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Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult <em>Drosophila</em> CNS

The Gal4/ UAS binary method is powerful for gene and neural circuitry manipulation in Drosophila. For most neurobiological studies, however, Gal4 ...

University of Oklahoma - Norman

Brandeis University

&#x7531;&#x63A5;&#x89E6;&#x836F;&#x7269;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x89E6;&#x53D1;&#x5C1D;&#x8BD5;&#x8FD8;&#x539F;&#x6B63;&#x5E38;&#x795E;&#x7ECF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7684;&#x6052;&#x4E45;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x5355;&#x4E2A;&#x9547;&#x9759;&#x9EBB;&#x9189;&#x82C4;&#x9187; slo K(+) &#x901A;&#x9053;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5FEB;&#x901F;&#x836F;&#x7269;&#x8010;&#x53D7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x73B0;&#x8C61;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x65AF;&#x6D1B;&#x4F10;&#x514B;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x5BB9;&#x5FCD;&#xFF0C;&#x800C;&#x4ECE;&#x8BF1;&#x5BFC; slo &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x4EFF;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x5BF9;&#x82EF;&#x7532;&#x9187;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x53CD;&#x5E94;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x4E3A;&#x521D;&#x59CB;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684; hyperkinesis &#x548C;&#x4E0B;&#x4E00;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x9547;&#x9759;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x591A;&#x52A8;&#x6027;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x5BFC;&#x81F4; slo &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x6EF4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F7F;&#x52A8;&#x7269;&#x5BF9;&#x82EF;&#x7532;&#x9187;&#x66F4;&#x52A0;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9547;&#x9759;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0; slo &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x514D;&#x75AB;&#x8010;&#x53D7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x65AF;&#x6D1B;&#x4F10;&#x514B;&#x836F;&#x7269;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x4EF7;&#x503C;&#x3002;

&#x65AF;&#x6D1B;&#x4F10;&#x514B; K(+) &#x901A;&#x9053;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5FEB;&#x901F;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x3002;

Changes in neural activity caused by exposure to drugs may trigger homeostatic mechanisms that attempt to restore normal neural excitability. In Drosophila, a single sedation with the anesthetic benzyl alcohol changes the expression of the slo K(+) channel gene and induces rapid drug tolerance. We demonstrate linkage between these two phenomena by using a mutation and a transgene. A mutation that eliminates slo expression prevents tolerance, whereas expression from an inducible slo transgene mimics tolerance in naive animals. The behavioral response to benzyl alcohol can be separated into an initial phase of hyperkinesis and a subsequent phase of sedation. The hyperkinetic phase causes a drop in slo gene expression and makes animals more sensitive to benzyl alcohol. It is the sedative phase that stimulates slo gene expression and induces tolerance. We demonstrate that the expression level of slo is a predictor of drug sensitivity.

slo K(+) channel gene regulation mediates rapid drug tolerance.

Changements dans l&#39;activit&eacute; neuronale caus&eacute;e par l&#39;exposition aux m&eacute;dicaments peuvent d&eacute;clencher des m&eacute;canismes hom&eacute;ostatiques qui tentent de restaurer l&#39;excitabilit&eacute; neuronale normale. Chez la drosophile, une s&eacute;dation unique avec l&#39;alcool benzylique anesth&eacute;sique modifie l&#39;expression du g&egrave;ne de l&#39;ALS k (+) canal et induit une tol&eacute;rance de m&eacute;dicaments rapide. Nous montrons le lien entre ces deux ph&eacute;nom&egrave;nes &agrave; l&#39;aide d&#39;une mutation et un transg&egrave;ne. Une mutation qui &eacute;limine l&#39;expression slo emp&ecirc;che la tol&eacute;rance, alors que l&#39;expression d&#39;un transg&egrave;ne slo inductible imite la tol&eacute;rance chez les animaux na&iuml;fs. La r&eacute;ponse comportementale &agrave; l&#39;alcool benzylique peut &ecirc;tre s&eacute;par&eacute;e en une phase initiale de fait et une phase ult&eacute;rieure de la s&eacute;dation. La phase hyperkin&eacute;tique entra&icirc;ne une chute dans l&#39;expression des g&egrave;nes slo et rend les animaux plus sensibles &agrave; l&#39;alcool benzylique. C&#39;est la phase s&eacute;dative qui stimule l&#39;expression du g&egrave;ne ALS et induit la tol&eacute;rance. Nous d&eacute;montrons que le niveau d&#39;expression de slo est un indicateur de la sensibilit&eacute; de la drogue.

SLO r&eacute;gulation du g&egrave;ne du canal k (+) intervient dans la tol&eacute;rance de m&eacute;dicaments rapide.

slo K (+)-Kanal Genregulation vermittelt schnelle Vertr&#xE4;glichkeit der Medikamente.

Cambiamenti nell&#39;attivit&agrave; neurale causata da esposizione a farmaci possono innescare meccanismi omeostatici che tentano di ripristinare la normale eccitabilit&agrave; neurale. In drosofila, una singola sedazione con l&#39;alcol benzilico anestetico cambia l&#39;espressione del gene del canale del K(+) slo e induce la tolleranza della droga rapida. Noi dimostrare il collegamento tra questi due fenomeni utilizzando una mutazione e un transgene. Una mutazione che elimina slo espressione impedisce la tolleranza, considerando che l&#39;espressione di un transgene slo inducibile imita tolleranza in animali ingenui. La risposta comportamentale di alcool benzilico pu&ograve; essere suddivisa in una fase iniziale di Ipercinesia e una successiva fase di sedazione. La fase ipercinetica provoca un calo nell&#39;espressione del gene slo e rende gli animali pi&ugrave; sensibili all&#39;alcol benzilico. &Egrave; la fase di sedativa che stimola l&#39;espressione di gene slo e induce tolleranza. Dimostriamo che il livello di espressione di slo &egrave; un predittore di sensibilit&agrave; di droga.

regolazione genica SLO K(+) canale media tolleranza droga rapida.

