European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 21 (21), 5017-5020 (2017).</li><li>Cavalcanti, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE5+Restores+Depressed+Baroreflex+Sensitivity+in+Renovascular+Hypertensive+Rats.">Inhibition of PDE5 Restores Depressed Baroreflex Sensitivity in Renovascular Hypertensive Rats.</a> Frontiers in Physiology. 7, 15 (2016).</li><li>Dias, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sildenafil+ameliorates+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+the+stenotic+kidneys+in+mice+with+renovascular+hypertension.">Sildenafil ameliorates oxidative stress and DNA damage in the stenotic kidneys in mice with renovascular hypertension.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 35 (2014).</li><li>Lerman, L. O., Chade, A. R., Sica, V., Napoli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+hypertension:+an+overview.">Animal models of hypertension: an overview.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 146 (3), 160-173 (2005).</li><li>Reckelhoff, J. F., Romero, D. G., Yanes Cardozo, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex,+Oxidative+Stress,+and+Hypertension:+Insights+From+Animal+Models.">Sex, Oxidative Stress, and Hypertension: Insights From Animal Models.</a> Physiology (Bethesda). 34 (3), 178-188 (2019).</li><li>Goldblatt, H., Lynch, J., Hanzal, R. F., Summerville, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Experimental+Hypertension+:+I.+The+Production+of+Persistent+Elevation+of+Systolic+Blood+Pressure+by+Means+of+Renal+Ischemia.">Studies on Experimental Hypertension : I. The Production of Persistent Elevation of Systolic Blood Pressure by Means of Renal Ischemia.</a> Journal of Experimental Medicine. 59 (3), 347-379 (1934).</li><li>Gollan, F., Richardson, E., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+the+systemic+blood+of+animals+with+experimental+renal+hypertension.">Hypertension in the systemic blood of animals with experimental renal hypertension.</a> Journal of Experimental Medicine. 88 (4), 389-400 (1948).</li><li>Lewis, H. A., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Experimental+Hypertension:+XVIII.+Experimental+Observations+on+the+Humoral+Mechanism+of+Hypertension.">Studies on Experimental Hypertension: XVIII. Experimental Observations on the Humoral Mechanism of Hypertension.</a> Bulletin of the New York Academy of Medicine. 18 (7), 459-487 (1942).</li><li>Warner, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+deficiency+of+Smad3+protects+the+kidneys+from+atrophy+and+interstitial+fibrosis+in+2K1C+hypertension.">Genetic deficiency of Smad3 protects the kidneys from atrophy and interstitial fibrosis in 2K1C hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 302 (11), 1455-1464 (2012).</li><li>Lorenz, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renovascular+hypertension+using+a+modified+two-kidney,+one-clip+approach+in+mice+is+not+dependent+on+the+alpha1+or+alpha2+Na-K-ATPase+ouabain-binding+site.">Renovascular hypertension using a modified two-kidney, one-clip approach in mice is not dependent on the alpha1 or alpha2 Na-K-ATPase ouabain-binding site.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 301 (3), 615-621 (2011).</li><li>Ebina, K., Iwabuchi, T., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+change+in+permanently+clipped+or+ligated+cerebral+arterial+wall.+Part+II:+Autopsy+cases+of+aneurysmal+neck+clipping.">Histological change in permanently clipped or ligated cerebral arterial wall. Part II: Autopsy cases of aneurysmal neck clipping.</a> Acta Neurochirurgica. 66 (1-2), 23-42 (1982).</li><li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox6:+A+new+modulator+of+renin+expression+during+physiological+conditions.">Sox6: A new modulator of renin expression during physiological conditions.</a> bioRxiv. , (2019).</li><li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox6+as+a+new+modulator+of+renin+expression+in+the+kidney.">Sox6 as a new modulator of renin expression in the kidney.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2019).</li><li>Chade, A. R., Williams, M. L., Engel, J., Guise, E., Harvey, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+translational+model+of+chronic+kidney+disease+in+swine.">A translational model of chronic kidney disease in swine.