פרוטוקול זה נותן הדרכה מדויקת, צעד אחר צעד, ליציקת כלי הדם העורקיים הריאה בעכברים בוגרים ותחילת לידה. טכניקה זו מאפשרת למשתמשים ללהק באופן מלא את כל רשת כלי הדם להדמיה במגוון שיטות, כולל מיקרו-CT, תוך שמירה על שלמות הרקמות הרכות. טכניקה זו שימושית במיוחד להתבוננות במורפולוגיה ואדריכלות של כלי דם ריאתי, אך ניתן להתאים אותה בקלות לפילוח של מיטות כלי דם אחרות.
כמו ניתוחים וניתוחים רבים, אין תחליף למעשה לדמיין הליך, והצופים עשויים להפיק תועלת מלראות כמה מהתמרונים המאתגרים יותר מבוצעים. לאחר תהליך xiphoid נחשף, בעדינות לתפוס ולרומם את כלוב הצלעות. בזהירות לעשות חתך בסרעפת חשופה עכשיו, שקוף למחצה.
הריאות יתמוטטו בעליל, ויתרחקו מהסרעפת. לאחר חשיפת הריאה וקנה הנשימה, חוט 15 ס"מ של צינורות PE10 על הרכזת של מחט 30-מד. ולצרף יחידה זו למזרק מיליליטר אחד, המכיל 10 עד 4 טוחן של נתרן nitroprusside, ב PBS.
קדם את הבוכנה כדי להפוך את הצינורות עד שכל האוויר כבר מטוהר. כחלופה יעילה לטקסט, לחדור את פסוק הלב בצד אחד, ולהעביר את קצות מדפים מעוגלים דרך השריר, ואת הצד השני של הרקמה. לתפוס קצה אחד של אורך 10 ס"מ של משי 7-0, ולמשוך כשני סנטימטרים דרך הרקמה.
לאחר קשירת התפר, השתמש בשמונה ס"מ הנותרים של תפר כדי למשוך את הלב באופן סיבתי. ותדביק את קצה התפר ללוח הניתוחים. וו את קצות מדפים מעוגלים תחת הן את העורקים העולים ואת תא המטען של עורק הריאה.
ולמשוך אורך של 3 ס"מ של משי 7-0 בחזרה דרך הפתח כדי ליצור תפר רופף חד פעמי. השתמש במספריים כדי לבצע חתך של 1-2 מ"מ לכיוון עלות הלב, חדירה החדר הימני דק הקירות. והכניסו את הצינורות ההפוכים לחדר הימני, והתקדמו בעדינות את הקטטר לתוך תא המטען הדק למחצה של עורק התריאה.
ודא חזותית כי הקטטר לא התקדם לענפי הריאה השמאליים או הימניים, ואינו עולה על נקודת ענף עורק הריאה. מדביקים את החלק הדיסטלי של הצינור ללוח הניתוחי, ומהדקים בעדינות את התפר הרופף סביב שני הכלים הגדולים. חותכים את חתיכת התפר באורך שמונה ס"מ כדי להחזיר את הלב למצב מנוחה טבעי.
ולגזור את הנביאה השמאלית של הלב כדי לאפשר לתוספות לצאת מהסקגולטורה. לאחר מכן, השתמש במשאבת מזרק, כדי להחדיר את הנתרן nitroprusside בקצב זרימה של 0.5 מיליליטר / דקה הן לשטוף את הדם, כדי להחדיר את כלי הדם באופן מקסימלי, עד perfusate פועל ברור. כדי לבנות את יחידת אינפלציית הריאות, לחתוך את קטטר פלסטיק גמיש 24-מד תוך וריד מהאמבטיה ולהתחבר המחט של ערכת עירוי פרפר.
צרף יחידה זו ל stopcock, ולצרף את stopcock למזרק פתוח 50 מיליליטר. לאחר טעינת המזרק עם פורמלין ו priming קטטר, עם stopcock סגור, למקם את המזרק בעמדת טבעת, עד לנקודה שבה המניסקוס הוא 20 ס"מ מעל קנה הנשימה. מניחים שני תפרים רופפים, שניים עד ארבעה מילימטרים זה מזה, נחותים מהסחוס העריסה, ולהשתמש במספריים כדי לבצע חתך קטן ברצועה cricothyroid, מעולה על התפרים.
מכניסים את הקטטר לתוך הפתח, ומקדמות את הקצה מעבר לשני התפרים הרופפים. הדק את התפרים סביב קנה הנשימה, ולפתוח את stopcock כדי לאפשר את הפורמלין להיכנס לריאות על ידי כוח הכבידה. חכה חמש דקות עד שהריאות יתנפחו לגמרי.
