subretinal-transplantation-macs-purified-photoreceptor-precursor

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Technische Universität Dresden

&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53D8;&#x6027;&#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x662F;&#x89C6;&#x89C9;&#x53D7;&#x635F;&#x548C;&#x5931;&#x660E;&#x7684;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5316;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x666E;&#x904D;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x5149;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x8868;&#x793A;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7B56;&#x7565;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x534F;&#x52A9;&#x5728;&#x4E30;&#x5BCC;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x5149;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4EA7;&#x540E;&#x7B2C; 4 &#x5929;&#x6746;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x627E;&#x51FA;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5149;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x53EF;&#x79FB;&#x690D;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D53;&#x7F29;&#x3001; &#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6746;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x7279;&#x5B9A;&#x8BB0;&#x8005;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x548C;&#x68D2;&#x4E86;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x78C1;&#x76F8;&#x5173;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6392;&#x5E8F; (MAC) &#x4E0E; CD73 &#x6297;&#x4F53;&#x3002;MAC &#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x88AB;&#x79FB;&#x690D;&#x5230;&#x6210;&#x5E74;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4E0B;&#x7A7A;&#x95F4;&#x3002;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x4E2D;&#x6240;&#x8F7D;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x672A;&#x6392;&#x5E8F;&#xFF0C;CD73 &#x9634;&#x6027;&#x548C; CD73 &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6570;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x8BDD;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x79FB;&#x690D;&#x540E;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A; CD73 &#x6746;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; CD73 &#x4E92;&#x59D4;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x68D2;&#x6D53;&#x7F29;&#x81F3; 87%&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x672A;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#xFF0C;CD73 &#x9633;&#x6027; MAC &#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x5916;&#x90E8;&#x90E8;&#x5206;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x7EA6;&#x4E09;&#x500D;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x3002;CD73 &#x57FA;&#x4E8E; MAC &#x662F;&#x96C6;&#x6210;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7684;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x51C0;&#x5316;&#x8868;&#x793A;&#x53EF;&#x79FB;&#x690D;&#x611F;&#x5149;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x65B0;&#x5DE5;&#x5177;&#x4ECE;&#x5F02;&#x6784;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x8BB0;&#x8005;&#x5728;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;

&#x66F4;&#x591A;&#x5730;&#x7EB3;&#x5165;&#x79FB;&#x690D; CD73 &#x9633;&#x6027;&#x5149;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x3002;

PURPOSE. Retinal degeneration initiated by loss of photoreceptors is the prevalent cause of visual impairment and blindness in industrialized countries. Transplantation of photoreceptor cells represents a possible replacement strategy. This study determined that identification of cell surface antigens can assist in enriching photoreceptor precursors for transplantation. METHODS. The expression profile of rod photoreceptors at postnatal day 4 was investigated by microarray analysis to identify photoreceptor-specific cell surface antigens. For enrichment of transplantable photoreceptors, neonatal retinas from rod photoreceptor-specific reporter mice were dissociated, and the rods were purified by magnetic associated cell sorting (MACS) with CD73 antibodies. MAC-sorted cell fractions were transplanted into the subretinal space of adult wild-type mice. The number of rod photoreceptors contained in unsorted, CD73-negative, and CD73-positive cell fractions were quantified in vitro and after grafting in vivo. RESULTS. Microarray analysis revealed that CD73 is a marker for rod photoreceptors. CD73-based MACS resulted in enrichment of rods to 87%. Furthermore, in comparison with unsorted cell fractions, CD73-positive MAC-sorted cells showed an approximately three-fold increase in the number of integrated, outer segment-forming photoreceptors after transplantation. CONCLUSIONS. CD73-based MACS is a reliable method for the enrichment of integrating photoreceptors. Purification via cell surface markers represents a new tool for the separation of transplantable photoreceptor precursors from a heterogeneous cell population, avoiding the need of reporter gene expression in target cells.

Increased integration of transplanted CD73-positive photoreceptor precursors into adult mouse retina.

BUT DU VOYAGE. Initi&eacute; par la perte des photor&eacute;cepteurs de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence r&eacute;tinienne est la cause courante de malvoyance et de c&eacute;cit&eacute; dans les pays industrialis&eacute;s. Transplantation de cellules photor&eacute;ceptrices repr&eacute;sente une strat&eacute;gie de remplacement &eacute;ventuel. Cette &eacute;tude a d&eacute;termin&eacute; qu&#39;identification des antig&egrave;nes de surface cellulaire peut aider &agrave; enrichir les pr&eacute;curseurs de photor&eacute;cepteur &agrave; la transplantation. M&Eacute;THODES. Le profil d&#39;expression des photor&eacute;cepteurs de la tige &agrave; jour apr&egrave;s la naissance 4 a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute; par analyse microarray pour identifier les antig&egrave;nes de surface de cellules photor&eacute;ceptrices sp&eacute;cifiques. Pour l&#39;enrichissement des photor&eacute;cepteurs transplantables, r&eacute;tines neonatal de souris sp&eacute;cifiques photor&eacute;cepteur journaliste tige ont &eacute;t&eacute; dissoci&eacute;es, et les tiges ont &eacute;t&eacute; purifi&eacute;es par magn&eacute;tique cellule associ&eacute;e (CMA) de tri avec CD73 anticorps. Fractions cellulaires tri-MAC ont &eacute;t&eacute; transplant&eacute;es dans l&#39;espace sous-r&eacute;tinienne des souris adultes de type sauvage. Le nombre de photor&eacute;cepteurs tige contenues dans non tri&eacute;s, CD73 n&eacute;gatifs, et les fractions cellulaires CD73 s&eacute;ropositifs ont &eacute;t&eacute; quantifi&eacute;es in vitro et apr&egrave;s la greffe in vivo. R&Eacute;SULTATS. &laquo; Microarray &raquo; analyse a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que CD73 est un marqueur des photor&eacute;cepteurs de la tige. CD73 MACINTOSHS a abouti &agrave; l&#39;enrichissement des tiges &agrave; 87 %. En outre, en comparaison des fractions cellulaires non tri&eacute;es, MAC-tri des cellules positives CD73 a montr&eacute; un environ tripl&eacute; le nombre de photor&eacute;cepteurs segment formant int&eacute;gr&eacute;s et externes apr&egrave;s la transplantation. CONCLUSIONS. Mac CD73 est une m&eacute;thode fiable pour l&#39;enrichissement de l&#39;int&eacute;gration des photor&eacute;cepteurs. Purification par l&#39;interm&eacute;diaire de marqueurs de surface cellulaire repr&eacute;sente un nouvel outil pour la s&eacute;paration des pr&eacute;curseurs de photor&eacute;cepteur transplantables d&#39;une population de cellules h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes, &eacute;vitant la n&eacute;cessit&eacute; de l&#39;expression du g&egrave;ne rapporteur dans les cellules cibles.