&#x85AC;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x795E;&#x7D4C;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;, &#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x93AE;&#x9759;&#x3068;&#x9EBB;&#x9154;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30EB; &#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB; slo &#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3068; transgene &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x9593;&#x306E;&#x9023;&#x643A;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8010;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E; slo transgene &#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; slo &#x5F0F;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x5909;&#x7570;&#x8010;&#x6027;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30EB; &#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x884C;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x52D5;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3068;&#x93AE;&#x9759;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x5206;&#x3051;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x52D5;&#x306E;&#x76F8;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7; slo &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30EB; &#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;slo &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x93AE;&#x9759;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; slo &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x4E88;&#x6E2C;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

slo &#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9C8;&#xC57D;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD765;&#xBD84;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; &#xC2DC;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC2E4;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xC9C4;&#xC815; &#xB9C8; &#xCDE8; &#xBCA4; &#xC9C8; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; slo K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB294; transgene &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xD604;&#xC0C1; &#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Slo &#xC2DD; &#xC81C;&#xAC70; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2DD;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; slo transgene&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xACF5;&#xCC28;&#xB97C;, &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA4; &#xC9C8; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xD589;&#xB3D9; &#xBC18;&#xC751; hyperkinesis&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC9C4;&#xC815;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD480;&#xC5B4; &#xC704;&#xC0C1; slo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xD558;&#xB77D; &#xC6D0;&#xC778;&#xACFC; &#xB354; &#xBCA4; &#xC9C8; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; slo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC9C4;&#xC815; &#xC81C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Slo &#xC2DD; &#xC218;&#xC900; &#xB9C8;&#xC57D; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

slo K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xC911;&#xC7AC; &#xBE60;&#xB978; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131;.

Los cambios en la actividad de los nervios causados por la exposici&oacute;n a las drogas pueden provocar mecanismos homeost&aacute;ticos que intentan restaurar la excitabilidad neuronal normal. En Drosophila, una sedaci&oacute;n sola con el alcohol benc&iacute;lico anest&eacute;sico cambia la expresi&oacute;n del gen slo k canal e induce tolerancia r&aacute;pida de la droga. Se demuestra el v&iacute;nculo entre estos dos fen&oacute;menos mediante una mutaci&oacute;n y un transgen. Una mutaci&oacute;n que elimina expresi&oacute;n slo impide tolerancia, mientras que la expresi&oacute;n de un transgen slo inducible imita tolerancia en animales ingenuos. La respuesta conductual al alcohol benc&iacute;lico puede dividirse en una fase inicial de Hipercinesis y una posterior fase de sedaci&oacute;n. La fase hipercin&eacute;tica causa una reducci&oacute;n en la expresi&oacute;n g&eacute;nica de slo y hace que los animales m&aacute;s sensibles al alcohol benc&iacute;lico. Es la fase de sedante que estimula la expresi&oacute;n del gen slo e induce la tolerancia. Demostramos que el nivel de expresi&oacute;n de slo es un predictor de la sensibilidad de la droga.

regulaci&oacute;n del gen slo k canal media tolerancia r&aacute;pida de la droga.

Per portare GAL4 produzione sotto il controllo del promotore del sesso (P1) contenuto all&#39;interno del gene infruttuosi di drosofila, una cassetta di gal4 precedentemente &egrave; stata inserita a valle di P1. Questo inserto dovrebbe eliminare le proteine FRU(M) maschio-specifici, che contengono normalmente 101 aminoacidi (aa) a loro termini N. Cos&igrave; i maschi omozigoti per l&#39;inserto P1-gal4 dovrebbero essere courtless, come &egrave; stato brevemente ha dichiarato di essere cos&igrave; nella relazione iniziale di questo tipo transgenico. Ma mosche XY cui unica forma di fru &egrave; P1-gal4 ora sono stati trovati a Corte vigorosamente. P1-gal4 femmine non visualizzato alcun apprezzabile maschio-come azioni tranne comportamenti di rifiuto del corteggiamento; ancora, hanno sviluppato un muscolo addominale maschio-specifico. Nessuna immunoreattivit&agrave; contro il maschio-specific aa era rilevabile nel P1-gal4 mosche. Ma maschio-come segnali neurali sono stati osservati in XY o XX P1-gal4 pupe e adulti dopo l&#39;applicazione di un anticorpo che rileva tutte le isoforme di FRU; femmine transgeniche visualizzate ridotta espressione di tali proteine. RT-PCR di razionalizzato questi risultati: P1 trascrizioni includono forme di splicing anomalo da cui &egrave; stato rimosso gal4, permettendo FRU di difettare M aa s di essere prodotta nel maschio-come i modelli in entrambi i sessi. All&#39;interno di maschi, tali proteine difettose promuovono la differenziazione neurale e la funzione che &egrave; sufficiente per supportare brioso P1-gal4 corteggiamento. Ma invariate la maschio-specific FRU N-terminus &egrave; temperato dalla constatazione che intra-fru sequenze codifica questi 101 aa &egrave; altamente conservati tra parenti interspecifici di d. melanogaster.

infruttuosi prodotti del Gene troncati della loro qualit&agrave; di maschio-come promuovere maschilit&agrave; neurali e comportamentali in drosofila se queste proteine sono prodotte nei posti giusti a destra volte.

