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Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

The University of Hong Kong - HKU

&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x91CD;&#x8981;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EA7;&#x5987; mRNAs &#x5728;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5375;&#x3001; &#x5168;&#x7403;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x548C;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x80FD;&#x529B;&#x8D2D;&#x7F6E;&#x5B58;&#x50A8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9636;&#x6BB5;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x5375;&#x6CE1;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E00;&#x6BB5;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x7684;&#x5929;&#x6570;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x53C2;&#x4E0E;&#x53D1;&#x8D77;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5375;&#x6CE1;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x5E76;&#x53D1;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5374;&#x4E0D;&#x751A;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;SCF &#x6216;&#x5DE5;&#x5177;&#x5305;&#x914D;&#x4F53;) &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0A;&#x5230;&#x4E2D;&#x65EC;-&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x53CA;&#x5BF9; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x65E9;&#x671F;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x5230; multilaminar &#x5375;&#x6CE1;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x89E6;&#x53D1;&#x4E13;&#x7528;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8005;&#xFF0C;&#x4ECE; Dnmt1 &#x548C; Dnmt3L &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x624B;&#x672F;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x5375;&#x6CE1; Foxo3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x9E21;&#x86CB;&#x663E;&#x793A; Dnmt1 &#x6C34;&#x5E73;&#x5347;&#x9AD8;&#x3002;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x8FDE;&#x7EED; relocalisation &#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E; DNMT1 &#x6B63;&#x5728;&#x5BFC;&#x51FA;&#x4ECE;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x53CC;&#x677F;&#x5375;&#x6CE1;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; DNMT3A multilaminar &#x9636;&#x6BB5;&#x88AB;&#x8F93;&#x9001;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x3001; &#x6307;&#x793A;&#x63A7;&#x5236;&#x5370;&#x8FF9;&#x8D29;&#x8FD0;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8D85;&#x4E34;&#x754C;&#x6D41;&#x4F53;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7; phophostidylinositol &#x4FE1;&#x53F7; 3 (PI3) &#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF1A; &#x6291;&#x5236;&#x6B64;&#x8DEF;&#x5F84;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62; FOXO3 &#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x5B83;&#x8FD8;&#x963B;&#x6B62; DNMT1 &#x51FA;&#x53E3;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230;&#x5168;&#x5C3A;&#x5BF8; &#xFF08;70 microM&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x6B21;&#x7EA7;&#x5375;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x4E8E;&#x5375;&#x6CE1;&#x5185;&#x819C;&#x5C42;&#x672A;&#x80FD;&#x5F62;&#x6210;&#x6B63;&#x786E;&#x3002;De novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x770B;&#x5230;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x3001; &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E3A;&#x6700;&#x9AD8;&#x4E3A; Snrpn &#x548C; Igf2r &#x867D;&#x7136; Peg1 &#x665A;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x65E9;&#x671F;&#x4F53;&#x5185;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x8D85;&#x4E34;&#x754C;&#x6D41;&#x4F53;&#x5904;&#x7406;&#x5E76;&#x672A;&#x589E;&#x52A0;&#x663E;&#x793A;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x770B;&#x5230;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x91CD;&#x590D; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316; IAP &#x6CA1;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x52A0;&#x8F7D;&#x7531;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x8D85;&#x4E34;&#x754C;&#x6D41;&#x4F53;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x5B8C;&#x6210;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x5230;&#x8F85;&#x52A9;&#x5375;&#x6CE1;&#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x4E0D;&#x592A;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x53D7;&#x8D85;&#x4E34;&#x754C;&#x6D41;&#x4F53;&#x3002;

&#x6B63;&#x5728;&#x52A0;&#x8F7D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

Epigenetic reprogramming occurs during oocyte growth in mice, a stage where a number of important events are occurring, including transcription of maternal mRNAs for storage in the mature egg, global transcriptional silencing and the acquisition of meiotic competence. Oocyte growth occurs in conjunction with follicular development over a period of many days. The signals involved in initiating different stages in oocyte and follicular development and the concurrent epigenetic changes are poorly understood. Here we examine the role of stem cell factor (SCF or Kit ligand) on the early- to mid-stages of oocyte growth and on DNA methyltransferase expression and function using a one-step in vitro culture system. Our results show that SCF promotes early oocyte growth and development to the multilaminar follicle stage. Oocyte growth is sufficient to trigger transcription of Dnmt1 and Dnmt3L from dedicated oocyte promoters, and we show that eggs undergoing growth in the absence of follicle development in Foxo3 mutants show elevated levels of Dnmt1. The methyltransferase proteins undergo sequential relocalisation in the oocyte, with DNMT1 being exported from the nucleus at the bilaminar follicle stage, while DNMT3A is transported into the nucleus at the multilaminar stage, indicating an important role for trafficking in controlling imprinting. SCF is thought to signal partly through the phophostidylinositol 3 (PI3) kinase pathway: inhibiting this path was previously shown to prevent FOXO3 nuclear export and we could show here that it also prevented DNMT1 export. Some oocytes reached full size (70 microM) in this in vitro system, but no secondary follicles were formed, most likely due to failure of the thecal layer to form properly. De novo methylation of imprinted genes was seen in some oocyte cultures, with methylation levels being highest for Snrpn and Igf2r which are methylated early in vivo, while Peg1, which is methylated late, showed little or no methylation. SCF treatment did not increase the number of cultures showing methylation. We saw no evidence for de novo methylation of IAP repeats in our cultures. These results suggest that while methyltransferase loading is triggered by oocyte growth, in which SCF plays an important role, complete methylation probably requires progression to the secondary follicle stage and is unlikely to be affected by SCF.