Int&eacute;gration accrue des pr&eacute;curseurs de photor&eacute;cepteur CD73 positifs transplant&eacute;s dans la r&eacute;tine de souris adulte.

ZWECK. Initiiert durch Verlust von Lichtrezeptoren Netzhautdegeneration ist die vorherrschende Ursache der Sehbehinderung und Blindheit in industrialisierten L&auml;ndern. Transplantation von Sehzellen stellt eine m&ouml;glichen Ersatz-Strategie. Diese Studie festgestellt, dass die Identifizierung der Zelle Oberfl&auml;che Antigene bereichern Photorezeptor Vorstufen f&uuml;r Transplantation helfen kann. METHODEN. Das Ausdruck-Profil von Stab Lichtrezeptoren auf postnatale Tag 4 wurde von Microarray Analyse Photorezeptor-spezifische Zelle Oberfl&auml;che Antigene identifizieren untersucht. F&uuml;r die Anreicherung von &uuml;bertragbare Lichtrezeptoren neonatale Netzhaut Stab Photorezeptor-spezifische Reporter M&auml;use wurden getrennt und die Stangen waren CD73-Antik&ouml;rper durch magnetische zugeordnete Zelle Sortieren (MACS) gereinigt. MAC-sortiert Zelle Br&uuml;che wurden in den Subretinale Raum der Erwachsenen Wildtyp-M&auml;usen verpflanzt. Die Anzahl der Stab Photorezeptoren in enthaltenen Unsortiert, CD73-Negative, und CD73-positiven Zellen Br&uuml;che wurden in vitro und nach Pfropfen in-vivo quantifiziert. ERGEBNISSE. Microarray-Analyse ergab, dass CD73 Marker f&uuml;r Stab Photorezeptoren ist. CD73-basierten MACS f&uuml;hrte Bereicherung der St&auml;be zu 87 %. Ferner im Vergleich mit unsortierten Zelle Br&uuml;che, CD73-positivem MAC sortierten Zellen zeigte eine ca. Verdreifachung der Zahl die Anzahl der integrierten, &auml;u&szlig;ere Segment-bildenden Photorezeptoren nach der Transplantation. SCHLUSSFOLGERUNGEN. CD73-basierten MACS ist eine zuverl&auml;ssige Methode f&uuml;r die Bereicherung der Photorezeptoren zu integrieren. Reinigung &uuml;ber Zelle Oberfl&auml;che Marker stellt ein neues Instrument f&uuml;r die Trennung von &uuml;bertragbare Photorezeptor Vorl&auml;ufer von eine heterogene Zellpopulation, zu vermeiden, dass der Reporter-Genexpression in Zielzellen.

Verst&auml;rkte Integration von transplantierten CD73-positivem Photorezeptor Vorstufen in adulten Maus Netzhaut.

SCOPO. Degenerazione retinica avviata dalla perdita dei fotorecettori &egrave; la causa prevalente di minorazione visiva e di cecit&agrave; nei paesi industrializzati. Il trapianto di cellule fotorecettrici rappresenta una strategia possibile sostituzione. Questo studio ha determinato che identificazione degli antigeni di superficie pu&ograve; assistere nell&#39;arricchimento dei precursori di fotorecettori per trapianto. METODI. Il profilo di espressione dei fotorecettori asta al 4 giorno postnatale &egrave; stato studiato da analisi di microarray per identificare i fotorecettori specifici antigeni superficiali. Per arricchimento dei fotorecettori trapiantabili, retine neonatale da topi reporter fotorecettori specifici asta erano dissociate, e le barre erano purificate dalla magnetico associato cella Ordinamento (MACS) con anticorpi CD73. Le frazioni cella MAC-ordinati sono state trapiantate nello spazio di topi adulti wild-type. Il numero di fotorecettori asta contenute misti, CD73-negativo, e le frazioni di cella CD73-positivi sono state quantificate in vitro e dopo l&#39;innesto in vivo. RISULTATI. Analisi di microarray ha rivelato che CD73 &egrave; un marker dei fotorecettori rod. Mac basati su cd73 ha portato arricchimento delle canne all&#39;87%. Inoltre, rispetto alle frazioni cellulari indifferenziati, cellule CD73-positivi ordinati MAC ha mostrato un circa triplice aumento del numero dei fotorecettori formando segmento esterni, integrate dopo il trapianto. CONCLUSIONI. Mac basati su cd73 &egrave; un metodo affidabile per l&#39;arricchimento di integrazione di fotorecettori. Purificazione tramite marcatori di superficie cellulare rappresenta un nuovo strumento per la separazione dei precursori di fotorecettori trapiantabili da una popolazione cellulare eterogenea, evitando la necessit&agrave; di espressione del gene reporter in cellule bersaglio.

Maggiore integrazione dei precursori di fotorecettori trapiantati CD73-positivi nella retina di topo adulto.

