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Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Columbia University College of Physicians and Surgeons

&#x526F;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; (PIV5) 5 V &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x9003;&#x907F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;V &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5757;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &#xFF08;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#xFF09; &#x901A;&#x8FC7;&#x9632;&#x6B62;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x5173;&#x952E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; IRF3&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x9000;&#x5316; STAT1 &#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x548C;&#x5757; &#xFF0D; &beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x751F;&#x4EA7;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 (IL-6)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (TNF)-&alpha; &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-1beta&#xFF0C;&#x662F;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x6E05;&#x9664;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4FC3;&#x708E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5236;&#x5B9A;&#x6218;&#x7565;&#x963B;&#x6B62;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; PIV5 &#x611F;&#x67D3;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5982;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x6216;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x6709;&#xFF0C;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x800C;&#x611F;&#x67D3;&#x7A81;&#x53D8; PIV5 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E30;&#x5BCC;&#x57DF; (rPIV5VDeltaC) &#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x589E;&#x52A0;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8868;&#x8FBE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#x611F;&#x67D3;&#x4E86;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; PIV5 &#x7684; rPIV5VDeltaC&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x8D28;&#x7C92;&#x7F16;&#x7801;&#x5168;&#x957F; PIV5 V &#x86CB;&#x767D;&#x963B;&#x6B62;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; rPIV5VDeltaC&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; V &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5373;&#x4F7F; rPIV5VDeltaC &#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5242;&#x76D2;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0; &#xFF08;&#x82AF;&#x7247;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5B83;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x7684; PIV5 &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x526F;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; 5 V &#x86CB;&#x767D;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The V protein of parainfluenza virus 5 (PIV5) plays an important role in the evasion of host immune responses. The V protein blocks interferon (IFN) signaling in human cells by causing degradation of the STAT1 protein, a key component of IFN signaling, and blocks IFN-beta production by preventing nuclear translocation of IRF3, a key transcription factor for activating IFN-beta promoter. Interleukin-6 (IL-6), along with tumor necrosis factor (TNF)-alpha and IL-1beta, is a major proinflammatory cytokine that plays important roles in clearing virus infection through inflammatory responses. Many viruses have developed strategies to block IL-6 expression. Wild-type PIV5 infection induces little, if any, expression of cytokines such as IL-6 or TNF-alpha, whereas infection by a mutant PIV5 lacking the conserved C-terminal cysteine rich domain (rPIV5VDeltaC) induced high levels of IL-6 expression. Examination of mRNA levels of IL-6 indicated that the transcription activation of IL-6 played an important role in the increased IL-6 expression. Co-infection with wild-type PIV5 prevented the activation of IL-6 transcription by rPIV5VDeltaC, and a plasmid encoding the full-length PIV5 V protein prevented the activation of IL-6 promoter-driven reporter gene expression by rPIV5VDeltaC, indicating that the V protein played a role in inhibiting IL-6 transcription. The activation of IL-6 was independent of IFN-beta even though rPIV5VDeltaC-infected cells produced IFN-beta. Using reporter gene assays and chromatin immunoprecipitation (ChIP), it was found that NF-kappaB played an important role in activating expression of IL-6. We have proposed a model of activating and inhibiting IL-6 transcription by PIV5.

Inhibition of interleukin-6 expression by the V protein of parainfluenza virus 5.

La prot&eacute;ine V du virus parainfluenza 5 (PIV5) joue un r&ocirc;le important dans l&#39;&eacute;vasion des r&eacute;ponses immunitaires de l&#39;h&ocirc;te. La prot&eacute;ine V bloque les signaux dans les cellules humaines en provoquant une d&eacute;gradation des prot&eacute;ines STAT1, un &eacute;l&eacute;ment cl&eacute; de l&#39;IFN de signalisation et la production de blocs IFN-b&ecirc;ta en emp&ecirc;chant la translocation nucl&eacute;aire du IRF3, un facteur de transcription cl&eacute; d&#39;activation de promoteur de l&#39;IFN-b&ecirc;ta de l&#39;interf&eacute;ron (IFN). L&#39;interleukine-6 (IL-6), ainsi que du facteur de n&eacute;crose tumorale (TNF)-alpha et IL-1beta, est une cytokine pro-inflammatoire majeure qui joue un r&ocirc;le important dans la gu&eacute;rison d&#39;une infection virus par le biais de r&eacute;actions inflammatoires. De nombreux virus ont d&eacute;velopp&eacute; des strat&eacute;gies pour bloquer l&#39;expression d&#39;IL-6. Infection PIV5 sauvage induit l&#39;expression peu, sinon aucune, de cytokines telles que l&#39;IL-6 ou TNF-alpha, alors que l&#39;infection par un domaine riche en cyst&eacute;ine mutant PIV5 manque le C-terminal conserv&eacute; (rPIV5VDeltaC) induit des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;IL-6 expression. Examen de l&#39;ARNm de l&#39;IL-6 indique que l&#39;activation de la transcription de l&#39;IL-6 a jou&eacute; un r&ocirc;le important dans l&#39;expression accrue d&#39;IL-6. Co-infection par sauvage PIV5 emp&ecirc;che l&#39;activation de la transcription de l&#39;IL-6 rPIV5VDeltaC, et un plasmide codant pour la prot&eacute;ine pleine longueur de la PIV5 V emp&ecirc;che l&#39;activation de l&#39;expression g&eacute;nique de IL-6 journaliste pilot&eacute;e par le promoteur de la rPIV5VDeltaC, ce qui indique que la prot&eacute;ine V a jou&eacute; un r&ocirc;le dans l&#39;inhibition de la transcription de l&#39;IL-6. L&#39;activation de l&#39;IL-6 est ind&eacute;pendante de l&#39;IFN-b&ecirc;ta m&ecirc;me si les cellules infect&eacute;es par le rPIV5VDeltaC produisent IFN-b&ecirc;ta. &Agrave; l&#39;aide de tests de g&egrave;ne de journaliste et d&#39;immunopr&eacute;cipitation de la chromatine (ChIP), il a &eacute;t&eacute; constat&eacute; que le NF-kappaB a jou&eacute; un r&ocirc;le important dans l&#39;activation de l&#39;expression d&#39;IL-6. Nous avons propos&eacute; un mod&egrave;le d&#39;activation et inhibition de la transcription d&#39;IL-6 par PIV5.

