המחברים מודים לחברי ועדת המשנה לאימות שיטות מיקרוביולוגיה (MMVS) ומועצת המדריך האנליטי הבקטריולוגי (BAM) של ה-FDA על סקירה ביקורתית של מחקרי אימות שיטת סלמונלה LAMP.

<ol>
	<li>Notomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+of+DNA.">Loop-mediated isothermal amplification of DNA.</a> Nucleic Acids Research. 28 (12), 63 (2000).</li><li>Kaneko, H., Kawana, T., Fukushima, E., Suzutani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+of+loop-mediated+isothermal+amplification+to+a+culture+medium+and+biological+substances.">Tolerance of loop-mediated isothermal amplification to a culture medium and biological substances.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 70 (3), 499-501 (2007).</li><li>Francois, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robustness+of+a+loop-mediated+isothermal+amplification+reaction+for+diagnostic+applications.">Robustness of a loop-mediated isothermal amplification reaction for diagnostic applications.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 62 (1), 41-48 (2011).</li><li>Yang, Q., Wang, F., Prinyawiwatkul, W., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robustness+of+Salmonella+loop-mediated+isothermal+amplification+assays+for+food+applications.">Robustness of Salmonella loop-mediated isothermal amplification assays for food applications.</a> Journal of Applied Microbiology. 116 (1), 81-88 (2014).</li><li>Nagamine, K., Watanabe, K., Ohtsuka, K., Hase, T., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+reaction+using+a+nondenatured+template.">Loop-mediated isothermal amplification reaction using a nondenatured template.</a> Clinical Chemistry. 47 (9), 1742-1743 (2001).</li><li>Zhang, X., Lowe, S. B., Gooding, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+review+of+monitoring+methods+for+loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP).">Brief review of monitoring methods for loop-mediated isothermal amplification (LAMP).</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 61, 491-499 (2014).</li><li>Nagamine, K., Hase, T., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+reaction+by+loop-mediated+isothermal+amplification+using+loop+primers.">Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers.</a> Molecular and Cellular Probes. 16 (3), 223-229 (2002).</li><li>Yang, Q., Domesle, K. J., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+for+Salmonella+detection+in+food+and+feed:+Current+applications+and+future+directions.">Loop-mediated isothermal amplification for Salmonella detection in food and feed: Current applications and future directions.</a> Foodborne Pathogens and Disease. 15 (6), 309-331 (2018).</li><li>Mori, Y., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP):+Expansion+of+its+practical+application+as+a+tool+to+achieve+universal+health+coverage.">Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): Expansion of its practical application as a tool to achieve universal health coverage.</a> Journal of Infection and Chemotherapy. 26 (1), 13-17 (2020).</li><li>Mansour, S. M., Ali, H., Chase, C. C., Cepica, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+for+diagnosis+of+18+World+Organization+for+Animal+Health+(OIE)+notifiable+viral+diseases+of+ruminants,+swine+and+poultry.">Loop-mediated isothermal amplification for diagnosis of 18 World Organization for Animal Health (OIE) notifiable viral diseases of ruminants, swine and poultry.</a> Animal Health Research Reviews. 16 (2), 89-106 (2015).</li><li>Kumar, Y., Bansal, S., Jaiswal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP):+A+rapid+and+sensitive+tool+for+quality+assessment+of+meat+products.">Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): A rapid and sensitive tool for quality assessment of meat products.</a> Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. 16 (6), 1359-1378 (2017).</li><li>Kundapur, R. R., Nema, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification:+Beyond+microbial+identification.">Loop-mediated isothermal amplification: Beyond microbial identification.</a> Cogent Biology. 2, 1137110 (2016).</li><li>. Compliance Policy Guide Sec. 690.800 Salmonella in Food for Animals Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/downloads/iceci/compliancemanuals/compliancepolicyguidancemanual/ucm361105.pdf">https://www.fda.gov/downloads/iceci/compliancemanuals/compliancepolicyguidancemanual/ucm361105.pdf</a> (2013)</li><li>Bird, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+3M+molecular+detection+assay+(MDA)+2+-+Salmonella+for+the+detection+of+Salmonella+spp.+in+select+foods+and+environmental+surfaces:+collaborative+study,+first+action+2016.01.">Evaluation of the 3M molecular detection assay (MDA) 2 - Salmonella for the detection of Salmonella spp. in select foods and environmental surfaces: collaborative study, first action 2016.01.</a> Journal of AOAC International. 99 (4), 980-997 (2016).</li><li>D'Agostino, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+loop-mediated+amplification/ISO+6579-based+method+for+analysing+soya+meal+for+the+presence+of+Salmonella+enterica.">Validation of a loop-mediated amplification/ISO 6579-based method for analysing soya meal for the presence of Salmonella enterica.</a> Food Analytical Methods. 9 (11), 2979-2985 (2016).</li><li>Ge, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-laboratory+validation+of+a+loop-mediated+isothermal+amplification+method+for+screening+Salmonella+in+animal+food.">Multi-laboratory validation of a loop-mediated isothermal amplification method for screening Salmonella in animal food.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 562 (2019).</li><li>D'Agostino, M., Diez-Valcarce, M., Robles, S., Losilla-Garcia, B., Cook, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+loop-mediated+isothermal+amplification-based+method+for+analysing+animal+feed+for+the+presence+of+Salmonella.">A loop-mediated isothermal amplification-based method for analysing animal feed for the presence of Salmonella.</a> Food Analytical Methods. 8 (10), 2409-2416 (2015).</li><li>Galan, J. E., Ginocchio, C., Costeas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+the+Salmonella+invasion+gene+invA:+homology+of+InvA+to+members+of+a+new+protein+family.">Molecular and functional characterization of the Salmonella invasion gene invA: homology of InvA to members of a new protein family.</a> Journal of Bacteriology. 174 (13), 4338-4349 (1992).</li><li>Chen, S., Wang, F., Beaulieu, J. C., Stein, R. E., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+viable+salmonellae+in+produce+by+coupling+propidium+monoazide+with+loop-mediated+isothermal+amplification.">Rapid detection of viable salmonellae in produce by coupling propidium monoazide with loop-mediated isothermal amplification.</a> Applied and Environmental Microbiology. 77 (12), 4008-4016 (2011).</li><li>Yang, Q., Chen, S., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+Salmonella+serovars+in+shell+eggs+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">Detecting Salmonella serovars in shell eggs by loop-mediated isothermal amplification.</a> Journal of Food Protection. 76 (10), 1790-1796 (2013).</li><li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+loop-mediated+isothermal+amplification+for+the+rapid,+reliable,+and+robust+detection+of+Salmonella+in+produce.">Evaluation of loop-mediated isothermal amplification for the rapid, reliable, and robust detection of Salmonella in produce.</a> Food Microbiology. 46, 485-493 (2015).</li><li>Yang, Q., Domesle, K. J., Wang, F., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+Salmonella+in+food+and+feed+by+coupling+loop-mediated+isothermal+amplification+with+bioluminescent+assay+in+real-time.">Rapid detection of Salmonella in food and feed by coupling loop-mediated isothermal amplification with bioluminescent assay in real-time.</a> BMC Microbiology. 16 (1), 112 (2016).</li><li>Domesle, K. J., Yang, Q., Hammack, T. S., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+Salmonella+loop-mediated+isothermal+amplification+assay+in+animal+food.">Validation of a Salmonella loop-mediated isothermal amplification assay in animal food.</a> International Journal of Food Microbiology. 264, 63-76 (2018).</li><li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MIQE+guidelines:+minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments.">The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.</a> Clinical Chemistry. 55 (4), 611-622 (2009).</li></ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים. הדעות המובעות בכתב יד זה הן של המחברים ואינן משקפות בהכרח את המדיניות הרשמית של מחלקת הבריאות ושירותי האנוש, מינהל המזון והתרופות האמריקאי או ממשלת ארה"ב. התייחסות לחומרים מסחריים, ציוד או תהליך כלשהו אינה מהווה בשום אופן אישור, אישור או המלצה של מינהל המזון והתרופות האמריקאי.