DNA methyltransferase loading, but not de novo methylation, is an oocyte-autonomous process stimulated by SCF signalling.

Reprogrammation &eacute;pig&eacute;n&eacute;tique se produit au cours de la croissance des ovocytes chez la souris, une sc&egrave;ne o&ugrave; un certain nombre d&#39;&eacute;v&eacute;nements importants se produisent, y compris la transcription de l&#39;ARNm maternels pour stockage dans l&#39;ovule mature, transcriptionnelle globale et l&#39;acquisition de comp&eacute;tence m&eacute;iotique. Croissance des ovocytes se produit en conjonction avec le d&eacute;veloppement folliculaire sur une p&eacute;riode de plusieurs jours. On conna&icirc;t mal les signaux ayant servi &agrave; amorcer les diff&eacute;rentes &eacute;tapes de l&#39;ovocyte et le d&eacute;veloppement folliculaire et les changements &eacute;pig&eacute;n&eacute;tiques simultan&eacute;es. Ici, nous examinons le r&ocirc;le de stem cell factor (SCF ou Kit ligand) sur au milieu-d&eacute;but de la croissance de l&#39;ovocyte et sur l&#39;ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rase expression et fonction &agrave; l&#39;aide d&#39;une seule &eacute;tape dans le syst&egrave;me de culture in vitro. Nos r&eacute;sultats montrent qu&#39;EFC favorise la croissance pr&eacute;coce des ovocytes et d&eacute;veloppement jusqu&#39;au stade du follicule multilaminaire. Croissance des ovocytes est suffisante pour d&eacute;clencher la transcription de Dnmt1 et Dnmt3L des promoteurs de l&#39;ovocyte d&eacute;di&eacute;, et nous montrons que les oeufs en croissance en l&#39;absence de d&eacute;veloppement folliculaire chez les mutants Foxo3 montrent des niveaux &eacute;lev&eacute;s de Dnmt1. Les prot&eacute;ines m&eacute;thyltransf&eacute;rase subissent une relocalisation des activit&eacute;s s&eacute;quentielles dans l&#39;ovocyte, avec DNMT1 export&eacute; du noyau au stade follicule bilaminaire, tandis que DNMT3A est transport&eacute; dans le noyau au stade multilaminaire, indiquant un r&ocirc;le important pour le trafic dans le contr&ocirc;le de l&#39;empreinte. EFC est pens&eacute; pour signaler, en partie gr&acirc;ce &agrave; la phophostidylinositol, 3 voie de la kinase (PI3): inhiber cette voie a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; pour emp&ecirc;cher les exportations nucl&eacute;aires FOXO3 et ici, nous avons pu montrer qu&#39;il a &eacute;galement emp&ecirc;ch&eacute; DNMT1 exportation. Certains ovocytes atteint pleine grandeur (70 microM) dans ce syst&egrave;me in vitro, mais aucun follicules secondaires ont &eacute;t&eacute; form&eacute;s, tr&egrave;s probablement en raison de l&#39;&eacute;chec de la couche th&egrave;que pour former correctement. De novo la m&eacute;thylation des g&egrave;nes imprim&eacute;s a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e dans certaines cultures d&#39;ovocytes, avec des niveaux de m&eacute;thylation &eacute;tant plus &eacute;lev&eacute; pour Snrpn et Igf2r qui sont m&eacute;thyl&eacute;es t&ocirc;t in vivo, tandis que Peg1, qui est m&eacute;thyl&eacute; tardif, ont montr&eacute; peu ou pas de m&eacute;thylation. Traitement du SCF n&#39;a pas augment&eacute; le nombre de cultures, montrant la m&eacute;thylation. Nous avons vu qu&#39;aucune preuve de m&eacute;thylation de novo de l&#39;IAP se r&eacute;p&egrave;te dans nos cultures. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que bien que chargement m&eacute;thyltransf&eacute;rase est d&eacute;clench&eacute;e par la croissance de l&#39;ovocyte, dans lequel le SCF joue un r&ocirc;le important, m&eacute;thylation compl&egrave;te probablement exige la progression vers le stade de follicule secondaire et est peu susceptible d&#39;&ecirc;tre affect&eacute;e par le SCF.

ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rase de chargement, mais pas de novo methylation, est un processus autonome ovocyte stimul&eacute; par le CSAH signalisation.

