קריסטלוגרפיה סדרתית של סינכרוטרון, או SSX, היא אזור חדש יחסית ומתפתח במהירות של MX.It מתאים מאוד לניסויים במינון נמוך וטמפרטורת החדר, אבל אולי הכי חשוב, הוא ממש מתאים לדינמיקה הבאה. זה מאפשר סרטי סטופ-מושן של חלבונים בפעולה להיעשות. ב- I24, מצבים מרובים של SSX זמינים.
פרוטוקול זה מתמקד ב- SSX מטרה קבועה, המאפשר מגוון רחב של ניסויים טוריים באמצעות כמויות מוגבלות של מדגם. שבבי הסיליקון עלולים להיפגע בעת טעינה וניקוי שלהם, אם אינך מכיר אותם. כמו כן, פרוטוקול יישור השבב חדש לחלוטין לקריסטלוגרפים רבים, ועיבוד הנתונים שונה במקצת מנתוני הסיבוב הסטנדרטיים שלך.
כדי להכין מחזיק שבב, לחתוך שני גיליונות של רדיד פוליאסטר לתוך כ 6 על 6 ס"מ ריבועים, ומניחים את הסדינים על שתי לוחות הבסיס. באמצעות טבעות איטום מתכת, לתקן את הסדינים במקום, ולאחר מכן בזהירות למשוך על רדיד עודף כדי להסיר את כל הקמטים. לאחר מכן, בחר שבב סיליקון עם פתחים בגודל המתאים ביחס לגודל הגבישים שיש לנתח.
זוהר לפרוק את השבב במשך 25 שניות ב 0.39 מיליבר, עם זרם 15 מיליאמפר. השתמש פינצטה למקם את שבב הסיליקון על שלב טעינת השבב, עם הסורגים מוגבהים מול למטה. לאחר מכן, באמצעות פיפטה, להחיל 200 microliters של תרחיף microcrystal לצד השטוח של השבב, הפצת תרחיף כדי לכסות את כל בלוקי העיר של השבב.
אם השבב פגום, לכסות את כל החורים עם חתיכה קטנה של רדיד פוליאסטר, כדי להבטיח כי ואקום אחיד ניתן ליישם. לאחר מכן להחיל ואקום עדין כדי לשאוף את כל הנוזל העודף דרך השבב. הסר את השבב משלב טעינת השבב, ולהכתים בזהירות את החלק התחתון של השבב עם נייר מסנן כדי להסיר נוזל עודף.
מניחים את השבב הטעון על החצי הגדול יותר של מחזיק השבב בין סימני המדריך, צד שטוח כלפי מטה. מניחים את החצי הקטן של מחזיק השבב על השבב כדי לאטום אותו. שני החצאים של מחזיק השבב אמורים להיכנס למקומו.
לאחר מכן, באמצעות ברגים מכוסים, לתקן את השבב בבטחה במקום. כדי ליישר את השבב, החזק את מחזיק השבב בזווית של 30 מעלות בעת התקרבות להר. לאחר מכן השתמש בתלייה קימתית כדי למקם את השבב הטעון על שלב XYZ בקו הקרן.
כאשר המגנטים יוצרים קשר, אפשר למחזיק השבב להסתובב במקביל לזרימה ולחץ למקומו. לאחר הצבת השבב, השתמש במערכת הצפייה בקו הקרן על הציר ובממשק המשתמש הגרפי של יישור השבב כדי לאתר את ה- fiducial השמאלי העליון של השבב. כדי למרכז את 0 fiducial ב- X, Y ו- Z, עבור פנימה והחוצה של המוקד כדי ליישר Z, למעלה ולמטה כדי ליישר Y, ושמאלה וימינה כדי ליישר X.ולאחר מכן לחץ על הגדר Fiducial 0"לאחר יישור fiducial 1 ו- 2 עם קרן הרנטגן באותו אופן, לחץ על צור מערכת מתואמת"כדי ליצור מטריצה מתואמת.
לאחר מכן לחץ על בלוק בדוק"כדי להעביר את שלב XYZ לבאר הראשונה של כל בלוק עיר. אם כוונת הרנטגן תואמת את פתחי הצמצם, השבב מיושר. בייצוג גרפי זה של תוצאות חיפוש נקודתי מ- DIALS ניתן לצפות בהתוויה של קצב פגיעה מתעדכן.
אם לוחצים על חבטה, תמונת ההסתעפות המתאימה תוצג במציג התמונות של DIALS. בטבלה זו, ניתן לדמיין את שיעורי יצירת האינדקס והאינטגרציה הנוכחיים המתעדכנים בזמן אמת עם איסוף הנתונים במהלך הביקור. הדמיה של הפרמטרים של תא היחידה יכולה לחשוף פולימורפים.
חלקות דו מימדיות של פרמטרים שימושיים ניתן גם לייצר כדי לחשוף וריאציות המתעוררות עקב טעינה או התייבשות אפקטים. תחזיות סטריאוטוגרפיות יכולות לחשוף את הנוכחות או היעדר הכיוונים המועדפים שניתן להזין בחזרה לפרוטוקול הטעינה. לדוגמה, בהקרנה זו, ניתן לראות את ההשפעות של עומס יתר על שבב עם גבישי ליזוזים.
בעת טעינת השבב, pipette לאט ולהשתמש באצבע שלך כדי להניח את pipette מעל השבב. זה מונע ממך לגעת בשבב ולדקור בטעות חורים בסיליקון. בעת עיבוד נתונים, הפוך את השימוש בצינורות האוטומטיים לזמינים.
זה ייתן לך מושג טוב כיצד הניסוי שלך מתקדם, ואם אתה צריך לשנות משהו. שיטה זו יכולה להיות מיושמת על כל מערכת חלבון שניתן לגבש בכמויות משמעותיות. והתגובה יכולה להיות מופעלת על ידי צילומי רנטגן קלים או ערבוב מהיר.
מחקרים דינמיים על סדרה של מבנים יכולים לספק תובנה על אופן תפקוד החלבונים.