הצגנו כאן שיטת LAMP פשוטה, מהירה, ספציפית ורגישה להקרנה ואישור סלמונלה במזון מן החי ובתרבות הטהורה, בהתאמה. עם הנוחות של תערובת מאסטר איזותרמית המכילה ארבעה מגיבים מרכזיים, ותמהיל פריימר מוכן לשימוש, שהוכן בתוך הבית, הרכבת תגובת LAMP דורשת רק כמה שלבי צנרת (איור 1). זמן הריצה הכולל, כולל שלבי הגברה ואנאל, הוא פחות מ-38 דקות(איור 2A, B ואיור 3אמפר,B). תוצאות חיוביות מנוטרות באמצעות פלואורסצנטיות בזמן אמת (איור 2C ואיור 3C,D)וניתן לזהות אותן כבר ב-5 דקותו-26 דקות. שלב האנאל משמש כאישור נוסף לספציפיות LAMP מכיוון שרק דגימות עם Tm נכון (בסביבות 90 °C (בסביבות 90 °C)) מדווחות כחיוביות(איור 2D,E ואיור 3E-G). רגישויות של 1 תא סלמונלה בתרבות טהורה < 1 CFU/25 גרם במזון לבעלי חיים דווחו בעבר26.
כמו LAMP הוא יעיל למדי ומייצר כמות גדולה של DNA1, זה קריטי כי שיטות העבודה הטובות ביותר במעבדה משמשים למניעת זיהום צולב, אשר עשויים לכלול פיזית הפרדה בין האזורים להכנת תערובת הורים LAMP והוספת תבניות DNA, הימנעות יצירת אירוסולים, באמצעות טיפים פיפט מסנן, החלפת כפפות לעתים קרובות, והימנעות מפתיחת צינורות תגובה LAMP לאחר הגברה.
הספציפיות של שיטת סלמונלה LAMP זו נבדקה בעבר באמצעות 300 זנים חיידקיים (247 סלמונלה של 185 סרוברים ו 53 שאינםסלמונלה) והוכח להיות 100% ספציפי26. יש לציין כי הבדלים משמעותיים ב- Tmax נצפו בין שני מיני הסלמונלה, S. enterica וסלמונלה בונגורי, ובין תת המין S. enterica, במיוחד subsp. arizonae (IIIa)26. עם זאת, אלה היו עדיין תוצאות חיוביות תקפות לפי הכללים לפרש תוצאות LAMP. במחקר הרב-מעבדתי שלנו במזון לכלבים יבשים שכלל 14 אנליסטים19, נצפו מדי פעם דגימות עם תוצאות לא עקביות בריצות LAMP כפולות. אלה בדרך כלל מעורבים דגימות עם תוצאות חיוביות מעוכבות (Tmax > 15 דקות). חזרה על שתי ההפעלות באופן עצמאי פתרה בדרך כלל את הבעיה. לעתים רחוקות יותר, ראינו דגימות עם ערכי Tm נכונים אך לא או לא סדירים Tmax (< 5 דקות). זה נגרם בדרך כלל על ידי בועות אוויר בצינור התגובה.
לאורך מחזור החיים של פיתוח שיטת LAMP, הערכה, מחקר precollaborative, אימות רב מעבדה, ראינו סובלנות גבוהה של LAMP למעכבים במזון מן החי שונים או מטריצות מזון ומדיה תרבות4,19,22,23,24, הדגשת החוסן של השיטה ושיתוף מחקרים רבים אחרים בקנה מידה עולמי8. זה עדיף בהשוואה PCR או PCR בזמן אמת, אשר בדרך כלל דורש בקרת הגברה פנימית כדי להבטיח כי תוצאות שליליות אינן בשל עיכוב מטריקס28. יתר על כן, LAMP הפגינה ספציפיות ורגישות דומות (או מעולות) בהשוואה ל- PCR או PCR בזמן אמת ברוב המכריע של מחקרים8. העלות של ריאגנטים LAMP הוא על $1 לכל תגובה. מכשירי LAMP המשמשים בפרוטוקול זה הם קטנים, בעלי תחזוקה נמוכה וניידים. הם יכולים להתמודד עם כל שיטת הגברה isothermal המעסיקה זיהוי היעד על ידי מדידת פלואורסצנטיות, LAMP כלול. באמצעות תוכנת LAMP, ניתן ליצור דוחות מקיפים בפורמט מרובה (pdf, טקסט ותמונה).
אימות פעולת שירות הוא שלב קריטי לפני שניתן יהיה לאמץ שיטה חדשה לשימוש שגרתי. ראוי לציין כי פרוטוקול LAMP שדווח כאן השלים בהצלחה אימות מרובה מעבדות19. עם השילוב האחרון של פרוטוקול LAMP זה לתוך ארה"ב. ה-FDA של BAM פרק 5 סלמונלה27, צפוי כי השיטה תרוויח שימוש רחב הרבה יותר, הן כשיטת סינון מהירה במזון מן החי והן כשיטת אישור אמינה לסלמונלה המשוערת מבודדת מכל קטגוריות המזון.