&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x8996;&#x899A;&#x969C;&#x5BB3;&#x3084;&#x5931;&#x660E;&#x306E;&#x5148;&#x9032;&#x56FD;&#x306E;&#x6D41;&#x884C;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x611F;&#x5149;&#x4F53;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3067;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;&#x6746;&#x751F;&#x5F8C; 4 &#x65E5;&#x76EE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;.&#x53EF;&#x79FB;&#x690D;&#x6027;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x7DB2;&#x819C;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x56FA;&#x6709;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x78C1;&#x6C17;&#x95A2;&#x9023;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; (MAC) CD73 &#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MAC &#x306B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x30BB;&#x30EB;&#x753B;&#x306F;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x4E0B;&#x8154;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x6746;&#x6570; CD73 &#x8CA0;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x306A;&#x3057;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x79FB;&#x690D;&#x5F8C; CD73 &#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x753B;&#x5206;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790; CD73 &#x6746;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CD73 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; MAC &#x68D2;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E; 87 &#xFF05; &#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;MAC &#x306B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048; CD73 &#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x672A;&#x6574;&#x7406;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x753B;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7D71;&#x5408;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x6570;&#x7D04; 3 &#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3002;CD73 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; MAC &#x306E;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x53EF;&#x79FB;&#x690D;&#x6027;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x7528;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D71;&#x5408;&#x79FB;&#x690D; CD73 &#x967D;&#x6027;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x3002;

&#xBAA9;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCC0;&#xC131; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xBA85; &#xC120;&#xC9C4;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB110;&#xB9AC; &#xD37C;&#xC9C4; &#xC6D0;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC774;&#xC2DD; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC774;&#xC2DD; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790; &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD560; &#xC218; &#xACB0;&#xC815;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B0; &#xD6C4; 4 &#xC77C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; microarray &#xBD84;&#xC11D; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Transplantable &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xB18D;&#xCD95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC790; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD574;&#xB9AC; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBD09;&#xC744; CD73 &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xB9C8;&#xADF8;&#xB124;&#xD2F1; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC140; &#xC815;&#xB82C; (&#xB9E5;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9E5; &#xC815;&#xB82C; &#xC140; &#xBD84;&#xC218; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC131;&#xC778; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; subretinal &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC218;&#xB294; &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, CD73 &#xC74C;&#xC218;&#xAC00; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC811;&#xBAA9; &#xD6C4; CD73 &#xC591;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC218; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microarray &#xBD84;&#xC11D; CD73 &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. CD73 &#xAE30;&#xBC18; MAC &#xACB0;&#xACFC; &#xBD09; &#xB18D;&#xCD95; 87%. &#xB610;&#xD55C;, &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC140; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; CD73 &#xC591;&#xC131; &#xB9E5; &#xC815;&#xB82C; &#xC140; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;&#xB294; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4;, &#xD1B5;&#xD569;, &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xC218;&#xC758; &#xC57D; 3 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00;. &#xACB0;&#xB860;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9E5; CD73 &#xAE30;&#xBC18; &#xD1B5;&#xD569; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xB18D;&#xCD95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC815;&#xD654; &#xAE30;&#xC790; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; transplantable &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; CD73 &#xD3EC;&#xC9C0;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD1B5;&#xD569;.

PROP&Oacute;SITO. Iniciado por p&eacute;rdida de fotorreceptores de la degeneraci&oacute;n retiniana es la causa frecuente de discapacidad visual y ceguera en los pa&iacute;ses industrializados. Trasplante de c&eacute;lulas fotorreceptoras representa una estrategia de reemplazo posible. Este estudio se determin&oacute; que identificaci&oacute;n de ant&iacute;genos de superficie celular puede ayudar a enriquecer los precursores del fotorreceptor para el trasplante. M&Eacute;TODOS. El perfil de expresi&oacute;n de los fotorreceptores de la varilla en d&iacute;a postnatal 4 fue investigado por an&aacute;lisis de microarrays para identificar ant&iacute;genos de superficie de c&eacute;lulas fotorreceptoras espec&iacute;ficas. Para el enriquecimiento de los fotorreceptores transplantables, neonatales retinas de ratones de fotorreceptor espec&iacute;fico reportero barra fueron disociados, y las varillas se purificaron por c&eacute;lula asociada magn&eacute;tica clasificaci&oacute;n (Mac) con anticuerpos CD73. Fracciones celulares MAC clasificadas fueron transplantadas en el espacio subretinal de ratones adultos de tipo salvaje. El n&uacute;mero de fotorreceptores varilla contenida en sin clasificar, CD73-negativo, y fracciones celulares de CD73-positivo se cuantificaron in vitro y despu&eacute;s de injertar en vivo. RESULTADOS. An&aacute;lisis de microarrays revelaron que CD73 es un marcador para los fotorreceptores de la barra. MACS basadas en cd73 resultaron en enriquecimiento de barras a 87%. Adem&aacute;s, en comparaci&oacute;n con fracciones de celulares sin clasificar, CD73 positivo clasificadas MAC c&eacute;lulas demostraron un aproximadamente triple aumento en el n&uacute;mero de fotorreceptores segmento-formaci&oacute;n integradas, externos despu&eacute;s del trasplante. CONCLUSIONES. MACS basadas en cd73 es un m&eacute;todo fiable para el enriquecimiento de la integraci&oacute;n de fotorreceptores. Purificaci&oacute;n mediante marcadores de superficie celular representa una nueva herramienta para la separaci&oacute;n de los precursores del fotorreceptor transplantables de una poblaci&oacute;n heterog&eacute;nea de la c&eacute;lula, evitando la necesidad de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de reportero en las c&eacute;lulas diana.

Mayor integraci&oacute;n de precursores de fotorreceptor CD73 positivo trasplantados en retina rat&oacute;n adulto.

&#x76F8;&#x5173;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7ED3;&#x5408;&#x51FA;&#x8272;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5149;&#x955C;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x76F8;&#x5173;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E0A;&#x975E;&#x5E38;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x8D85;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x5FEB;&#x901F;&#x800C;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5BF9;&#x5D4C;&#x5165;&#x5728; Lowicryl K4M &#x7532;&#x57FA;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x7532;&#x916F;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6837;&#x672C;&#x90E8;&#x5206;&#x6F14;&#x793A;&#x4E86;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66; &#x300B;&#x3002;&#x8D85;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x90FD;&#x88C5;&#x5728;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (EM) &#x7F51;&#x683C;&#x548C;&#x540C;&#x65F6;&#x6CBE;&#x91D1;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x9EC4;&#x91D1;&#x6216;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x6297;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; G (IgG) &#x9EC4;&#x91D1;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4EFB;&#x4E00;&#x86CB;&#x767D;&#x5230; Alexa488 &#x6216; Alexa555&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86; FluoroNanogold&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x94F6;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;&#x6837;&#x54C1;&#x5FC5;&#x987B;&#x5728;&#x5149;&#x955C;&#x548C;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C; (TEM)&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x9996;&#x5148;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8367;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x675F;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#x548C;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E2D;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x5173;&#x5230;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