&#x4E3A;&#x4E86;&#x4F7F;&#x679C;&#x8747;&#x7684;&#x5F92;&#x52B3;&#x57FA;&#x56E0;&#x5185;&#x6240;&#x8F7D; (P1) &#x6027;&#x522B;&#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684; GAL4 &#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;gal4 &#x5361;&#x5E26;&#x4EE5;&#x524D;&#x63D2;&#x5165; P1 &#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x3002;&#x6B64;&#x63D2;&#x5165;&#x5E94;&#x6D88;&#x9664;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7537;&#x6027;&#x7684; FRU(M) &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x7684; 101 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178; (aa)&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x7537;&#x6027;&#x5408;&#x5B50; P1 gal4 &#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x5E94;&#x8BE5;&#x662F; courtless&#xFF0C;&#x7B80;&#x8981;&#x5730;&#x6307;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#x662F;&#x8FD9;&#x6837;&#x3002;&#x4F46;&#x5176;&#x552F;&#x4E00;&#x7684; fru &#x5F62;&#x5F0F;&#x662F; P1 gal4 &#x7684; XY &#x82CD;&#x8747;&#x5DF2;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5411;&#x6CD5;&#x9662;&#x5927;&#x529B;&#x3002;P1 gal4 &#x5973;&#x6027;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7537;&#x6027;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x64CD;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x9664;&#x975E;&#x6C42;&#x7231;&#x62D2;&#x7EDD;&#x884C;&#x4E3A; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7537;&#x6027;&#x8179;&#x90E8;&#x808C;&#x8089;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7537;&#x6027;&#x7684; aa &#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5728; P1 gal4 &#x82CD;&#x8747;&#x3002;&#x4F46;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7537;&#x6027;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53D1;&#x73B0; XY &#x6216; XX P1 gal4 &#x86F9;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x4E2D;&#x5E94;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x6240;&#x6709;&#x7684; FRU &#x5F02;&#x6784;&#x4F53; &#xFF1B; &#x540E;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5973;&#x6027;&#x51CF;&#x5C11;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; P1 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x5305;&#x62EC;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664; gal4 &#x662F;&#x53CD;&#x5E38;&#x7684;&#x63A5;&#x5934;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8; FRU &#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F; M aa &#x7684;&#x7537;&#x6027;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x7537;&#x5973;&#x4EA4;&#x51FA;&#x3002;&#x5728;&#x7537;&#x6027;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x652F;&#x6301;&#x5BCC;&#x6709;&#x671D;&#x6C14;&#x7684; P1 gal4 &#x6C42;&#x7231;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x4F46;&#x8FD8;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x7684;&#x7537;&#x6027;&#x7279;&#x5B9A; FRU N-&#x603B;&#x7AD9;&#x94A2;&#x5316;&#x73BB;&#x7483;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5185;&#x90E8; fru &#x5E8F;&#x5217;&#x7F16;&#x7801;&#x8FD9;&#x4E9B; 101 aa &#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684; D.&#x9ED1;&#x8179;&#x679C;&#x8747;&#x79CD;&#x95F4;&#x4EB2;&#x5C5E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;

&#x6BEB;&#x65E0;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;&#x622A;&#x65AD;&#x5176;&#x7537;&#x6027;&#x6C14;&#x8D28;&#x7684;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x795E;&#x7ECF;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x52A0;&#x5F3A;&#x96C4;&#x6027;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x5728;&#x53F3;&#x8FB9;&#x751F;&#x4EA7;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;

To bring GAL4 production under the control of the sex promoter (P1) contained within Drosophila's fruitless gene, a gal4 cassette was previously inserted downstream of P1. This insert should eliminate male-specific FRU(M) proteins, which normally contain 101 amino acids (aa's) at their N termini. Thus males homozygous for the P1-gal4 insert should be courtless, as was briefly stated to be so in the initial report of this transgenic type. But XY flies whose only fru form is P1-gal4 have now been found to court vigorously. P1-gal4 females displayed no appreciable male-like actions except courtship rejection behaviors; yet, they developed a male-specific abdominal muscle. No immunoreactivity against the male-specific aa's was detectable in P1-gal4 flies. But male-like neural signals were observed in XY or XX P1-gal4 pupae and adults after applying an antibody that detects all FRU isoforms; transgenic females displayed reduced expression of such proteins. RT-PCR's rationalized these findings: P1 transcripts include anomalous splice forms from which gal4 was removed, allowing FRU's lacking M aa's to be produced in male-like patterns in both sexes. Within males, such defective proteins promote neural differentiation and function that is sufficient to support spirited P1-gal4 courtship. But dispensability of the male-specific FRU N-terminus is tempered by the finding that intra-fru sequences encoding these 101 aa's are highly conserved among interspecific relatives of D. melanogaster.

fruitless Gene products truncated of their male-like qualities promote neural and behavioral maleness in Drosophila if these proteins are produced in the right places at the right times.

Pour orienter la production de GAL4 sous le contr&ocirc;le du promoteur du sexe (P1) contenus dans les vaine g&egrave;ne de drosophile, une cassette de gal4 a &eacute;t&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment ins&eacute;r&eacute;e en aval de P1. Cet encart devrait &eacute;liminer les prot&eacute;ines sp&eacute;cifiques aux m&acirc;les FRU(M), qui renferment normalement 101 acides amin&eacute;s (aa) &agrave; leurs extr&eacute;mit&eacute;s N. Les m&acirc;les homozygotes pour l&#39;insert P1-gal4 doivent donc courtless, comme l&#39;indiquait bri&egrave;vement dans le rapport initial de ce type transg&eacute;nique. Mais les mouches XY dont seule la forme fru est P1-gal4 maintenant ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s &agrave; Cour vigoureusement. P1-gal4 femelles n&#39;affichent aucune action d&#39;hommes comme appr&eacute;ciable sauf les comportements de parade nuptiale de rejet ; Pourtant, ils ont d&eacute;velopp&eacute; un m&acirc;le-sp&eacute;cifique des muscles abdominaux. Aucune immunor&eacute;activit&eacute; contre l&#39;aa m&acirc;le-sp&eacute;cifique a &eacute;t&eacute; d&eacute;tectable dans P1-gal4 mouches. Mais hommes comme signaux neuronaux ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;es en XY ou XX P1-gal4 de nymphes et d&#39;adultes apr&egrave;s avoir appliqu&eacute; un anticorps qui d&eacute;tecte toutes les isoformes de FRU ; femelles transg&eacute;niques affich&eacute;es r&eacute;duit l&#39;expression de ces prot&eacute;ines. RT-PCR de rationaliser ces conclusions : P1 transcriptions comprennent formes anormales d&#39;&eacute;pissage d&#39;o&ugrave; gal4 a &eacute;t&eacute; supprim&eacute;, permettant aux FRU de manque M aa &agrave; produire dans les profils d&#39;hommes comme chez les deux sexes. Dans les m&acirc;les, ces prot&eacute;ines d&eacute;fectueuses promouvoir la diff&eacute;renciation neuronale et la fonction qui est suffisante pour supporter la fougueuse P1-gal4 parade nuptiale. Mais dispense du m&acirc;le-sp&eacute;cifique FRU N-terminus est temp&eacute;r&eacute;e par la constatation qu&#39;intra-fru s&eacute;quences codant ces 101 aa est hautement conserv&eacute;e chez les parents intersp&eacute;cifiques de d. melanogaster.

