בעזרת הפרוטוקול המתואר, אנו יכולים להשוות בין הלב התורם, החדר השמאלי ותפקוד החדר לאחר השימור, ואנו יכולים לבחון את ההבדל בביולוגיה של שימור בשני החדרים במהלך תהליך שימור זה. טכניקה זו משתמשת במערכת זילוח ex vivo כדי לבחון את תפקודי הלב לאחר השימור. הוא מספק כלים חזקים ואמינים לסינון טיפולים חדשים לשיפור תפקודי הלב של התורם לאחר השימור.
מתחילים בהכנת בצק כמתואר בטקסט ומעצבים חתיכה קטנה מהבצק לצורה אליפסה כדי לקבל את הראש. חברו אותו לקצה גדיל ספגטי יבש. טובלים את הראש בתמיסת הסוכר שכבר מוכנה ומסירים אותה לאט ברגע שהיא מצופה היטב בסרט דק של התמיסה.
לאחר מכן, השהו את גדיל הספגטי על גוש קצף פוליסטירן או על מחזיקים אחרים כדי לאפשר היווצרות כיסוי אחיד ומבריק מעל הראש וייבשו אותו למשך הלילה. למחרת, טובלים את התבנית באלסטומר סיליקון המפוזר בקסילן ומחזירים את גדיל הספגטי לגוש קצף הפוליסטירן בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים או עד לייבוש. חזור על שלב זה פעם נוספת.
לאחר מכן, הכניסו את התבנית למים כדי להפריד ולאסוף את הבלון. אחסנו את הבלון ב-0.02% נתרן אזיד. כעת, חתכו קצה קהה של שני קהות ממחט של 22 מד והרכיבו קצה קהה אחד לבלון הסיליקון ואילו הקצה השני קהה לצינור PE.
השתמש בתפר משי 4-0 כדי לקשור את הבלון במקומו על המחט. קח את העכבר C57Black/6 והזריק תוך צפקית 200 יחידות של הפרין לתוך הבטן של החיה עבור נוגדי קרישה. לאחר אישור הרדמה תקינה עם צביטת בוהן, לבצע חתך ממש מתחת עצם החזה.
ובאמצעות מספריים, לפתוח את החזה על ידי חיתוך הסרעפת בצלעות. לאחר מכן, קפלו את דופן החזה הקדמית כדי לחשוף את החזה במלואו לפני ביצוע חתך באבי העורקים היורד קרוב לקשת אבי העורקים. כעת, העבירו את הלב, הריאות ובלוטת התימוס של העכבר להיסטידין-טריפטופן-קטוגלוטרט קר כקרח, או מאגר HTK, כדי לבודד את האיברים.
חשוף את אבי העורקים על ידי הסרת כל רקמת חיבור. חברו את קצה אבי העורקים למחט בעלת 22 מד וקשרו אותה בתפר משי 6-0. ודא שהצינורית נמצאת מעל שורש אבי העורקים, כדי לא להפריע לשסתום אבי העורקים.
מחוררים את אבי העורקים למשך כ-10 דקות עם 10 מיליליטר של חיץ HTK, מקורר מראש לארבע מעלות צלזיוס. בהתאם לסוג הניסוי, או לאחסן את הלב בצינור 50 מיליליטר עם HTK קר כקרח במשך שמונה שעות או מיד לבצע את השפע. כדי לבצע שפע, חבר את הלב המורכב על המחט לצינורית במנגנון לנגנדורף וקשר אותו בתפר משי.
התחל את השפע במצב זרימה קבועה בשלושה מיליליטר לדקה, ולאחר מכן לאחר שינוי למצב לחץ קבוע ב 70 עד 80 מילימטר כספית, להתאים את קצב הזלוף לכשישה מיליליטר לדקה. לאחר מכן, חברו בלון סיליקון מנופח מלא מים למתמר לחץ ולמזרק מלא מים באמצעות ברז תלת-כיווני. לאחר 15 עד 20 דקות של תקופת שיווי משקל לאחר הזילוח הקודם, חתכו את האטריום הימני, או RA, והכניסו את הבלון לחדר הימני, או RV, דרך RA. השתמש בסרט כדי להחזיק את הבלון בתוך הקרוואן ולמזער את השטח הפתוח של RA כדי לעזור להגביל את הבלון בחדר.