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (2), 364-373 (2018).</li><li>Xue, Y., Xu, Z., Chen, H., Gan, W., Chong, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-energy+shock+wave+preconditioning+reduces+renal+ischemic+reperfusion+injury+caused+by+renal+artery+occlusion.">Low-energy shock wave preconditioning reduces renal ischemic reperfusion injury caused by renal artery occlusion.</a> Acta Cir&#250;rgica Brasileira. 32 (7), 550-558 (2017).</li><li>Lalanne, A., Beaudeux, J. L., Bernard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NGAL:+a+biomarker+of+acute+and+chronic+renal+dysfunction.">NGAL: a biomarker of acute and chronic renal dysfunction.</a> Annales de Biologie Clinique. 69 (6), 629-636 (2011).</li><li>Bolignano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+gelatinase-associated+lipocalin+(NGAL)+as+a+marker+of+kidney+damage.">Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) as a marker of kidney damage.</a> American Journal of Kidney Diseases. 52 (3), 595-605 (2008).</li><li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+renal+atrophy+in+murine+2+kidney+1+clip+hypertension+is+strain+independent.">Development of renal atrophy in murine 2 kidney 1 clip hypertension is strain independent.</a> Research in Veterinary Science. 107, 171-177 (2016).</li><li>Anderson, W. P., Woods, R. L., Kline, R. L., Korner, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+haemodynamic+responses+to+unilateral+renal+artery+stenosis+in+conscious+dogs.">Acute haemodynamic responses to unilateral renal artery stenosis in conscious dogs.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 12 (3), 305-309 (1985).</li><li>Imanishi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+degree+of+renal+arterial+stenosis+that+causes+hypertension+in+dogs.">Critical degree of renal arterial stenosis that causes hypertension in dogs.</a> Angiology. 43 (10), 833-842 (1992).</li><li>Ziecina, R., Abramczyk, P., Lisiecka, A., Papierski, K., Przybylski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenal-renal+portal+circulation+contributes+to+decrease+in+renal+blood+flow+after+renal+artery+stenosis+in+rats.">Adrenal-renal portal circulation contributes to decrease in renal blood flow after renal artery stenosis in rats.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 49 (4), 553-560 (1998).</li><li>Johnson, J. A., Ichikawa, S., Kurz, K. D., Fowler, W. L., Payne, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressor+responses+to+vasopressin+in+rabbits+with+3-day+renal+artery+stenosis.">Pressor responses to vasopressin in rabbits with 3-day renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology. 240 (6), 862-867 (1981).</li><li>Eirin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+glomerular+filtration+rate+after+renal+revascularization+correlate+with+microvascular+hemodynamics+and+inflammation+in+Swine+renal+artery+stenosis.">Changes in glomerular filtration rate after renal revascularization correlate with microvascular hemodynamics and inflammation in Swine renal artery stenosis.</a> Circulation: Cardiovascular Interventions. 5 (5), 720-728 (2012).</li><li>Ma, Z., Jin, X., He, L., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CXCL16+regulates+renal+injury+and+fibrosis+in+experimental+renal+artery+stenosis.">CXCL16 regulates renal injury and fibrosis in experimental renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory. 311 (3), 815-821 (2016).</li><li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analysis+of+signaling+pathways+activated+in+a+murine+model+of+two-kidney,+one-clip+hypertension.">Temporal analysis of signaling pathways activated in a murine model of two-kidney, one-clip hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (4), 1055-1068 (2009).</li><li>Wiesel, P., Mazzolai, L., Nussberger, J., Pedrazzini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-kidney,+one+clip+and+one-kidney,+one+clip+hypertension+in+mice.">Two-kidney, one clip and one-kidney, one clip hypertension in mice.</a> Hypertension. 29 (4), 1025-1030 (1997).</li><li>Johns, C., Gavras, I., Handy, D. E., Salomao, A., Gavras, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+experimental+hypertension+in+mice.">Models of experimental hypertension in mice.</a> Hypertension. 28 (6), 1064-1069 (1996).</li></ol>

