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Visualization of UV-induced Replication Intermediates in <em>E. coli</em> using Two-dimensional Agarose-gel Analysis

Inaccurate replication in the presence of DNA damage is responsible for the majority of cellular rearrangements and mutagenesis observed in all cell types ...

Portland State University

&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176; (&#x8FDC;&#x85E4;) &#x4E09;&#x548C; formamidopyrimidine-N-&#x7CD6;&#x82F7;&#x9176; (&#x53F0;&#x5851;) &#x5220;&#x9664;&#x57FA;&#x6C27;&#x5316;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684; DNA glycosylases &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x3002;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63D0;&#x53D6;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FDC;&#x85E4; III &#x662F;&#x4E00;&#x822C;&#x6C27;&#x5316;&#x5627;&#x5576;&#xFF0C;&#x671D;&#x7740;&#x66F4;&#x79EF;&#x6781;&#x800C;&#x53F0;&#x5851;&#x662F;&#x6C27;&#x5316;&#x560C;&#x5464;&#x671D;&#x7740;&#x66F4;&#x79EF;&#x6781;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x5177;&#x4F53;&#x90E8;&#x5206;&#x91CD;&#x53E0;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x4E0D;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x5728;&#x8FD8;&#x539F;&#x540E;&#x6C27;&#x5316;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6A21;&#x677F;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x8FDC;&#x85E4;&#x4E09;&#x548C;&#x53F0;&#x5851;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E0E;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x4F53;&#x5185;&#x6C27;&#x5316;&#x57FA;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53F0;&#x5851;&#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x8FC5;&#x901F;&#x5220;&#x9664;&#x5176;&#x886C;&#x5E95;&#x75C5;&#x53D8;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53F0;&#x5851;&#x8FD8;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E86;&#x627F;&#x8BA4;&#x7684;&#x8FDC;&#x85E4;&#x4E09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x5728;&#x5168;&#x7403;&#x4FEE;&#x590D;&#x635F;&#x574F;&#x560C;&#x5464;&#x548C;&#x5627;&#x5576;&#x635F;&#x5BB3;&#x4F53;&#x5185;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FDC;&#x85E4;&#x4E09;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x53F0;&#x5851;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x7387;&#xFF0C;&#x53EA;&#x662F;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4FEE;&#x590D;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x8FDC;&#x85E4;&#x516B;&#x6216;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5207;&#x9664;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x660E;&#x663E;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x53F0;&#x5851;&#x6216;&#x8FDC;&#x85E4;&#x4E09;&#x57FA;&#x677F;&#x5168;&#x7403;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x590D;&#x5236;&#x6062;&#x590D;&#x540E;&#x6240;&#x6709;&#x7A81;&#x53D8; DNA &#x6C27;&#x5316;&#x635F;&#x4F24;&#x751A;&#x81F3;&#x5F53;&#x75C5;&#x53D8;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x8868;&#x660E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x6765;&#x5904;&#x7406;&#x6216;&#x514B;&#x670D;&#x5728;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x9047;&#x5230;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x635F;&#x4F24;&#x7684; dna&#xFF0C;&#x63A5;&#x53D7;&#x68C0;&#x67E5;&#x3002;

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Endonuclease (Endo) III and formamidopyrimidine-N-glycosylase (Fpg) are two of the predominant DNA glycosylases in Escherichia coli that remove oxidative base damage. In cell extracts and purified form, Endo III is generally more active toward oxidized pyrimidines, while Fpg is more active towards oxidized purines. However, the substrate specificities of these enzymes partially overlap in vitro. Less is known about the relative contribution of these enzymes in restoring the genomic template following oxidative damage. In this study, we examined how efficiently Endo III and Fpg repair their oxidative substrates in vivo following treatment with hydrogen peroxide. We found that Fpg was nonredundant and required to rapidly remove its substrate lesions on the chromosome. In addition, Fpg also repaired a significant portion of the lesions recognized by Endo III, suggesting that it plays a prominent role in the global repair of both purine damage and pyrimidine damage in vivo. By comparison, Endo III did not affect the repair rate of Fpg substrates and was only responsible for repairing a subset of its own substrate lesions in vivo. The absence of Endo VIII or nucleotide excision repair did not significantly affect the global repair of either Fpg or Endo III substrates in vivo. Surprisingly, replication recovered after oxidative DNA damage in all mutants examined, even when lesions persisted in the DNA, suggesting the presence of an efficient mechanism to process or overcome oxidative damage encountered during replication.