לאחר 20 דקות של איסוף נתונים פונקציונליים עבור הקרוואנים, חתכו את האטריום השמאלי, או LA, והכניסו בלון מלא מים מנופח לחדר השמאלי, או LV, דרך לוס אנג'לס. השתמשו בנייר דבק כדי להחזיק את הבלון בתוך LV.To לכייל את מתמר הלחץ, מלאו תחילה מזרק 10 מיליליטר במי מלח חמים וחברו את המזרק לכיפה דרך ברז משולש. פתחו את הברז ומלאו לאט את הכיפה במי מלח לפני סגירת כל הברזים והוצאת המזרק. לאחר מכן, חבר את הכיפה המלאה למתמר על ידי חיבור מד הלחץ לקצה השלישי של הברז התלת-כיווני.
בתוכנת ההקלטה, מהתפריט הנפתח של הערוץ המתחבר למתמר, בחר באפשרות של גשר אמפר. לחץ על 0 לפני תחילת ההקלטה כדי להגדיר את קריאת המתמר לאפס מילימטרים של כספית. לאחר מספר שניות של הקלטה, לדחוף לאט את המזרק ולהגדיל את הלחץ ל 100.
לחץ על תפסיק כדי לסיים את ההקלטה. בתיבת הדו-שיח המרת יחידות, בחר את אזור ההקלטה עבור אפס מילימטרים של כספית ולחץ על החץ ל- 1 לפני הקלדת אפס מילימטרים של כספית. באופן דומה, בחר את אזור ההקלטה עבור 100 מ"מ כספית.
לחץ על החץ ל- 2 והקלד 100 מילימטרים של כספית. כעת, לחץ על אישור כדי לכייל את המתמר. לאחר סיום הכיול, שנו את שם התעלה המתאימה למתמר הלחץ עם הבלון כלחץ חדרי, או לחץ LV, והתחילו להקליט כאשר הלב מחובר למערכת.
לאחר החדרת הבלון לחדר, התאימו את נפח המים בבלון באמצעות מזרק מיקרומטר דרך הברז התלת-כיווני כדי לשמור על הלחץ הדיאסטולי הסופי בחמישה עד 10 מילימטרים של כספית. לאחר מכן, שנה את שם הערוץ הריק כ- dP/dt ושמור על ערוץ המקור הנגזרת כלחץ חדרי. תעלה זו רושמת את יחס שינוי הלחץ בחלל החדר במהלך התכווצות.
בחר את תקופת המדידה היציבה לפני שתגדיר את מודול לחץ הדם. לאחר מכן, בחר את לחץ LV כערוץ הקלט ולחץ על בחירה לפני לחיצה על אישור. כעת, לחץ על תצוגת מסווג כדי להסיר מחזור לב חריג ועל תצוגת טבלה כדי ליצור את הטבלאות עבור הממוצע של dP/dt מרבי ו- dP/dt מינימלי עבור התקופה שנבחרה. כאשר לב העכבר אוחסן במאגר HTK במשך אפס שעות לפני הזילוח, לחץ סיסטולי גבוה יותר נרשם עבור LV בהשוואה ל- RV. בנוסף, בהשוואה ל-RV, ה-LV הציג גם התכווצות שרירים משמעותית יותר, כמו גם הרפיה.
עם זאת, כאשר בוצע זילוח על הלב לאחר שחשף אותו לשמונה שעות של אחסון קר, הן ה- LV והן ה- RV הראו ירידה תפקודית משמעותית בהשוואה לשלב שעת האפס. הירידות נצפו חמורות יותר ב-LV בהשוואה ל-RV. ההתכווצות וההרפיה של ה-LV לאחר אחסון של שמונה שעות היו 25.1% ו-30.7% מהפונקציה המתאימה לאחסון שעות אפס, בעוד שה-RV הציג 32.5% ו-29.1% של תפקוד, בהשוואה לקו הבסיס של שעת אפס. ציון תפקוד לקוי ראשוני של LV לאחר אחסון ממושך היה משמעותי יותר מזה של RV. איכות השימור תלויה במידה רבה בזילוח של HTK.
חשוב לוודא שהזילוח עקבי כדי להשוות במדויק בין טיפולים שונים. עם מדידה מדויקת של תפקוד הלב התורם של שימור, שיטה זו יכולה בקלות להסתגל לתרופות סינון שיכולות לשפר את תפקוד הלב התורם ולאחר מכן לאמת עוד יותר באמצעות מודל השתלה הטרוטופית.