לא מוצהרים ניגודי עניינים, כספיים או אחרים, על ידי המחברים.

היצרות עורק הכליה היא גורם חשוב ליתר לחץ דם משני או עמיד, ולפגיעה בכליות 1,29. מודל גולדבלט בעל שתי הכליות (2K1C) שימש לחקר יתר לחץ דם רנובסקולרי המושרה על ידי RAStenosis 1,17,18,19. מספר מחקרים קודמים ש...

היצרות עורק הכליה (RAStenosis) היא בעיה בלתי פתירה המשפיעה על כ -6% מהאנשים מעל גיל 65 ועל עד 40% מהאנשים עם מחלת כלי דם כליליים או היקפיים 1,2. הטיפולים הקיימים כיום במחלה מוגבלים; לכן, קיים צורך קריטי לפתח טיפולים חדשים לטיפול ביתר לחץ דם רנובסקולרי או יתר לחץ דם עמיד המושרה על ידי RAStenosis. מערכת רנין אנגיוטנסין אלדוסטרון (RAAS) היא מסלול המפתח המעורב בפתוגנזה של יתר לחץ דם המושרה על ידי RAStenosis או יתר לחץ דם רנובסקולרי 3,4. טיפולים ידועים המכוונים ל-RAAS, כגון מעכבי ACE או חוסמי קולטן אנגיוטנסין, מקלים על יתר לחץ דם, אך זקוקים לבדיקה מדוקדקת של אי ספיקת כליות והיפרקלמיה 5,6,7. רנין מזרז את השלב המגביל את הקצב ב-RAAS; הוא ממיר אנגיוטנסינוגן לאנגיוטנסין I. בטרשת עורקים, היווצרות פלאק גורמת להיצרות של עורק הכליה המניע את הפרשת רנין, וכתוצאה מכך יתר לחץ דם רנובסקולרי ונזק לכליות8. מספר מחקרים דיווחו על רמות מוגברות של עקה חמצונית במהלך יתר לחץ דם רנובסקולרי בבני אדם, אשר אומתו עם מודל שני עכברי קליפ כליה אחת (2K1C) וכן מודלים אחרים של בעלי חיים עם יתר לחץ דם 2,9,10,11,12,13,14,15,16 . המנגנון המולקולרי של בקרת ביטוי רנין במהלך RAStenosis המושרה יתר לחץ דם renovascular אינו מובן היטב ומצדיק חקירה נוספת.
מודלים ניסיוניים של בעלי חיים המשחזרים באופן אמין ומשכפל RAStenosis חשובים בהבהרת המנגנונים התאיים והמולקולריים של בקרת ביטוי רנין לפיתוח טיפולים חדשניים. מודל העכבר 2K1C הוא מודל ניסיוני מבוסס היטב לחקר הפתוגנזה של יתר לחץ דם רנובסקולרי17,18,19,20. מודל זה נוצר על ידי התכווצות עורק הכליה באמצעות קליפ 17,20,21, ולכן מייצר חסימה של עורק הכליה שמביאה לעלייה בביטוי רנין ויתר לחץ דם 17,19,20,21. עם זאת, אין דוחות טכניים זמינים, המתארים הליך צעד אחר צעד כדי ליצור היצרות עורק הכליה במודלים של בעלי חיים.
קליפסים כסופים קונבנציונליים בצורת U, צינורות פוליאוריתן ותופסנים אחרים שימשו כדי לכווץ את עורק הכליה כדי לגרום להיצרות עורק הכליה. מחקרים מסוימים הראו כי העיצוב והחומר של הקליפ הם קריטיים להשגת נתונים אמינים וניתנים לשחזור עם מודל החיות 2K1C. על פי Lorenz et al., השימוש בקליפסים כסופים קונבנציונליים בעיצוב U גורם לשיעור הצלחה נמוך של יתר לחץ דם (40-60%)21. בשל עיצוב הקליפ, עורק הכליה נלחץ לרוחב, מה שמפעיל כמה כיווצים והסתברות גדולה יותר להיעקר מעורק הכליה. גמישות כסף ומשיכות עשויות לאפשר שינויים ברוחב הקליפס; לכן, גרימת רמות שונות של יתר לחץ דם בקרב עכברים. דו תחמוצת הכסף על התפס עלולה לגרום לדלקת פריווסקולרית, התפשטות אינטימית וגרגירי רקמות, מה שמשנה את קוטר עורק הכליה22. בשל השונות ברמות יתר לחץ הדם המתקבלות עם קליפס הכסף הקונבנציונלי של U-design, Warner et al. ו- Lorenz et al. השתמשו בהצלחה בצינורות פוליאוריתן בעיצוב עגול יותר כדי ליזום היצרות עורק הכליה בעכברים, ויצרו אינדוקציה אמינה ועקבית יותר של שתי הכליות מודל20,21.
בדו"ח זה אנו מתארים פרוטוקול כירורגי ליצירת RAStenosis ניסיוני בעכברים, תוך שימוש בצינורות הפוליאוריתן כדי לכווץ את עורק הכליה. השרוול בעל העיצוב העגול מפוליאוריתן הוא קליפס שניתן לשחזור, אמין ובעלות נמוכה יותר ליצירת היצרות בעכבר. מטרתו של מודל ניסיוני זה היא לחקור ולהגדיר את המנגנון המולקולרי והתאי של בקרת ביטוי רנין במהלך היצרות עורק הכליה. אישרנו את ההצלחה של מודל עכברי RAStenosis על ידי מדידת ביטוי רנין וסמן פגיעה בכליות נויטרופילים הקשורים לג'לטינאז (N-GAL).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Diet Gel</td>
			<td>Clear H2O</td>
			<td>Diet-Gel 76A</td>
			<td>Surgery recovery diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMC Heated Hard pad</td>
			<td>Hallowell</td>
			<td>000A2788B</td>
			<td>Heating pads were used to keep mice warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>662G</td>
			<td>4-0 (1.5 metric), This suture was used to close the peritoneum, and skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815 G</td>
			<td>8-0 (0.4 metric), This suture was used to close cuff to tie and constrict the artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500</td>
			<td>Braintree Scientific Inc.</td>
			<td>GER 5287</td>
			<td>Sterilize surgical tools between surgeries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Ketofen</td>
			<td>Painkiller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyurethane</td>
			<td>Braintree Scientific Inc.</td>
			<td>MRE-025</td>
			<td>This tube was used to initiate stenosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine antiseptic swabsticks</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS093901</td>
			<td>It was applied after hair removal and surgery on the skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7 Clip Applier</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>204-1000</td>
			<td>This clip applier was used to apply clip in case one or more sutures went off</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile towel drapes</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>4410</td>
			<td>It was used as a bedsheet for mice during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic ointment</td>
			<td>Medi-First</td>
			<td>22312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water pump</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>T/pump Professionals</td>
			<td>Used to warm and circulate water in the heating hard pad to keep mice warm during and post-surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified two kidney one clip mouse model of renin regulation in renal artery stenosis