Inhibition de l&#39;expression de l&#39;interleukine-6 par la prot&eacute;ine V du virus parainfluenza 5.

Das V-Protein der parainfluenza-Virus 5 (PIV5) spielt eine wichtige Rolle in der Hinterziehung von Host-Immunantworten. Das V-Protein blockiert Interferon (IFN) signalisieren in menschlichen Zellen durch Abbau der STAT1-Protein, eine Schl&uuml;sselkomponente IFN zu signalisieren, und Bl&ouml;cke IFN-Beta-Produktion durch die Verhinderung nuklearer Translokation von IRF3, einen wichtigen Transkriptionsfaktor zur Aktivierung von IFN-Beta-Projekttr&auml;ger verursachen. Interleukin-6 (IL-6), zusammen mit Tumor-Nekrose-Faktor (TNF)-Alpha und IL-1beta, ist eine gro&szlig;e Proinflammatory Cytokine, die wichtige Rollen im clearing Virus-Infektion durch entz&uuml;ndliche Reaktionen spielt. Viele Viren entwickelten Strategien zum Blockieren von IL-6-Ausdruck. Wildtyp PIV5 Infektion induziert, wenn &uuml;berhaupt, nur geringe Ausdruck der Zytokine wie IL-6 oder TNF-Alpha, w&auml;hrend einer Infektion durch ein Mutant PIV5 fehlt die konservierten C-terminalen Cystein reichen Gebiet (rPIV5VDeltaC) hohe IL-6 Expression induziert. Pr&uuml;fung der mRNA-Stufen von IL-6 zeigte, dass die Aktivierung der Transkription von IL-6 in die erh&ouml;hte Expression von IL-6 eine wichtige Rolle gespielt. Koinfektion mit Wildtyp PIV5 verhindert die Aktivierung der Transkription von IL-6 von rPIV5VDeltaC, und einem Plasmid, das in PIV5-V-Protein-Codierung verhindert die Aktivierung der IL-6-Promotor-gesteuerte Reporter-Genexpression durch rPIV5VDeltaC, darauf hinweist, dass das V-Protein eine Rolle bei der Hemmung von IL-6-Transkription. Die Aktivierung von IL-6 war unabh&auml;ngig von IFN-Beta, auch wenn rPIV5VDeltaC-infizierten Zellen IFN-Beta produziert. Mit Reporter-Gen-Proben und Chromatin Immunopr&auml;zipitation (ChIP), wurde festgestellt, dass NF-KappaB bei Aktivierung die Expression von IL-6 eine wichtige Rolle gespielt. Wir haben ein Modell der Aktivierung und Hemmung von IL-6-Transkription von PIV5 vorgeschlagen.

Hemmung der Interleukin-6-Expression durch das V-Protein der parainfluenza-Virus 5.

La proteina V di virus parainfluenzali 5 (PIV5) svolge un ruolo importante nell&#39;evasione della risposta immunitaria ospite. La proteina V blocca l&#39;interferone (IFN) in cellule umane di segnalazione provocando la degradazione della proteina STAT1, un componente chiave di IFN di segnalazione e produzione di blocchi IFN-beta da prevenire la traslocazione nucleare di IRF3, un fattore di trascrizione chiave per l&#39;attivazione di promotore di IFN-beta. Interleuchina-6 (IL-6), insieme al fattore di necrosi tumorale (TNF)-Alfa e IL-1beta, &egrave; una citochine proinfiammatorie principali che svolge ruoli importanti in compensazione l&#39;infezione del virus attraverso le risposte infiammatorie. Molti virus hanno sviluppato strategie per bloccare l&#39;espressione di IL-6. Infezione PIV5 selvaggio-tipo induce poco, se del caso, espressione di citochine come IL-6 e TNF-alfa, considerando che l&#39;infezione da un dominio ricco di cisteina mutante PIV5 manca il C-terminale conservato (rPIV5VDeltaC) indotta da alti livelli di espressione di IL-6. Esame dei livelli di mRNA di IL-6 ha indicato che l&#39;attivazione della trascrizione di IL-6 ha giocato un ruolo importante nell&#39;aumentata espressione di IL-6. Co-infezione con selvaggio-tipo PIV5 impedito l&#39;attivazione della trascrizione di IL-6 da rPIV5VDeltaC, e un plasmide codifica per la proteina PIV5 V full-length ha impedito l&#39;attivazione di IL-6 espressione del gene reporter promotore-guidato da rPIV5VDeltaC, che indica che la proteina V ha svolto un ruolo nell&#39;inibire la trascrizione di IL-6. L&#39;attivazione di IL-6 &egrave; stato indipendente di IFN-beta, anche se rPIV5VDeltaC-cellule infette prodotto IFN-beta. Utilizzando dosaggi gene reporter e immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), si &egrave; constatato che la NF-kappaB ha giocato un ruolo importante nell&#39;attivazione di espressione di IL-6. Abbiamo proposto un modello di attivazione e inibendo la trascrizione di IL-6 da PIV5.

Inibizione dell&#39;interleuchina-6 espressione dalla proteina V di virus parainfluenzali 5.