Epigenetischen Reprogrammierung tritt w&auml;hrend der Eizelle Wachstum bei M&auml;usen eine B&uuml;hne, wo eine Anzahl von wichtigen Ereignissen, einschlie&szlig;lich Transkription des m&uuml;tterlichen mRNAs f&uuml;r Speicherung in die reife Eizelle, globale transcriptional silencing und den Erwerb von meiotischen Kompetenz auftreten. Eizelle die Vergr&ouml;&szlig;erung in Verbindung mit follikul&auml;ren Entwicklung &uuml;ber einen Zeitraum von vielen Tagen. Die Signale, die Einleitung von verschiedener Phasen Eizelle und follikul&auml;ren Entwicklung und die gleichzeitigen epigenetischen Ver&auml;nderungen beteiligt sind oft missverstanden. Hier untersuchen wir die Rolle der Stammzell-Faktor (SCF oder Kit-Ligand), auf - zu Mitte-Fr&uuml;hstadium Eizelle Wachstum und auf DNA Methyltransferase Ausdruck und Funktion mit einem einstufigen in-Vitro-Kultur-System. Unsere Ergebnisse zeigen, dass SCF fr&uuml;hen Eizelle Wachstum und Entwicklung zur Multilaminar Follikel Stufe f&ouml;rdert. Eizelle Wachstum reicht um die Transkription der Dnmt1 und Dnmt3L von dedizierten Eizelle Promotoren ausl&ouml;sen, und wir zeigen, dass Eier in Wachstum in Ermangelung der Follikel Entwicklung in Foxo3-Mutanten erh&ouml;hte Konzentrationen von Dnmt1 zeigen. Die Methyltransferase-Proteine unterziehen sequenzielle zur&uuml;ckzuverhelfen in der Eizelle mit DNMT1 exportiert werden vom Kern Stadium der Bilaminar Follikel, w&auml;hrend DNMT3A im Stadium der Multilaminar in den Zellkern transportiert wird, angibt, eine wichtige Rolle f&uuml;r den Handel bei der Kontrolle der Pr&auml;gung. SCF wird gedacht, um unter anderem durch die Phophostidylinositol 3 (PI3)-Kinase-Signalweg signalisieren: Hemmung dieser Pfad wurde zuvor gezeigt, dass nukleare FOXO3-Export zu verhindern und wir k&ouml;nnten hier zeigen, dass es auch DNMT1 Export verhindert. Einige Eizellen vollen Gr&ouml;&szlig;e (70 MicroM) in dieser in-vitro-System erreicht, aber keine sekund&auml;re Follikel bildeten sich h&ouml;chstwahrscheinlich wegen des Ausfalls der thecal Ebene, richtig zu bilden. De Novo Methylierung von Genen, die aufgedruckten wurde in einigen Kulturen Eizelle mit Methylierung-Stufen, die h&ouml;chste f&uuml;r Snrpn und Igf2r gesehen, die fr&uuml;h in Vivo methyliert sind, w&auml;hrend Peg1, die sp&auml;t methyliert ist, wenig oder gar keine Methylierung zeigte. SCF-Behandlung nicht die Anzahl der Kulturen zeigen Methylierung zu erh&ouml;hen. Wir haben gesehen, dass keine Belege f&uuml;r die de Novo Methylierung der IAP in unseren Kulturen wiederholt. Diese Ergebnisse legen nahe, w&auml;hrend Methyltransferase Laden von Eizelle Wachstum ausgel&ouml;st wird, in dem SCF eine wichtige Rolle spielt, vollst&auml;ndige Methylierung wahrscheinlich Fortschreiten auf die sekund&auml;re Follikel-B&uuml;hne erfordert und ist unwahrscheinlich, dass vom SCF betroffen sein.

Laden, aber nicht de Novo Methylierung, DNA-Methyltransferase ist ein Eizelle-autonomen Prozess angeregt durch SCF signalisieren.

Riprogrammazione epigenetica si verifica durante la crescita di ovociti nei topi, un palco dove si verifica una serie di eventi importanti, compreso trascrizione di mRNA materno per lo stoccaggio nell&#39;uovo maturo, silenziamento trascrizionale globale e l&#39;acquisizione di competenze meiotic. Crescita ovocita si verifica in concomitanza con lo sviluppo follicolare in un periodo di molti giorni. I segnali di avvio diverse fasi nell&#39;ovocita e sviluppo follicolare e il concomitanti cambiamenti epigenetici sono mal capiti. Qui esaminiamo il ruolo di fattore della cellula formativa (SCF o Kit ligando) su - a met&agrave;-fasi iniziali di crescita ovocita e sul DNA metiltransferasi espressione e funzione utilizzando un One-Step in vitro sistema cultura. I nostri risultati mostrano che SCF promuove la crescita precoce ovocita e sviluppo allo stadio di follicolo multilaminare. Crescita ovocita &egrave; sufficiente a far scattare la trascrizione di Dnmt1 e Dnmt3L da promotori ovocita dedicato, e ci mostra che le uova in fase di crescita in assenza di sviluppo del follicolo Foxo3 mutanti mostrano livelli elevati di Dnmt1. Le proteine metiltransferasi subiscono sequenziale delocalizzazione nell&#39;ovocita, con DNMT1 esportata dal nucleo in fase di bilaminar follicolo mentre DNMT3A &egrave; trasportato nel nucleo in fase multilaminare, indicando un ruolo importante per il traffico nel controllo di imprinting. SCF &egrave; pensato per segnalare in parte attraverso il phophostidylinositol 3 (PI3) chinasi via: inibendo questo percorso precedentemente &egrave; stato indicato per impedire l&#39;esportazione nucleare FOXO3 e potremmo mostrare qui che ha impedito anche DNMT1 esportazione. Alcuni ovociti raggiunto full size (70 microM) in questo sistema in vitro, ma non follicoli secondari sono stati formati, probabilmente a causa di fallimento dello strato stenosi per formare correttamente. De novo metilazione dei geni imprinted &egrave; stato visto in alcune culture dell&#39;ovocita, con livelli di metilazione essere pi&ugrave; alto per Snrpn e Igf2r che sono metilati presto nel vivo, mentre Peg1, che &egrave; metilato in ritardo, ha mostrato poca o nessuna metilazione. Trattamento SCF non aumenta il numero delle culture mostrando la metilazione. Abbiamo visto che alcuna prova per de novo metilazione di IAP si ripete nelle nostre culture. Questi risultati suggeriscono che mentre caricamento metiltransferasi &egrave; innescato dalla crescita degli ovociti, in cui SCF svolge un ruolo importante, metilazione completa probabilmente richiede la progressione verso la fase del follicolo secondario ed &egrave; improbabile da essere colpiti da SCF.