הגברה איסותרמית בתיווך לולאה (LAMP) היא מבחן הגברה של חומצת גרעין איסותרמית חדשנית (iNAAT) שהומצא בשנת 2000 על ידי קבוצה של מדענים יפנים1. באמצעות היווצרות מבנה DNA ספציפי לגזע-לולאת במהלך השלבים הראשונים, LAMP משתמשת פולימראז DNA עקירת גדילים כדי להגביר ביעילות את החומר ההתחלתי הזה מעין אקספוננציאלית, וכתוצאה מכך 109 עותקים של היעד בפחות מ 1 שעות1. בהשוואה לתגובת שרשרת פולימראז (PCR), NAAT בשימוש נרחב, LAMP יש מספר יתרונות. ראשית, תגובות LAMP מתבצעות בתנאים איסותרמיים. זה מייתר את הצורך במכשיר רכיבה תרמי מתוחכם. שנית, LAMP סובלנית מאוד למדיית תרבות וחומרים ביולוגיים2 עם חוסן שהוכח עבור יישומים קליניים ומזון3,4. פעולה זו מפשטת את ההכנה לדוגמה וממזערת תוצאות שליליות כוזבות5. שלישית, LAMP נוח לפלטפורמות זיהוי מרובות, כגון מערבולת, צבעים, ביולומינציה, פלואורסצנטיות ומיקרופלואידיקה6. רביעית, LAMP הוא מאוד ספציפי כפי שהוא משתמש ארבעה עד שישה פרייומרים שתוכננו במיוחד כדי למקד שישה עד שמונה אזורים ספציפיים1,7. החמישית, LAMP הוא רגיש במיוחד ומחקרים רבים דיווחו על רגישות מעולה שלה PCR או PCR בזמן אמת8. לבסוף, LAMP הוא מהיר יותר עם מבחנים רבים עכשיו לאמץ זמן ריצה סטנדרטי 30 דקות בעוד PCR סוג מבחנים בדרך כלל לקחת 1-2 שעות8.
תכונות אטרקטיביות אלה תדלקו את היישום של LAMP באזורים רחבים לגילוי פתוגן, כוללאבחון במבחנה 9 , אבחון מחלות בעליחיים 10, ובדיקות מזון וסביבה11. יש לציין, TB-LAMP (מנורה עבור שחפת Mycobacterium) הומלץ על ידי WHO כמבחן חלופי תקף עבור מיקרוסקופיה מריחת כיח עבור אבחונים שחפת ריאות בהגדרות היקפיות12. יישום LAMP מתרחב גם מעבר לזיהוי מיקרוביאלי כדי לכלול גילוי של אלרגנים, מיני בעלי חיים, עמידות לסמים, אורגניזמים מהונדסים גנטית וחומרי הדברה13.
סלמונלה לא הטיפוסית היא פתוגן זואונוטי של בטיחות מזון משמעותית ודאגה לבריאות הציבור ברחבי העולם14. הוא זוהה גם כמפגע מיקרוביאלי חשוב במזון לבעלי חיים (כלומר, מזון לבעליחיים) 15,16. כדי למנוע מחלות/התפרצויות סלמונלה ממזון אנושי מזוהם ומזון לבעלי חיים, חובה על שיטות מהירות, אמינות וחזקות לבדיקת סלמונלה במגוון מטריצות. בעשור האחרון נעשו מאמצים ניכרים ברחבי העולם בפיתוח ויישום של מבחני סלמונלה LAMP במגוון רחב של מטריצות מזון, כפי שסוכם לאחרונה בסקירה מקיפה8. מספר מבחני מנורת סלמונלה, כולל זה המוצג כאן, השלימו בהצלחה אימות רב מעבדה בעקבות הנחיות בינלאומיות מבוססות היטב17,18,19,20.
מבחני מנורת הסלמונלה שלנו מתמקדים במיוחד בגן הפלישה לסלמונלה invA (מספר הצטרפות GenBank M90846)21 והוא מהיר, אמין וחזק במספר מטריצות מזון4,22,23,24,25,26. השיטה קיבלה תוקף בשש מטריצות מזון מן החי במחקר טרום קולבוריטיבי26 ובמזון לכלבים יבשים במחקר רב מעבדתימשותף 19. כתוצאה מכך, שיטת סלמונלה LAMP המוצגת כאן שולבה לאחרונה במינהל המזון והתרופות האמריקאי (המדריך האנליטי הבקטריולוגי (BAM) של ה-FDA פרק 5 סלמונלה27 לשרת שתי מטרות, אחת כשיטת סינון מהירה לנוכחות סלמונלה במזון מן החי ושתיים כשיטת אישור אמינה לסלמונלה חזקה מבודדת מכל המזונות.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Brain heart infusion (BHI) broth</td>
			<td>BD Diagnostic Systems, Sparks, MD</td>
			<td>299070</td>
			<td>Liquid growth medium used in the cultivation of Salmonella.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered peptone water (BPW)</td>
			<td>BD Diagnostic Systems, Sparks, MD</td>
			<td>218105</td>
			<td>Preenrichment medium for the recovery of Salmonella from animal food samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA AWAY</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>7010</td>
			<td>Eliminates unwanted DNA and DNase from laboratory bench, glassware, and plasticware without affecting subsequent DNA samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie Explorer software</td>
			<td>OptiGene Ltd., West Sussex, United Kingdom</td>
			<td>Version 2.0.6.3</td>
			<td>Supports remote operation of Genie instruments including LAMP runs and data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie II or Genie III (LAMP instrument)</td>
			<td>OptiGene Ltd., West Sussex, United Kingdom</td>
			<td>GEN2-02 or GEN3-02</td>
			<td>A small instrument capable of temperature control up to 100 &#176;C with &#177; 0.1 &#176;C accuracy and simultaneous fluorescence detection via the FAM channel. Genie II has 2 blocks (A and B) with 8 samples in each block. Genie III has a single block that accommodates 8 samples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie strip</td>
