צנתור תוך-תאי יושם באופן נרחב בניסויים בבעלי חיים, במיוחד אלה על כאב נוירופתי. עם זאת, לשיטות המסורתיות עדיין יש מספר מגבלות. למרות שכמה חוקרים ניסו לשפר את השיטות המסורתיות, עדיין יש לשנות את השיטות הזמינות.
בזאת, אנו מציגים שיטה שונה לצנתור תוך-תאי בחולדות המייצגת גישה פשוטה, נוחה ואמינה למתן תרופות תוך תאי חוזר. הכינו צינור PE10 באורך 15 ס"מ. הכנס חוט נירוסטה באורך 20 ס"מ עם שני קצוות מלוטשים לצינור PE10 כתמיכה וסמן את הצינור שני סנטימטרים מקצה אחד.
חותכים את הקצה החד של מחט 22G ואוטמים את הקצה הדיסטלי עם זוג מלקחיים. חותכים קטטר אפידורלי לרסיסים של סנטימטר אחד. לאחר מכן הכנס את השברים האלה למחט 22G החדה ואטם את הקצה הדיסטלי עם זוג מלקחיים ישרים מחוממים.
מכשיר זה נקרא מכסה איטום הצינור. מכינים רצועה אנטיאלרגית 0.3 ס"מ כפול 0.5 ס"מ עם זוג מספריים. הכינו את המכשירים לצנתור תוך-תקלי, אשר עוקר לפני הניתוח.
כולל מלקחיים שיניים, מספריים, מכשיר gavage, ידית אזמל, ולהבים מספר 10. יש לעקר את צינור PE10 ואת חוט ההנחיה באתנול למשך כשעתיים. להרדים חולדות עם 3% isoflurane בקצב זרימה של שלושה ליטר לדקה.
הניחו חולדה על שולחן הניתוחים והכף האחורית נחתכה בזוג מלקחיים. היעדר תנועת מוט אחורי בתגובה לגירוי אישר הרדמה מוצלחת. טיפול הולם ומשככי כאבים בוצע על ידי הזרקה תוך שרירית עבור מיליגרם אחד לקילוגרם meloxicam לפני צנתור intrathecal.
מסיר את השיער באזור עמוד השדרה המותני של הגב ועל האזור שבין שתי אוזניים באמצעות מכונת גילוח. מניחים צינור צנטריפוגה מתחת לבטן החולדה בצומת המותניים. לעקר את אתרי הניתוח עם פתרון povidoneiodine ו פתרון אתנול שלוש פעמים.
כסו את החולדה בחבישה אספטית וחשפו את אתרי הניתוח. ולאחר מכן לשטוף עם מלוחים רגילים לפני הניתוח. קבע את מיקום החלל הבין חולייתי בין L5 ו- L6, על ידי איתור תהליך עמוד השדרה של L6 בנקודת האמצע בין הפסגות האיליאק הדו-צדדיות השמאלית והימנית.
תקן את העור עם האגודל השמאלי והאצבע המורה של המפעיל ולאחר מכן בצע חתך קו אמצע באורך שלושה עד ארבעה סנטימטרים ממש מעל התהליך עמוד השדרה בין L4 ו- S1. להפריד בבוטות את הרקמות התת עוריות עם זוג מספריים. אתר שוב את החלל הבין חולייתי בין L5 ל-L6. הדקו והרימו את התהליך הגבי L5 בעזרת זוג מלקחיים בעלי שיניים כדי להרחיב את החלל הבין חולייתי.
ואז מפריד בבוטות את השרירים סביב גוף החוליה עם זוג מספריים לחלק העליון של התהליך הגבי L6 נחשף לחלוטין. כאשר התהליך הגבי L5 מורם עם זוג מלקחיים בעלי שיניים והחלל הבין חולייתי מורחב על ידי זוג נוסף של מלקחיים, נקו את החלל הבין חולייתי L5 עד שש עם כדור צמר גפן עד שאזור V ההפוך נחשף לחלוטין. נקבו את עמוד השדרה עם מחט 23G באזור V ההפוך, ממש מתחת לחלק העליון של התהליך הגבי L6.
הכנס בזהירות את צינור PE10 המכיל חוט נירוסטה לתעלת עמוד השדרה באתר הניקוב כשהוא מוטה 30 מעלות לכיוון הזנב. זווית ההחדרה הותאמה עד שניתן היה להחדיר בהצלחה את צינור PE10 ללא כל התנגדות. כאשר האזור המסומן של צינור PE10 מגיע לשריר האחורי, הצנתור מופסק.