Escherichia coli Fpg glycosylase is nonrendundant and required for the rapid global repair of oxidized purine and pyrimidine damage in vivo.

Endonucl&#xE9;ase (Endo) III et formamidopyrimidine-N-glycosylase (FPG) sont deux des ADN glycosylases pr&#xE9;dominants dans Escherichia coli qui &#xE9;liminent les d&#xE9;g&#xE2;ts de base oxydatif. Dans des extraits cellulaires et sous forme purifi&#xE9;e, Endo III est g&#xE9;n&#xE9;ralement plus actif vers pyrimidines oxyd&#xE9;es, alors que Fpg est plus active &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard des purines oxyd&#xE9;es. Toutefois, les sp&#xE9;cificit&#xE9;s de substrat de ces enzymes se chevauchent partiellement in vitro. On en sait moins sur la contribution relative de ces enzymes dans la restauration de la matrice g&#xE9;nomique &#xE0; la suite des dommages oxydatifs. Dans cette &#xE9;tude, nous avons examin&#xE9; comment efficacement Endo III et Fpg r&#xE9;parer leurs substrats oxydatifs dans le traitement in vivo apr&#xE8;s avec du peroxyde d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne. Nous avons constat&#xE9; que Fpg &#xE9;tait redondant et n&#xE9;cessaire pour &#xE9;liminer rapidement ses l&#xE9;sions substrat sur le chromosome. En outre, GPJ a aussi r&#xE9;par&#xE9; une partie importante des l&#xE9;sions reconnues par Endo III, ce qui sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;elle joue un r&#xF4;le important dans la r&#xE9;paration des dommages mondiale purine et les l&#xE9;sions pyrimidine in vivo. Par comparaison, Endo III n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;incidence sur le taux de r&#xE9;paration des substrats glyc&#xE9;mie &#xE0; jeun et &#xE9;tait seul responsable de la r&#xE9;paration d&#x26;#39;un sous-ensemble de ses l&#xE9;sions propres substrat in vivo. L&#x26;#39;absence de Endo VIII ou de la r&#xE9;paration par excision de nucl&#xE9;otides n&#x26;#39;a pas affect&#xE9; significativement la r&#xE9;paration globale de l&#x26;#39;une des Fpg ou Endo III substrats in vivo. &#xC9;tonnamment, la r&#xE9;plication r&#xE9;cup&#xE9;r&#xE9; apr&#xE8;s des dommages oxydatifs &#xE0; l&#x26;#39;ADN dans tous les mutants examin&#xE9;s, m&#xEA;me lorsque les l&#xE9;sions ont persist&#xE9; dans l&#x26;#39;ADN, sugg&#xE9;rant la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme efficace pour traiter ou de surmonter les dommages oxydatifs rencontr&#xE9;s lors de la r&#xE9;plication.

Escherichia Coli FPG Glycosylase est Nonrendundant et n&#xE9;cessaires pour la r&#xE9;paration rapide mondiale de la purine oxyd&#xE9; et dommages pyrimidine in vivo

