תרבות הסבר זנב תלת-ממדית לחקר פילוח בעלי חוליות בזברהפיש

3-D זברה דג זנב explants בואו ננצל את השקיפות של עוברי זברה עד למידתו המלאה במהלך התפתחות somite ופילוח בעלי חוליות. מלאו מיכל הזדווגות ריק במים של מערכת הדגים. נקה את המסננת עם מי מערכת.

הרימו את המחסומים בין זוגות ההזדווגות. מעבירים באופן סלקטיבי את זוג הדגים למיכל המים המתוקים. לאסוף עוברים במסננת באמצעות העברות מים עם מיכל ריק.

לשטוף את העוברים שנאספו עם מים מערכת דגים ולהפוך על צלחת פטרי. כלי ניתוח בזיגוג אתנול. הפוך שתי שכבות של קלטות בשקופיות.

חותכים את הצדדים האופקיים של תאים עמוקים. תא שלם חותך עם צדדים אנכיים. מקלפים את הקלטת מפני השטח של התא.

יוצקים את המדיה של תרבות התאים בצינור. מערבבים סידן כלורי 2.8 מילימולאר ריכוז סופי. הוסף פתרון אנטיביוטי.

התקשורת הנפרדת של אלקוט בצינור נפרד. מחמאה סרום שור עוברי כדי להפוך את תרבית הרקמות בינונית. לבטל את הקורלציה של עוברים עם מחטים.

לשטוף את העוברים בצלחת מים מתוקים ולאסוף אותם להסבר. לייצב את העובר עם מחט ולהתחיל de-yoking. חותכים את שאריות הרקמות.

מעבירים את האקספלנטים לכיסוי. לשטח את הרקמה ולמצוץ מדיה עודפת עם פיפטה. שים את העטיפה על מדיום צמיחה המכיל תא שקופית.

שים את רקמת האקספלנט על מגבון רקמה. החל שמן טבילה על המטרה. תרכיב את תא השקופיות במיקרוסקופ.

כוונן ערוצי לייזר לרכישת תמונה. בדוק את מגבלות שכבת z של הדגימה. הגדר דימות זמן ושכבות z.

מערכת הסבר זנב תלת מימדי שומרת על שילוב תאים לניצן הזנב והתארכות עודפת ללא פגע כמו עוברים שלמים. ניתן גם לעצור התארכות עודפת על ידי הפעלה כימית של פני השטח עם קולגן מסוג אחד. מערכת explants זברה-דג זברה תלת-ממדי מאפשרת לנו לנצל את השקיפות של עוברי זברה על ידי מתן אפשרות לנו לצלם תמונות מיקרוסקופיות ברזולוציה גבוהה וכמעט אובייקטיבית.

חוץ מזה, זה מאפשר לנו לנתק את עודף התארכות מן איתות מורפוגן וגם לשלוט על מקורות איתות מורפוגן עם שיטות ניתוח פשוטות.