DNA metiltransferasi carico, ma non de novo metilazione, sono un ovocita-autonomo processo stimolato da SCF segnalazione.

&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x5316;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x5375;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x7372;&#x5F97;&#x306E;&#x6BCD;&#x6027; Mrna &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x3001;&#x767A;&#x751F;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x6240;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x5375;&#x80DE;&#x767A;&#x80B2;&#x65E5;&#x6570;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x5375;&#x5B50;&#x3068;&#x5375;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x3068;&#x540C;&#x6642;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; - &#x306B;&#x534A;&#x3070;-&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x304A;&#x3088;&#x3073; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; in vitro &#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x3067;&#x3001;&#x30EF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#xFF09; SCF &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SCF &#x521D;&#x671F;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3068; multilaminar &#x5375;&#x80DE;&#x671F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E; Dnmt1 &#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x5C02;&#x7528;&#x5375;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Foxo3 &#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5375;&#x80DE;&#x767A;&#x80B2;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5375; Dnmt1 &#x9AD8;&#x5024;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x57FA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x518D;&#x5730;&#x57DF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B; DNMT3A &#x6838;&#x306B; multilaminar &#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x904B;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x6838;&#x304B;&#x3089; bilaminar &#x5375;&#x80DE;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DNMT1 &#x3068;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;, &#x5237;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SCF phophostidylinositol &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; 3 (PI3) &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;: &#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x4EE5;&#x524D;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; FOXO3 &#x6838;&#x8F38;&#x51FA;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3082; DNMT1 &#x8F38;&#x51FA;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5375;&#x5B50;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA; (70 microM) &#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E; in vitro &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x304C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5375;&#x80DE;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x5931;&#x6557;&#x306E;&#x83A2;&#x819C;&#x5C64;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;De novo &#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x637A;&#x5370;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x306B;&#x9045;&#x304F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Peg1 &#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Snrpn &#x3068; Igf2r &#x6700;&#x9AD8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SCF &#x51E6;&#x7406;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;IAP &#x306E; de novo &#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x56DE;&#x6570;&#x3092;&#x898B;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092; SCF &#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5375;&#x80DE;&#x671F;&#x3078;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3001;SCF &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;de novo &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5F8B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9; SCF &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x523A;&#x6FC0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Epigenetic &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; oocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC0DD;&#xC950;, &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xACC4;&#xB780;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; transcriptional &#xC785;&#xC744; meiotic &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xD68D;&#xB4DD;&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD1A0;&#xB9AC;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xC131; Mrnas&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC704;&#xCE58; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xBA70;&#xCE60; &#xB3D9;&#xC548; follicular &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oocyte follicular &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC2DC; epigenetic &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC2DC;&#xC791;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC5D0;-&#xD558; &#xC911;&#xBC18;-&#xCD08;&#xAE30; oocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; DNA methyltransferase &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xB294; 1 &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBE44;&#xC728; (SCF &#xB610;&#xB294; &#xD0A4;&#xD2B8; ligand)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; SCF &#xCD09;&#xC9C4; &#xCD08;&#xAE30; oocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; multilaminar &#xBAA8; &#xADFC; &#xBB34;&#xB300;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC804;&#xC6A9;&#xB41C; oocyte &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Dnmt1 &#xBC0F; dnmt3l&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; Foxo3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xACAA;&#xACE0; &#xACC4;&#xB780; dnmt1&#xC758; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC;. Methyltransferase &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; relocalisation oocyte&#xC5D0;&#xC11C; dnmt1&#xB85C; &#xC218;&#xCD9C; &#xB418; &#xACE0; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; bilaminar &#xBAA8; &#xADFC; &#xBB34;&#xB300;&#xC5D0; DNMT3A multilaminar &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB418;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;, &#xAC01; &#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. SCF&#xB294; &#xC0DD;&#xAC01; 3 (PI3) &#xB2C8; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; phophostidylinositol&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;: FOXO3 &#xD575; &#xC218;&#xCD9C;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC92C;&#xB358;&#xC774; &#xACBD;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; DNMT1 &#xC218;&#xCD9C; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBD80; oocytes&#xC774; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xCCB4; &#xD06C;&#xAE30; (70 microM)&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5C6;&#xC74C; &#xBCF4;&#xC870; &#xB0AD;, &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; thecal &#xACC4;&#xCE35;&#xC758; &#xC2E4;&#xD328;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB294; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xAC20;&#xC740;, Peg1 &#xBCF4;&#xC5EC; &#xAC70;&#xC758; &#xC5C6;&#xAC70;&#xB098; &#xC804;&#xD600; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCD08;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xBCF4;, &#xAC20; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC218;&#xC900;&#xC758; Snrpn &#xBC0F; Igf2r &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xB418; &#xACE0; &#xC77C;&#xBD80; oocyte &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. SCF &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xBB38;&#xD654; &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBB34;&#xB98E;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xBC18;&#xBCF5; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; methyltransferase &#xB85C;&#xB4DC; SCF&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; oocyte &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xBA54; &#xD2F8; &#xC544;&#xB9C8; &#xBCF4;&#xC870; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD574;&#xC57C; SCF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD06C;&#xB2E4;.