st&eacute;riles produits du g&egrave;ne tronqu&eacute;s de leurs qualit&eacute;s d&#39;hommes comme promouvoir la masculinit&eacute; neuronale et comportementale chez la drosophile si ces prot&eacute;ines sont produites dans les bons endroits au bon temps.

GAL4-Produktion unter der Kontrolle des Projekttr&auml;gers Geschlecht (P1) innerhalb der Taufliege fruchtlosen gen zu bringen, war zuvor eine gal4-Kassette eingelegt flussabw&auml;rts von P1. Dieser Packungsbeilage sollte M&auml;nnchen-spezifische FRU(M) Proteine, beseitigen, die normalerweise ihre N-Termini 101 Aminos&auml;uren (aa) enthalten. Daher sollten M&auml;nner homozygot f&uuml;r die P1-gal4-Insert courtless, wie kurz erw&auml;hnt wurde, so in dem urspr&uuml;nglichen Bericht dieser transgenen Art zu sein. Aber XY fliegen, deren einzige Fru Form P1-gal4 ist, jetzt gefunden worden vor Gericht energisch. P1-gal4 Frauen angezeigt keine sp&uuml;rbaren M&auml;nnchen-&auml;hnliche Aktionen au&szlig;er Balz Ablehnung Verhaltensweisen; Dennoch entwickelten sie ein M&auml;nnchen-spezifische Bauchmuskeln. Keine Immunoreactivity gegen die Mann-spezifische aa war im P1-gal4 fliegen nachweisbar. Aber M&auml;nnchen-&auml;hnliche neuronale Signale in XY oder XX P1-gal4 Puppen und Erwachsenen beobachtet wurden, nach der Anwendung eines Antik&ouml;rpers, das alle FRU-Isoformen erkennt; Transgene Frauen angezeigt reduziert Ausdruck solcher Proteine. RT-PCR ist diese Erkenntnisse rationalisiert: P1 Abschriften umfassen anomale Splei&szlig;-Formen, die aus der gal4 entfernt wurde, erm&ouml;glicht FRU ist M aa fehlt, das M&auml;nnchen-&auml;hnliche Muster bei beiden Geschlechtern produziert. In M&auml;nner f&ouml;rdern solche Defekte Proteine neuronale Differenzierung und Funktion, die ausreicht, um temperamentvoll P1-gal4-Werbung zu unterst&uuml;tzen. Aber Entbehrlichkeit von den M&auml;nnchen-spezifische FRU N-Terminus wird gemildert durch die Erkenntnis, dass Intra-Fru Sequenzen Codierung dieser 101 aa sind stark Interspezifische Verwandten von D. Melanogaster konserviert.

fruchtlosen Genprodukte abgeschnitten von ihren M&auml;nnchen-&auml;hnliche Qualit&auml;ten zu neuronale und Verhaltensanalysen Mannsein in Drosophila f&ouml;rdern, wenn diese Proteine, an den richtigen Stellen auf der rechten Seite produziert werden mal.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7121;&#x76CA;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5185;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x30BB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; (P1) &#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067; GAL4 &#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;gal4 &#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x65E2;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; P1 &#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x901A;&#x5E38; 101 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; (aa) &#x3067;&#x305D;&#x306E; N &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7537;&#x6027; FRU(M) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7537;&#x6027; P1 gal4 &#x633F;&#x5165;&#x306F;&#x30DB;&#x30E2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x3046;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x578B;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x7C21;&#x6F54;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C; courtless &#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; fru &#x5F62;&#x5F0F; P1 gal4 &#x3067;&#x3059; XY &#x30CF;&#x30A8;&#x4ECA;&#x88C1;&#x5224;&#x6240;&#x306B;&#x7CBE;&#x529B;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P1 gal4 &#x5973;&#x6027;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6C42;&#x611B;&#x62D2;&#x7D76;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x9664;&#x304F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x8179;&#x90E8;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7537;&#x6027;&#x7279;&#x5B9A; aa &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x967D;&#x6027;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F; P1 gal4 &#x30CF;&#x30A8;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FE1;&#x53F7; XY &#x307E;&#x305F;&#x306F; XX P1 gal4 &#x86F9;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; FRU &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;;&#x8868;&#x793A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x5973;&#x6027;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3002;RT-PCR &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5408;&#x7406;&#x5316;: P1 &#x306E;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7570;&#x5E38;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; gal4 &#x304B;&#x3089;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x3001;FRU &#x306E; M aa &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8A31;&#x53EF;&#x306E;&#x96CC;&#x96C4;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x5185;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x5343;&#x5C0B;&#x306E;&#x795E;&#x96A0;&#x3057; P1 gal4 &#x6C42;&#x611B;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3002;&#x3042;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x306E; FRU N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5206;&#x6563;&#x6027;&#x3092;&#x935B;&#x3048;&#x3066;&#x6240;&#x898B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9; fru &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 101 &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; aa &#x306E;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7A2E;&#x9593;&#x306E;&#x89AA;&#x621A;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7121;&#x76CA;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8CEA;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x3068;&#x884C;&#x52D5;&#x7537;&#x6027;&#x3089;&#x3057;&#x3055;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x53F3;&#x306E;&#x53F3;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x56DE;&#x3002;