			<td>OptiGene Ltd., West Sussex, United Kingdom</td>
			<td>OP-0008</td>
			<td>8-well microtube strips with integral locking caps and a working volume of 10 to 150 &#181;l.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie strip holder</td>
			<td>OptiGene Ltd., West Sussex, United Kingdom</td>
			<td>GBLOCK</td>
			<td>Used to hold Genie strips when setting up a LAMP reaction, the aluminum holder can also be used as a cool block.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCl) solution, 1 N</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>SA48-500</td>
			<td>Adjusts pH of animal food samples after adding BPW and prior to overnight enrichment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat block</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>88-860-022</td>
			<td>Heats samples at 100 &#177; 1 oC for DNA extraction.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>3960</td>
			<td>Standard laboratory incubator.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ISO-001 isothermal master mix</td>
			<td>OptiGene Ltd., West Sussex, United Kingdom</td>
			<td>ISO-001</td>
			<td>An optimized master mix to simplify the assembly of a LAMP reaction, containing a strand-displacing GspSSD DNA polymerase large fragment from Geobacillus spp., thermostable inorganic pyrophosphatase, reaction buffer, MgSO4, dNTPs, and a double-stranded DNA binding dye (FAM detection channel).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>A416</td>
			<td>Disinfects work surfaces.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAMP primers</td>
			<td>Integrated DNA Technologies Inc., Coralville, IA</td>
			<td>Custom</td>
			<td>LAMP primers with detailed information in Table 1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf North America, Hauppauge, NY</td>
			<td>22620207</td>
			<td>MiniSpin plus personal microcentrifuge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td>Standard microcentrifuge tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular grade water</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>AM9938</td>
			<td>Used in making primer stocks, primer mix, and LAMP reaction mix.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH) solution, 1 N</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>SS266-1</td>
			<td>Adjusts pH of animal food samples after adding BPW and prior to overnight enrichment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonselective agar (e.g., blood agar, nutrient agar, and trypticase soy agar)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>R01202</td>
			<td>Solid growth medium used in the cultivation of Salmonella.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone water</td>
			<td>BD Diagnostic Systems, Sparks, MD</td>
			<td>218071</td>
			<td>Dilutes overnight Salmonella cultures to make positive control DNA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and tips</td>
			<td>Mettler-Toledo Rainin LLC, Oakland CA</td>
			<td>Pipet Lite LTS series</td>
			<td>Standard laboratory pipettes and tips.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrepMan Ultra sample preparation reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td>
			<td>4318930</td>
			<td>A simple kit used for the rapid preparation of DNA templates for use in a LAMP reaction.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmonella reference strain LT2</td>
			<td>ATCC, Manassas, VA</td>
			<td>700720</td>
			<td>Salmonella reference strain used as positive control.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase soy broth (TSB)</td>
			<td>BD Diagnostic Systems, Sparks, MD</td>
			<td>211768</td>
			<td>Liquid growth medium used in the cultivation of Salmonella.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>Scientific Industries, Inc., Bohemia, NY</td>
			<td>SI-0236</td>
			<td>Standard laboratory vortex mixer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whirl-pak filter bag</td>
			<td>Nasco Sampling Brand, Fort Atkinson, WI</td>
			<td>B01318</td>
			<td>Filter bags to hold animal food samples for preenrichment.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