&#x6807;&#x7B7E;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5149;&#x955C;&#x548C;&#x7535;&#x955C;&#x8D85;&#x8584;&#x6811;&#x8102;&#x8282;&#x3002;

Correlative microscopy combines the versatility of the light microscope with the excellent spatial resolution of the electron microscope. Here, we describe fast and simple methods for correlative immunofluorescence and immunogold labeling on the very same ultrathin section. The protocols are demonstrated on sections of tissue samples embedded in the methacrylate Lowicryl K4M. Ultrathin sections are mounted on electron microscopy (EM) grids and stained simultaneously with fluorescent and gold markers. For the detection of primary antibodies, we applied either protein A gold or immunoglobulin G (IgG) gold in combination with secondary antibodies coupled to Alexa488 or Alexa555. Alternatively, the correlative marker FluoroNanogold was used, followed by silver enhancement. The samples have to be analyzed first at the light microscope and then in the transmission electron microscope (TEM), because the fluorescence is bleached by the electron beam. Labeled structures selected at the fluorescence microscope can be identified in the TEM and analyzed at high resolution. This way, fluorescent signals can be directly correlated to the corresponding subcellular structures in the area of interest.

Labeling of ultrathin resin sections for correlative light and electron microscopy.

Microscopie corr&eacute;lative combine la polyvalence du microscope photonique avec l&#39;excellente r&eacute;solution spatiale du microscope &eacute;lectronique. Nous d&eacute;crivons ici des m&eacute;thodes simples et rapides pour immunofluorescence corr&eacute;lative et immunologique &agrave; l&#39;or d&#39;&eacute;tiquetage sur le m&ecirc;me tron&ccedil;on ultramince. Les protocoles sont illustr&eacute;s sur les sections des &eacute;chantillons de tissus incorpor&eacute;s dans le m&eacute;thacrylate Lowicryl K4M. Coupes ultrafines sont mont&eacute;s sur des grilles de microscopie &eacute;lectronique (me) et color&eacute;es simultan&eacute;ment avec des marqueurs fluorescents et d&#39;or. Pour la d&eacute;tection des anticorps primaires, nous avons appliqu&eacute; soit prot&eacute;ine or ou immunoglobuline G (IgG) or en combinaison avec des anticorps secondaires coupl&eacute; &agrave; Alexa488 ou Alexa555. Alternativement, le marqueur corr&eacute;latif FluoroNanogold a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e, suivie d&#39;argent mise en valeur. Les &eacute;chantillons doivent &ecirc;tre analys&eacute;s tout d&#39;abord au microscope photonique, puis dans le microscope &eacute;lectronique &agrave; transmission (TEM), parce que la fluorescence est blanchie par le faisceau d&#39;&eacute;lectrons. Structures &eacute;tiquet&eacute;es, s&eacute;lectionn&eacute;s &agrave; la microscopie &agrave; fluorescence peuvent &ecirc;tre identifi&eacute;s dans le TEM et analys&eacute;s &agrave; haute r&eacute;solution. De cette fa&ccedil;on, les signaux fluorescents peuvent &ecirc;tre corr&eacute;l&eacute;s directement aux structures subcellulaires correspondantes dans la zone d&#39;int&eacute;r&ecirc;t.

L&#39;&eacute;tiquetage des sections ultra-minces de r&eacute;sine pour microscopie corr&eacute;lative photonique et &eacute;lectronique.

Korrelative Mikroskopie verbindet die Vielseitigkeit der Lichtmikroskope mit die exzellente r&auml;umliche Aufl&ouml;sung des Elektronenmikroskops. Hier beschreiben wir die schnelle und einfache Methoden f&uuml;r Korrelative Immunfluoreszenz und Immunogold Beschriftung auf der selben ultrad&uuml;nne Abschnitt. Die Protokolle sind Abschnitte von Gewebeproben, die eingebettet in die Methacrylat Lowicryl K4M unter Beweis gestellt. Ultrad&uuml;nne Abschnitte sind montiert auf Elektronenmikroskopie (EM) Gittern und gleichzeitig mit fluoreszierenden und gold Marker befleckt. F&uuml;r den Nachweis von Prim&auml;rantik&ouml;rper wir entweder Protein ein Gold oder Immunglobulin G (IgG) Gold in Kombination mit Sekund&auml;rantik&ouml;rper gekoppelt auf Alexa488 oder Alexa555 angewendet. Alternativ die Korrelative Markierung, die FluoroNanogold verwendet wurde, gefolgt von Silber-Verbesserung. Die Proben haben zuerst auf das Lichtmikroskop und dann in die Transmissions-Elektronenmikroskop (TEM), analysiert werden, da die Fluoreszenz durch den Elektronenstrahl gebleicht ist. Beschriftete Strukturen ausgew&auml;hlt bei der Fluoreszenz-Mikroskopie k&ouml;nnen in der TEM identifiziert und mit hoher Aufl&ouml;sung analysiert werden. Auf diese Weise k&ouml;nnen fluoreszierende Signale direkt an die entsprechenden subzellularen Strukturen im Bereich der Interesse korreliert werden.

Kennzeichnung von ultrad&uuml;nnen Harz Abschnitte f&uuml;r Korrelative Licht- und Elektronenmikroskopie.

Microscopia correlativa unisce la versatilit&agrave; del microscopio luce con l&#39;eccellente risoluzione spaziale del microscopio elettronico. Qui, descriviamo metodi semplici e veloci per immunofluorescenza correlativo e immunogold etichettatura sulla stessa sezione ultrasottile. I protocolli sono dimostrati su sezioni di campioni di tessuto incorporati in metacrilato Lowicryl K4M. Sezioni ultrasottili sono montati su griglie di microscopia elettronica (EM) e tinto simultaneamente con marcatori fluorescenti e oro. Per la rilevazione di anticorpi primari, abbiamo applicato o proteina un oro o oro di immunoglobulina G (IgG) in combinazione con anticorpi secondari accoppiato a Alexa488 o Alexa555. In alternativa, il correlativo marcatore &egrave; stato utilizzato FluoroNanogold, seguita da miglioramento d&#39;argento. I campioni devono essere analizzati prima al microscopio e poi al microscopio elettronico a trasmissione (TEM), perch&eacute; la fluorescenza &egrave; sbiancata dal fascio di elettroni. Strutture con etichette selezionate al microscopio di fluorescenza possono essere identificati nel TEM e analizzati ad alta risoluzione. In questo modo, segnali fluorescenti possono essere direttamente correlati alle strutture subcellulari corrispondente nell&#39;area di interesse.