GAL4 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC758; &#xBCF4;&#xB78C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC139;&#xC2A4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; (P1)&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; gal4 &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC0BD;&#xC785; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; p 1&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xC774; &#xC0BD;&#xC785;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0;&#xC11C; 101 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; (aa)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB0A8;&#xC131; &#xC804;&#xC6A9; FRU(M) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB0A8;&#xC131; homozygous P1 gal4 &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; courtless, &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB807;&#xAC8C; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBA85;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; fru &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; P1 gal4 XY &#xD30C;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xAE08; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC95;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. P1-gal4 &#xC5EC;&#xC131; &#xAD6C;&#xC560; &#xAC70;&#xC808; &#xB3D9;&#xC791;; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xB0A8;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xC791;&#xC5C5; &#xC5C6;&#xC74C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB0A8;&#xC131; &#xC804;&#xC6A9; &#xBCF5; &#xBD80; &#xADFC;&#xC721;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB0A8;&#xC131; &#xC804;&#xC6A9; aa&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5C6;&#xC74C; immunoreactivity P1 gal4 &#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0A8;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB4E0; FRU isoforms; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD55C; &#xD6C4; XY &#xB610;&#xB294; XX P1-gal4 pupae&#xC640; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC5EC;&#xC131; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC2DD; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;. RT-PCR&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD569;&#xB9AC;&#xD654;: P1 &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xB4F1; &#xBCC0;&#xCE59;&#xC801; &#xC778; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC591;&#xC2DD; gal4 &#xC81C;&#xAC70;, &#xB0A8;&#xB140; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0A8;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; FRU M aa &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xB0A8;&#xC131;, &#xB0B4; &#xAC19;&#xC740; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654;&#xC640; &#xC529; &#xC529; &#xD55C; P1 gal4 &#xAD6C;&#xC560;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0A8;&#xC131; &#xD2B9;&#xC815; FRU N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; dispensability &#xB2E8;&#xB828; &#xB41C; &#xADF8; &#xB0B4;&#xBD80; fru &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCC3E;&#xB294; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 101 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; aa&#xC758; &#xB514; melanogaster&#xC758; interspecific &#xCE5C;&#xCC99; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB0A8;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xC790;&#xC9C8;&#xC758; &#xC790;&#xB97C; &#xBB34; &#xC775; &#xC9C4; &#xC81C;&#xD488; &#xD64D;&#xBCF4; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD589;&#xB3D9; maleness &#xC624;&#xB978;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC2DC;&#xAC04;.

Para traer GAL4 producci&oacute;n bajo el control del promotor sexo (P1) contenido en el gen infructuoso de Drosophila, anteriormente fue insertado un cassette gal4 aguas abajo de P1. Este tubo debe eliminar prote&iacute;nas FRU(M) hombre-espec&iacute;ficas, que suelen contengan 101 amino&aacute;cidos (aa) en sus t&eacute;rminos de N. As&iacute; los machos homocig&oacute;ticos para la inserci&oacute;n de P1-gal4 deben ser courtless, como fue expresado brevemente a serlo en el informe inicial de este tipo transg&eacute;nico. Pero moscas XY cuya &uacute;nica forma de fru es P1-gal4 ahora se han encontrado vigorosamente a los tribunales. P1-gal4 hembras no muestran ninguna acci&oacute;n apreciable del hombre-como excepto comportamientos de rechazo del cortejo; sin embargo, desarrollaron un m&uacute;sculo abdominal inespec&iacute;fico del hombre. No immunoreactivity contra el hombre espec&iacute;fico de aa era perceptible en P1-gal4 moscas. Pero hombre-como se&ntilde;ales neuronales se observaron en XY o XX P1-gal4 pupas y adultos despu&eacute;s de aplicar un anticuerpo que detecta todos FRU isoformas; hembras transg&eacute;nicas muestra redujeron la expresi&oacute;n de estas prote&iacute;nas. RT-PCR de racionalizar estos resultados: P1 transcripciones incluyen formas an&oacute;malas de empalme del cual fue removido gal4, permitiendo FRU de falta M aa que se producen en el hombre-como patrones en ambos sexos. En varones, tales prote&iacute;nas defectuosas promoci&oacute;n la diferenciaci&oacute;n de los nervios y la funci&oacute;n que es suficiente para respaldar el esp&iacute;ritu P1-gal4 cortejo. Pero la prescindibilidad del hombre espec&iacute;ficos FRU N-terminal es templado por encontrar secuencias que intra-fru codificaci&oacute;n estas 101 aa est&aacute; muy conservadas entre familiares interespec&iacute;ficas de D. melanogaster.

infructuosos productos g&eacute;nicos truncados de sus cualidades de hombre-como promoci&oacute;n masculinidad neuronal y de comportamiento en Drosophila si estas prote&iacute;nas se producen en los lugares correctos en la derecha veces.