loop-mediated isothermal amplification for screening salmonella in animal food and confirming salmonella from culture isolation

הגברה איסותרמית בתיווך לולאה (LAMP) התגלתה כבדיקת הגברה עוצמתית של חומצת גרעין לגילוי מהיר של סוכנים חיידקיים, פטרייתיים, טפיליים ויראליים רבים. סלמונלה היא פתוגן חיידקי של דאגה עולמית לבטיחות מזון, כולל מזון לבעלי חיים. מוצג כאן הוא פרוטוקול רב מעבדה מאומת סלמונלה LAMP שניתן להשתמש בהם כדי לסנן במהירות מזון מן החי לנוכחות של זיהום סלמונלה והוא יכול לשמש גם כדי לאשר סלמונלה המשוער מבודד התאושש מכל קטגוריות המזון. מבחני LAMP מכוונים באופן ספציפי לגן הפלישה לסלמונלה (invA) והוא מהיר, רגיש וספציפי מאוד. DNAs תבנית מוכנים מרקים העשרה של מזון מן החי או תרבויות טהורות של סלמונלה המשוערת מבודדת. תערובת ריאגנט מנורה מוכנה על ידי שילוב של תערובת הורים isothermal, פרייומרים, תבנית DNA, ומים. בדיקת LAMP פועלת בטמפרטורה קבועה של 65 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. תוצאות חיוביות מנוטרות באמצעות פלואורסצנטיות בזמן אמת וניתן לזהותן כבר 5 דקות. בדיקת LAMP מפגינה עמידות גבוהה כלפי מעכבים במדיום מזון או תרבות מן החי, ומשמשת כשיטה מהירה, אמינה, איתנה, חסכונית וידידותית למשתמש לסינון ולאישור סלמונלה. שיטת LAMP שולבה לאחרונה במדריך האנליטי הבקטריולוגי (BAM) של מינהל המזון והתרופות האמריקאי (BAM) פרק 5.