Endonuklease (Endo) III und Formamidopyrimidine-N-Glycosylase (Fpg) sind zwei der vorherrschende DNA-Glycosylases in Escherichia coli, die oxidative Grundschaden zu entfernen. In Zelle Extrakten und gereinigter Form ist Endo III im Allgemeinen mehr aktiv in Richtung oxidierte Pyrimidine, w&auml;hrend Fpg aktivere in Richtung oxidierte Purine. Die Substrat Besonderheiten dieser Enzyme &uuml;berlappen jedoch teilweise in-vitro. Weniger bekannt ist, &uuml;ber den relativen Beitrag dieser Enzyme bei der Wiederherstellung der genomischen Vorlage nach oxidativen Sch&auml;den. In dieser Studie haben wir gepr&uuml;ft, wie effizient Endo III und Fpg ihrer oxidativen Substrate in-vivo nach der Behandlung mit Wasserstoffperoxid reparieren. Wir fanden, dass Fpg nicht redundantes und verpflichtet seine Substrat-L&auml;sionen auf dem Chromosom schnell zu entfernen. Fpg repariert dar&uuml;ber hinaus auch einen erheblichen Teil der L&auml;sionen von Endo III, was darauf hindeutet, dass er eine herausragende Rolle in der globalen Reparatur von sowohl Purin und Pyrimidin Sch&auml;den in-vivo spielt erkannt. Im Vergleich dazu Endo III hatte keine Auswirkungen auf die Reparatur-Rate der Fpg Substrate und war nur f&uuml;r eine Teilmenge der eigenen Substrat L&auml;sionen in-vivo Reparatur verantwortlich. Da Endo VIII oder Nucleotide Excision Repair die weltweite Reparaturleistungen Fpg oder Endo III Substrate in-vivo nicht erheblich beeintr&auml;chtigen. &Uuml;berraschenderweise erholt Replikation nach oxidativen DNA-Sch&auml;den in alle Mutanten untersucht, sogar wenn L&auml;sionen in der DNA beibehalten, was darauf hindeutet das Vorhandensein eines effizienten Mechanismus zu verarbeiten oder zu &uuml;berwinden, oxidative Sch&auml;den, die w&auml;hrend der Replikation aufgetreten.

Escherichia coli Fpg Glycosylase ist Nonrendundant und f&uuml;r die schnelle weltweite Reparaturleistungen oxidierte Purin und Pyrimidin Schaden in-vivo erforderlich.

Endonucleasi (Endo) III e formamidopyrimidine-N-glycosylase (Fpg) sono due del predominante glycosylases DNA in Escherichia coli che rimuovere il danno ossidativo base. In estratti cellulari e forma purificata, Endo III &egrave; in genere pi&ugrave; attivi verso pirimidine ossidati, mentre Fpg &egrave; pi&ugrave; attivo nei confronti di purine ossidate. Tuttavia, la specificit&agrave; di substrato di questi enzimi sovrapporsi parzialmente in vitro. Meno &egrave; conosciuto circa il contributo relativo di questi enzimi nel ripristino del modello genomic seguendo il danno ossidativo. In questo studio, abbiamo esaminato quanto efficientemente Endo III e Fpg riparare loro substrati ossidativi in vivo a seguito di trattamento con perossido di idrogeno. Abbiamo trovato che Fpg &egrave; stato richiesto di rimuovere rapidamente le lesioni di substrato sul cromosoma e nonredundant. Inoltre, Fpg riparato anche una porzione significativa delle lesioni riconosciute da Endo III, suggerendo che esso gioca un ruolo importante nella riparazione globale di entrambi danno di Purina e pirimidina danno in vivo. In confronto, Endo III non influenza il tasso di riparazione dei substrati Fpg e soltanto &egrave; stato responsabile per la riparazione di un sottoinsieme delle proprie lesioni di substrato in vivo. L&#39;assenza di Endo VIII o riparazione di asportazione del nucleotide non influenzano in modo significativo la riparazione globale di substrati Fpg o Endo III in vivo. Sorprendentemente, replica recuperato dopo il danno ossidativo al DNA tutti i mutanti esaminati, anche quando le lesioni permanenti nel DNA, suggerendo la presenza di un meccanismo efficiente per elaborare o superare il danno ossidativo incontrato durante la replica.

Escherichia coli Fpg glycosylase &egrave; nonrendundant e necessaria per la riparazione rapida globale di ossidato Purina e pirimidina danni in vivo.

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fpg&#x306E;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7CBE;&#x88FD;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9060;&#x85E4;III&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x8A66;&#x9A13;&#x7BA1;&#x5185;&#x3067;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x640D;&#x50B7;&#x5F8C;&#x306B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9060;&#x85E4;III&#x304A;&#x3088;&#x3073;fpg&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;in 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vivo&#x3067;&#x9060;&#x85E4;III&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x4FEE;&#x7406;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x304C;&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;DNA&#x5185;&#x3067;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3067;&#x3082;&#x3001;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x5168;&#x3066;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x7684;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x5F8C;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;Nonrendundant&#x3067;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D4;&#x30EA;&#x30DF;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x4FEE;&#x7406;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