אם הריאות נצמדות לכלוב הצלעות במהלך האינפלציה, השתמש במטסים קהים כדי לתפוס את החלק החיצוני של כלוב הצלעות, והזז את הצלעות לכל הכיוונים כדי לסייע בהפצת האונות מבלי ליצור מגע ישיר עם הריאות. לאחר חמש דקות, לסגת קטטר מאחורי התפר הראשון ligate. ואז לסגת קטטר מאחורי התפר השני ligate.
הריאות צריכות כעת להיות מנופחות במצב סגור, בלחץ. כדי להטיל את כלי הדם, לטעון מיליליטר אחד של פתרון 8-1-1 של חומר ריפוי פולימרי diluent לתוך מזרק מיליליטר אחד. ולהכניס בזהירות את הבוכנה.
עם המזרק הפוך, לדכא את הבוכנה כדי להסיר את האוויר, ולאפשר היווצרות של מניסקוס בקצה המזרק. הסר את מזרק nitroprusside נתרן מהרכזת של המחט, ולטפטף תוספת PBS לתוך הרכזת, כדי ליצור מניסקוס. הצטרפו למזרק הפולימר-תרכובת לרכזת, והתחל את העירוי ב-0.02 מילימטרים לדקה.
לפקח על התרכובת כפי שהוא נע בחופשיות דרך צינורות, ונוי על נפח המזרק כפי שהוא נכנס תא המטען של עורק הריאה. המשיכו בשפע עד שכל האונות יתמלאו לחלוטין, עד לכלי הקטן ביותר. עצור את המשאבה, ושוב, שים לב לנפח המזרק.
מכסים את הריאות עם ניגוב ניקוי סיבים אופטיים, ולהחיל בנדיבות PBS. אפשר לדגימה לשבת באין מפריע במשך 30 עד 40 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר תרכובת הפולימר נרפא והוקשח, לנתק את הגפיים ואת החצי התחתון של העכבר.
ומקום את הראש ואת בית החזה לתוך חרוט 50 מיליליטר מלא 10% פורמלין במאגר, לילה. למחרת בבוקר, לתפוס את קנה הנשימה להפריד בעדינות את הלב ואת יחידת הריאות מכלוב הצלעות הנותרים ואת בית החזה. מניחים את בלוק הרקמות שנקטפו בבקבוקון נבל מלא פורמלין.
גבס מוצלח יגרום למילוי אחיד של כל רשת עורקי הריאה. אם יש נזק לדרכי הנשימה של הריאה או הריאות, דליפות קטנות ימנעו מהריאות להחזיק בלחץ. מילוי מטושטש או לא שלם יכול לנבוע מנעל אוויר כתוצאה מהכנסת האוויר למערכת כלי הדם באמצעות הקטטר, חסימת זרימת במורד הזרם של המתחם.
Underfilling מתרחשת כאשר תרכובת קטנה מדי הוא הציג לתוך כלי הדם. לחלופין, מילוי יתר, או החדרת יותר מדי תרכובת פולימר מהר מדי, יכול לגרום לקרע עורקי, או, בדרך כלל, מעבר ורדם. קידום הקטטר רחוק מדי במורד תא המטען הריאה יכול לגרום לקצה להיתקע לענף עורק ריאתי אחד, ליצור חוסר איזון בזרימה, ולגרום לצד אחד להתמלא מהר יותר מהשני.
ביצועים זהירים של הטכניקה כפי שהוכח, באמצעות ניטור ישיר המתאים של נקודות קצה כלי דם דיסטליים, שיעורי עירוי סטנדרטי יכול לגרום למילוי אופטימלי של כלי דם ריאתי. יתר על כן, התאמת טכניקה זו כלי הדם המערכתיים יכול להניב תוצאות חיוביות באותה מידה במיטות כלי דם אחרים. לאחר הליהוק, ניתן לעבד דגימות לסריקת טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת.
לעיבוד שלאחר עיבוד, חבילת תוכנה מסחרית יכולה לשמש ליצירת עיבוד נפח תלת-ממדי של עץ כלי הדם הריאה. כאשר מנסים טכניקה זו בפעם הראשונה, להיות זהיר במיוחד סביב הריאות שביר, ואת עורק הריאה. והכי חשוב, הימנע החדרת אוויר לתוך מעגל כלי הדם.
לאחר גבס מוצלח, ניתן לסרוק דגימה באמצעות מיקרו-CT, ו ניתן לחקור שאלות הקשורות למורפומטריה ואדריכלות של כלי הדם.