היצרות עורק הכליה היא מצב שכיח בחולים עם מחלת כלי דם כליליים או היקפיים שבה מערכת רנין אנגיוטנסין אלדוסטרון (RAAS) מופעלת יתר על המידה. בהקשר זה, יש היצרות של עורקי הכליה המעוררים עלייה בביטוי ושחרור של רנין, הפרוטאז המגביל את קצב ב- RAAS. העלייה בביטוי הרנין כתוצאה מכך היא גורם ידוע ליתר לחץ דם רנובסקולרי, הקשור לעתים קרובות לפגיעה בכליות ולפגיעה באיברי הקצה. לכן, יש עניין רב בפיתוח טיפולים חדשניים למצב זה. המנגנון המולקולרי והתאי של בקרת רנין בהיצרות עורק הכליה אינו מובן במלואו ומצדיק חקירה נוספת. כדי לגרום להיצרות עורק הכליה בעכברים, פותח מודל שונה של 2 כליות 1 קליפ (2K1C) עכבר גולדבלט. הכליה הימנית התקבעה בעכברים מסוג בר, ועכברים שהופעלו על ידי שומה שימשו כבקרה. לאחר היצרות עורק הכליה, קבענו ביטוי רנין ופגיעה בכליות. הכליות נקטפו, וקורטיקס טרי שימש לקביעת ביטוי חלבון ו-mRNA של רנין. מודל חייתי זה ניתן לשחזור וניתן להשתמש בו כדי לחקור תגובות פתופיזיולוגיות, מסלולים מולקולריים ותאיים המעורבים ביתר לחץ דם רנובסקולרי ופגיעה בכליות.