Endonuclease (&#xC5D4;&#xB3C4;) III&#xC640; formamidopyrimidine-N-glycosylase (Fpg) &#xB450; &#xC8FC;&#xB41C; DNA glycosylases &#xC0B0;&#xD654; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC9C0;. &#xC140; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xC815;&#xD654; &#xD3FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D4;&#xB3C4; III&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0;&#xD654; pyrimidines&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; Fpg &#xC0B0;&#xD654; purines &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCB4; &#xC678; &#xACB9;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB35C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5D4;&#xB3C4; III Fpg &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE30;&#xD310; &#xB4E4;&#xC744; &#xC218;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC;. Fpg&#xB294; &#xBE44;&#xC911;&#xBCF5; &#xBC0F; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Fpg&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC5D4;&#xB3C4; 3 &#xC138;, purine &#xC190;&#xC0C1;&#xACFC; pyrimidine &#xC190;&#xC0C1; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC740; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xC2DD;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9; &#xBD80;&#xBD84; &#xC218;&#xB9AC;. &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC5D4;&#xB3C4; III Fpg &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xD310; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC790;&#xCCB4;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xB9CC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5D4;&#xB3C4; 8 &#xC138; &#xB610;&#xB294; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC808;&#xB2E8; &#xC218;&#xB9AC;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; Fpg &#xB610;&#xB294; &#xC5D4;&#xB3C4; 3 &#xC138; &#xAE30;&#xD310; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A; &#xC558; &#xC5B4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xBCD1; &#xBCC0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; DNA&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD6C4;.

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; Fpg glycosylase nonrendundant &#xC774;&#xBA70; &#xC0B0;&#xD654; purine pyrimidine &#xC190;&#xC0C1; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

Endonucleasa (Endo) III y formamidopirimidina-N-glycosylase (FPG) son dos de los ADN glycosylases predominantes en Escherichia coli que eliminan el da&#xF1;o oxidativo de base. En los extractos celulares y forma purificada, Endo III es generalmente m&#xE1;s activa hacia pirimidinas oxidadas, mientras FPG es m&#xE1;s activo hacia purinas oxidadas. Sin embargo, las especificidades de sustrato de estas enzimas se solapan parcialmente in vitro. Menos se sabe sobre la contribuci&#xF3;n relativa de estas enzimas en la restauraci&#xF3;n de la plantilla gen&#xF3;mico tras el da&#xF1;o oxidativo. En este estudio, hemos examinado la eficacia con Endo III y FPG reparar sus sustratos oxidativos en el tratamiento in vivo siguiente con per&#xF3;xido de hidr&#xF3;geno. Se encontr&#xF3; que era FPG no redundante y requerida para eliminar r&#xE1;pidamente sus lesiones sustrato en el cromosoma. Adem&#xE1;s, FPG tambi&#xE9;n repar&#xF3; una parte significativa de las lesiones reconocidas por Endo III, lo que sugiere que juega un papel destacado en el mundial de reparaciones de los da&#xF1;os, tanto de purina y pirimidina da&#xF1;os in vivo. En comparaci&#xF3;n, Endo III no afect&#xF3; la tasa de reparaci&#xF3;n de sustratos FPG y s&#xF3;lo era responsable de la reparaci&#xF3;n de un subconjunto de sus lesiones propio sustrato in vivo. La ausencia de Endo VIII o reparaci&#xF3;n por escisi&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos no afect&#xF3; significativamente la reparaci&#xF3;n global de cualquiera FPG o Endo III sustratos in vivo. Sorprendentemente, la replicaci&#xF3;n se recuper&#xF3; despu&#xE9;s de da&#xF1;o oxidativo del ADN en todos los mutantes examinados, incluso cuando las lesiones persist&#xED;an en el ADN, lo que sugiere la presencia de un mecanismo eficiente para procesar o superar el da&#xF1;o oxidativo encontrado durante la replicaci&#xF3;n.

Escherichia Coli PGA glycosylase es Nonrendundant y necesaria para la reparaci&#xF3;n r&#xE1;pida propagaci&#xF3;n mundial de las purinas oxidadas y el da&#xF1;o pirimidina en Vivo

Brandy J. Schalow

Department of Biology

Portland State University

Visualization of UV-induced Replication Intermediates in E. coli using Two-dimensional Agarose-gel Analysis

Brandy J. Schalow

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biology

Portland State University

Visualization of UV-induced Replication Intermediates in E. coli using Two-dimensional Agarose-gel Analysis

Department of Biology