La tomografía de coherencia óptica se usa ampliamente en el diagnóstico clínico de diferentes enfermedades de la retina, pero aún es difícil de aplicar en modelos de ratón. Este protocolo describe cómo manejar la técnica de OCT en animales. Esta tecnología se puede aplicar a animales con diferentes tamaños de globo ocular.
Permite imágenes transversales retinianas no invasivas, de alta resolución y en tiempo real, junto con mediciones cuantitativas del grosor de la retina. La OCT ayuda en el diagnóstico de retinopatía mediante la identificación de las características de la lesión, como la ubicación, el rango, la forma y el tamaño de las lesiones, así como todas las anomalías retinianas sospechosas, como la neovascularización retiniana. Este protocolo es aplicable a estudios en animales o enfermedades del fondo de ojo, incluidas las enfermedades de la retina.
Antes de comenzar el procedimiento, prepárese y siga el protocolo paso a paso. Realizar el experimento cuando el animal esté anestesiado. Uno debe ser capaz de obtener imágenes OCT de buena calidad después de un poco de práctica.
Para comenzar, encienda la computadora e inicie el software. Haga clic en el botón programa de prueba para completar el programa de prueba. Luego, encienda el termostato y precaliéntelo a 37 grados centígrados.
Después de las pruebas del programa, inicie el procedimiento del módulo OCT. Cree un nuevo asunto y rellene la información del ratón. Luego, precalienta la manta eléctrica y cúbrela con toallas quirúrgicas.
Coloque el ratón anestesiado en la plataforma de la manta eléctrica e inmediatamente cubra ambos ojos con gel médico de hialuronato de sodio. A continuación, coloque una lente de contacto 100D en la córnea del ratón con el lado cóncavo tocando el gel de hialuronato de sodio en la superficie de la córnea. Luego, coloque el mouse en la pequeña plataforma animal de temperatura constante del dispositivo cSLO.
Ajuste el ángulo de la lente de contacto con fórceps para mantener la pupila en el centro de la lente. Ajuste los ajustes de la cabeza para que el ojo mire hacia adelante. Haga clic en el botón OCT, elija el módulo del mouse e inicie el programa cSLO.
Luego, use la palanca de operación para mover lentamente la lente preestablecida hacia la lente de contacto. Haga más ajustes para alinear la imagen del polo anterior-posterior, centrándolo en la cabeza del nervio óptico. A continuación, inicie el programa OCT y haga clic en la barra de progreso hacia arriba y hacia abajo hasta que aparezca la imagen de OCT.
Ajuste el rango mínimo entre 0 y 20 y el rango máximo entre 40 y 60. Luego, ajuste la distancia preestablecida de la lente y la dirección de la posición hasta obtener una imagen OCT ideal. Seleccione la posición de escaneo moviendo la línea estándar en el cSLO.
A continuación, haga clic en promedio para superponer la señal de imagen cSLO y OCT y haga clic en el botón de disparo para adquirir la imagen OCT SLO. Después del experimento, retire la lente de contacto 100D y aplique el gel ocular de levofloxacina para proteger la córnea. Para corregir la estratificación de la retina, haga clic en examen de carga en la interfaz de OCT y llame a las imágenes de OCT desde una ventana emergente.
A continuación, haga doble clic en la imagen en el contenedor de medios para mostrarla en la pantalla. A continuación, haga clic en la detección de capas para completar la estratificación automática en la retina. Después de seleccionar la línea divisoria a ambos lados de la capa preparada para el análisis, haga clic en editar capa para ajustar el espaciado y el intervalo límite.
A continuación, modifique la línea moviendo el círculo rojo. Para medir el grosor de la laminación retiniana, haga clic en el botón Medir marcador y seleccione la línea divisoria de la capa que se va a analizar para mostrar el límite de la capa en la imagen OCT. A continuación, seleccione conectar con capa y permanecer conectado en movimiento.
A continuación, seleccione el área para mostrar los resultados y haga clic en la posición que se analizará en la imagen OCT para que aparezca la línea de medición. Haga clic en la siguiente columna para ver las mediciones posteriores y para revelar los datos anteriores. Para medir el grosor total de la retina, seleccione la línea uno y la línea siete en la lista de la esquina superior derecha.
Luego, a partir de la aparición de la estructura retiniana en el borde de la papila óptica, mida cuatro valores a intervalos de espaciado de 200 micrómetros en la regla horizontal. Las imágenes OCT de ratones C57BL/6 mostraron varias capas retinianas con una demarcación clara. En contraste, los ratones knockout Vldlr mostraron lesiones hiperreflectantes anormales.
Las imágenes de OCT mostraron algunas bandas reflectantes medias en las superficies retinianas de los ratones knockout Vldlr. Estas bandas se adhirieron al vaso retiniano, siendo consistentes con las características de OCT de desprendimiento vítreo incompleto. Una lesión hiperreflectante apareció en el espacio subretiniano y se extendió a la capa nuclear externa, pero no atravesó la capa plexiforme externa.
La apariencia de OCT de esta lesión fue consistente con los hallazgos patológicos. La sección patológica mostró que la neovascularización rompió la capa del epitelio pigmentario de la retina, los segmentos internos y externos fotorreceptores y la membrana limitante externa, invadiendo la capa nuclear externa, pero no la capa plexiforme externa. Otra banda de lesión hiperreflectante, localizada en el espacio subretiniano, no involucró la capa nuclear externa.
De acuerdo con los hallazgos patológicos, esta neovascularización subretiniana no rompió la membrana limitante externa. La comparación del grosor retiniano del ojo derecho en las direcciones temporal, nasal, superior e inferior del polar posterior entre los dos grupos reveló que el grosor de la retina de los ratones knockout Vldlr era significativamente menor que el de los ratones C57BL / 6J. Al realizar el protocolo, coloque correctamente una lente de contacto 100D en la córnea, luego ajuste la posición de la imagen.
Seleccione la ubicación de escaneo y superponga la imagen antes de disparar. Después de este procedimiento, la OCT del segmento anterior es factible, lo que requiere cambiar la distancia entre la lente preestablecida y la córnea. Puede mostrar la córnea, la cámara anterior, el iris, el cuerpo ciliar y el cristalino.
Esta técnica proporciona una herramienta importante para la investigación de la retinopatía en modelos de animales pequeños, promoviendo la detección no invasiva y la medición de la retinopatía en la investigación básica.