&#xC548; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBA54; &#xD2F8;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB85C;&#xB4DC; DNA methyltransferase SCF &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; oocyte &#xC790;&#xCE58; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Reprogramaci&oacute;n epigen&eacute;tica ocurre durante el crecimiento del ovocito en ratones, una etapa donde se producen una serie de eventos importantes, incluyendo la transcripci&oacute;n de los mRNAs materna para almacenamiento en el &oacute;vulo maduro, silenciamiento transcripcional global y la adquisici&oacute;n de competencias mei&oacute;tica. Crecimiento de ovocitos ocurre conjuntamente con desarrollo folicular durante muchos d&iacute;as. Las se&ntilde;ales implicadas en la iniciaci&oacute;n de diferentes etapas de ovocitos y desarrollo folicular y los concurrentes cambios epigen&eacute;ticos son poco conocidas. Aqu&iacute; examinamos el papel del factor de c&eacute;lula de v&aacute;stago (SCF o Kit ligand) en las primeras - a mediados-etapas de crecimiento del ovocito y en DNA metiltransferasa expresi&oacute;n y funci&oacute;n con un paso en el sistema de cultivo de vitro. Nuestros resultados muestran que el SCF promueve crecimiento temprano de ovocitos y desarrollo a la etapa de fol&iacute;culo multilaminares. Crecimiento de ovocitos es suficiente para desencadenar la transcripci&oacute;n de Dnmt1 y Dnmt3L de promotores de ovocitos dedicado, y mostramos que los huevos que experimentan crecimiento en ausencia de desarrollo folicular en Foxo3 mutantes muestran niveles elevados de Dnmt1. Las prote&iacute;nas de la metiltransferasa someterse a relocalizar secuencial en el ovocito, con DNMT1 exportadas desde el n&uacute;cleo en la etapa de fol&iacute;culo bilaminar, mientras que DNMT3A se transporta en el n&uacute;cleo en la etapa de multilaminares, indicando un papel importante para el tr&aacute;fico en el control de impresi&oacute;n. SCF se cree que en parte a trav&eacute;s de la phophostidylinositol de se&ntilde;al v&iacute;a de cinasa (PI3) 3: inhibir este camino fue demostrado previamente para evitar que FOXO3 las exportaciones nucleares y nos podr&iacute;amos mostrar aqu&iacute; que tambi&eacute;n impidi&oacute; la exportaci&oacute;n de DNMT1. Algunos ovocitos alcanzaron a tama&ntilde;o completo (70 microM) en este sistema in vitro, pero no los fol&iacute;culos secundarios fueron formados, probablemente debido a la falta de la capa tecal para formar correctamente. De novo metilaci&oacute;n de genes impresos se vio en algunas culturas de ovocitos, con niveles de metilaci&oacute;n siendo m&aacute;s alto para Snrpn y Igf2r que est&aacute;n metilados temprano en vivo, mientras que Peg1, que es metilado tarde, mostraron poca o ninguna metilaci&oacute;n. Tratamiento de la SCF no aument&oacute; el n&uacute;mero de culturas mostrando la metilaci&oacute;n. Hemos visto que ninguna evidencia de metilaci&oacute;n de novo de IAP se repite en nuestras culturas. Estos resultados sugieren que mientras carga metiltransferasa es accionada por el crecimiento del ovocito, en la cual SCF desempe&ntilde;a un papel importante, completa metilaci&oacute;n probablemente requiere la progresi&oacute;n a la etapa de fol&iacute;culo secundario y es poco probable ser afectado por SCF.

Metiltransferasa de ADN carga, pero no de la metilaci&oacute;n de novo, es un proceso de ovocitos aut&oacute;nomo estimulado por se&ntilde;alizaci&oacute;n de SCF.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; ZFP57 &#x662F;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EA7;&#x5987;&#x5408;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7EF4;&#x62A4; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5370;&#x8BB0;&#x5728;&#x5370;&#x8FF9;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x5370;&#x8FF9;&#x5982;&#x4F55;&#x9488;&#x5BF9; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x63A7;&#x5236;&#x533A;&#x57DF;&#x53D1;&#x8D77;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x70D9;&#x5370;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x83B7;&#x5F97;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x672C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5370;&#x8BB0;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; ZFP57 &#x5982;&#x4F55;&#x4FDD;&#x6301;&#x9F20;&#x6807; (ES) &#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5370;&#x8BB0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; ZFP57 &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E27;&#x5931;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5370;&#x8BB0;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5176;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E27;&#x5931;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;ZFP57 &#x5230; Zfp57 null ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F15;&#x5165;&#x4E0D;&#x662F;&#x70D9;&#x5370;&#x7684;&#x518D;&#x53D6;&#x5F97; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5DF2;&#x9057;&#x5931;&#x6216;&#x66F4;&#x6539; Zfp57 null ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5370;&#x8BB0;&#x7684;&#x5185;&#x5B58;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;ZFP57 &#x548C; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F62;&#x6210;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5B58;&#x5728; KAP1/TRIM28/TIF1&beta; &#x65F6; co-expressed COS &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5916;&#x6E90; ZFP57 &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7A81;&#x53D8; ZFP57 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x4EA4;&#x4E92; KAP1/TRIM28/TIF1&beta; &#x80FD;&#x5728;&#x7EF4;&#x6301;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5370;&#x8BB0;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; ZFP57 &#x53D6;&#x4EE3;&#x5176;&#x534F;&#x56E0;&#x6570; KRAB &#x6846;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; ZFP57 &#x53EF;&#x4EE5;&#x62DB;&#x8058;&#x5230;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x5730;&#x533A;&#x7EF4;&#x6301; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x70D9;&#x5370;&#xFF0C;DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7; KAP1/TRIM28/TIF1&beta;&#x3002;