V &#x86CB;&#x767D;&#x30D1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 5 (PIV5) &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8131;&#x7A0E;&#x3067;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;V &#x86CB;&#x767D; IRF3&#x3001;IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; STAT1 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;, IFN &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; (IFN) &#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 6 (IL-6&#xFF09;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (TNF) &#x3068;&#x5171;&#x306B;-&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068; IL &#xFF0D;1 &beta; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x708E;&#x75C7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;IL-6 &#x5F0F;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IL 6 &#x5F0F;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; PIV5 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (rPIV5VDeltaC) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x304C;, &#x91CE;&#x751F;&#x578B; PIV5 &#x611F;&#x67D3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; IL-6 &#x307E;&#x305F;&#x306F; TNF-&alpha; &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x3042;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;IL 6 &#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E; IL 6 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x306E; IL-6 &#x5F0F;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RPIV5VDeltaC &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; IL 6 &#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; PIV5 &#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;V &#x86CB;&#x767D; IL 6 &#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x305F;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B; rPIV5VDeltaC&#x3001;IL-6 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x99C6;&#x52D5;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; PIV5 V &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3002;IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; rPIV5VDeltaC &#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;il-6 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F; IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D; (ChIP) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;NF-&kappa; b &#x5F0F; il-6 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PIV5 &#x306B;&#x3088;&#x308B; IL-6 &#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 5 &#x306E; V &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 6 &#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xD30C;&#xB77C; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 5 (PIV5)&#xC758; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xD68C;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN) IRF3, IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD575;&#xC2EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC758; &#xD575; &#xC804;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; STAT1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, IFN &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xBE14;&#xB85D; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xCD08;&#xB798; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8;-6 (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6), &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC778;&#xC790; (TNF)&#xC640; &#xD568;&#xAED8;-&#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-1beta, &#xCCAD;&#xC18C; &#xC120; &#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; proinflammatory cytokine&#xC740;. &#xB9CE;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6 &#xC2DD;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; PIV5 &#xAC10;&#xC5FC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; PIV5 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xC871; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (rPIV5VDeltaC)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC720;&#xBC1C; IL 6 &#xC2DD;&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80; &#xBC18;&#xBA74; cytokines &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6 &#xB610;&#xB294; TNF-&#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC791;&#xC740; &#xACBD;&#xC6B0;, &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6&#xC758; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; IL 6&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; IL 6 &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; piv5&#xC640; &#xAC10;&#xC5FC; rPIV5VDeltaC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; IL 6 &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; PIV5 V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xBC29;&#xC9C0; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC7AC;&#xC0DD; IL 6 &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; rPIV5VDeltaC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6 &#xBAA8;&#xD130; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. IL 6 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Rpiv5vdeltac&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC0B0; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0;&#xB3C4; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCDE8;&#xC7AC; &#xC6D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; chromatin immunoprecipitation (&#xCE69;)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, NF-kappaB IL 6 &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; piv5&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6 &#xC804;&#xC0AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD30C;&#xB77C; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 5 V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8;-6 &#xC2DD;&#xC758; &#xC800;&#xD574;.

La prote&iacute;na de V del virus de la parainfluenza 5 (PIV5) desempe&ntilde;a un papel importante en la evasi&oacute;n de la respuesta inmune de anfitri&oacute;n. La prote&iacute;na V bloquea el interfer&oacute;n (IFN) se&ntilde;alizaci&oacute;n en c&eacute;lulas humanas causando la degradaci&oacute;n de la prote&iacute;na de STAT1, un componente clave de se&ntilde;alizaci&oacute;n IFN y la producci&oacute;n de bloques IFN-beta evitando translocaci&oacute;n nuclear de IRF3, un factor de transcripci&oacute;n clave para activar el promotor de IFN-beta. Interleucina-6 (IL-6), junto con el factor de necrosis tumoral (TNF)-alfa e IL-1beta, es una citocina proinflamatoria principales que juega un papel importante en la erradicaci&oacute;n de la infecci&oacute;n por el virus a trav&eacute;s de las respuestas inflamatorias. Muchos virus han desarrollado estrategias para bloquear la expresi&oacute;n de IL-6. Infecci&oacute;n de PIV5 salvaje-tipo induce poca, o ninguna, expresi&oacute;n de citocinas como TNF-alfa, IL-6 mientras que la infecci&oacute;n por un dominio de la rica de la ciste&iacute;na mutante PIV5 falta el c-terminal conservado (rPIV5VDeltaC) inducida por altos niveles de expresi&oacute;n de IL-6. Examen de los niveles de mRNA de IL-6 indica que la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de IL-6 desempe&ntilde;&oacute; un papel importante en la mayor expresi&oacute;n de IL-6. Coinfecci&oacute;n con el salvaje-tipo PIV5 prevenir la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de la IL-6 por rPIV5VDeltaC y un pl&aacute;smido de codificaci&oacute;n de la prote&iacute;na integral de PIV5 V evit&oacute; que la activaci&oacute;n de la expresi&oacute;n del gen de IL-6 reportero promotor-conducido por rPIV5VDeltaC, que indica que la prote&iacute;na V desempe&ntilde;&oacute; un papel en la inhibici&oacute;n de la transcripci&oacute;n de la IL-6. La activaci&oacute;n de IL-6 fue independiente de IFN-beta, a pesar de que las c&eacute;lulas infectadas rPIV5VDeltaC producen IFN-beta. Mediante ensayos de gen reportero e inmunoprecipitaci&oacute;n de cromatina (ChIP), se encontr&oacute; que el NF-kappaB desempe&ntilde;&oacute; un papel importante en la activaci&oacute;n de la expresi&oacute;n de IL-6. Hemos propuesto un modelo de activaci&oacute;n e inhibiendo la transcripci&oacute;n de la IL-6 por PIV5.

Inhibici&oacute;n de la expresi&oacute;n de interleucina-6 por la prote&iacute;na V del virus de la parainfluenza 5.

