טומוגרפיה קוהרנטית אופטית נמצאת בשימוש נרחב באבחון קליני של מחלות רשתית שונות, אך עדיין מאתגר ליישם אותה במודלים של עכברים. פרוטוקול זה מתאר כיצד לנהל את טכניקת OCT בבעלי חיים. טכנולוגיה זו יכולה להיות מיושמת על בעלי חיים עם גדלים שונים של גלגלי עיניים.
הוא מאפשר הדמיית חתך רשתית לא פולשנית, ברזולוציות גבוהות ובזמן אמת, יחד עם מדידות כמותיות של עובי הרשתית. OCT מסייע באבחון רטינופתיה על ידי זיהוי תכונות הנגע כגון מיקום, טווח, צורה וגודל של הנגעים, כמו גם כל ההפרעות החשודות ברשתית כגון neovascularization הרשתית. פרוטוקול זה חל על מחקרים בבעלי חיים או מחלות פונדוס, כולל מחלות רשתית.
לפני תחילת ההליך, להיות מוכן ופעל לפי הפרוטוקול צעד אחר צעד. בצע את הניסוי כאשר החיה מורדמת. אחד צריך להיות מסוגל להשיג תמונות OCT באיכות טובה לאחר תרגול כלשהו.
כדי להתחיל, הפעל את המחשב והפעל את התוכנה. לחץ על לחצן תוכנית הבדיקה כדי להשלים את תוכנית הבדיקה. לאחר מכן, הפעל את התרמוסטט וחמם אותו ל -37 מעלות צלזיוס.
לאחר בדיקת התוכנית, התחל את הליך מודול OCT. צור נושא חדש ומלא את פרטי העכבר. לאחר מכן, מחממים מראש את השמיכה החשמלית ומכסים אותה במגבות כירורגיות.
הניחו את העכבר המרדים על משטח השמיכה החשמלית ומיד צפו את שתי העיניים בג'ל נתרן היאלורונאט רפואי. לאחר מכן, הניחו עדשת מגע 100D על קרנית העכבר כשהצד הקעור נוגע בג'ל הנתרן היאלורונאט על משטח הקרנית. לאחר מכן, הנח את העכבר על פלטפורמת בעלי החיים הקטנה בטמפרטורה קבועה של התקן cSLO.
התאם את זווית עדשת המגע באמצעות מלקחיים כדי לשמור על האישון במרכז העדשה. כוונן את ההתאמות לראש כדי לגרום לעין לפנות ישר קדימה. לחץ על לחצן OCT, בחר את מודול העכבר והפעל את תוכנית cSLO.
לאחר מכן, השתמש בידית ההפעלה כדי להזיז באיטיות את העדשה המוגדרת מראש לכיוון עדשת המגע. בצע התאמות נוספות כדי ליישר את התמונה של הקוטב הקדמי-אחורי, ומרכזו בראש עצב הראייה. לאחר מכן, הפעל את תוכנית OCT ולחץ על מד ההתקדמות למעלה ולמטה עד להופעת תמונת ה- OCT.
התאם את הטווח המינימלי בין 0 ל- 20 ואת הטווח המרבי בין 40 ל- 60. לאחר מכן, כוונן את המרחק וכיוון המיקום המוגדרים מראש של העדשה עד לקבלת תמונת OCT אידיאלית. בחר את מיקום הסריקה על-ידי הזזת הקו הרגיל ב- cSLO.
לאחר מכן, לחץ על ממוצע כדי לכסות את אות התמונה cSLO ו- OCT ולחץ על לחצן הצילום כדי להשיג את תמונת ה- OCT של SLO. לאחר הניסוי, הסר את עדשת המגע 100D ומרוח את ג'ל העיניים levofloxacin כדי להגן על הקרנית. לתיקון ריבוד הרשתית, לחצו על 'טען בדיקה' בממשק OCT וקראו את תמונות ה-OCT מחלון נפתח.