Etichettatura delle sezioni ultrasottili resina per luce correlativo e microscopia elettronica.

&#x76F8;&#x95A2;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x95A2;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x4E0A;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x8D85;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x3092;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x9AD8;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3067; Lowicryl K4M &#x306E;&#x30E1;&#x30BF;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x9178;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8D85;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x304C;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB; (EM) &#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x6B21;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;Alexa488 &#x307E;&#x305F;&#x306F; Alexa555 &#x306B;&#x91D1;&#x3084;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; G (IgG) &#x91D1;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B; gpcr &#x9069;&#x7528;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;FluoroNanogold &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x76F8;&#x95A2;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x9280;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x96FB;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6F02;&#x767D;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x6700;&#x521D;&#x3057;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (TEM) &#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;TEM &#x5185;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6975;&#x8584;&#x6A39;&#x8102;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x76F8;&#x95A2;&#x5149;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xC0C1;&#xD638; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xACF5;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC640; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xB2E4;&#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xACB0;&#xD569;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0C1;&#xD638; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; immunogold &#xB611;&#xAC19;&#xC740; ultrathin &#xC139;&#xC158;&#xC5D0; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xBA54;&#xD0C0; &#xD06C; &#xB9B4; &#xC0B0; Lowicryl k4m&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC139;&#xC158;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ultrathin &#xC139;&#xC158; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (EM) &#xACA9;&#xC790;&#xC5D0; &#xD0D1;&#xC7AC; &#xB418;&#xBA70; &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xACE8;&#xB4DC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xB4DC;. 1 &#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; Alexa488 &#xB610;&#xB294; Alexa555 &#xAE08; &#xB610;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; G (IgG) &#xACE8;&#xB4DC; 2 &#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC801;&#xC6A9;. &#xB610;&#xB294; Fluoronanogold&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xD45C;&#xC2DD; &#xB4A4; &#xC2E4;&#xBC84; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC0D8;&#xD50C; &#xC804;&#xC790; &#xBE54;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xBC31; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TEM) &#xBA3C;&#xC800; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xBD84;&#xB958; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; TEM&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; &#xC218; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB420; &#xAD00;&#xC2EC; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; subcellular &#xAD6C;&#xC870;.

&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xBE5B; ultrathin &#xC218; &#xC9C0; &#xC139;&#xC158;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;.

Microscop&iacute;a correlativa combina la versatilidad de la microscop&iacute;a con la excelente resoluci&oacute;n espacial del microscopio electr&oacute;nico. Aqu&iacute;, describimos los m&eacute;todos r&aacute;pidos y sencillos para inmunofluorescencia correlativa y immunogold etiquetado en la misma secci&oacute;n ultrafina. Los protocolos se demuestran en las secciones de muestras de tejido embebidas en el metacrilato Lowicryl K4M. Secciones ultrafinas son montadas en rejillas de microscopia electr&oacute;nica (EM) y manchadas simult&aacute;neamente con marcadores fluorescentes y oro. Para la detecci&oacute;n de anticuerpos primarios, aplicamos cualquier prote&iacute;na un oro o el oro de inmunoglobulina G (IgG) en combinaci&oacute;n con los anticuerpos secundarios junto a Alexa488 o Alexa555. Por otra parte, el marcador correlativo FluoroNanogold fue utilizado, seguido por plata mejora. Las muestras debe analizarse primero en el microscopio &oacute;ptico y luego en el microscopio electr&oacute;nico de transmisi&oacute;n (TEM), porque la fluorescencia es blanqueada por el haz de electrones. Etiquetado estructuras seleccionadas en el microscopio de fluorescencia pueden ser identificadas en el TEM y analizadas en alta resoluci&oacute;n. As&iacute;, las se&ntilde;ales fluorescentes pueden correlacionarse directamente a las estructuras subcelulares correspondientes en el &aacute;rea de inter&eacute;s.

Etiquetado de secciones de resina ultrafino para luz correlativa y microscopia electr&oacute;nica.