איור 2 ואיור 3 מציגים גרפים/טבלאות LAMP מייצגים המוצגים בשתי הפלטפורמות. בהפעלת LAMP זו, דגימות S1 עד S6 הן דילול סדרתי פי 10 של S. enterica serovar Infantis ATCC 51741 החל מ- 1.1 x 106 CFU עד 11 CFU לכל תגובה. שליטה חיובית היא S. enterica serovar Typhimurium ATCC 19585 (LT2) ב 1.7 x 10 4 CFU לכלתגובה NTC הוא מים כיתה מולקולרית.
כפי שמוצג באיור 2E ובאיור 3G, הן בארות NTC והן בארות מחשב הן פקדים חוקיים. באר NTC יש Tmax ריק בעוד Tm הוא < 83 °C (70 °F) על לוח מכשיר LAMP וריק בתוכנת LAMP, מה שמרמז על תוצאה שלילית. המחשב גם יש Tמקסימום של 7 דקות 45 שניות ו Tm של ~ 90 °C (60 °F) על שתי הפלטפורמות, מה שמרמז על תוצאה חיובית. דגימות S1 כדי S6 יש Tמקסימום בין 6 דקות 30 שניות ו 12 דקות 15 שניות, כל להיות סלמונלה-חיובי.
לאחר ריצות כפולות של אותה קבוצת דגימות, תוצאות LAMP הסופיות מדווחות עבור דגימות אלה. ריצת LAMP מייצגת זו מראה כי LAMP מזהה בהצלחה סלמונלה עם מגוון רחב של ריכוזים בדגימות.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61239/61239fig2v2.jpg"> איור 2: תוצאות LAMP מייצגות המוצגות בלוח המכשירים של LAMP. (A)הכרטיסיה פרופיל מציגה את פרופיל הטמפרטורה מתוכנת. (B) הכרטיסיה טמפרטורה מציגה טמפרטורות בפועל בבארות המדגם כאשר תגובת LAMP ממשיכה. (C)הכרטיסייה הגברה מציגה קריאות פלואורסצנטיות במהלך הגברה של LAMP. (ד)הכרטיסייה Anneal מציגה שינויים בפלואורסצנטיות (נגזרת) במהלך שלב האנאל. (ה)הכרטיסיה תוצאות מציגה תצוגה טבלאית של תוצאות LAMP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61239/61239fig2v2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61239/61239fig3v2.jpg"> איור 3: תוצאות LAMP מייצגות המוצגות בתוכנת LAMP. (A)הכרטיסיה פרופיל מציגה את פרופיל הטמפרטורה מתוכנת. (B) הכרטיסיה טמפרטורה מציגה טמפרטורות בפועל בבארות המדגם כאשר תגובת LAMP ממשיכה. (C)הכרטיסייה הגברה מציגה קריאות פלואורסצנטיות במהלך הגברה של LAMP. (D)הכרטיסיה קצב הגברה מציגה שינויים בפלואורסצנטיות (יחס פלואורסצנטיות) במהלך הגברה של LAMP. (E)הכרטיסייה Anneal מציגה קריאות פלואורסצנטיות בשלב האנאל. (ו)הכרטיסייה נגזרת Anneal מציגה שינויים בפלואורסצנטיות (נגזרת) במהלך שלב anneal. (G) הכרטיסיה 'תוצאה' מציגה תצוגה טבלאית של תוצאות LAMP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61239/61239fig3v2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation at JoVE.com

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

הגברה איזותרמית בתיווך לולאה (LAMP) היא מבחן הגברה של חומצת גרעין (iNAAT) אשר משך עניין נרחב בתחום זיהוי הפתוגן. כאן, אנו מציגים פרוטוקולסלמונלה LAMP מרובה מעבדות כשיטה מהירה, אמינה וחזקה להקרנת סלמונלה במזון לבעלי חיים ולאימות סלמונלה חזקה מבידוד תרבותי.

הגברה איזותרמית בתיווך לולאה להקרנת סלמונלה במזון לבעלי חיים ואישור סלמונלה מבידוד תרבות

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, ...

loop-mediated-isothermal-amplification-for-screening-salmonella

Research

JoVE Journal

Biology

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

7.9K Views.  U.S. Food and Drug Administration. הגברה איזותרמית בתיווך לולאה (LAMP) היא מבחן הגברה של חומצת גרעין (iNAAT) אשר משך עניין נרחב בתחום זיהוי הפתוגן. כאן, אנו מציגים פרוטוקולסלמונלה LAMP מרובה מעבדות כשיטה מהירה, אמינה וחזקה להקרנת סלמונלה במזון לבעלי חיים ולאימות סלמונלה חזקה מבידוד תרבותי...

Video: Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and tumorigenesis. Many researchers have taken advantage of the colitis induced by Salmonella typhimurium for the studies on the early phase of inflammation and infection. However, only few reports are on the chronic infection in vivo. Mice with Salmonella persistent existence in the gastrointestinal tract allow us to explore the long-term host-bacterial interaction, signal transduction, and tumorigenesis. We have established a chronic bacterial infected mouse model with Salmonella typhimurium colonization in the mouse intestine over 6 months. To use this system, it is necessary for the researcher to learn how to prepare the bacterial culture and gavage the animals. We detail a methodology for prepare bacterial culture and gavage mice. We also show how to detect the Salmonella persistence in the gastrointestinal tract. Overall, this protocol will aid researchers using the bacterial infected mouse model to address fundamentally important biological and microbiological questions.

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

Establish a chronic bacterial infected mouse model with persistent Salmonella typhimurium colonization in intestine for 27 weeks.

כרוני סלמונלה עכבר אינפקטד דגם

The bacterial infected mouse model is a powerful model system for studying areas such as infection, inflammation, immunology, signal transduction, and ...