&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8111;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x5730;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x5176;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;GAL4 &#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5E8F;&#x5217; (UAS) &#x4E8C;&#x8FDB;&#x5236;&#x6587;&#x4EF6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#xFF0C;&#x4F46; GAL4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F80;&#x5F80;&#x8FC7;&#x4E8E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#xFF0C;&#x7CBE;&#x7EC6;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9057;&#x4F20;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x9650;&#x5236; GAL4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;GAL4 &#x65E0;&#x4EBA;&#x673A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x6DFB;&#x52A0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF1A; &#x589E;&#x5F3A;&#x9677;&#x9631;&#x91CD;&#x7EC4;&#x9176;&#xFF0C;Flippase (ET-FLP)&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x7EE7;&#x627F;&#x3001; &#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; FLP &#x548C; FLP &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A; GAL4 GAL80 &#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x9547;&#x538B;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x767B;&#x8BB0;&#x7A0E;&#x4F9D;&#x8D56; GAL80&quot;(flip)-&#x5728;&quot;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x884C;&#x7684;&#x96C6;&#x5408;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5305;&#x62EC; UAS &#x7F16;&#x7801;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#xFF0C;&#x800C;&#x7535;&#x8DEF;&#x51FD;&#x6570;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F7F;&#x7528;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; UAS &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x6807;&#x8BB0;&#x7535;&#x8DEF;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x6B64; ET-FLP &#x81F4;&#x4EA4;&#x53C9; GAL80/GAL4 &#x9547;&#x538B; (FINGR) &#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6620;&#x5C04;&#x57FA;&#x7840;&#x98DE;&#x884C;&#x7FFC;&#x901A;&#x80C0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EBF;&#x8DEF;&#x3002;FINGR &#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#x548C;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x6620;&#x5C04;&#x4EE5;&#x53CA;&#x514B;&#x9686;&#x5206;&#x6790;&#x57FA;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD;&#x6D3E;&#x751F;&#x9996;&#x6B21;&#x767B;&#x8BB0;&#x7A0E;/FLP &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5230;&#x679C;&#x8747;&#x8F93;&#x6DB2;&#x7684; GAL4 &#x884C;&#x7684;&#x5E9E;&#x5927;&#x96C6;&#x5408;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x6218;&#x7565;&#x548C;&#x6218;&#x672F;&#x57FA;&#x7840;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; FINGR &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E5F;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x54EA;&#x4E9B;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5305;&#x62EC; GAL4&#x3001; &#x65E0;&#x4EBA;&#x673A;&#x3001; GAL80 &#x548C; FLP &#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x5176;&#x4ED6;&#x9002;&#x5408;&#x8FDB;&#x884C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x751F;&#x7269;&#x3002;

&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x6620;&#x5C04;&#x9057;&#x4F20;&#x9A6C;&#x8D5B;&#x514B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Transgenic manipulation of subsets of brain cells is increasingly used for studying behaviors and their underlying neural circuits. In Drosophila, the GAL4-upstream activating sequence (UAS) binary system is powerful for gene manipulation, but GAL4 expression is often too broad for fine mapping of neural circuits. Here, we describe the development of unique molecular genetic tools to restrict GAL4 expression patterns. Building on the GAL4-UAS system, our method adds two components: a collection of enhancer-trap recombinase, Flippase (ET-FLP), transgenic lines that provide inheritable, reproducible, and tissue-specific FLP and an FRT-dependent GAL80 "flip-in" construct that converts FLP expression into tissue-specific repression of GAL4 by GAL80. By including a UAS-encoded fluorescent protein, circuit morphology can be simultaneously marked while the circuit function is assessed using another UAS transgene. In a proof-of-principle analysis, we applied this ET-FLP-induced intersectional GAL80/GAL4 repression (FINGR) method to map the neural circuitry underlying fly wing inflation. The FINGR system is versatile and powerful in combination with the vast collection of GAL4 lines for neural circuit mapping as well as for clonal analysis based on the infusion of the yeast-derived FRT/FLP system of mitotic recombination into Drosophila. The strategies and tactics underlying our FINGR system are also applicable to other genetically amenable organisms in which transgenes including the GAL4, UAS, GAL80, and FLP factors can be applied.

A genetic mosaic approach for neural circuit mapping in Drosophila.

La manipulation transg&#xE9;nique de sous-ensembles de cellules du cerveau est de plus en plus utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des comportements et de leurs sous-jacents circuits neuronaux. Chez la drosophile, le GAL4-s&#xE9;quence d&#x26;#39;activation en amont du syst&#xE8;me binaire (UAS) est puissant pour la manipulation g&#xE9;n&#xE9;tique, mais GAL4 expression est souvent trop large pour la cartographie fine des circuits neuronaux. Ici, nous d&#xE9;crivons le d&#xE9;veloppement de la uniques outils de g&#xE9;n&#xE9;tique mol&#xE9;culaire pour restreindre GAL4 profils d&#x26;#39;expression. S&#x26;#39;appuyant sur le syst&#xE8;me GAL4-UAS, notre m&#xE9;thode ajoute deux composantes: une collection de enhancer-trap recombinase, flippase (HE-FLP), des lign&#xE9;es transg&#xE9;niques qui fournissent des FLP h&#xE9;r&#xE9;ditaire, reproductible, et le tissu-sp&#xE9;cifique et un GAL80 FRT-d&#xE9;pendante &#x26;quot;flip en &#xAB;construire qui convertit l&#x26;#39;expression FLP dans le tissu-sp&#xE9;cifique de r&#xE9;pression de GAL4 par GAL80. En incluant une UAS-cod&#xE9; morphologie prot&#xE9;ine fluorescente, le circuit peut &#xEA;tre simultan&#xE9;ment marqu&#xE9;es tandis que la fonction du circuit est &#xE9;valu&#xE9;e en utilisant un autre transg&#xE8;ne UAS. Dans une analyse de preuve de principe, nous avons appliqu&#xE9; cette HE-FLP-induite intersectionnelle GAL80/GAL4 la r&#xE9;pression (FINGR) m&#xE9;thode pour cartographier les circuits neuronaux qui sous-tend l&#x26;#39;inflation aile mouche. Le syst&#xE8;me est FINGR polyvalent et puissant en combinaison avec la vaste collection de GAL4 lignes pour la cartographie des circuits neuronaux, ainsi que pour l&#x26;#39;analyse clonale sur la base de la perfusion de la levure d&#xE9;riv&#xE9; FRT / FLP syst&#xE8;me de recombinaison mitotique dans la drosophile. Les strat&#xE9;gies et les tactiques qui sous-tendent notre syst&#xE8;me de FINGR sont &#xE9;galement applicables &#xE0; d&#x26;#39;autres organismes g&#xE9;n&#xE9;tiquement qui se pr&#xEA;tent, dans lequel transg&#xE8;nes y compris le GAL4, SAMU, GAL80, et les facteurs de FLP peut &#xEA;tre appliqu&#xE9;e.