&#x526F;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; 5 (PIV5) &#x662F;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x526F;&#x7C98;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;V/P &#x57FA;&#x56E0;&#x7684; PIV5 &#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x4E24;&#x4E2A; mRNA &#x7269;&#x79CD;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x671F;&#x95F4;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E24;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;V &#x548C; P&#xFF0C;164 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x90FD;&#x662F;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; G &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x67D0;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9; pseudotemplated &#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x6B64;&#x524D;&#x636E;&#x62A5;&#x9053;&#x53D8;&#x5F02;&#x6B64;&#x76F8;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x7EC4; PIV5 (rPIV5-&#x6D88;&#x8D39;&#x7269;&#x4EF7;&#x6307;&#x6570;-)&#xFF0C;&#x5C55;&#x54C1;&#x9AD8;&#x67B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5982; &beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 6 &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x516D;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BF9;&#x5E94; V &#x86CB;&#x767D;&#x548C; P &#x86CB;&#x767D;&#x5171;&#x4EAB;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5916;&#x5F62;&#x662F;&#x5426;&#x4E0E; rPIV5-&#x6D88;&#x8D39;&#x7269;&#x4EF7;&#x6307;&#x6570;-&#x662F;&#x7531;&#x4E8E; P &#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;/&#x6216; V &#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; minigenome &#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5728;&#x804C;&#x80FD;&#x4E0A;&#x7684; P &#x548C; V &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; P &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x516D;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x53D8;&#x5316; &#xFF08;Pcpi-&#xFF09; &#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; P &#x4FC3;&#x8FDB;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x867D;&#x7136; V &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x516D;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x53D8;&#x5316; &#xFF08;&#x63A7;&#x5236;&#x7A0B;&#x5E8F;-&#xFF09; &#x4ECD;&#x7136;&#x6291;&#x5236; minigenome &#x590D;&#x5236;&#x4E00;&#x6837;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; V &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; rPIV5 &#x6D88;&#x8D39;&#x7269;&#x4EF7;&#x6307;&#x6570;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x5347;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F52; P &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F4D;&#x7F6E; 157 P &#x86CB;&#x767D;&#x7684; Ser (&#x91CE;&#x751F;&#x578B; P &#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;) &#x4ECE;&#x516C;&#x5171;&#x5C4B; &#xE473; &#xFF08;&#x5728; Pcpi-&#x6B8B;&#x7559;&#xFF09; &#x5230;&#x5355;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x9AD8;&#x67B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C; (33) P &#x6807;&#x7B7E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; S157 P &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8BE5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; P &#x86CB;&#x767D; 157 &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x590D;&#x5236;&#x3002;

&#x526F;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; 5 P &#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x53D8;&#x5316;&#x63D0;&#x5347;&#x4E86;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Parainfluenza virus 5 (PIV5) is a prototypical paramyxovirus. The V/P gene of PIV5 encodes two mRNA species through a process of pseudotemplated insertion of two G residues at a specific site during transcription, resulting in two viral proteins, V and P, whose N termini of 164 amino acid residues are identical. Previously it was reported that mutating six amino acid residues within this identical region results in a recombinant PIV5 (rPIV5-CPI-) that exhibits elevated viral protein expression and induces production of cytokines, such as beta interferon and interleukin 6. Because the six mutations correspond to the shared region of the V protein and the P protein, it is not clear whether the phenotypes associated with rPIV5-CPI- are due to mutations in the P protein and/or mutations in the V protein. To address this question, we used a minigenome system and recombinant viruses to study the effects of mutations on the functions of the P and V proteins. We found that the P protein with six amino acid residue changes (Pcpi-) was more efficient than wild-type P in facilitating replication of viral RNA, while the V protein with six amino acid residue changes (Vcpi-) still inhibits minigenome replication as does the wild-type V protein. These results indicate that elevated viral gene expression in rPIV5-CPI- virus-infected cells can be attributed to a P protein with an increased ability to facilitate viral RNA synthesis. Furthermore, we found that a single amino acid residue change at position 157 of the P protein from Ser (the residue in the wild-type P protein) to Phe (the residue in Pcpi-) is sufficient for elevated viral gene expression. Using mass spectrometry and (33)P labeling, we found that residue S157 of the P protein is phosphorylated. Based on these results, we propose that phosphorylation of the P protein at residue 157 plays an important role in regulating viral RNA replication.

A single amino acid residue change in the P protein of parainfluenza virus 5 elevates viral gene expression.

Les virus Parainfluenza 5 (PIV5) est un paramyxovirus prototypique. Le g&egrave;ne de V/P de PIV5 code pour deux esp&egrave;ces d&#39;ARNm &agrave; travers un processus d&#39;insertion pseudotemplated de r&eacute;sidus G deux dans un site sp&eacute;cifique au cours de la transcription, ce qui entra&icirc;ne deux prot&eacute;ines virales, V et P, dont termini N de 164 acides amin&eacute;s est identiques. Auparavant, il a &eacute;t&eacute; signal&eacute; que six r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s au sein de cette r&eacute;gion identique de mutation se traduit par une PIV5 recombinante (rPIV5 - CPI-) qui montre l&#39;expression de la prot&eacute;ine virale &eacute;lev&eacute;e et induit la production de cytokines, telles que l&#39;interleukine-6 et de l&#39;interf&eacute;ron b&ecirc;ta. Parce que les six mutations correspondent &agrave; la r&eacute;gion partag&eacute;e de la prot&eacute;ine de V et de la prot&eacute;ine P, il n&#39;est pas clair si les ph&eacute;notypes associ&eacute;s &agrave; rPIV5-CPI-sont dues &agrave; des mutations de la prot&eacute;ine P et/ou les mutations de la prot&eacute;ine V. Pour r&eacute;pondre &agrave; cette question, nous avons utilis&eacute; un syst&egrave;me de minigenome et le virus recombinants pour &eacute;tudier les effets des mutations sur les fonctions des prot&eacute;ines P et V. Nous avons constat&eacute; que la prot&eacute;ine P avec six changements de r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s (Pcpi-) est plus efficace que le sauvage P en facilite la r&eacute;plication de l&#39;ARN viral, tandis que la prot&eacute;ine V avec six changements de r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s (Vcpi-) encore inhibe la r&eacute;plication de minigenome comme le fait la prot&eacute;ine V de type sauvage. Ces r&eacute;sultats indiquent que l&#39;expression des g&egrave;nes viraux &eacute;lev&eacute;s dans les cellules rPIV5-CPI-infect&eacute;s peut &ecirc;tre attribu&eacute;e &agrave; une prot&eacute;ine P d&#39;une capacit&eacute; accrue pour faciliter la synth&egrave;se de l&#39;ARN virale. En outre, nous avons trouv&eacute; qu&#39;un seul acide amin&eacute; r&eacute;sidus le changement au poste 157 de la prot&eacute;ine P de Ser (le r&eacute;sidu dans la prot&eacute;ine P sauvage) &agrave; Phe (le r&eacute;sidu dans le Pcpi-) suffit pour l&#39;expression des g&egrave;nes viraux &eacute;lev&eacute;s. &Agrave; l&#39;aide de la spectrom&eacute;trie de masse et d&#39;&eacute;tiquetage de P (33), nous avons constat&eacute; que les r&eacute;sidus que S157 de la prot&eacute;ine P est phosphoryl&eacute;. Selon ces r&eacute;sultats, nous proposons que la phosphorylation de la P prot&eacute;ine au r&eacute;sidu 157 joue un r&ocirc;le important dans la r&eacute;gulation de r&eacute;plication de l&#39;ARN virale.