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also termed the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The reproductive axis is a key integrator of environmental and internal input adapting fertility to favorable conditions for reproduction. Prior to embarking upon a fertility study in mice and rats, sexual maturity is evaluated to exclude the possibility that the observed reproductive phenotypes are caused by delayed or absent pubertal onset. This protocol describes a non-invasive approach to assess pubertal onset in males through the determination of preputial separation, and in females through vaginal opening and first estrus. After the confirmation of the completion of puberty and the achievement of sexual maturity, a fertility study can be initiated. The procedure describes the optimal breeding conditions for mice and rats, how to set up a fertility study, and what parameters to evaluate and determine if the treatment or gene deletion has an impact on fertility.

Many treatments and genetic mutations impact the timing of sexual maturity and fertility. This protocol describes a non-invasive method to evaluate pubertal onset in mice and rats prior to setting up a fertility study in sexually mature animals.

קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Quasi-metagenomic Analysis of Salmonella from Food and Environmental Samples

Quasi-metagenomics sequencing refers to the sequencing-based analysis of modified microbiomes of food and environmental samples. In this protocol, microbiome modification is designed to concentrate genomic DNA of a target foodborne pathogen contaminant to facilitate the detection and subtyping of the pathogen in a single workflow. Here, we explain and demonstrate the sample preparation steps for the quasi-metagenomics analysis of Salmonella enterica from representative food and environmental samples including alfalfa sprouts, ground black pepper, ground beef, chicken breast and environmental swabs. Samples are first subjected to the culture enrichment of Salmonella for a shortened and adjustable duration (4&#8211;24 h). Salmonella cells are then selectively captured from the enrichment culture by immunomagnetic separation (IMS). Finally, multiple displacement amplification (MDA) is performed to amplify DNA from IMS-captured cells. The DNA output of this protocol can be sequenced by high throughput sequencing platforms. An optional quantitative PCR analysis can be performed to replace sequencing for Salmonella detection or assess the concentration of Salmonella DNA before sequencing.

Quasi-metagenomic Analysis of Salmonella from Food and Environmental Samples

Here, we present a protocol to prepare DNA samples from food and environmental microbiomes for concerted detection and subtyping of Salmonella through quasimetagenomic sequencing. The combined use of culture enrichment, immunomagnetic separation (IMS), and multiple displacement amplification (MDA) allows effective concentration of Salmonella genomic DNA from food and environmental samples.&#160;

ניתוח קוואזי-metagenomic של סלמונלה מזון, סביבתית דגימות

Quasi-metagenomics sequencing refers to the sequencing-based analysis of modified microbiomes of food and environmental samples. In this protocol, ...

Isolation and Culture of Primary Oral Keratinocytes from the Adult Mouse Palate

For years, most studies involving keratinocytes have been conducted using human and mouse skin epidermal keratinocytes. Recently, oral keratinocytes have attracted attention because of their unique function and characteristics. They maintain the homeostasis of the oral epithelium and serve as resources for applications in regenerative therapies. However, in vitro studies that use oral primary keratinocytes from adult mice have been limited due to the lack of an efficient and well-established culture protocol. Here, oral primary keratinocytes were isolated from the palate tissues of adult mice and cultured in a commercial low-calcium medium supplemented with a chelexed-serum. Under these conditions, keratinocytes were maintained in a proliferative or stem cell-like state, and their differentiation was inhibited even after increased passages. Marker expression analysis showed that the cultured oral keratinocytes expressed the basal cell markers p63, K14, and &#945;6-integrin and were negative for the differentiation marker K13 and the fibroblast marker PDGFR&#945;. This method produced viable and culturable cells suitable for downstream applications in the study of oral epithelial stem cell functions in vitro.

The present protocol describes the isolation and culture of oral keratinocytes derived from the adult mouse palate. An evaluation method using immunostaining is also reported.

בידוד ותרבות של קרטינוציטים אוראליים ראשוניים מחך העכבר למבוגרים

For years, most studies involving keratinocytes have been conducted using human and mouse skin epidermal keratinocytes. Recently, oral keratinocytes have ...

Isolation and Screening from Soil Biodiversity for Fungi Involved in the Degradation of Recalcitrant Materials

Environmental pollution is an increasing problem, and identifying fungi involved in the bioremediation process is an essential task. Soil hosts an incredible diversity of microbial life and can be a good source of these bioremediative fungi. This work aims to search for soil fungi with bioremediation potential by using different screening tests. Mineral culture media supplemented with recalcitrant substances as the sole carbon source were used as growth tests. First, soil dilutions were plated on Petri dishes with mineral medium amended with humic acids or lignocellulose. The growing fungal colonies were isolated and tested on different substrates, such as complex mixtures of hydrocarbons (petrolatum and used motor oil) and powders of different plastic polymers (PET, PP, PS, PUR, PVC). Qualitative enzymatic tests were associated with the growth tests to investigate the production of esterases, laccases, peroxidases, and proteases. These enzymes are involved in the main degradation processes of recalcitrant material, and their constitutive secretion by the examined fungal strains could have the potential to be exploited for bioremediation. More than 100 strains were isolated and tested, and several isolates with good bioremediation potential were found. In conclusion, the described screening tests are an easy and low-cost method to identify fungal strains with bioremediation potential from the soil. In addition, it is possible to tailor the screening tests for different pollutants, according to requirements, by adding other recalcitrant substances to minimal culture media.

