פרוטוקול זה משתמש לובסטרים אמריקאים צעירים כמודל כדי להדגים את השימוש בפגמים לעכב כדי להעריך את הביצועים הפיזיולוגיים במהלך מתח תרמי. טכניקה זו מעבירה זרם חשמלי קטן מתנוד על פני שתי אלקטרודות המושתלות משני צדי הלב ומודדת את השינוי במתח כאשר השריר מתכווץ ומרגיע. לאחר מכן ניתן להמיר מתח זה בקלות לפעימות לדקה כדי להתוות את הדובי לאורך טווח הטמפרטורות המוערך כדי לקבוע חלונות ביצועים תרמיים.
טכניקה זו היא זעיר פולשנית ומאפשרת איסוף נתונים בזמן אמת באורגניזמים בשלב מאוחר שבו זה עלול להיות קשה לראות ישירות את ביצועי הלב. שיטה זו מתמקדת גם בחישוב טמפרטורת שבירת Arrhenius או ABT ומשתמשת בזה כנקודת קצה לא קטלנית כדי לקבוע גבולות תרמיים. לעטוף צינורות חמרן ברור סביב עצמו כדי ליצור סליל החלפת חום כי הוא כ 8 עד 10 ס"מ קוטר ויש לו הרחבות כי הם 40 עד 70 ס"מ.
אבטח את סליל באמצעות סרט חשמלי. חבר את סליל החלפת החום לאספקה החיצונית והחזר אביזרי אמבט המים במחזור. ודא שהחיבור מאובטח באמצעות מהדקי צינור.
ממלאים את באר אמבט המים במחזור עם מי אוסמוזה הפוכים ומחברים את כבל החשמל לשקע. הפעל את אמבט המים ולוודא שאין דליפות בקשר שלה סליל החלפת חום. הגדר את ממיר ההימנעות על-ידי חיבור כבל BNC השחור לפלט זרם החילופין ביחידה וחיבורו לוגר הנתונים של מעבדת החשמל באמצעות יציאת הערוץ הראשון.
חבר את התרמיסטור לתרמיל מסוג T ולאחר מכן חבר את תרמיל סוג T ליציאת ערוץ 2 של אוגר הנתונים של מעבדת החשמל. חבר את כבל החשמל של אוגר נתוני מעבדת החשמל לאספקת חשמל וחבר את אוגר הנתונים למחשב PC באמצעות מחבר כבל ה- USB. מלאו את תא ההתאקלמות בזירה הניסיונית ב-7.5 ליטר מי ים מלאכותיים.
מניחים את הלובסטר על רשת פלסטיק. אבטחו בזהירות את טפרי הלובסטרים והבטן לרשת הפלסטיק באמצעות אזיונות כבלים קטנים. יבש את השריון עם מגבת נייר ולנקות אותו עם ספוג כותנה ספוג 70% אתנול.
בזהירות יד לקדוח שני חורים קטנים כמעט דרך carapace משני צדי pericardium. לסיים כל חור על ידי החדרת בעדינות מחט חיטוי סטרילית. לגרד את קצת בידוד חוטים באמצעות סכין גילוח.
בזהירות לכופף את הקצה של כל חוט באמצעות מדחפים ולהכניס אחד לתוך כל אחד החורים שנקדחו לאחרונה. לאבטח כל עופרת חוט באמצעות טיפה קטנה של דבק סופר ולאפשר לו להתייבש במשך חמש עד 10 דקות. לאחר הדבק יבש, לחבר את החוט מוביל ממיר בלתי תלוי ולהדליק אותו.
מניחים את הלובסטר בתא ההתאקלמות ומאפשרים לו להתאקלם באלקטרודות המושתלות במשך 15 עד 20 דקות. הפעל את מעבדת החשמל ופתח את תוכנת תרשים המעבדה במחשב. לחץ על ניסוי חדש וה השאר את מסך תצוגת התרשים פתוח.
בתצוגת תרשים, אתר את תפריט פונקציית הערוץ עבור ערוץ אחד. בחרו מגבר קלט מהתפריט ובחרו צימוד AC. על ממיר מבוי סתום, להתאים את הרווח ואת האיזון עד אות חזק נצפתה על פלט מעבדת החשמל, במטרה לשמור על האיזון קרוב לאפס.
בערוץ השני בחר תרמיל מסוג T כדי לתעד נתוני טמפרטורה בזמן אמת. לחץ על לחצן התחל ומעבדת החשמל תתחיל ברישום נתונים. מניחים את רשת הפלסטיק עם הלובסטר המצורף בזהירות על הזירה הניסיונית ולהגדיר את סליל החלפת החום על גבי הרשת.