Un changement de r&eacute;sidu seul acide amin&eacute; dans la prot&eacute;ine P du virus parainfluenza 5 &eacute;l&egrave;ve l&#39;expression des g&egrave;nes viraux.

Parainfluenza-Virus 5 (PIV5) ist ein prototypisches Paramyxoviridae. Die V/P der PIV5 kodiert f&uuml;r zwei Arten der mRNA durch einen Prozess Pseudotemplated Einf&uuml;gung des zwei G R&uuml;ckst&auml;nde an einem bestimmten Standort w&auml;hrend der Transkription, wodurch zwei virale Proteine, V und P, dessen N-Termini der 164 Aminos&auml;urereste um identisch sind. Zuvor wurde berichtet, dass mutierende sechs Aminos&auml;urereste um dieser Region, identische in eine rekombinante PIV5 Ergebnisse (rPIV5 - CPI-), die Exponate erh&ouml;hten virale Proteinexpression und induziert die Produktion von Zytokinen, wie Beta-Interferon und Interleukin 6. Da die sechs Mutationen in den freigegebenen Bereich des V-Protein und das P-Protein entsprechen, ist nicht klar, ob die Ph&auml;notypen rPIV5-CPI-sind durch Mutationen im Protein P bzw. Mutationen im Protein V zugeordnet. Um diese Frage zu l&ouml;sen, haben wir ein Minigenome-System und rekombinante Viren, um die Auswirkungen von Mutationen auf die Funktionen der Proteine P und V zu studieren. Wir fanden, dass das Protein P mit sechs Aminos&auml;ure-R&uuml;ckstand-&Auml;nderungen (Pcpi-) effizienter als Wildtyp P in der Erleichterung des Replikation viraler RNA, w&auml;hrend das V-Protein mit sechs Aminos&auml;ure-R&uuml;ckstand-&Auml;nderungen (Vcpi-) noch Minigenome Replikation hemmt, ebenso wie das Wildtyp-V-Protein. Diese Ergebnisse zeigen, dass erh&ouml;hte virale Genexpression in rPIV5-CPI-Virus-infizierten Zellen zu einem P-Protein mit einer erh&ouml;hten F&auml;higkeit zur Erleichterung der viralen RNA Synthese zugeschrieben werden kann. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass eine einzelne Aminos&auml;ure R&uuml;ckstand &Auml;nderung an Position 157 P-Protein aus Ser (der R&uuml;ckstand in der Wildtyp-P-Protein), Phe (der R&uuml;ckstand in Pcpi-) erh&ouml;hten virale Genexpression ausreicht. Mit Massenspektrometrie und (33) P Kennzeichnung, fanden wir, dass R&uuml;ckst&auml;nde, die S157 des Proteins P phosphoryliert ist. Basierend auf diesen Ergebnissen, schlagen wir vor, dass die Phosphorylierung p Protein bei R&uuml;ckstand 157 spielt eine wichtige Rolle bei der Regulierung der viralen RNA-Replikation.

Eine einzelne Aminos&auml;ure R&uuml;ckstand Ver&auml;nderung der P-Protein der parainfluenza-Virus 5 erhebt virale Genexpression.

Parainfluenza virus 5 (PIV5) &egrave; un prototipo paramixovirus. Il gene V/P del PIV5 codifica per due specie di mRNA attraverso un processo di inserimento di pseudotemplated dei residui due G presso un sito specifico durante la trascrizione, con conseguente due proteine virali, V e P, cui termini N dei residui dell&#39;amminoacido 164 sono identici. In precedenza &egrave; stato riferito che la mutazione di sei residui dell&#39;amminoacido all&#39;interno di questa regione identica risultati in un PIV5 ricombinante (rPIV5 - CPI-) che esibisce l&#39;espressione della proteina virale elevato e induce la produzione di citochine, come l&#39;interferone beta e interleuchina 6. Perch&eacute; sei mutazioni corrispondono alla regione condivisa della proteina V e la proteina P, non &egrave; chiaro se i fenotipi associati rPIV5-CPI-sono dovute alle mutazioni della proteina P e/o mutazioni della proteina V. Per rispondere a questa domanda, abbiamo utilizzato un sistema di minigenome e virus ricombinanti per studiare gli effetti delle mutazioni sulle funzioni delle proteine P e V. Abbiamo trovato che la proteina P con sei modifiche residui dell&#39;amminoacido (Pcpi-) era pi&ugrave; efficiente di selvaggio-tipo P facilitando la replica di RNA virale, mentre la proteina V con sei modifiche residui dell&#39;amminoacido (Vcpi-) inibisce ancora replica minigenome come fa la proteina V wild-type. Questi risultati indicano che espressione del gene virale elevata nelle cellule rPIV5-CPI-infetti pu&ograve; essere attribuita ad una proteina P con un&#39;aumentata capacit&agrave; di facilitare la sintesi di RNA virale. Inoltre, abbiamo trovato che una singolo amminoacido residui modifica alla posizione 157 della proteina P da Ser (il residuo nella proteina wild-type P) a Phe (il residuo in Pcpi-) &egrave; sufficiente per l&#39;espressione del gene virale elevato. Mediante spettrometria di massa e l&#39;etichettatura di P (33), abbiamo trovato che quel residuo S157 della proteina P &egrave; fosforilato. Basato su questi risultati, proponiamo che la fosforilazione del P proteina al residuo 157 svolge un ruolo importante nella regolazione della replicazione virale RNA.

Un singolo amminoacido residui cambiamento nella proteina del virus parainfluenzale 5 P eleva l&#39;espressione del gene virale.