Here, we present a protocol for screening soil biodiversity to look for fungal strains involved in the degradation of recalcitrant materials. First, fungal strains able to grow on humic acids or lignocellulose are isolated. Their activity is then tested both in enzymatic assays and on pollutants such as hydrocarbons and plastics.

בידוד וסינון מהמגוון הביולוגי בקרקע עבור פטריות המעורבות בהתדרדרות של חומרים סרבנים

Environmental pollution is an increasing problem, and identifying fungi involved in the bioremediation process is an essential task. Soil hosts an ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The preparation of high-quality single-cell suspensions is essential for single-cell level studies such as single-cell RNA or genome sequencing. However, there is no ready-to-use protocol for aquaculture fish species, particularly for the intestine of tilapia. The effective dissociation enzymes vary depending on the tissue type. Therefore, optimizing the tissue dissociation protocol by selecting the appropriate enzyme or enzyme combination to obtain enough viable cells with minimum damage is essential. This study illustrates an optimized protocol to prepare a high-quality single-cell suspension from Nile tilapia intestine with an enzyme combination of collagenase/dispase. This combination is highly effective for dissociation with the utilization of bovine serum albumin and DNase to reduce cell aggregation after digestion. The cell output satisfies the requirements for single-cell sequencing, with 90% cell viability and a high cell concentration. This protocol can also be modified to prepare a single-cell suspension from the intestines of other fish species. This research provides an efficient reference protocol and reduces the need for additional trials in the preparation of single-cell suspensions for aquaculture fish species.

Here, we demonstrate the preparation of a high-quality single-cell suspension of tilapia intestine for single-cell sequencing.

הכנת תרחיף חד-תאי ממעי אמנון הנילוס לריצוף חד-תאי

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

שימוש בניתוח Colorimetric ו- RT-LAMP כדי לזהות SARS-CoV-2 

Detecting SARS-CoV-2 Virus by Reverse Transcription-Loop-Mediated Isothermal Amplification

The severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) virus has dramatically impacted human health. It continues to be a threat to modern society because many people die as a result of infection. The disease is diagnosed using serologic and molecular tests, such as the gold standard real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). The last has several disadvantages because it requires specialized infrastructure, costly equipment, and trained personnel. Here, we present a protocol outlining the steps required to detect the SARS-CoV-2 virus using reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) in human samples. The protocol includes instructions for designing primers in silico, preparing reagents, amplification, and visualization. Once standardized, this method can be easily implemented and adapted to any laboratory or point-of-care within 60 min at a low cost and using inexpensive equipment. It is adaptable to detecting different pathogens. Thus, it can potentially be used in the field and in health centers to carry out timely epidemiological surveillance.

מחבר זרקור: קידום אבחון פתוגנים עם LAMP סטנדרטי

Here we provide a complete protocol to standardize and implement the method for detecting the SARS-CoV-2 virus in human samples by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP). This method, done within 60 min, could be adapted to any laboratory or point-of-care at a low cost and using inexpensive equipment.

איתור נגיף SARS-CoV-2 על ידי הגברה איזותרמית בתיווך לולאת שעתוק לאחור

The severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) virus has dramatically impacted human health. It continues to be a threat to modern ...

שימוש ב-LPS חיידקי לסילוק בקטריופאג'ים מתרביות סלמונלה

Bacteriophage Removal from Infected Salmonella Cultures

Bacteriophages, or simply phages, play a vital role in microbial environments, impacting bacterial populations and shaping their evolution and interactions. These organisms are viruses that infect and replicate within bacterial hosts. Phages are ubiquitous on Earth, highly diverse, and very abundant. While bacteriophages have valuable roles in different environments and are a key area of research in microbiology and ecology, their presence can be undesirable in certain industrial processes or products. Considering the abundance and ubiquity of bacteriophages on Earth, the design of procedures for the removal of bacteriophages from bacterial cultures is crucial in diverse laboratory and industrial applications to preserve the integrity of the cultures and ensure accurate experimental results or product quality. Here, we have fine-tuned a protocol to eliminate the bacteriophages from infected Salmonella enterica cultures, using a strategy based on the use of lipopolysaccharides (LPS) located in the outer membrane of Gram-negative bacteria. Bacterial LPS plays an important role in host recognition by phages, and we make use of this property to design an effective procedure for the removal of phages, which use LPS as a receptor, in Salmonella bacterial cultures.

מחבר זרקור: חיסול יעיל של בקטריופאג'ים מתרביות סלמונלה נגועות באמצעות ליפופוליסכרידים

Bacteriophages, ubiquitous and diverse on Earth, infect and replicate within bacterial hosts, playing a crucial role in microbial ecosystems. Despite their importance, their presence may disrupt industrial processes. We have developed a method using bacterial lipopolysaccharides to eliminate bacteriophages from Salmonella cultures.