&#x950C;&#x6307;&#x86CB;&#x767D; ZFP57 &#x9700;&#x8981;&#x62DB;&#x8058; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x53CA;&#x5176;&#x534F;&#x56E0;&#x6570;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5370;&#x8BB0;&#x3002;

Previously, we discovered that ZFP57 is a maternal-zygotic effect gene, and it maintains DNA methylation genomic imprint at multiple imprinted regions in mouse embryos. Despite these findings, it remains elusive how DNA methyltransferases are targeted to the imprinting control regions to initiate and maintain DNA methylation imprint. To gain insights into these essential processes in genomic imprinting, we examined how ZFP57 maintains genomic DNA methylation imprint in mouse embryonic stem (ES) cells. Here we demonstrate that the loss of ZFP57 in mouse ES cells led to a complete loss of genomic DNA methylation imprint at multiple imprinted regions, similar to its role in mouse embryos. However, reintroduction of ZFP57 into Zfp57-null ES cells did not result in reacquisition of DNA methylation imprint, suggesting that the memory for genomic imprinting had been lost or altered in Zfp57-null ES cells in culture. Interestingly, ZFP57 and DNA methyltransferases could form complexes in the presence of KAP1/TRIM28/TIF1Î² when co-expressed in COS cells. We also found that the wild-type exogenous ZFP57 but not the mutant ZFP57 lacking the KRAB box that interacts with its co-factor KAP1/TRIM28/TIF1Î² could substitute for the endogenous ZFP57 in maintaining the DNA methylation imprint in ES cells. These results suggest that ZFP57 may recruit DNA methyltransferases to its target regions to maintain DNA methylation imprint, and this interaction is likely facilitated by KAP1/TRIM28/TIF1Î².

Zinc Finger Protein ZFP57 Requires Its Co-factor to Recruit DNA Methyltransferases and Maintains DNA Methylation Imprint in Embryonic Stem Cells via Its Transcriptional Repression Domain.

Auparavant, nous avons d&eacute;couvert que ZFP57 est un g&egrave;ne effet maternel-zygotiques et il maintient empreinte g&eacute;nomique de DNA methylation &agrave; plusieurs r&eacute;gions imprim&eacute;es dans des embryons de souris. Malgr&eacute; ces constatations, elle reste insaisissable comment ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rases sont cibl&eacute;s sur l&#39;empreinte contr&ocirc;lent les r&eacute;gions d&#39;initier et de maintenir l&#39;empreinte de la m&eacute;thylation de l&#39;ADN. Mieux comprendre ces processus essentiels dans l&#39;empreinte g&eacute;nomique, nous avons examin&eacute; comment ZFP57 maintient empreinte de m&eacute;thylation de l&#39;ADN g&eacute;nomique dans les cellules souches embryonnaires (ES) de souris. Nous d&eacute;montrons que la perte de ZFP57 dans les cellules ES de souris a conduit &agrave; une perte compl&egrave;te de l&#39;empreinte de m&eacute;thylation de l&#39;ADN g&eacute;nomique &agrave; plusieurs r&eacute;gions imprim&eacute;es, similaires &agrave; son r&ocirc;le dans des embryons de souris. Cependant, r&eacute;introduction de ZFP57 dans les cellules ES Zfp57 null n&#39;a pas entra&icirc;n&eacute; r&eacute;acquisition d&#39;empreinte de m&eacute;thylation de l&#39;ADN, sugg&eacute;rant que la m&eacute;moire de l&#39;empreinte g&eacute;nomique a &eacute;t&eacute; perdue ou modifi&eacute;e dans les cellules ES Zfp57 null dans la culture. Fait int&eacute;ressant, ZFP57 et ADN m&eacute;thyltransf&eacute;rases pourraient former des complexes en pr&eacute;sence de KAP1/TRIM28/TIF1&beta; lorsque Co-exprim&eacute;e dans des cellules COS. Nous avons &eacute;galement constat&eacute; que le ZFP57 exog&egrave;ne de type sauvage, mais pas le mutant ZFP57 manque la bo&icirc;te KRAB qui interagit avec son cofacteur que KAP1/TRIM28/TIF1&beta; pourrait se substituer &agrave; la ZFP57 endog&egrave;ne dans le maintien de l&#39;empreinte de m&eacute;thylation de l&#39;ADN dans les cellules ES. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les ZFP57 peuvent recruter des m&eacute;thyltransf&eacute;rases de l&#39;ADN de ses r&eacute;gions cibles pour conserver l&#39;empreinte de la m&eacute;thylation de l&#39;ADN, et cette interaction est probablement facilit&eacute;e par KAP1/TRIM28/TIF1&beta;.

Zinc Finger Protein ZFP57 exige son cofacteur recruter des m&eacute;thyltransf&eacute;rases de l&#39;ADN et conserve l&#39;empreinte de m&eacute;thylation de l&#39;ADN dans les cellules souches embryonnaires par l&#39;interm&eacute;diaire de son domaine de la r&eacute;pression transcriptionnelle.