&#x79FB;&#x690D;&#x5230;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF09; &#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F6E;&#x6362;&#x7684;&#x81F4;&#x76F2;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x8868;&#x660E;&#x5AC1;&#x63A5;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5C06;&#x96C6;&#x6210;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x5916;&#x6838;&#x5C42; (&#x83E9;) &#x53D1;&#x5C55;&#x6210;&#x4E3A;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x819C;&#x3001; &#x9489;&#x4E66;&#x9489;&#x4EE5;&#x672C;&#x673A;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5BF9;&#x9F50;&#x7684;&#x5149;&#x76D8;&#x5916;&#x6BB5; &#xFF08;OS&#xFF09; &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7279;&#x5F81;&#x5DF2;&#x4E0D;&#x5DF2;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7814;&#x7A76;&#x8FC7;&#x79FB;&#x690D;&#x540E;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x53CC;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BB0;&#x8005;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x662F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x867D;&#x7136;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x88AB;&#x4E30;&#x5BCC;&#x4F7F;&#x7528; CD73-&#x57FA;&#x4E8E;&#x78C1;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x6392;&#x5E8F;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x79FB;&#x690D;&#x5165;&#x6210;&#x5E74;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6216;&#x663E;&#x6027;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53D8;&#x6027;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x80BE;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x4E09;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#xFF0C;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x8BB0;&#x8005;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; OS &#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x5149;&#x548C;&#x7535;&#x955C;&#x5404;&#x7EA7;&#x76D1;&#x6D4B;&#x3002;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x6B63;&#x786E;&#x5730;&#x96C6;&#x6210;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x548C;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5149;&#x76D8;&#x819C;&#x9489;&#x4E66;&#x9489;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x4E3B;&#x673A;&#x7684;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x53D1;&#x5C55;&#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x4ECD;&#x7559;&#x5728; sub-retinal &#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7684;&#x4E0D;&#x96C6;&#x6210;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4E5F;&#x4EA7;&#x751F;&#x50CF;&#x672C;&#x5730;&#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x53D7;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x6539;&#x8FDB;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x6210;&#x719F;&#x548C; OS &#x5F62;&#x6210;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5BF9;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x7684;&#x4E00;&#x9762;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x73AF;&#x5883;&#x6697;&#x793A;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; PPC &#x5206;&#x5316;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x79FB;&#x690D;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x96C6;&#x6210;&#x8FD8;&#x662F;&#x4E0D;&#x8FDB;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7684;&#x4E24;&#x5929;&#x624D;&#xFF0C;&#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x751F;&#x6210;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x5149;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7C7B;&#x578B;&#x91CE;&#x751F;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;&#x65E2;&#x7136;&#x60A3;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x53D8;&#x6027;&#x60A3;&#x8005;&#x5931;&#x53BB;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6781;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x79FB;&#x690D;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Transplantation of photoreceptor precursor cells (PPCs) into the retina represents a promising treatment for cell replacement in blinding diseases characterized by photoreceptor loss. In preclinical studies, we and others demonstrated that grafted PPCs integrate into the host outer nuclear layer (ONL) and develop into mature photoreceptors. However, a key feature of light detecting photoreceptors, the outer segment (OS) with natively aligned disc membrane staples, has not been studied in detail following transplantation. Therefore, we used as donor cells PPCs isolated from neonatal double transgenic reporter mice in which OSs are selectively labeled by green fluorescent protein while cell bodies are highlighted by red fluorescent protein. PPCs were enriched using CD73-based magnetic associated cell sorting and subsequently transplanted into either adult wild-type or a model of autosomal-dominant retinal degeneration mice. Three weeks post-transplantation, donor photoreceptors were identified based on fluorescent-reporter expression and OS formation was monitored at light and electron microscopy levels. Donor cells that properly integrated into the host wild-type retina developed OSs with the formation of a connecting cilium and well-aligned disc membrane staples similar to the surrounding native cells of the host. Surprisingly, the majority of not-integrated PPCs that remained in the sub-retinal space also generated native-like OSs in wild-type mice and those affected by retinal degeneration. Moreover, they showed an improved photoreceptor maturation and OS formation by comparison to donor cells located on the vitreous side suggesting that environmental cues influence the PPC differentiation and maturation. We conclude that transplanted PPCs, whether integrated or not into the host ONL, are able to generate the cellular structure for effective light detection, a phenomenon observed in wild-type as well as in degenerated retinas. Given that patients suffering from retinitis pigmentosa lose almost all photoreceptors, our findings are of utmost importance for the development of cell-based therapies.

Outer segment formation of transplanted photoreceptor precursor cells.

La transplantation de cellules photor&eacute;ceptrices de pr&eacute;curseur (SPAC) dans la r&eacute;tine repr&eacute;sente un traitement prometteur pour le remplacement de la cellule en aveuglant les maladies caract&eacute;ris&eacute;es par une perte des photor&eacute;cepteurs. Dans les &eacute;tudes pr&eacute;cliniques, nous et autres ont d&eacute;montr&eacute; que SPAC greff&eacute;es int&eacute;grer la couche nucl&eacute;aire externe h&ocirc;te (ONL) et qu&#39;il devienne matures photor&eacute;cepteurs. Toutefois, un &eacute;l&eacute;ment cl&eacute; de la d&eacute;tection des photor&eacute;cepteurs, le segment externe (OS) avec des agrafes de disque en mode natif align&eacute;s de membrane, la lumi&egrave;re n&#39;a pas &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute; en d&eacute;tail apr&egrave;s la transplantation. Par cons&eacute;quent, nous avons utilis&eacute; comme cellules donneuses SPAC isol&eacute;s de souris n&eacute;onatales journaliste transg&eacute;niques double dans laquelle OSs sont s&eacute;lectivement marqu&eacute;s par la prot&eacute;ine fluorescente verte tandis que les corps cellulaires sont mises en &eacute;vidence par une prot&eacute;ine fluorescente rouge. CCP ont &eacute;t&eacute; enrichies &agrave; l&#39;aide de CD73 base magn&eacute;tique cellule associ&eacute;e tri et ensuite transplant&eacute;es sauvage adulte ou un mod&egrave;le de souris de d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence r&eacute;tinienne autosomique dominante. Trois semaines apr&egrave;s, donneur photor&eacute;cepteurs ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s bas&eacute; sur expression fluorescentes-journaliste et formation de l&#39;OS a &eacute;t&eacute; suivie &agrave; niveaux de microscopie photonique et &eacute;lectronique. Cellules donneuses qui correctement int&eacute;gr&eacute; dans la r&eacute;tine de type sauvage h&ocirc;te d&eacute;velopp&eacute; OSs avec la formation d&#39;un cil de raccordement et bien align&eacute;es disque membrane staples semblables aux cellules environnantes natifs de l&#39;h&ocirc;te. &Eacute;tonnamment, la majorit&eacute; des CCP non int&eacute;gr&eacute; qui est rest&eacute; dans l&#39;espace sous-r&eacute;tinien a &eacute;galement g&eacute;n&eacute;r&eacute; des OSs natif chez les souris de type sauvage et les personnes touch&eacute;es par la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence r&eacute;tinienne. En outre, ils ont montr&eacute; une maturation photor&eacute;cepteur am&eacute;lior&eacute;e et la formation de l&#39;OS par comparaison aux cellules du donneur situ&eacute;s sur le c&ocirc;t&eacute; vitr&eacute;e, ce qui sugg&egrave;re que les signaux environnementaux influencent la PPC diff&eacute;renciation et la maturation. Nous concluons que transplant&eacute;es SPAC, qu&#39;ils soient int&eacute;gr&eacute;s ou pas l&#39;h&ocirc;te ONL, sont capables de g&eacute;n&eacute;rer la structure cellulaire pour la d&eacute;tection de lumi&egrave;re efficace, un ph&eacute;nom&egrave;ne observ&eacute; dans la sauvage aussi bien que dans les r&eacute;tines d&eacute;g&eacute;n&eacute;r&eacute;es. &Eacute;tant donn&eacute; que les patients souffrant de r&eacute;tinite pigmentaire perdent presque tous les photor&eacute;cepteurs, nos conclusions sont d&#39;une importance capitale pour le d&eacute;veloppement de th&eacute;rapies cellulaires.