&#x30D1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 5 &#xFF08;PIV5&#xFF09; &#x539F;&#x578B;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30AF;&#x30BD; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;V/P &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; PIV5 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;V &#x3068;&#x305D;&#x306E; N &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB; 164 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B; P &#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x4E2D;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067; 2 &#x3064;&#x306E; G &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; pseudotemplated &#x633F;&#x5165;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066; 2 mRNA &#x306E;&#x7A2E;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x540C;&#x4E00;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; PIV5 &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (rPIV5 - &#x6D88;&#x8CBB;&#x8005;&#x7269;&#x4FA1;&#x6307;&#x6570;-) &#x306F;&#x3001;&#x6607;&#x683C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &beta; &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 6 &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092; V &#x86CB;&#x767D;&#x304A;&#x3088;&#x3073; P &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x7CFB; rPIV5 CPI &#x306F; P &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3084; V &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; minigenome &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; P &#x3068; V &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x3005; 6 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x5316; (Pcpi-) P &#x86CB;&#x767D;&#x304C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; V &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5909;&#x5316; (Vcpi-) V &#x86CB;&#x767D;&#x306F;&#x307E;&#x3060; minigenome &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; P &#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; RNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6607;&#x683C;&#x3057;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE; rPIV5 CPI &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; RNA &#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5897;&#x9032;&#x3068; P &#x86CB;&#x767D;&#x306B;&#x5E30;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5909;&#x66F4;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067; 157 P &#x86CB;&#x767D;&#x306E; Ser (&#x91CE;&#x751F;&#x578B; P &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x6B8B;&#x4F59;) Phe &#xFF08;Pcpi-&#x6B8B;&#xFF09; &#x304C;&#x6607;&#x683C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x304A;&#x3088;&#x3073; (33) P &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23; S157 P &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B; P &#x306E; 157 &#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; RNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 5 P &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5909;&#x66F4;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD30C;&#xB77C; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 5 (PIV5)&#xB294; &#xC6D0;&#xD615; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC778;. PIV5 V/P &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;, &#xB450; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; V, P, 164 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC911; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; 2 G &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; pseudotemplated &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; mRNA &#xC885;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; PIV5 &#xACB0;&#xACFC; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774; &#xB3D9;&#xC77C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (rPIV5-CPI-)&#xB294; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; cytokines, &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;, &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; 6 &#xB4F1;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACF5;&#xC720; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB294; &#xACE0;&#xAE30; rPIV5 CPI&#xB294; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xB294; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xD574; &#xC5F0;&#xAD00; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; minigenome &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; P&#xC640; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xACBD; (Pcpi-)&#xC73C;&#xB85C; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xACBD; (Vcpi-)&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; V &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; minigenome &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xCD09;&#xC9C4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; P &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; rPIV5 CPI &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC704;&#xCE58; 157 P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Ser (&#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD398; (Pcpi-&#xC794;&#xC5EC;&#xBB3C;)&#xB97C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; (33) P &#xB77C;&#xBCA8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; S157 phosphorylated &#xADF8; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; P&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 157&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

&#xD30C;&#xB77C; &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 5&#xC758; P &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC62C;&#xB9B0;&#xB2E4;.

Virus de la parainfluenza 5 (PIV5) es un paramixovirus protot&iacute;pico. El gen V/P de PIV5 codifica dos especies del mRNA a trav&eacute;s de un proceso de inserci&oacute;n de la pseudotemplated de residuos de dos G en un sitio espec&iacute;fico durante la transcripci&oacute;n, dando por resultado dos prote&iacute;nas virales, V y P, cuyos t&eacute;rminos N de 164 residuos de amino&aacute;cidos son id&eacute;nticos. Previamente se inform&oacute; que mutando seis residuos del amino&aacute;cido dentro de esta regi&oacute;n id&eacute;ntico resultados en un PIV5 recombinante (rPIV5 - CPI-) que exhibe la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na viral elevada e induce la producci&oacute;n de citoquinas, tales como interfer&oacute;n beta y la interleucina 6. Debido a las seis mutaciones corresponden a la regi&oacute;n compartida de la prote&iacute;na de la V y la prote&iacute;na P, no est&aacute; claro si los fenotipos asociados con rPIV5-CPI-son debido a las mutaciones en la prote&iacute;na P o mutaciones en la prote&iacute;na V. Para abordar esta cuesti&oacute;n, utilizamos un sistema de minigenome y virus recombinantes para estudiar los efectos de las mutaciones en las funciones de las prote&iacute;nas P y V. Se encontr&oacute; que la prote&iacute;na P con seis cambios de residuo de amino&aacute;cido (Pcpi-) fue m&aacute;s eficiente que el salvaje-tipo P en facilitar la replicaci&oacute;n del ARN viral, mientras que la prote&iacute;na V con seis cambios de residuo de amino&aacute;cido (Vcpi-) todav&iacute;a inhibe la replicaci&oacute;n de minigenome igual que la prote&iacute;na de V de tipo salvaje. Estos resultados indican que la expresi&oacute;n g&eacute;nica viral elevada en las c&eacute;lulas rPIV5-CPI-infectado puede atribuirse a una prote&iacute;na de P con una mayor capacidad para facilitar la s&iacute;ntesis de ARN viral. Adem&aacute;s, se encontr&oacute; que un cambio de residuo solo amino&aacute;cido en la posici&oacute;n 157 de la prote&iacute;na P de Ser (residuo en la prote&iacute;na de tipo P) a Phe (residuo en Pcpi-) es suficiente para expresi&oacute;n g&eacute;nica viral elevada. Usando espectrometr&iacute;a de masas y etiquetado de P (33), encontramos residuo que es fosforilado S157 de la prote&iacute;na P. Basado en estos resultados, proponemos que la fosforilaci&oacute;n de la P prote&iacute;na en el residuo 157 desempe&ntilde;a un papel importante en la regulaci&oacute;n de la replicaci&oacute;n del RNA viral.

Un cambio de residuo solo amino&aacute;cido en la prote&iacute;na P del virus de la parainfluenza 5 eleva la expresi&oacute;n g&eacute;nica viral.