Une approche g&#xE9;n&#xE9;tique pour la cartographie mosa&#xEF;que des circuits neuronaux chez la drosophile

Transgene Manipulation von Teilmengen von Gehirnzellen wird zunehmend verwendet, f&uuml;r die Untersuchung der Verhaltensweisen und ihre zugrunde liegenden neuronalen Schaltkreise. Drosophila das GAL4-upstream aktivierende Sequenz (FH)-Bin&auml;r-System ist m&auml;chtig f&uuml;r Genmanipulation, aber GAL4 Ausdruck ist oft zu breit f&uuml;r Feinkartierung von neuronale Schaltkreise. Hier beschreiben wir die Entwicklung der einzigartige Molekulare genetische Tools um GAL4 Ausdrucksmuster zu beschr&auml;nken. Aufbauend auf das GAL4-UAS-System, unsere Methode f&uuml;gt zwei Komponenten: eine Sammlung von Enhancer-Trap Recombinase, Phospholipidtranslokatoren (ET-FLP), transgene Linien, die vererbbare, reproduzierbare und Gewebe-spezifischen FLP und ein FRT-abh&auml;ngige GAL80 &quot;kippen-in&quot;-Gebilde, das FLP Ausdruck in Gewebe-spezifischen Unterdr&uuml;ckung der GAL4 von GAL80 umwandelt. Durch die Aufnahme einer UAS-codierte fluoreszierenden Proteins, kann Schaltung Morphologie gleichzeitig markiert werden, w&auml;hrend die Schaltung-Funktion mit einem anderen UAS Transgene beurteilt wird. In einer Analyse Nachweis-des-Prinzip angewendet wir diese ET-FLP-induzierte intersektionale GAL80/GAL4 Repression (FINGR) Methode um die neuralen Schaltkreis Kerninflation Fliegen Fl&uuml;gel zuzuordnen. Das FINGR-System ist vielseitig und leistungsf&auml;hig in Kombination mit der riesigen Sammlung von GAL4-Linien f&uuml;r die neuralen Schaltkreis Zuordnung sowie f&uuml;r klonale Analyse auf der Grundlage der Infusion des Hefe-abgeleitete FRT/FLP-Systems Mitotische Rekombination in Drosophila. Die Strategien und Taktiken, die zugrunde liegenden unser FINGR-System gelten auch f&uuml;r andere genetisch empf&auml;nglich Organismen, in denen, die transgene einschlie&szlig;lich die GAL4, UAS, GAL80 und FLP Faktoren angewendet werden kann.

Einem genetischen Mosaik-Konzept f&uuml;r die Zuordnung der neuralen Schaltkreis in Drosophila.

Manipolazione transgenica di sottoinsiemi di cellule cerebrali &egrave; sempre pi&ugrave; utilizzato per studiare i comportamenti e i loro circuiti neurali sottostanti. In drosofila, a Monte GAL4 sequenza (UAS) attivazione sistema binario &egrave; potente per la manipolazione del gene, ma espressione GAL4 &egrave; spesso troppo ampio per fine mappatura dei circuiti neurali. Qui, descriviamo lo sviluppo di strumenti unici di genetici molecolari per limitare i modelli di espressione GAL4. Costruzione del sistema GAL4-UAS, il nostro metodo aggiunge due componenti: una collezione di recombinase enhancer trap, Flippase (ET-FLP), linee transgeniche che forniscono FLP ereditabili, riproducibile e tessuto-specifici e un costrutto FRT-dipendente GAL80 &quot;flip-in&quot; che converte l&#39;espressione FLP in tessuto-specifica repressione di GAL4 di GAL80. Includendo una proteina fluorescente UAS-codificati, morfologia del circuito pu&ograve; essere contemporaneamente contrassegnato mentre la funzione di circuito &egrave; valutata utilizzando un altro UAS transgene. In un&#39;analisi del principio di prova, abbiamo applicato questo ET-FLP-induced Intersezionali GAL80/GAL4 repressione (FINGR) metodo per mappare i circuiti neurali sottostanti ala volare l&#39;inflazione. Il sistema FINGR &egrave; versatile e potente in combinazione con la vasta collezione di linee GAL4 per il mapping del circuito neurale, nonch&eacute; per analisi clonale basato sull&#39;infusione del sistema FLP/FRT lievito-derivato di ricombinazione mitotica in drosofila. Le strategie e le tattiche sottostante il nostro sistema FINGR sono inoltre applicabili ad altri organismi geneticamente suscettibili in cui transgeni compreso i fattori GAL4, UAS, GAL80 e FLP pu&ograve; essere applicato.

Un approccio di mosaico genetico per il mapping del circuito neurale in drosofila.