Zuvor entdeckten wir, dass ZFP57 ein m&uuml;tterlicher zygotic Effekt-gen ist und DNA Methylierung genomische Impressum auf mehrere eingepr&auml;gten Regionen in Maus-Embryos wacht. Trotz dieser Ergebnisse bleibt es schwer wie DNA-Methyltransferasen ausgerichtet sind, um die Pr&auml;gung Regionen zu initiieren und pflegen von DNA-Methylierung Impressum zu steuern. Um tiefere Einblicke in diese grundlegenden Prozesse in genomische Pr&auml;gung, haben wir gepr&uuml;ft, wie ZFP57 genomische DNA-Methylierungs-Impressum in M&auml;useder embryonalen Stammzellen (ES) verwaltet. Hier zeigen wir, dass der Verlust der ZFP57 in Maus-ES-Zellen zu einem vollst&auml;ndigen Verlust der genomische DNA-Methylierung-Impressum bei mehreren eingepr&auml;gten Regionen, &auml;hnlich wie seine Rolle in den Maus-Embryos gef&uuml;hrt. Jedoch Wiedereinf&uuml;hrung der ZFP57 in Zfp57-Null-ES-Zellen nicht f&uuml;hren R&uuml;ckgewinnung von DNA-Methylierungs-Impressum, was darauf hindeutet, dass der Speicher f&uuml;r genomische Pr&auml;gung verloren bzw. in Zfp57-Null-ES-Zellen in Kultur ver&auml;ndert worden war. Interessanterweise konnte ZFP57 und DNA-Methyltransferasen bilden komplexe in Anwesenheit KAP1/TRIM28/TIF1&beta; beim co-expressed in COS-Zellen. Wir fanden auch, dass die exogene Wildtyp-ZFP57 aber nicht der Mutant ZFP57 fehlt die KRABBE-Box, die mit ihren Co-factor interagiert, den KAP1/TRIM28/TIF1&beta; der endogenen ZFP57 bei der Aufrechterhaltung des DNA-Methylierung-Impressums in ES-Zellen ersetzen k&ouml;nnte. Diese Ergebnisse legen nahe, dass ZFP57 m&ouml;glicherweise DNA-Methyltransferasen zu ihren Zielregionen rekrutieren, DNA-Methylierung Impressum beizubehalten, und diese Interaktion wird wahrscheinlich durch KAP1/TRIM28/TIF1&beta; erleichtert.

Zink-Finger-Protein-ZFP57 erfordert die Co-factor DNA-Methyltransferasen zu rekrutieren und DNA Methylierung Impressum in embryonale Stammzellen &uuml;ber seine Transcriptional Repression-Dom&auml;ne verwaltet.

In precedenza, abbiamo scoperto che ZFP57 &egrave; un gene effetto materno-zygotic, e mantiene DNA metilazione genomic impronta a pi&ugrave; regioni impresso negli embrioni del mouse. Nonostante questi risultati, rimane sfuggente come methyltransferases del DNA sono mirati per l&#39;imprinting alle regioni di avviare e mantenere l&#39;impronta di metilazione del DNA di controllo. Per acquisire conoscenze in questi processi essenziali in imprinting genomico, abbiamo esaminato come ZFP57 mantiene impronta di metilazione del DNA genomico in cellule staminali embrionali (ES) del mouse. Qui dimostriamo che la perdita di ZFP57 in cellule di topo ES ha portato ad una perdita completa di impronta di metilazione del DNA genomico a regioni pi&ugrave; impresso, simile al suo ruolo in embrioni del mouse. Tuttavia, reintroduzione di ZFP57 in cellule ES Zfp57-null non si traducesse in riacquisizione dell&#39;impronta di metilazione del DNA, suggerendo che la memoria per imprinting genomico era stata persa o alterata in cellule ES Zfp57-null nella cultura. &Egrave; interessante notare che, ZFP57 e DNA methyltransferases potrebbe formare complessi in presenza di KAP1/TRIM28/TIF1&beta; quando co-expressed in cellule COS. Abbiamo anche trovato che il selvaggio-tipo esogeno ZFP57 ma non il mutante ZFP57 manca la casella KRAB che interagisce con il suo cofattore che potrebbe sostituire KAP1/TRIM28/TIF1&beta; per la ZFP57 endogena nel mantenere l&#39;impronta di metilazione del DNA nelle cellule ES. Questi risultati suggeriscono che la ZFP57 pu&ograve; reclutare methyltransferases del DNA per le regioni di destinazione per mantenere l&#39;impronta di metilazione del DNA, e questa interazione &egrave; probabilmente facilitata da KAP1/TRIM28/TIF1&beta;.

