ゼブラフィッシュにおける脊椎動物のセグメンテーションを研究する3D尾翼植物培養

3Dゼブラフィッシュの尾の外植は、スマイトの発達と脊椎動物のセグメンテーション中にゼブラフィッシュ胚の透明性を最大限に活用しましょう。空の交配タンクに魚のシステム水を入れます。システム水でストレーナーをきれいにします。

交配ペア間の障壁を上げます。魚のペアを淡水タンクに選択的に移動します。空のタンクで水の移動を通してストレーナーで胚を収集します。

リンスは、魚のシステム水で胚を収集し、ペトリ皿にフリップ。エタノール釉薬解剖ツール。スライド上にテープを 2 層作成します。

深い部屋の水平側面をカットします。垂直側面と完全な部屋の切り傷。テープをチャンバー表面からはがします。

細胞培養培地をチューブに注ぎます。塩化カルシウム2.8ミリモル最終濃度を混合します。抗生物質溶液を追加します。

別のチューブ内のアリコート解離メディア。ティッシュ培養培地を作るために牛の血清を補完する。針で胚を脱コリオンさせる。

淡水皿に胚を洗い流し、植え出しのためにそれらを収集します。針で胚を安定させ、脱ヨークを開始します。残った組織をトリミングします。

外植をカバースリップに移します。組織を平らにし、ピペットで余分な培地を吸い出します。スライドチャンバーを含む成長培地にカバースリップを置きます。

外植組織をティッシュワイプに置きます。目的に浸漬油を適用します。スライドチャンバを顕微鏡に取り付けます。

画像取得用にレーザーチャンネルを調整します。サンプルの Z レイヤーの制限を確認します。時間イメージングとZレイヤーを設定します。

3次元尾外植システムは、細胞の統合を尾芽に保ち、余分な伸びを胚全体のようにそのまま維持します。また、1種類のコラーゲンで表面を化学的に活性化させることにより過剰な伸びを止めることもできる。3Dゼブラフィッシュの尾の外植システムは、高解像度とほぼ客観的な顕微鏡画像を撮らせることによって、ゼブラフィッシュ胚の透明性を利用することができます。

それに加えて、過剰な伸びをモルフォゲンシグナル伝達から切り離し、単純な解剖方法でモルフォゲンシグナル伝達源を制御することができます。