&#x8133;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x884C;&#x52D5;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;GAL4-&#x4E0A;&#x6D41;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x914D;&#x5217;&#xFF08;UAS&#xFF09;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;GAL4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304C;&#x5E83;&#x3059;&#x304E;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;GAL4&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D7;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30D5;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;ET-FLP&#xFF09;&#x3001;&#x7D99;&#x627F;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;FLP&#x3068;FRT-&#x4F9D;&#x5B58;GAL80&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; &#x26;quot;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF1A;GAL4-UAS&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x4E0A;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3; &#x26;quot;GAL80&#x3067;GAL4&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x5F3E;&#x5727;&#x306B;FLP&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56DE;&#x8DEF;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x5225;&#x306E;UAS&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306B;UAS-&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x660E;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30A8;&#x306E;&#x7FBD;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EC;&#x7387;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;ET-FLP-&#x8A98;&#x5C0E;&#x4EA4;&#x70B9;GAL80/GAL4&#x5F3E;&#x5727;&#xFF08;F&#x200B;&#x200B;INGR&#xFF09;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; FINGR&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306B;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x7531;&#x6765;&#x306E;FRT / FLP&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;GAL4&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x81A8;&#x5927;&#x306A;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x7528;&#x9014;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x5F37;&#x529B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;FINGR&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x3084;&#x6226;&#x8853;&#x3082;GAL4&#x3001;UAS&#x3001;GAL80&#x3001;&#x53CA;&#x3073;FLP&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

&#xB1CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC870;&#xC791;&#xC740; &#xC810;&#xC810; &#xD589;&#xB3D9;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;, GAL4 &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (UAS) &#xC774;&#xC9C4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; GAL4 &#xC2DD;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xB108;&#xBB34; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C;&#xC758; &#xBBF8;&#xC138; &#xB9E4;&#xD551;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; GAL4 &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xC81C;&#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GAL4-UAS &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD95;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xCD94;&#xAC00; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;: &#xC99D;&#xAC15; &#xD2B8;&#xB7A9; recombinase, Flippase (FLP &#xB3D9;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC2DC;), &#xC0C1;&#xC18D;, &#xC7AC;&#xD604;&#xC131;, &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; FLP &#xBC0F; gal80&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; gal4&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC5B5;&#xC555; &#xBCC0;&#xD658; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; FLP &#xC2DD; GAL80 &quot;&#xD50C;&#xB9BD;-&#xC5D0;&#xC11C;&quot; FRT &#xC885;&#xC18D; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778; &#xBAA8;&#xC74C;. UAS &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; UAS transgene&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD68C;&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD68C;&#xB85C; &#xD615;&#xD0DC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xC6D0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC774; &#xC678; FLP &#xC720;&#xB3C4; intersectional GAL80/GAL4 &#xC5B5;&#xC555; (FINGR) &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC774; &#xB0A0;&#xAC1C; &#xC778;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xD551;&#xD560;. FINGR &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD568;&#xAED8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xD551; &#xBB3C;&#xB860; &#xD074;&#xB860; &#xBD84;&#xC11D; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0; mitotic &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC720;&#xB798; FRT/FLP &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC785;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; GAL4 &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xAD11;&#xB300; &#xD55C; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;. &#xC804;&#xB7B5;&#xACFC; &#xC804;&#xC220;&#xC744; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; FINGR &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xC5B4;&#xB5A4; transgenes&#xC5D0; GAL4, UAS, GAL80, FLP &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xD551; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBAA8;&#xC790;&#xC774;&#xD06C; &#xC811;&#xADFC;.

La manipulaci&#xF3;n transg&#xE9;nica de subconjuntos de c&#xE9;lulas del cerebro se utilizan cada vez m&#xE1;s para el estudio de los comportamientos y sus circuitos neurales subyacentes. En Drosophila, la GAL4-aguas arriba secuencia de activaci&#xF3;n (UAS) sistema binario es de gran alcance para la manipulaci&#xF3;n gen&#xE9;tica, pero la expresi&#xF3;n de GAL4 es demasiado amplio para el mapeo preciso de los circuitos neuronales. En este caso, se describe el desarrollo de herramientas &#xFA;nicas de gen&#xE9;tica molecular para restringir los patrones de expresi&#xF3;n GAL4. Bas&#xE1;ndose en el sistema GAL4-UAS, nuestro m&#xE9;todo se agregan dos componentes: una recopilaci&#xF3;n de potenciador de la trampa de la recombinasa, Flippase (ET-FLP), las l&#xED;neas transg&#xE9;nicas que proporcionan FLP reproducibles heredable, y espec&#xED;fico de tejido y un GAL80 FRT-dependiente &#x26;quot;flip en &#x26;quot;construir que convierte la expresi&#xF3;n de FLP en tejidos espec&#xED;ficos de la represi&#xF3;n de GAL4 por GAL80. Al incluir una morfolog&#xED;a fluorescente UAS prote&#xED;na codificada, el circuito puede ser simult&#xE1;neamente marcado mientras que la funci&#xF3;n del circuito se evalu&#xF3; mediante otro transg&#xE9;n UAS. En un an&#xE1;lisis de la prueba de principio, se aplic&#xF3; este ET-FLP-inducida por la represi&#xF3;n interseccional GAL80/GAL4 (FINGR) para mapear el circuito neural que subyace a la inflaci&#xF3;n mosca ala. El sistema FINGR es vers&#xE1;til y potente en combinaci&#xF3;n con la vasta colecci&#xF3;n de GAL4 l&#xED;neas para el mapeo circuito neural, as&#xED; como para el an&#xE1;lisis clonal basado en la infusi&#xF3;n de la levadura derivada de FRT / FLP sistema de recombinaci&#xF3;n mit&#xF3;tica en Drosophila. Las estrategias y t&#xE1;cticas que subyacen a nuestro sistema de FINGR son tambi&#xE9;n aplicables a otros organismos gen&#xE9;ticamente susceptibles en que transgenes incluyendo la GAL4, UAS, GAL80, y los factores de FLP puede ser aplicada.

Rudolf A. Bohm

Department of Zoology

University of Oklahoma - Norman

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

Rudolf A. Bohm

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University of Oklahoma - Norman

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

Department of Zoology