מניחים את התרמיסטור ליד הלובסטר, לפני הנחת המכסה על הזירה הניסיונית כדי להפחית את הלחץ החזותי בנושא הבדיקה. התאם את היתרה לפי הצורך והצב תגובה על הפלט המציינת כי הניסוי החל. יש לשמור את הפלט מעת לעת לאורך כל הניסוי.
לחץ על קובץ ובחר שמירה בשם כדי לשמור תחילה את הפלט במחשב. הגדל את טמפרטורת המים של הזירה הניסיונית בקצב של כ 1.5 מעלות צלזיוס כל 15 דקות כדי להשיג רמפה מ 12 עד 30 מעלות צלזיוס על פני תקופה של שעתיים ו -30 דקות על ידי התאמת הטמפרטורה של אמבט המים recirculating. לאחר השלמת הרמפה, מוציאים את הלובסטר מהזירה הניסיונית ומ מניחים אותו באמבטיית התאוששות למשך כ-20 דקות.
לאחר 20 דקות, לחץ על לחצן העצור בפלט מעבדת החשמל ושמור את הקובץ. הסר בזהירות את האלקטרודות וצמצם את קשרי הכבלים לפני החזרת הבדיקה כפופה למיכל החזקה שלה. פתח את לוח הנתונים על-ידי לחיצה על תפריט חלון ובחירת לוח נתונים.
הגדר עמודה A כזמן על-ידי לחיצה כפולה על עמודה A ולחיצה על בחירה ונקודה פעילה, בחר זמן וסגור את החלון על-ידי לחיצה על אישור. הגדר את עמודה B לטמפרטורה הממוצעת בחלק הנבחר של הנתונים על-ידי לחיצה כפולה על עמודה B ובחירת סטטיסטיקה. בחר ממוצע מצד ימין של התפריט וערוץ 2 כמקור החישוב בתחתית חלון התפריט. לחץ פעמיים על עמודה C ובחר בחירה ונקודה פעילה.
בחרו 'משך בחירה', לחצו על הלחצן 'אשר' לסגירת החלון. לחץ פעמיים על עמודה D ובחר מידות מחזוריות. בחר ספירת אירועים, בחר ערוץ אחד כמקור החישוב, לחץ על אישור כדי לסגור את החלון.
פעולה זו תספור את פסגות הנתונים כדי לקבוע את קצב הלב על-פני חלק נבחר של הנתונים. לחץ פעמיים על עמודה E ובחר מידות מחזוריות. בחר קצב מחזורי ממוצע וערוץ אחד כמקור החישוב בתחתית חלון התפריטים.
לחץ על אישור כדי לסגור את החלון וזה מספק את ההערכה הסופית של קצב הלב כמו פעימות לדקה על פני חלק נבחר של נתונים. חזור לקובץ הנתונים וסמן את המקטעים הרצויים של הפלט. בחר פקודות והוספה מרובה לפנקס הנתונים.
בחר זמן ומשך נתונים כל 30 שניות על-ידי סימון כל תיבה והזנת 30 תחת תפריט בחר. לחץ על הבחירה הנוכחית ולחץ על הוסף.
פתח את קובץ הנתונים ב- Excel. המר טמפרטורה ממעלות צלזיוס להיפך של קלווין. קח את היומן הטבעי של קצב הלב, ליצור עלילה Arrhenius על ידי התוויית קצב הלב כפונקציה של טמפרטורה.
התאם נתונים אלה עם רגרסיה בכיוון מושלם וקבע את נקודת ההצטלבות. זוהי טמפרטורת הבלמים של ארניוס או איי.בי.טי. זוהי דוגמה לפלט הצפוי באמצעות לוגר הנתונים של מעבדת החשמל.
המתח מוצג באדום וטמפרטורת הזירה בכחול. נתונים אלה מראים התפלגות צפויה של קצב הלב במהלך רמפת טמפרטורה. לבסוף, פאנל זה מראה עלילה צפויה של Arrhenius מבעל חיים ניסיוני.
בכושר עם רגרסיה מושלמת, הכוכב האדום מדגיש את הצומת שלהם שהוא טמפרטורת שבירת Arrhenius. בעת שימוש בטכניקה זו, חשוב לאפשר לנושא הבדיקה שלך תקופות זמן נאותות של הסמכה והתאוששות כדי להבטיח שאתה מקליט במדויק את ביצועי הלב. חשוב גם לקבוע את קצב ההתחממות המתאים לניסוי לפני הפעלתו בנושא הבדיקה.
למרות שאנו מתמקדים אך ורק בטמפרטורה בסרטון זה, טכניקה זו יכולה להיות מיושמת באופן נרחב כדי להבין השפעות סביבתיות על הפיזיולוגיה האורגניזמית על ידי חשיפה מוקדמת של נבדקים לנבדקים ללחצים נוספים כגון החמצון באוקיינוס, או זמינות חמצן מופחתת לפני הפעלתם דרך רמפת הטמפרטורה.