התכווצות עורק הכליה מגבירה את ביטוי הרנין בכליה היציבה תוך דיכוי הביטוי בכליה הנגדית. הקטיף של שתי הכליות (2K1C) או מודל ההיצרות של גולדבלט גורם לביטוי מוגבר של רנין ולפגיעה בכליות. זה מוכר כמודל הייצוגי הטוב ביותר של היצרות עורק הכליה חד צדדית בבני אדם.
ביטוי של רנין ופרורנין...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis at JoVE.com

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

מודל שונה של 2 כליות 1 קליפ (2K1C) עכבר גולדבלט פותח תוך שימוש בצינורות פוליאוריתן כדי ליזום היצרות של עורק הכליה, מה שגרם לעלייה בביטוי הרנין ובפגיעה בכליות. כאן אנו מתארים הליך מפורט של הכנה והנחת השרוול על עורק הכליה כדי ליצור מודל עכבר 2K1C הניתן לשחזור ועקבי.

מודל שונה של שתי כליות קליפ אחד של ויסות רנין בהיצרות עורק הכליה

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

a-modified-two-kidney-one-clip-mouse-model-renin-regulation-renal

Research

JoVE Journal

Medicine

4.6K Views.  Vanderbilt University Medical Center. מודל שונה של 2 כליות 1 קליפ (2K1C) עכבר גולדבלט פותח תוך שימוש בצינורות פוליאוריתן כדי ליזום היצרות של עורק הכליה, מה שגרם לעלייה בביטוי הרנין ובפגיעה בכליות. כאן אנו מתארים הליך מפורט של הכנה והנחת השרוול על עורק הכליה כדי ליצור מודל עכבר 2K1C הניתן לשחזור ועקבי.

Video: A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients revealed that only a mild increase in serum creatinine levels (0.3 to 0.4 mg/dl) is associated with a 70% greater risk of death than in persons without any increase 1. Along these lines, surgical procedures requiring cross-clamping of the aorta and renal vessels are associated with a renal failure rates of up to 30% 4. Similarly, AKI after cardiac surgery occurs in over 10% of patients under normal circumstances and is associated with dramatic increases in mortality. AKI are also common complications after liver transplantation. At least 8-17% of patients end up requiring renal replacement therapy 5. Moreover, delayed graft function due to tubule cell injury during kidney transplantation is frequently related to ischemia-associated AKI 6. Moreover, AKI occurs in approximately 20% of patients suffering from sepsis 6.The occurrence of AKI is associated with dramatic increases of morbidity and mortality 1. Therapeutic approaches are very limited and the majority of interventional trials in AKI have failed in humans. Therefore, additional therapeutic modalities to prevent renal injury from ischemia are urgently needed 3, 7-9. 
To elucidate mechanisms of renal injury due to ischemia and possible therapeutic strategies murine models are intensively required 7-13. Mouse models provide the possibility of utilizing different genetic models including gene-targeted mice and tissue specific gene-targeted mice (cre-flox system). However, murine renal ischemia is technically challenging and experimental details significantly influence results. We performed a systematic evaluation of a novel model for isolated renal artery occlusion in mice, which specifically avoids the use of clamping or suturing the renal pedicle 14. This model requires a nephrectomy of the right kidney since ischemia can be only performed in one kidney due to the experimental setting. In fact, by using a hanging-weight system, the renal artery is only instrumented once throughout the surgical procedure. In addition, no venous or urethral obstruction occurs with this technique. We could demonstrate time-dose-dependent and highly reproducible renal injury with ischemia by measuring serum creatinine. Moreover, when comparing this new model with conventional clamping of the whole pedicle, renal protection by ischemic preconditioning is more profound and more reliable. Therefore his new technique might be useful for other researchers who are working in the field of acute kidney injury.