מסיר באיטיות את חוט הנירוסטה מצינור PE10, ולאחר מכן מחבר את צינור PE10 למזרק, דרכו מוזרק 20 מיקרוליטר של מלח רגיל. לאחר הסרת המזרק, ייתכן שמי מלח זרמו ברציפות מתוך צינור PE10, מה שמעיד על כך שצינור PE10 מוכנס בהצלחה לחלל התת עכבישי. לאחר ש-PE10 2 אושר כבלתי חסום, תפרו את השרירים בצד אחד של גוף החוליה בתפר ארבע אפס ובצעו קשר.
לאחר מכן קשרו את התפר סביב צינור PE10 וצרו קשר נוסף. אין לחתוך את התפר ואת התפר את השרירים בצד השני. קשרו שוב את התפר סביב צינור PE10.
לעשות קשר שלישי לחתוך את התפר. בצע חתך באורך 0.5 ס"מ בסנטימטר אחד ממש מתחת לנקודת האמצע בין האוזניים. להפריד בבוטות את הרקמות התת עוריות עם זוג מספריים.
ולהכניס צינור מתכת דרך החתך לכיוון הזנב. עד שהקצה נראה בחתך המותני. הכנס את הקצה הדיסטלי של צינור PE10 לתוך צינור ה-gavage עד שצינור PE10 יוצא מהקצה השני של צינור ה-gavage.
ואז בעדינות מושך gavage. כאשר צינור PE10 מאושר שוב כבלתי חסום, תפרו את השרירים הנותרים סביב החתך המותני בתפר ארבע אפס. קושר את התפר סביב צינור PE10 ויוצר קשר נוסף.
תקן שוב את צינור PE10. תפרו את העור, תוך הימנעות מנזק לצינור PE10, ואז תפרו את עור הצוואר בתפר ארבע אפס. קשרו את התפר סביב צינור PE10 וצרו קשר כדי לתקן את צינור PE10.
לאחר שצינור PE10 אושר שוב ללא הפרעה, אטום את הקצה החוץ-גופי של צינור PE10 עם מכסה איטום. צינור PE10 יובש עם פיסת רקמה ורצועה אנטי-אלרגית נקשרה סביב צינור PE10 מספר פעמים כדי למנוע נסיגה של צינור PE10 במהלך תנועת חולדות. לאחר הניתוח, החזירו את החולדה לכלוב שלה והשגיחו עליה מקרוב במהלך ההתאוששות מההרדמה עד שהיא חוזרת להכרה.
לאחר שהחולדה ערה לחלוטין, הסירו את מכסה האיטום והזריקו 20 מיקרוליטר של 2% לידוקאין לתוך צינור PE10 בקצב של 0.2 מיקרוליטר לשנייה באמצעות מזרק המילטון, ולאחר מכן הזרקה של 10 מיקרוליטר של מי מלח רגילים. אטמו את צינור PE10 עם מכסה איטום. הניחו חולדה על השולחן והתבוננו בזהירות.
שיתוק הגפיים התחתונות לאחר הזרקה תוך-תאית של לידוקאין, מצביע על צנתור מוצלח. שיתוק בגפיים האחוריות נמשך בדרך כלל כ-30 דקות. עקוב מקרוב אחר החולדה במהלך תקופת ההחלמה עד להחלמה מלאה של תפקוד הגפיים.
שיתוק מלא של שתי הגפיים התחתונות של החולדות לאחר הוראה תוך-תאית של לידוקאין הצביע על צנתור מוצלח. השוואת שיעור הצנתור המוצלח בין השיטות המותאמות שלנו לבין השיטה שדווחה בעבר. שיעור הצנתור התוך-תאי המוצלח בשיטה המותאמת שלנו היה 95%, שהיה גדול יותר מהשיעור של 88% שהושג בשיטה שדווחה על ידי Hou et al.
השוואה של שיעור הצנתרים הארוכים בין השיטה המותאמת שלנו לבין השיטה שדווחה בעבר. שיעור הצנתרים הארוכים בימים השני, החמישי והשביעי לאחר הצנתור התוך-תאי היה 94%81% ו-65% בהתאמה, במחקר של Storkson et al. שיעור הצנתרים הארוכים ביומיים, חמישה ושבעה ימים לאחר הצנתור התוך-תאי היה 95%90% ו-85% בהתאמה בשיטה שלנו.
לסיכום, השיטה המותאמת לצנתור תוך-תאי עשויה לשמש כלי שימושי לאינטרתקל חוזר ומתן תרופות ומהווה דרך פשוטה, נוחה ואמינה לקיצור משך הניסויים.