לאחר מכן, לחץ פעמיים על התמונה בגורם המכיל של המדיה כדי להציג אותה על המסך. לאחר מכן, לחץ על זיהוי שכבה כדי להשלים שכבות אוטומטיות על הרשתית. לאחר בחירת הקו המפריד משני צידי השכבה שהוכנה לניתוח, לחצו על 'ערוך שכבה' להתאמת הריווח ולהגבלת הטווח.
לאחר מכן, שנה את הקו על-ידי הזזת העיגול האדום. למדידת עובי למינציה ברשתית, לחצו על הלחצן 'סמן מדידה' ובחרו בקו המפריד של השכבה שיש לנתח כדי להציג את גבול השכבה בתמונת OCT. לאחר מכן, בחר התחבר לשכבה והישאר מחובר תוך כדי תנועה.
לאחר מכן, בחר את האזור להצגת התוצאות ולחץ על המיקום שיש לנתח בתמונת OCT כדי לגרום לקו המדידה להופיע. לחץ על העמודה הבאה לקבלת מדידות עוקבות וכדי לחשוף את הנתונים הקודמים. כדי למדוד את עובי הרשתית המלא, בחר שורה אחת וקו שבע ברשימה בפינה השמאלית העליונה.
לאחר מכן, מהופעת מבנה הרשתית בקצה הפפילה האופטית, מדוד ארבעה ערכים במרווחים של 200 מיקרומטר על הסרגל האופקי. תמונות OCT של עכברי C57BL/6 הראו שכבות רשתית שונות עם תיחום ברור. לעומת זאת, עכברי נוקאאוט של Vldlr הראו נגעים היפר-רפלקטיביים חריגים.
תמונות ה-OCT הראו כמה פסים מחזירי אור אמצעיים על משטחי הרשתית של עכברי הנוקאאוט Vldlr. רצועות אלה דבקו בכלי הרשתית, בהיותן עקביות עם מאפייני OCT של ניתוק זגוגית לא שלם. נגע היפר-רפלקטיבי אחד הופיע בחלל התת-קרקעי והתפשט לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא פרץ את שכבת הפרספקס החיצונית.
הופעת ה-OCT של נגע זה עלתה בקנה אחד עם ממצאים פתולוגיים. החלק הפתולוגי הראה כי ניאו-וסקולריזציה פרצה דרך שכבת האפיתל של פיגמנט הרשתית, מקטעים פנימיים-חיצוניים של פוטורצפטור והממברנה המגבילה החיצונית, ופלשה לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא לשכבת הפרספקס החיצונית. רצועה נוספת של נגע היפר-רפלקטיבי, הממוקם בחלל התת-קרקעי, לא כללה את השכבה הגרעינית החיצונית.
בהתאם לממצאים הפתולוגיים, ניאו-וסקולריזציה תת-קרקעית זו לא פרצה את הממברנה המגבילה החיצונית. השוואת עובי הרשתית של עין ימין בכיוונים הטמפורליים, האף, העליונים והנחותים של הקוטב האחורי בין שתי הקבוצות גילתה כי עובי הרשתית של עכברי Vldlr נוקאאוט היה נמוך משמעותית מזה של עכברי C57BL/6J. בעת ביצוע הפרוטוקול, הניחו כראוי עדשת מגע 100D על הקרנית, ולאחר מכן התאימו את מיקום התמונה.
בחר את מיקום הסריקה ושכב את התמונה לפני הצילום. לאחר הליך זה, OCT מקטע קדמי אפשרי, הדורש שינוי המרחק בין העדשה המוגדרת מראש לבין הקרנית. זה יכול להראות את הקרנית, החדר הקדמי, הקשתית, הגוף הציליארי, והעדשה.
טכניקה זו מספקת כלי חשוב לחקר רטינופתיה במודלים של בעלי חיים קטנים, ומקדמת זיהוי ומדידה לא פולשניים של רטינופתיה במחקר בסיסי.