A precise murine model for acute kidney injury (AKI) due to ischemia is an important tool to investigate acute kidney injury and possibly find therapeutic tools to treat renal injury. The hanging weight system offers a tool for immediate and reliable renal artery occlusion and reperfusion without causing renal congestion.

השימוש במערכת תלוי במשקל עבור חסימת עורק הכליה מבודדת

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this is only partially explained by traditional CVD risk factors. Vascular dysfunction is an important non-traditional risk factor, characterized by vascular endothelial dysfunction (most commonly assessed as impaired endothelium-dependent dilation [EDD]) and stiffening of the large elastic arteries. While various techniques exist to assess EDD and large elastic artery stiffness, the most commonly used are brachial artery flow-mediated dilation (FMDBA) and aortic pulse-wave velocity (aPWV), respectively. Both of these noninvasive measures of vascular dysfunction are independent predictors of future cardiovascular events in patients with and without kidney disease. Patients with CKD demonstrate both impaired FMDBA, and increased aPWV. While the exact mechanisms by which vascular dysfunction develops in CKD are incompletely understood, increased oxidative stress and a subsequent reduction in nitric oxide (NO) bioavailability are important contributors. Cellular changes in oxidative stress can be assessed by collecting vascular endothelial cells from the antecubital vein and measuring protein expression of markers of oxidative stress using immunofluorescence. We provide here a discussion of these methods to measure FMDBA, aPWV, and vascular endothelial cell protein expression.

The degree of vascular dysfunction and contributing physiological mechanisms can be assessed in patients with chronic kidney disease by measuring brachial artery flow-mediated dilation, aortic pulse-wave velocity, and vascular endothelial cell protein expression.

הערכה של תפקוד כלי דם בחולים עם מחלת כליות כרונית

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

הערכה של תפקוד כליות במודלים של העכבר של מחלת Glomerular

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by proteinuria which can eventually lead to chronic and end-stage renal disease. The glomerulus is a complex apparatus responsible for the filtration of plasma from the body. In disease, structural integrity is lost and allows for the abnormal leakage of plasma contents into the urine. A method to isolate and examine glomeruli in culture is critical for the study of these diseases. In this protocol, an efficient method of retrieving intact glomeruli from adult rat kidneys while conserving structural and morphological characteristics is described. This process is capable of generating high yields of glomeruli per kidney with minimal contamination from other nephron segments. With these glomeruli, injury conditions can be mimicked by incubating them with a variety of chemical toxins, including protamine sulfate, which causes foot process effacement and proteinuria in animal models. Degree of injury can be assessed using transmission electron microscopy, immunofluorescence staining, and western blotting. Nephrin and Wilms Tumor 1 (WT1) levels can also be assessed from these cultures. Due to the ease and flexibility of this protocol, the isolated glomeruli can be utilized as described or in a way that best suits the needs of the researcher to help better study glomerular health and structure in diseased states.

The main focus of this protocol is to efficiently isolate viable primary glomeruli cultures with minimal contaminants for use in a variety of downstream applications. The isolated glomeruli retain structural relationships between component cell types and can be cultured ex vivo for a short time.

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

משלוח תרופות ישיר לכליות דרך עורק הכליה

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...