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80DE;&#x82F7;&#x8131;&#x6C28;&#x9176; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x542F;&#x52A8;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; (Ig) &#x91CD;&#x94FE; (&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;) &#x7C7B;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x91CD;&#x7EC4; (CSR) &#x548C;&#x8D85; Ig &#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D8;&#x5F02; (&#x9655;&#x897F;&#x795E;&#x6728;) &#x5728; B &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; deaminating cytidines &#x886C;&#x5E95; DNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x548C;&#x975E;&#x6A21;&#x677F;&#x94FE;&#x4E0A;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x63F4;&#x52A9;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6A21;&#x677F; DNA &#x94FE;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5F53;&#x6742;&#x4EA4;&#x65B0;&#x751F; RNA &#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x662F;&#x4E2A;&#x8C1C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x7275;&#x8FDE; RNA exosome&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE; RNA &#x52A0;&#x5DE5;/&#x964D;&#x89E3;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x3001; &#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD; DNA &#x94FE;&#x5230;&#x63F4;&#x52A9;&#x3002;B &#x6CBF;&#x88AD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B; CSR&#xFF0C;RNA exosome &#x63F4;&#x52A9;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3001; &#x9644;&#x7740;&#x5728;&#x5BA4;&#x5185;&#x8FD0;&#x52A8;&#x573A;&#x5F00;&#x5173;&#x533A;&#x57DF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x63F4;&#x52A9;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x548C;&#x662F;&#x6700;&#x4F73;&#x4F01;&#x4E1A;&#x793E;&#x4F1A;&#x8D23;&#x4EFB;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE; RNA exosome &#x548C;&#x91CD;&#x7EC4; RNA exosome &#x6838;&#x5FC3;&#x590D;&#x6742;&#x4F20;&#x6388;&#x4F9D;&#x8D56;&#x63F4;&#x52A9;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2; DNA &#x8131;&#x6C28;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9655;&#x897F;&#x795E;&#x6728;&#x886C;&#x5E95;&#x4E24;&#x80A1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; RNA &#x76D1;&#x89C6;&#x673A;&#x68B0;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x6297;&#x4F53;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

RNA exosome &#x76EE;&#x6807;&#x63F4;&#x52A9;&#x80DE;&#x82F7;&#x8131;&#x6C28;&#x9176;&#x5BF9;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CC;&#x9762; DNA &#x57FA;&#x7247;&#x4E24;&#x80A1;&#x3002;

Activation-induced cytidine deaminase (AID) initiates immunoglobulin (Ig) heavy-chain (IgH) class switch recombination (CSR) and Ig variable region somatic hypermutation (SHM) in B lymphocytes by deaminating cytidines on template and nontemplate strands of transcribed DNA substrates. However, the mechanism of AID access to the template DNA strand, particularly when hybridized to a nascent RNA transcript, has been an enigma. We now implicate the RNA exosome, a cellular RNA-processing/degradation complex, in targeting AID to both DNA strands. In B lineage cells activated for CSR, the RNA exosome associates with AID, accumulates on IgH switch regions in an AID-dependent fashion, and is required for optimal CSR. Moreover, both the cellular RNA exosome complex and a recombinant RNA exosome core complex impart robust AID- and transcription-dependent DNA deamination of both strands of transcribed SHM substrates in vitro. Our findings reveal a role for noncoding RNA surveillance machinery in generating antibody diversity.

The RNA exosome targets the AID cytidine deaminase to both strands of transcribed duplex DNA substrates.

Activation-induced cytidine d&#xE9;saminase (AID) initie des immunoglobulines (Ig) de recombinaison de la cha&#xEE;ne lourde (IgH) de commutation de classe des entreprises (RSE) et Ig r&#xE9;gion variable hypermutation somatique (SHM) dans les lymphocytes B par d&#xE9;saminante cytidines sur mod&#xE8;le et des brins d&#x26;#39;ADN de substrats nontemplate transcrits. Cependant, le m&#xE9;canisme d&#x26;#39;acc&#xE8;s &#xE0; l &#x26;#39;AID brin d&#x26;#39;ADN matrice, en particulier lorsqu&#x26;#39;elles sont hybrid&#xE9;es &#xE0; une transcription ARN naissante, a &#xE9;t&#xE9; une &#xE9;nigme. Nous avons maintenant impliquer le exosomes ARN, un complexe RNA-processing/degradation cellulaire, en ciblant l&#x26;#39;aide &#xE0; deux brins d&#x26;#39;ADN. Dans les cellules de lign&#xE9;e B activ&#xE9;s pour la RSE, les associ&#xE9;s d&#x26;#39;ARN exosomes avec l&#x26;#39;AID, s&#x26;#39;accumule sur les r&#xE9;gions de commutation IgH dans un mode d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;aide, et est n&#xE9;cessaire pour la RSE optimale. En outre, &#xE0; la fois le complexe ARN cellulaire exosomes et un complexe d&#x26;#39;ARN recombinant coeur exosomes de r&#xE9;pandre AIDE-et robuste de la transcription d&#xE9;pendante de l&#x26;#39;ADN d&#xE9;samination des deux brins de transcrite SHM substrats in vitro. Nos r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent un r&#xF4;le de surveillance pour les machines ARN non codant pour g&#xE9;n&#xE9;rer la diversit&#xE9; des anticorps.

Le Exosome ARN cible le Cytidine Deaminase AID pour les deux brins de l&#x26;#39;ADN double brin Transcribed Substrats

Aktivierung induziert Cytidin-Deaminase (AID) initiiert Immunglobuline (Ig) schwere-Kette (IgH) Klasse Switch Rekombination (CSR) und Ig Variable Region somatische Hypermutation (SHM) in B-Lymphozyten, indem deaminating Cytidines auf Vorlage und nicht auf Vorlagen basierende Str&auml;nge transkribierte DNA-Substrate. Der Mechanismus der Hilfe Zugang zu der Vorlage-DNA-Strang, wurde insbesondere dann, wenn auf eine entstehende RNA-Transkript hybridisiert ein R&auml;tsel jedoch. Wir jetzt implizieren die RNA Exosome, komplexe zellul&auml;re RNA-Verarbeitung/Abbau, ins Visier nehmen Hilfe an beiden DNA-Str&auml;nge. In B-Linie-Zellen aktiviert f&uuml;r CSR verkn&uuml;pft mit Hilfe der RNA-Exosome, sammelt IgH Switch Regionen in einer Weise Hilfe abh&auml;ngig, und f&uuml;r optimale CSR ist erforderlich. Dar&uuml;ber hinaus vermitteln die komplexen zellul&auml;ren RNA-Exosome und ein rekombinantes RNA Exosome Kernkomplex robuste Beihilfen - und Transkription-abh&auml;ngigen DNA Deamination von beide Str&auml;nge der transkribierten SHM-Substrate, die in-vitro. Unsere Ergebnisse zeigen eine Rolle f&uuml;r nichtkodierende RNA-&Uuml;berwachung-Maschinen bei der Erzeugung von Antik&ouml;rper-Vielfalt.