Formation du segment externe des cellules pr&eacute;curseurs des photor&eacute;cepteurs transplant&eacute;s.

Transplantation von Sehzellen Vorl&auml;ufer (PPCs) in der Netzhaut stellt eine vielversprechende Behandlung f&uuml;r Zelle Ersatz in blendender Krankheiten mit Photorezeptoren Verlust dar. In pr&auml;klinischen Studien gezeigt wir u.a., dass Aufgepfropfte PPCs die Host nukleare Au&szlig;enschicht (ONL integrieren) und entwickeln sich zu Reifen Photorezeptoren. Ein wesentliches Merkmal des Lichts erkennen von Photorezeptoren, das &auml;u&szlig;ere Segment (OS) mit nativ ausgerichteten CD Membran Staples, ist jedoch nicht im Detail nach Transplantation gepr&uuml;ft worden. Daher haben wir als Spenderzellen PPCs isoliert neonatale Doppel Reporter transgene M&auml;use in die OSs von gr&uuml;n fluoreszierendes Protein selektiv beschriftet werden, w&auml;hrend Zelle K&ouml;rper von rot fluoreszierende Protein hervorgehoben werden verwendet. KKKS wurden angereichert mit CD73-basierte magnetische zugeordnete Zelle Sortieren und anschlie&szlig;end in ein Erwachsener Wildtyp oder ein Modell der autosomal-dominanten Netzhautdegeneration M&auml;use transplantiert. Drei Wochen Posttransplantationsverbesserungen, Spender, die Photorezeptoren identifiziert wurden basierend auf Leuchtstoff-Reporter Ausdruck und OS Bildung wurde auf Licht- und Elektronenmikroskopie Ebenen &uuml;berwacht. Spenderzellen, die ordnungsgem&auml;&szlig; in der Host-Wildtyp-Netzhaut integriert entwickelte OSs mit der Bildung einer verbindenden Zilie und einheitliches CD Membran Staples &auml;hnlich wie die umliegenden nativen Zellen des Wirtes. &Uuml;berraschend, die Mehrheit der nicht-integrierte PPCs, die in den subretinalen Raum blieb auch Native-wie OSs Wildtyp M&auml;usen erzeugt und die von Netzhautdegeneration betroffen. Dar&uuml;ber hinaus zeigten sie eine verbesserte Photorezeptor Reifung und OS-Bildung im Vergleich zu Spenderzellen befindet sich auf der Glask&ouml;rper Seite darauf hindeutet, dass &ouml;kologische Hinweise die PPC Differenzierung und Reifung beeinflussen. Wir schlie&szlig;en, dass PPCs, transplantiert, ob integriert oder nicht in der Host-ONL, k&ouml;nnen die Zellstruktur f&uuml;r effektive leichte Entdeckung, erzeugen ein Ph&auml;nomen im Wildtyp ebenso wie in degenerierten Netzhaut beobachtet. Angesichts der Tatsache, dass Patienten mit Retinitis Pigmentosa fast alle Photorezeptoren verlieren, sind unsere Ergebnisse von gr&ouml;&szlig;ter Bedeutung f&uuml;r die Entwicklung von zellbasierte Therapien.

&Auml;u&szlig;ere Segment Bildung von transplantierten Sehzellen Vorl&auml;ufer.

Il trapianto di cellule precursori di fotorecettori (PPCs) nella retina rappresenta un promettente trattamento per la sostituzione delle cellule nell&#39;accecante malattie caratterizzate da perdita di fotorecettori. In studi preclinici, noi e gli altri hanno dimostrato che innestati PPCs integrare lo strato nucleare esterno (ONL) di host e sviluppare in fotorecettori maturi. Tuttavia, una caratteristica chiave della luce rilevazione fotorecettori, il segmento esterno (OS) con graffette membrana disco allineato in modo nativo, non &egrave; stata studiata in dettaglio dopo trapianto. Pertanto, abbiamo utilizzato come donatore cellule isolate da topi neonatale reporter doppio transgenico in cui OSs PPCs sono etichettate in modo selettivo dalla proteina fluorescente verde mentre corpi cellulari sono evidenziati dalla proteina fluorescente rossa. PPCs erano arricchito utilizzando basati su CD73 magnetico associato cella Ordinamento e successivamente trapiantato in adult wild-type o un modello di topi di degenerazione retinica autosomica dominante. Post-trapianto di tre settimane, donatore di fotorecettori sono stati identificati basato su reporter fluorescente espressione e formazione di OS &egrave; stato monitorato a livelli di luce e la microscopia elettronica. Le cellule del donatore che correttamente integrato nella retina selvaggio-tipo host sviluppato OSs con formazione di un collegamento cilio e linea disco membrana staples simili alle cellule circostanti native dell&#39;host. Sorprendentemente, la maggior parte del PPCs non integrata che &egrave; rimasto nello spazio subretinico generato anche nativo-come OSs nei topi wild-type e quelli affetti da degenerazione retinica. Inoltre, hanno mostrato un OS formazione e maturazione dei fotorecettori migliorata in confronto alle cellule del donatore si trova sul lato vitreo che suggerisce che stimoli ambientali influenzano il PPC differenziazione e maturazione. Concludiamo che trapiantati PPCs, integrato o non nell&#39;ospite ONL, sono in grado di generare la struttura cellulare per rilevamento luce efficacia, un fenomeno osservato nel selvaggio-tipo cos&igrave; come in retine degenerate. Dato che i pazienti affetti da retinite pigmentosa perdono quasi tutti i fotorecettori, i nostri risultati sono della massima importanza per lo sviluppo di terapie cell-based.

Formazione del segmento esterno delle cellule precursori di fotorecettori trapiantati.

