Optik koherens tomografi, farklı retina hastalıklarının klinik tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak fare modellerinde uygulanması hala zordur. Bu protokol, hayvanlarda OCT tekniğinin nasıl yönetileceğini açıklar. Bu teknoloji farklı göz küresi boyutlarına sahip hayvanlara uygulanabilir.
İnvaziv olmayan, yüksek çözünürlüklü ve gerçek zamanlı retinal kesitsel görüntülemenin yanı sıra retina kalınlığının kantitatif ölçümlerini sağlar. OKT, lezyonların lokalizasyonu, aralığı, şekli ve büyüklüğü gibi lezyon özelliklerinin yanı sıra retinal neovaskülarizasyon gibi şüphelenilen tüm retinal anormallikleri tanımlayarak retinopati tanısında yardımcı olur. Bu protokol, retina hastalıkları da dahil olmak üzere hayvan çalışmaları veya fundus hastalıkları için geçerlidir.
Prosedüre başlamadan önce hazırlıklı olun ve protokolü adım adım takip edin. Hayvan anestezi uygulandığında deneyi yapın. Bazı uygulamalardan sonra kaliteli OCT görüntüleri elde edilebilmelidir.
Başlamak için bilgisayarı açın ve yazılımı başlatın. Test programını tamamlamak için test programı düğmesini tıklatın. Ardından, termostatı açın ve 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın.
Program testinden sonra, OCT modülü yordamını başlatın. Yeni bir konu oluşturun ve fare bilgilerini doldurun. Ardından, elektrikli battaniyeyi önceden ısıtın ve cerrahi havlularla örtün.
Anestezi uygulanan fareyi elektrikli battaniye platformuna yerleştirin ve hemen her iki gözü de tıbbi sodyum hyaluronatis jeli ile kaplayın. Ardından, fare korneasına, içbükey tarafı kornea yüzeyindeki sodyum hyaluronatat jeline dokunacak şekilde 100D kontakt lens yerleştirin. Ardından, fareyi cSLO cihazının küçük, sabit sıcaklıktaki hayvan platformunun üzerine getirin.
Göz bebeğini lensin merkezinde tutmak için forseps ile kontakt lensin açısını ayarlayın. Gözün düz bir şekilde öne bakmasını sağlamak için kafadaki ayarlamalara ince ayar yapın. OCT düğmesine tıklayın, fare modülünü seçin ve cSLO programını başlatın.
Ardından, ön ayarlı lensi yavaşça kontakt lense doğru hareket ettirmek için çalışma kolunu kullanın. Anterior-posterior kutbun görüntüsünü optik sinir kafasında ortalayarak hizalamak için daha fazla ayarlama yapın. Ardından, OCT programını başlatın ve OCT görüntüsü görünene kadar ilerleme çubuğunu yukarı ve aşağı tıklatın.
Minimum aralığı 0 ile 20 arasında, maksimum aralığı ise 40 ile 60 arasında ayarlayın. Ardından, ideal bir OCT görüntüsü elde edilene kadar önceden ayarlanmış lens mesafesini ve konum yönünü ayarlayın. cSLO'daki standart çizgiyi hareket ettirerek tarama konumunu seçin.
Ardından, cSLO ve OCT görüntü sinyalini kaplamak için ortalama'yı tıklatın ve SLO OCT görüntüsünü almak için çekim düğmesini tıklatın. Deneyden sonra, 100D kontakt lensi çıkarın ve korneayı korumak için levofloksasin göz jelini uygulayın. Retinal tabakalaşma düzeltmesi için, OCT arayüzünde yük incelemesine tıklayın ve bir açılır pencereden OCT görüntülerini çağırın.
Ardından, ekranda görüntülemek için medya kabındaki görüntüyü çift tıklatın. Ardından, retinada otomatik katmanlamayı tamamlamak için katman algılamaya tıklayın. Analiz için hazırlanan katmanın her iki tarafındaki bölme çizgisini seçtikten sonra, aralığı ayarlamak ve aralığı sınırlamak için katmanı düzenle'yi tıklatın.
Ardından, kırmızı daireyi hareket ettirerek çizgiyi değiştirin. Retinal laminasyon kalınlığını ölçmek için, ölçüm işaretçisi düğmesini tıklatın ve OCT görüntüsünde katmanın sınırını görüntülemek üzere analiz edilecek katmanın bölme çizgisini seçin. Ardından, katmanla bağlan'ı seçin ve hareket halindeyken bağlı kalın.
Ardından, sonuçların görüntüleneceği alanı seçin ve ölçüm çizgisinin görünmesini sağlamak için OCT görüntüsünde analiz edilecek konumu tıklatın. Sonraki ölçümler için ve önceki verileri ortaya çıkarmak için bir sonraki sütuna tıklayın. Tam retina kalınlığını ölçmek için, sağ üst köşedeki listeden birinci satırı ve yedinci satırı seçin.
Daha sonra, optik papillanın kenarındaki retinal yapının görünümünden, yatay cetvel üzerinde 200 mikrometre aralıklı aralıklarla dört değer ölçün. C57BL/6 farelerin OCT görüntüleri, net sınırları olan çeşitli retina tabakalarını gösterdi. Buna karşılık, Vldlr nakavt fareleri anormal hiperreflektif lezyonlar gösterdi.
OCT görüntüleri, Vldlr nakavt farelerinin retinal yüzeylerinde bazı orta yansıtıcı bantlar gösterdi. Bu bantlar retina damarına yapışmış olup, eksik vitreus dekolmanı OCT özellikleri ile tutarlıdır. Subretinal boşlukta bir hiperreflektif lezyon ortaya çıktı ve dış nükleer tabakaya yayıldı, ancak dış pleksiform tabakayı kırmadı.
Bu lezyonun OKT görünümü patolojik bulgularla uyumluydu. Patolojik kesit, neovaskülarizasyonun retinal pigment epitel tabakasını, fotoreseptör iç-dış segmentlerini ve dış sınırlayıcı membranı kırarak dış nükleer tabakayı invaze ettiğini, ancak dış pleksiform tabakayı invaze etmediğini gösterdi. Subretinal boşlukta bulunan bir başka hiperreflektif lezyon bandı, dış nükleer tabakayı içermiyordu.
Patolojik bulgularla uyumlu olarak, bu subretinal neovaskülarizasyon dış sınırlayıcı membranı kırmadı. İki grup arasında sağ gözün retinal kalınlığının posterior poların zamansal, nazal, üst ve alt yönlerinde karşılaştırılması, Vldlr nakavt farelerinin retina kalınlığının C57BL / 6J farelerinkinden anlamlı derecede düşük olduğunu ortaya koymuştur. Protokolü uygularken, korneaya düzgün bir şekilde 100D kontakt lens yerleştirin, ardından görüntü konumunu ayarlayın.
Tarama konumunu seçin ve çekimden önce görüntüyü bindirin. Bu prosedürü takiben, ön ayarlı lens ile kornea arasındaki mesafenin değiştirilmesini gerektiren ön segment OCT uygulanabilir. Korneayı, ön kamsayı, irisi, siliyer gövdeyi ve lensi gösterebilir.
Bu teknik, küçük hayvan modellerinde retinopati araştırması için önemli bir araç sağlar ve temel araştırmalarda retinopatinin non-invaziv tespitini ve ölçümünü teşvik eder.