Die RNA-Exosome zielt auf die Hilfe-Cytidin-Desaminase auf beide Str&auml;nge der transkribierten duplex DNA-Substrate.

Deaminasi attivazione indotta citidina (aiuto) avvia immunoglobuline (Ig) catene pesanti (IgH) classe switch ricombinazione (CSR) e Ig regione variabile ipermutazione somatica (SHM) nei linfociti B deammina cytidines sul modello e non template ciocche di substrati DNA trascritti. Tuttavia, il meccanismo di accesso aiuti a filo del DNA template, particolarmente quando ibridato a una trascrizione di RNA nascente, &egrave; stato un enigma. Abbiamo ora coinvolgono il RNA exosome, un complesso RNA-elaborazione/degradazione cellulare, in aiuto di targeting di due filamenti di DNA. In cellule di lignaggio B attivate per la RSI, il RNA exosome associa gli aiuti, si accumula sulle regioni switch IgH in maniera aiuto-dipendente ed &egrave; necessaria per la RSI ottimale. Inoltre, sia il cellulare RNA exosome complesso e un nucleo di exosome RNA complesso ricombinante impartire deaminazione DNA robusto aiuto - e trascrizione-dipendente di due fili di substrati SHM trascritti in vitro. I nostri risultati rivelano un ruolo per macchinari di sorveglianza RNA non codificante nel generare diversit&agrave; dell&#39;anticorpo.

il RNA exosome obiettivi la deaminasi della citidina aiuti a due filoni di trascritti substrati duplex di DNA.

&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AID&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;DNA&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x975E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x9396;&#x306B;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x8131;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;B&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;Ig&#xFF09;&#x91CD;&#x9396;&#xFF08;IGH&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#xFF08;CSR&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ig&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x8D85;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;SHM&#xFF09;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;RNA&#x8EE2;&#x5199;&#x7269;&#x306B;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x92F3;&#x578B;DNA&#x9396;&#x3078;&#x306E;AID&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x8B0E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;DNA&#x9396;&#x306B;AID&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;RNA&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;RNA-processing/degradation&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x3001;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x3002; CSR&#x3001;AID&#x306E;RNA&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;Associates&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;B&#x7CFB;&#x7D71;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AID&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x3067;&#x306E;IgH&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306A;CSR&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;RNA&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;RNA&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B3;&#x30A2;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306F;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;AID&#x3068;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;SHM&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9396;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;DNA&#x8131;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x5316;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30CE;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;RNA&#x30B5;&#x30FC;&#x30D9;&#x30A4;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

RNA&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9396;&#x306B;AID&#x306E;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;

&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; cytidine deaminase (&#xC6D0;&#xC870;) &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; DNA &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xACFC; &#xBE44;&#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC5D0; cytidines deaminating&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; (Ig) &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; (IgH) &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; (CSR)&#xACFC; Ig &#xBCC0;&#xC218; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; hypermutation (SHM) B &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C; DNA &#xAC00;&#xB2E5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC870; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xCD08;&#xAE30; RNA &#xC0AC;&#xBCF8;&#xC744; hybridized &#xB54C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC218;&#xC218;&#xAED8;&#xB07C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xB450; DNA &#xAC00;&#xB2E5;&#xC744; &#xC6D0;&#xC870; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; RNA-&#xCC98;&#xB9AC;/&#xC800;&#xD558; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; RNA exosome &#xC5F0;&#xB8E8;. B &#xD608;&#xD1B5; &#xC140; CSR&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, RNA exosome &#xC6D0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC870; &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; IgH &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; CSR&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; RNA exosome &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; RNA exosome &#xCF54;&#xC5B4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; SHM &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xC885;&#xC18D; DNA &#xD0C8;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xBA70;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; noncoding RNA &#xAC10;&#xC2DC; &#xAE30;&#xACC4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;.

RNA exosome &#xC6D0;&#xC870; cytidine deaminase &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xC774;&#xC911; DNA &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La activaci&#xF3;n inducida por la citidina deaminasa (AID) inicia inmunoglobulina (Ig) de recombinaci&#xF3;n de la cadena pesada (IgH) cambio de clase (CSR) y la regi&#xF3;n variable de Ig hipermutaci&#xF3;n som&#xE1;tica (SHM) en los linfocitos B por desaminar cytidines en la plantilla y las hebras nontemplate de sustratos de ADN transcrito. Sin embargo, el mecanismo de acceso AID a la cadena de ADN plantilla, particularmente cuando se hibridan a una transcripci&#xF3;n de ARN naciente, ha sido un enigma. Ahora implican el exosoma ARN, un complejo RNA-processing/degradation celular, en la orientaci&#xF3;n de la ayuda de dos hebras de ADN. En las c&#xE9;lulas de linaje B activadas para la RSE, el ARN asocia exosoma con la AID, se acumula en las regiones del interruptor CIB en una forma dependiente de la ayuda, y es necesario para una &#xF3;ptima RSE. Adem&#xE1;s, tanto el complejo ARN celular exosoma y un complejo ARN recombinante n&#xFA;cleo exosoma impartir robusto AID y la transcripci&#xF3;n dependiente de la desaminaci&#xF3;n de ADN de ambas hebras de transcrito sustratos SHM in vitro. Nuestros resultados revelan un papel para la maquinaria de vigilancia no codificante del ARN en la generaci&#xF3;n de diversidad de anticuerpos.

Celia Keim

Department of Microbiology and Immunology

Columbia University College of Physicians and Surgeons

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

Celia Keim

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Microbiology and Immunology

Columbia University College of Physicians and Surgeons

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

Department of Microbiology and Immunology