&#x7DB2;&#x819C;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;PPCs&#xFF09; &#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3070;&#x3086;&#x3044;&#x3070;&#x304B;&#x308A;&#x306E;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x96FB;&#x6C60;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x63A5;&#x6728; PPCs &#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x6838;&#x5916;&#x5C64;&#x306B; &#xFF08;ONL) &#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x6574;&#x5217;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30D7;&#x30EB;&#x30BA;&#x3068;&#x5916;&#x5074;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; (OS) &#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306B;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x8D64;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3069;&#x306E; OSs &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; PPCs &#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x7DD1;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;PPCs &#x306F;&#x3001;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x512A;&#x6027;&#x7DB2;&#x819C;&#x5909;&#x6027;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x79FB;&#x690D; CD73 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x78C1;&#x6C17;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;3 &#x9031;&#x9593;&#x79FB;&#x690D;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5F0F;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;OS &#x5F62;&#x6210;&#x5149;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D71;&#x5408;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7D9A;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x3068;&#x300C;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x7D30;&#x80DE;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068; OSs &#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;sub-retinal &#x7A7A;&#x9593;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x7D71;&#x5408; PPCs &#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x3082;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; OSs &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x3068; OS &#x5F62;&#x6210;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A; PPC &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x5074;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; 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&#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC; (PPCs)&#xC758; &#xB208;&#xBD80;&#xC2E0; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC140; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC774;&#xC2DD;&#xD560;&#xB41C; PPCs &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC678;&#xBD80; &#xD575; &#xCE35; (ONL)&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB300;&#xB1CC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB300;&#xB1CC;, &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB9C9; &#xC2A4;&#xD14C;&#xC774;&#xD50C; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; (OS)&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBE5B;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC774;&#xC2DD; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC140; &#xC2DC;&#xCCB4; &#xBD89;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC548; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; Oss&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC774;&#xC911; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xAE30;&#xC790; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; PPCs &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xB958; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PPCs CD73 &#xAE30;&#xBC18; &#xB9C8;&#xADF8;&#xB124;&#xD2F1; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC140; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB610;&#xB294; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCC0;&#xC131; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. 3 &#xC8FC; post-transplantation, &#xB300;&#xB1CC; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xC790; &#xC2DD; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xC601; &#xCCB4;&#xC81C; &#xD615;&#xC131; &#xBE5B;&#xACFC; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC140; &#xC5F0;&#xACB0; cilium&#xC640;&#xC640; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB9C9; &#xC2A4;&#xD14C;&#xC774;&#xD50C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD615;&#xC131; OSs &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC544;&#xB2C8; &#xD1B5;&#xD569; PPCs sub-retinal &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB294; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC19;&#xC740; &#xC6B4;&#xC601; &#xCCB4;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC131;&#xC219;&#xACFC; &#xC6B4;&#xC601; &#xCCB4;&#xC81C; &#xD615;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xD658;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC11C; PPC &#xBD84;&#xD654; &#xBC0F; &#xC131;&#xC219; &#xC88C;&#xC6B0; &#xC720;&#xB9AC; &#xCE21; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD1B5;&#xD569; &#xB610;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0; ONL &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBE5B; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xD604;&#xC0C1; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xB3C4; &#xD1F4; &#xD654; &#xD55C; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; PPCs, &#xC774;&#xC2DD; &#xACB0;&#xB860;. &#xADF8; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD654; &#xACE0;&#xD1B5; &#xBC1B;&#xB294; &#xD658;&#xC790;&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB300;&#xB1CC;&#xB97C; &#xC783;&#xACE0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xD615;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Trasplante de c&eacute;lulas precursoras de fotorreceptor (PPCs) en la retina representa un tratamiento prometedor para el reemplazo de la c&eacute;lula en cegamiento enfermedades caracterizadas por la p&eacute;rdida de fotorreceptores. En estudios precl&iacute;nicos, nosotros y otros demostraron que PPCs injertados integrar&aacute;n en la capa nuclear externa del anfitri&oacute;n (ONL) y convierten en fotorreceptores maduros. Sin embargo, una caracter&iacute;stica clave de la luz, detectar los fotorreceptores, el segmento externo (OS) con grapas de membrana de disco alineado de forma nativa, no se ha estudiado en detalle despu&eacute;s del trasplante. Por lo tanto, se utiliz&oacute; como c&eacute;lulas de un donante PPCs aislados de ratones transg&eacute;nicos doble neonatal de la reportera en que OSs selectivamente est&aacute;n marcadas por la prote&iacute;na verde fluorescente mientras que los cuerpos celulares se destacan por la prote&iacute;na fluorescente roja. PPCs fueron enriquecidos usando basadas en CD73 de magn&eacute;tico celular asociada clasificaci&oacute;n y posteriormente trasplantado en adultos tipo salvaje o un modelo de ratones de degeneraci&oacute;n retiniana autos&oacute;mica dominante. Poste-trasplante de tres semanas, donante fotorreceptores se identificaron basado en expresi&oacute;n fluorescente-reportero y formaci&oacute;n OS supervisaron en los niveles de luz y microscopia electr&oacute;nica. C&eacute;lulas de un donante que integraron correctamente en la retina de salvaje-tipo anfitri&oacute;n desarrollaron OSs con la formaci&oacute;n de un cilio que conecta y grapas de membrana de disco bien alineada similares a las c&eacute;lulas circundantes nativas del anfitri&oacute;n. Sorprendentemente, la mayor&iacute;a de PPCs no integrado que permaneci&oacute; en el espacio subretinianos tambi&eacute;n genera nativo OSs en ratones de tipo salvaje y los afectados por la degeneraci&oacute;n retiniana. Adem&aacute;s, demostr&oacute; una maduraci&oacute;n fotorreceptor mejorada y formaci&oacute;n OS en comparaci&oacute;n a las c&eacute;lulas del donante situadas en el lado v&iacute;trea sugiriendo que se&ntilde;ales ambientales influyen en la diferenciaci&oacute;n de la PPC y la maduraci&oacute;n. Concluimos que trasplantaron PPCs, ya sea integrado o no en el host ONL, son capaces de generar la estructura celular para la detecci&oacute;n eficaz de luz, un fen&oacute;meno observado en wild-type, as&iacute; como en las retinas degeneradas. Dado que los pacientes que sufren de retinosis pigmentaria pierden casi todos fotorreceptores, nuestros hallazgos son de suma importancia para el desarrollo de terapias basadas en c&eacute;lulas.

Dominic Eberle

CRTD / DFG-Research Center for Regenerative Therapies Dresden

Technische Universität Dresden

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Dominic Eberle

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}CRTD / DFG-Research Center for Regenerative Therapies Dresden

Technische Universität Dresden

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

CRTD / DFG-Research Center for Regenerative Therapies Dresden