Zinc Finger Protein ZFP57 richiede il relativo cofattore reclutare i Methyltransferases del DNA e mantiene l&#39;impronta di metilazione del DNA nelle cellule staminali embrionali tramite il dominio di repressione trascrizionale.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;ZFP57&#x3001;&#x6BCD;&#x6027;&#x30B3;&#x30B3;&#x30E4;&#x30B7;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x523B;&#x5370;&#x5730;&#x57DF;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x7DAD;&#x6301;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x5237;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;DNA &#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;ZFP57 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x830E; (ES) &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; ZFP57 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x8907;&#x6570;&#x637A;&#x5370;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5730;&#x57DF;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;ZFP57 &#x306E;&#x518D;&#x5C0E;&#x5165; Zfp57 null ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x7D1B;&#x5931;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;Zfp57 null ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x518D;&#x53D6;&#x5F97;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;ZFP57 &#x3068; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; KAP1/TRIM28/TIF1&beta; &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x4F5C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x5171;&#x540C; COS &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027; ZFP57 &#x3067;&#x3059;&#x304C; KAP1/TRIM28/TIF1&beta; ES &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; ZFP57 &#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x305D;&#x306E; co-factor &#x304C;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B; KRAB &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; ZFP57 &#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ZFP57 DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x62BC;&#x5370;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x5730;&#x57DF;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044; KAP1/TRIM28/TIF1&beta; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FC3;&#x9032;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4E9C;&#x925B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; ZFP57 DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; Co-factor &#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ZFP57 zygotic &#xBAA8;&#xC790; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xBA70; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC601;&#xC5ED; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xAC8C;&#xB188; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; DNA methyltransferases&#xB294; &#xAC01; &#xC778;&#xC744; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xC73C;&#xB85C;&#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB188; &#xAC01; &#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ZFP57 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES&#xC758;) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; zfp57&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; genomic DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Zfp57 null ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; zfp57&#xC758; reintroduction &#xD68D;&#xB4DD;&#xC758; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;, &#xAC8C;&#xB188; &#xAC01; &#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xC190;&#xC2E4; &#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; Zfp57 null ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, ZFP57 &#xBC0F; DNA methyltransferases &#xB2E8;&#xC9C0; KAP1/TRIM28/tif1&beta;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC591;&#xC2DD;&#xC744; &#xB54C; COS &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; co-expressed. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; exogenous ZFP57 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; ZFP57 KAP1/TRIM28/TIF1&beta; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4; zfp57&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; co-factor&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xC544; &#xC0C1;&#xC790; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; ZFP57 DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; DNA methyltransferases &#xCC44;&#xC6A9; &#xC218;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC544;&#xB9C8; KAP1/TRIM28/tif1&beta;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC544;&#xC5F0; &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ZFP57 DNA Methyltransferases&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; Co-factor &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; Transcriptional &#xC5B5;&#xC555; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;.

Previamente, hemos descubierto que ZFP57 es un gen materno-cig&oacute;ticos efecto, y mantiene la impronta gen&oacute;mica de metilaci&oacute;n de ADN en varias regiones impresas en embriones de rat&oacute;n. A pesar de estos resultados, es esquivo c&oacute;mo metiltransferasas del ADN est&aacute;n dirigidas a la impresi&oacute;n de controlar regiones para iniciar y mantener la impresi&oacute;n de la metilaci&oacute;n del ADN. Para obtener informaci&oacute;n sobre estos procesos esenciales en impresi&oacute;n gen&oacute;mica, examinamos c&oacute;mo ZFP57 mantiene la impronta de metilaci&oacute;n de ADN gen&oacute;mico en c&eacute;lulas madre embrionarias (ES) de rat&oacute;n. Aqu&iacute; demostramos que la p&eacute;rdida de ZFP57 en c&eacute;lulas madre embrionarias condujo a una p&eacute;rdida completa de la huella de metilaci&oacute;n de ADN gen&oacute;mico en varias regiones impresas, similares a su papel en embriones de rat&oacute;n. Sin embargo, reintroducci&oacute;n de ZFP57 en c&eacute;lulas madre embrionarias Zfp57-null no se produjo en la readquisici&oacute;n de la huella de la metilaci&oacute;n del ADN, sugiriendo que la memoria para impresi&oacute;n gen&oacute;mica hab&iacute;a sido perdida o alterada en c&eacute;lulas madre embrionarias Zfp57 nulo en la cultura. Curiosamente, ZFP57 y DNA metiltransferasas podr&iacute;an formar complejos en presencia de KAP1/TRIM28/TIF1&beta; cuando co-expressed en las c&eacute;lulas COS. Tambi&eacute;n encontramos que la ZFP57 ex&oacute;gena de tipo salvaje pero no el mutante ZFP57 falta el cuadro KRAB que interact&uacute;a con su cofactor que kap1/TRIM28/TIF1&beta; podr&iacute;a sustituir el ZFP57 end&oacute;genos en el mantenimiento de la impronta de la metilaci&oacute;n del ADN en c&eacute;lulas madre embrionarias. Estos resultados sugieren que el ZFP57 puede reclutar metiltransferasas del ADN a sus regiones de destino para mantener la impresi&oacute;n de la metilaci&oacute;n del ADN, y esta interacci&oacute;n es probablemente facilitada por KAP1/TRIM28/TIF1&beta;.

Zinc Finger prote&iacute;na ZFP57 requiere su cofactor reclutar metiltransferasas del ADN y mantiene la huella de metilaci&oacute;n de ADN en c&eacute;lulas madre embrionarias mediante su dominio de represi&oacute;n transcripcional.

Ho Tak Lau

Laboratory of Neurodegenerative Diseases,
Department of Anatomy,
LKS Faculty of Medicine,
Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine

The University of Hong Kong - HKU

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Ho Tak Lau

Laboratory of Neurodegenerative Diseases,Department of Anatomy,LKS Faculty of Medicine,Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine

The University of Hong Kong - HKU

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Laboratory of Neurodegenerative Diseases,
Department of Anatomy,
LKS Faculty of Medicine,
Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine