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Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

In diesem Beitrag pr&auml;sentieren wir eine Technik zur Herstellung Arrays mit eine Dichte von mindestens 90 mal h&ouml;her als zuvor ver&ouml;ffentlichte. Im einzelnen besprechen wir die Fertigung von zwei imaging Glasfaser-basierten Nanoarrays, eine mit 700nm Funktionen, eine andere mit 300nm Features. Bei Arrays mit bis zu 4.5x10(6) Array elements/mm(2) haben diese Nanoarrays eine hohe Packungsdichte. Eine einfache Radierung-Protokoll wird verwendet, um Nanowells zu erstellen, in denen Perlen hinterlegt werden k&ouml;nnen. Diese Perlen umfassen die Fernerkundung Elemente der Nanoarray. Ablagerung von der Nanobeads in die Nanowells mit zwei Techniken wird beschrieben. Die Oberfl&auml;cheneigenschaften der ge&auml;tzten Arrays werden mit Rasterkraftmikroskopie und Rasterelektronenmikroskopie untersucht. Fluoreszenzmikroskopie wurde verwendet, um die Arrays zu beobachten. Die 300nm-Array-Funktionen und der 500nm Mitte-Mitte-Abstand n&auml;hern sich die minimalen Strukturgr&ouml;&szlig;en sichtbar mit konventionellen Lichtmikroskopie.

Herstellung und optische Charakterisierung von imaging-Glasfaser-basierten Nanoarrays.

&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x6280;&#x672F;&#x5236;&#x5907;&#x9635;&#x5217;&#x5305;&#x542B;&#x81F3;&#x5C11; 90 &#x500D;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x4EE5;&#x524D;&#x516C;&#x5E03;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9635;&#x5217;&#x3001; 700nm &#x7279;&#x8272;&#x4E4B;&#x4E00;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0E; 300nm &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x7684;&#x5236;&#x4F5C;&#x3002;&#x5230; 4.5x10(6) &#x6570;&#x7EC4; elements/mm(2) &#x5305;&#x542B;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9635;&#x5217;&#x5177;&#x6709;&#x8D85;&#x9AD8;&#x7684;&#x5806;&#x79EF;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x7B80;&#x5355;&#x8680;&#x523B;&#x534F;&#x8BAE;&#x7528;&#x4E8E;&#x521B;&#x5EFA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x5B58;&#x653E;&#x73E0; nanowells&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x73E0;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x5D4C;&#x6BB5;&#x9065;&#x611F;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x7684; nanowells &#x5230; nanobeads &#x7684;&#x6C89;&#x79EF;&#x3002;&#x8680;&#x523B;&#x7684;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7279;&#x5F81;&#x4E0E;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x68C0;&#x67E5;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7528;&#x6765;&#x89C2;&#x5BDF;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;300Nm &#x9635;&#x5217;&#x529F;&#x80FD;&#x548C; 500nm &#x4E2D;&#x5FC3;&#x5230;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x529E;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x67E5;&#x770B;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x7279;&#x5F81;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x3002;

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In this paper, we present a technique for fabricating arrays containing a density at least 90 times higher than previously published. Specifically, we discuss the fabrication of two imaging fiber-based nanoarrays, one with 700nm features, another with 300nm features. With arrays containing up to 4.5x10(6) array elements/mm(2), these nanoarrays have an ultra-high packing density. A straightforward etching protocol is used to create nanowells into which beads can be deposited. These beads comprise the sensing elements of the nanoarray. Deposition of the nanobeads into the nanowells using two techniques is described. The surface characteristics of the etched arrays are examined with atomic force microscopy and scanning electron microscopy. Fluorescence microscopy was used to observe the arrays. The 300nm array features and the 500nm center-to-center distance approach the minimum feature sizes viewable using conventional light microscopy.

Fabrication and optical characterization of imaging fiber-based nanoarrays.

Dans cet article, nous pr&eacute;sentons une technique pour la fabrication de tableaux contenant une densit&eacute; au moins 90 fois plus &eacute;lev&eacute;e que pr&eacute;c&eacute;demment publi&eacute;s. Plus pr&eacute;cis&eacute;ment, nous discutons de la fabrication de deux imagerie NANOMATRICES de fibre optique, avec fonctionnalit&eacute;s de 700 nm, une autre avec des fonctionnalit&eacute;s de 300nm. Avec des tableaux contenant jusqu&#39;&agrave; 4.5x10(6) tableau elements/mm(2), ces NANOMATRICES ont une tr&egrave;s haute densit&eacute;. Un protocole simple gravure sert &agrave; cr&eacute;er des nanowells, dans lequel les perles peuvent &ecirc;tre d&eacute;pos&eacute;s. Ces perles comprennent les &eacute;l&eacute;ments sensibles de le nanoarray. D&eacute;p&ocirc;t de la nanobilles dans le nanowells &agrave; l&#39;aide de deux techniques est d&eacute;crite. Les caract&eacute;ristiques de surface des tableaux grav&eacute;s sont examin&eacute;s avec la microscopie &agrave; force atomique et le microscope &eacute;lectronique &agrave; balayage. La microscopie de fluorescence a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour observer les baies. Les fonctionnalit&eacute;s de tableau de 300nm et la distance de centre &agrave; centre de 500nm approchent les tailles minimales fonctionnalit&eacute; consultables &agrave; l&#39;aide de la microscopie optique conventionnelle.

Fabrication et caract&eacute;risation optique de fibre optique NANOMATRICES d&#39;imagerie.

In questo articolo, vi presentiamo una tecnica per fabbricanti matrici contenenti una densit&agrave; di almeno 90 volte superiori precedentemente pubblicati. In particolare, si discute la realizzazione di due di imaging basata su fibra di nanoarrays, uno con caratteristiche 700nm, un altro con caratteristiche di 300nm. Con matrici contenenti fino a elements/mm(2) di matrice 4.5x10(6), questi nanoarrays hanno un&#39;altissima densit&agrave;. Un incisione semplice protocollo viene utilizzato per creare nanowells in cui possono essere depositati perline. Queste perle comprendono gli elementi di telerilevamento della nanoarray. Deposizione del nanobeads in nanowells utilizzando due tecniche &egrave; descritto. Le caratteristiche superficiali delle matrici incise sono esaminate con microscopia a forza atomica e scanning electron microscopy. Microscopia di fluorescenza &egrave; stata usata per osservare le matrici. Le caratteristiche di matrice 300nm e la distanza centro-centro 500nm approccio le taglie minime funzionalit&agrave; visualizzabile tramite microscopia convenzionale.

Fabbricazione e caratterizzazione ottica di imaging basata su fibra nanoarrays.

&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 90 &#x500D;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; nanoarrays&#x3001;700 nm &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 1 &#x3064;&#x3001;&#x5225;&#x306E; 300 nm &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F5C;&#x88FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;4.5X10(6) &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; elements/mm(2) &#x307E;&#x3067;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; nanoarrays &#x306F;&#x8D85;&#x9AD8;&#x5145;&#x586B;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Nanowells &#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x5BC4;&#x8A17;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3001;nanoarray &#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x7D20;&#x5B50;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6C88;&#x7740;&#x3001;&#x30CA;&#x30CE;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; nanowells &#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x691C;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;300 Nm &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068; 500 nm &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x8DDD;&#x96E2;&#x5F93;&#x6765;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC774; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC870;&#xC791; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC00;&#xB3C4; &#xCD5C;&#xC18C; 90 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB192;&#xC774; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC74C; id&#xB85C; &#xCD9C;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xC18C;&#xAC1C;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC12C;&#xC720; &#xAE30;&#xBC18; nanoarrays, 700nm &#xAE30;&#xB2A5; &#xD558;&#xB098;, 300nm &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xC81C;&#xC791;&#xC744; &#xB300;&#xD574;&#xC11C; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBD05;&#xB2C8;&#xB2E4;. 4.5X10(6) &#xBC30;&#xC5F4; elements/mm(2)&#xAE4C;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC774; nanoarrays &#xCD08;&#xACE0; &#xD328;&#xD0B9; &#xBC00;&#xB3C4;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC5D0;&#xCE6D; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; nanowells &#xBE44;&#xC988;&#xB294; &#xC785;&#xAE08; &#xD558;&#xC2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBE44;&#xC988;&#xB294; nanoarray&#xC758; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;. &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; nanowells&#xC5D0;&#xB294; nanobeads&#xC758; &#xC99D; &#xCC29;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xCE6D; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC131; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAD00;&#xCC30; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 300Nm &#xBC30;&#xC5F4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; 500nm &#xC13C;&#xD130; &#xC13C;&#xD130; &#xAC70;&#xB9AC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC811;&#xADFC; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC81C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC12C;&#xC720; &#xAE30;&#xBC18; nanoarrays &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

En este trabajo presentamos una t&eacute;cnica para fabricar matrices que contienen una densidad de por lo menos 90 veces mayor que la previamente publicado. Espec&iacute;ficamente, se discute la fabricaci&oacute;n de dos im&aacute;genes basadas en fibra nanoarrays, uno con las caracter&iacute;sticas de 700nm, otro con caracter&iacute;sticas de 300nm. Con arreglos de discos que contienen hasta 4.5x10(6) matriz elements/mm(2), estos nanoarrays tienen una alt&iacute;sima densidad. Un protocolo sencillo grabado se utiliza para crear nanowells en el cual los granos pueden ser depositados. Estos granos constituyen los elementos de detecci&oacute;n de la nanoarray. Se describe la deposici&oacute;n de la nanobeads en el nanowells utilizando dos t&eacute;cnicas. Se examinan las caracter&iacute;sticas superficiales de los arreglos de discos grabados con microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica y microscop&iacute;a electr&oacute;nica. Microscop&iacute;a de fluorescencia se utiliz&oacute; para observar los arreglos de discos. Las caracter&iacute;sticas de la matriz de 300nm y la distancia de centro a centro de 500nm acercan los tama&ntilde;os m&iacute;nimos de la funci&oacute;n visibles con microscop&iacute;a &oacute;ptica convencional.

Fabricaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n &oacute;ptica de im&aacute;genes basadas en fibra nanoarrays.

&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x8868;&#x9762;&#x6216;&#x5916;&#x79D1;&#x624B;&#x672F;&#x66B4;&#x9732;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x5F80;&#x5F80;&#x53D7;&#x51E0;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6563;&#x70B9;&#x56FE;&#x548C;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x548C;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;GFP &#x53D1;&#x5C04;&#x8C31;&#x7EBF;&#x8F6E;&#x5ED3;&#x7684;&#x8C31;&#x7EBF;&#x8F6E;&#x5ED3;&#x3002;&#x5149;&#x8C31;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x5141;&#x8BB8;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8D21;&#x732E;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x603B;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F53;&#x5185;&#x9001;&#x7684;&#x52A0;&#x6743;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x7EAF;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E0D;&#x4F7F;&#x7528; epifluorescent &#x8FDE;&#x7EED;&#x6CE2;&#x5355;&#x4E00;&#x6FC0;&#x52B1;&#x548C;&#x6392;&#x653E;&#x901A;&#x6210;&#x50CF; (EFI) &#x968F;&#x65F6;&#x53EF;&#x80FD;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9608;&#x503C;&#xFF0C;&#x88F8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76AE;&#x4E0B;&#x6CE8;&#x5C04;&#x4E0E;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;EFI&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x6FC0;&#x53D1;&#x548C;&#x53D1;&#x5C04;&#x5E26;&#x901A;&#x6EE4;&#x6CE2;&#x5668;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x6210;&#x50CF;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5728; EFI &#x7CFB;&#x7EDF;&#x8BB0;&#x5F55;&#x7684;&#x53D1;&#x5C04;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x8D21;&#x732E;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53D1;&#x5C04;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x6350;&#x6B3E;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236;&#x4E86; 300-fold &#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;&#x68C0;&#x51FA;&#x9650;&#x4E3A; 3 x 1 x 10(6) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; efi &#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x6210;&#x50CF; 10 &#xFF08;3&#xFF09; &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8D21;&#x732E;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x56FE;&#x50CF;&#x5806;&#x6808;&#x4E2D;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7F16;&#x53F7; 100-fold &#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5149;&#x8C31;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E72;&#x6270;&#x7684;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; GFP &#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E4B;&#x4EA6;&#x7136;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6574;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x5149;&#x8C31;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x6539;&#x8FDB;&#x6574;&#x4E2A;&#x52A8;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x80BF;&#x7624;&#x884C;&#x3002;

Green fluorescent protein (GFP) has been used for cell tracking and imaging gene expression in superficial or surgically exposed structures. However, in vivo murine imaging is often limited by several factors, including scatter and attenuation with depth and overlapping autofluorescence. The autofluorescence signals have spectral profiles that are markedly different from the GFP emission spectral profile. The use of spectral imaging allows separation and quantitation of these contributions to the total fluorescence signal seen in vivo by weighting known pure component profiles. Separation of relative GFP and autofluorescence signals is not readily possible using epifluorescent continuous-wave single excitation and emission bandpass imaging (EFI). To evaluate detection thresholds using these two methods, nude mice were subcutaneously injected with a series of GFP-expressing cells. For EFI, optimized excitation and emission bandpass filters were used. Owing to the ability to separate autofluorescence contributions from the emission signal using spectral imaging compared with the mixed contributions of GFP and autofluorescence in the emission signal recorded by the EFI system, we achieved a 300-fold improvement in the cellular detection limit. The detection limit was 3 x 10(3) cells for spectral imaging versus 1 x 10(6) cells for EFI. Despite contributions to image stacks from autofluorescence, a 100-fold dynamic range of cell number in the same image was readily visualized. Finally, spectral imaging was able to separate signal interference of red fluorescent protein from GFP images and vice versa. These findings demonstrate the utility of the approach in detecting low levels of multiple fluorescent markers for whole-animal in vivo applications.

Improved in vivo whole-animal detection limits of green fluorescent protein-expressing tumor lines by spectral fluorescence imaging.

Prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour la cellule de suivi et d&#39;imagerie de l&#39;expression des g&egrave;nes dans le superficiel ou chirurgicalement expos&eacute;s des structures. Cependant, imagerie in vivo de murin est souvent limit&eacute;e par plusieurs facteurs, y compris le scatter et att&eacute;nuation avec profondeur et qui se chevauchent d&#39;autofluorescence. Les signaux de l&#39;autofluorescence ont des profils spectraux qui sont nettement diff&eacute;rents du profil spectral d&#39;&eacute;mission GFP. L&#39;utilisation de l&#39;imagerie spectrale permet de s&eacute;paration et la quantification de ces contributions pour le signal de fluorescence totale vu in vivo en pond&eacute;rant les profils connus composant pur. S&eacute;paration des signaux GFP et autofluorescence relatives n&#39;est pas facilement possible &agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;pifluorescence onde continue unique d&#39;excitation et d&#39;&eacute;mission passe-bande d&#39;imagerie (EFI). Pour &eacute;valuer les seuils de d&eacute;tection &agrave; l&#39;aide de ces deux m&eacute;thodes, les souris nues ont &eacute;t&eacute; inject&eacute;s par voie sous-cutan&eacute;e avec une s&eacute;rie de cellules exprimant GFP. Pour EFI, optimis&eacute;s les filtres passe-bande d&#39;excitation et d&#39;&eacute;mission ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s. En raison de la capacit&eacute; de s&eacute;parer l&#39;autofluorescence des contributions du signal d&#39;&eacute;mission &agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie spectrale par rapport &agrave; la contribution mixte de GFP et autofluorescence dans le signal des &eacute;missions enregistr&eacute; par le syst&egrave;me EFI, nous avons obtenu une am&eacute;lioration de 300 fois dans la limite de d&eacute;tection cellulaire. La limite de d&eacute;tection &eacute;tait de 3 x 10 3 cellules pour l&#39;imagerie spectrale par rapport &agrave; 1 x 10 6 cellules pour EFI. Malgr&eacute; les contributions dans les piles d&#39;image d&#39;autofluorescence, une plage dynamique 100 fois du nombre de cellules dans la m&ecirc;me image a &eacute;t&eacute; facilement visualis&eacute;e. Enfin, l&#39;imagerie spectrale &eacute;tait capable de s&eacute;parer le signal de brouillage de rouge fluorescent protein images GFP et vice versa. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent l&#39;utilit&eacute; de l&#39;approche dans la d&eacute;tection de faibles niveaux de multiples marqueurs fluorescents pour les applications in vivo d&#39;animaux entiers.

Am&eacute;lior&eacute; les limites de d&eacute;tection in vivo d&#39;animaux entiers de vert lign&eacute;es tumorales exprimant prot&eacute;ine fluorescente par imagerie de fluorescence spectrale.

Gr&uuml;nes fluoreszierendes Protein (GFP) bet&auml;tigt wurde, f&uuml;r Zelle nachverfolgen und imaging Genexpression in oberfl&auml;chliche oder chirurgisch gemachten Strukturen. In-vivo murinen Bildgebung ist jedoch oft durch verschiedene Faktoren, einschlie&szlig;lich Scatter und D&auml;mpfung mit Tiefe und &uuml;berlappende Autofluoreszenz begrenzt. Die Autofluoreszenz-Signale sind spektrale-Profile, die von der GFP Emission spektrale Profil deutlich abweichen. Die Verwendung der spektralen Bildgebung erm&ouml;glicht Trennung und quantitative Bestimmung der Beitr&auml;ge f&uuml;r das Gesamt-Fluoreszenz-Signal gesehen in-vivo durch Gewichtung bekannte reine Komponente-Profile. Trennung von relativen GFP und Autofluoreszenz-Signale ist nicht ohne weiteres m&ouml;glich, mit Epifluorescent Modul einzelne Anregungs- und Bandpass imaging (EFI). Um Erkennung Schwellenwerte mit diesen beiden Methoden zu bewerten, wurden nackte M&auml;use mit einer Reihe von GFP-Ausdruck Zellen subkutan injiziert. F&uuml;r EFI wurden optimierte Anregungs- und Bandpass-Filter verwendet. Aufgrund der F&auml;higkeit, Autofluoreszenz Beitr&auml;ge aus dem Emissions-Signal mit spektralen Bildgebung im Vergleich zu den gemischten Beitr&auml;gen der GFP und Autofluoreszenz im Emission Signal aufgenommen von der EFI-System zu trennen haben wir eine 300-fold Verbesserung der zellul&auml;ren Nachweisgrenze erreicht. Die Nachweisgrenze wurde 3 x 10 Absatz 3 Zellen f&uuml;r spektrale Bildgebung im Vergleich zu 1 x 10 6 Zellen f&uuml;r EFI. Trotz Beitr&auml;ge zu Bildstapeln aus Autofluoreszenz war ein Hundertfache Dynamikbereich der Zellen-Zahl in das gleiche Bild bereitwillig visualisiert. Schlie&szlig;lich konnte sich die spektrale Bildgebung Signalst&ouml;rungen rot fluoreszierenden Proteins von GFP-Bilder und umgekehrt zu trennen. Diese Ergebnisse zeigen das Dienstprogramm des Ansatzes bei der Aufdeckung von niedrigem Niveau mehrere fluoreszierenden Markern f&uuml;r ganze Tier in-vivo Anwendungen.

In-vivo ganz-Tier-Nachweisgrenzen der gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-Ausdruck Tumor Linien verbessert durch spektrale Fluoreszenz-Bildgebung.

Proteina fluorescente verde (GFP) &egrave; stata utilizzata per la cella di rilevamento e imaging espressione genica in superficiali o chirurgicamente esposti strutture. Tuttavia, in vivo imaging murino &egrave; spesso limitata da diversi fattori, tra cui dispersione e attenuazione con profondit&agrave; e autofluorescenza sovrapposta. I segnali di autofluorescenza hanno profili spettrali che sono nettamente diversi dal profilo spettrale di emissione GFP. L&#39;uso dell&#39;imaging spettrale permette separazione e quantificazione di questi contributi per il segnale di fluorescenza totale visto in vivo di ponderazione profili noto componente puro. Separazione dei segnali GFP e autofluorescenza relativi non &egrave; facilmente possibile utilizzando epifluorescent un singolo eccitazione ed emissione passabanda imaging (EFI). Per valutare le soglie di rilevamento utilizzando questi due metodi, topi nudi sono stati iniettati per via sottocutanea con una serie di cellule che esprimono GFP. Per EFI, ottimizzati filtri passa-banda di eccitazione e di emissione sono stati usati. Grazie alla capacit&agrave; di separare autofluorescenza contributi dal segnale di emissione mediante imaging spettrale rispetto ai contributi misti di GFP e autofluorescenza nel segnale delle emissioni registrato dal sistema di EFI, abbiamo ottenuto un 300-fold miglioramento il limite di rilevamento cellulare. Il limite di rilevazione era 3 x cellule sottoindicate per imaging spettrale rispetto a 1 x 10 celle per EFI. Nonostante contributi alle pile di immagini da autofluorescenza, una gamma dinamica 100 volte del numero di cellule nella stessa immagine &egrave; stata prontamente visualizzata. Infine, imaging spettrale &egrave; stato in grado di separare le interferenze sul segnale della proteina fluorescente rossa da immagini GFP e viceversa. Questi risultati dimostrano l&#39;utilit&agrave; dell&#39;approccio nel rilevare bassi livelli di pi&ugrave; marcatori fluorescenti per applicazioni in vivo animale intero.

Migliorato limiti di rilevamento intero-animali in vivo di fluorescente-esprimere la proteina tumorale linee verdi da imaging spettrale fluorescenza.

&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5916;&#x79D1;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x516C;&#x958B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;in vivo &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6563;&#x5E03;&#x3068;&#x6DF1;&#x3055;&#x3068;&#x91CD;&#x8907;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x5BB6;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7; GFP &#x306E;&#x767A;&#x5149;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5206;&#x5E03;&#x304B;&#x3089;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5206;&#x96E2;&#x53CA;&#x3073;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x898B;&#x7DCF;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x307F;&#x4ED8;&#x3051;&#x306B;&#x3088;&#x308B; in vivo &#x3067;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F8;&#x5BFE; GFP &#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; (EFI) epifluorescent &#x9023;&#x7D9A;&#x6CE2;&#x5358;&#x4E00;&#x52B1;&#x8D77;&#x3068;&#x653E;&#x5C04;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D1;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x3057;&#x304D;&#x3044;&#x5024;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30FC;&#x30C9;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x4E0B; GFP &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x6CE8;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EFI &#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x52B1;&#x8D77;&#x3068;&#x653E;&#x5C04;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D1;&#x30B9; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GFP &#x3068; EFI &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3067;&#x81EA;&#x767A;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x767A;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304B;&#x3089;&#x81EA;&#x767A;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x306E; 300 &#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x306F; 10 (3) &#x7D30;&#x80DE; EFI &#x7528; 10(6) &#x96FB;&#x6C60; x 1 &#x5BFE;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528; x 3 &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x304B;&#x3089;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;100 &#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x304C;&#x540C;&#x3058;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x306E;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; GFP &#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x9006;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5E72;&#x6E09;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; in vivo &#x3067;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

In vivo &#x3067;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x306E;&#x7DD1;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7DDA;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6539;&#x5584;&#x3002;

&#xC140; &#xCD94;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB178;&#xCD9C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xC220;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, in vivo murine &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC885;&#xC885; &#xBD84;&#xC0B0;&#xD615; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC1C4; &#xAE4A;&#xC774;&#xC640; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; autofluorescence &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Autofluorescence &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; GFP &#xBC29;&#xCD9C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;. &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC815;&#xB7C9;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xBCF8; &#xCD1D; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC21C;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC00;&#xC911;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0C1;&#xB300; GFP autofluorescence &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB300;&#xC5ED; epifluorescent &#xC5F0;&#xC18D;&#xD30C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD1B5;&#xACFC; (EFI) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC27D;&#xAC8C; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00;&#xB97C; &#xB204;&#xB4DC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; subcutaneously GFP &#xD45C;&#xD604; &#xC140; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC640; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. EFI, &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCD9C; &#xB300;&#xC5ED; &#xD1B5;&#xACFC; &#xD544;&#xD130; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Autofluorescence &#xAE30;&#xC5EC; GFP &#xBC0F; EFI &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; autofluorescence&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 300-fold &#xC138;&#xD3EC; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131;. &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4;&#xB294; EFI&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; &#xC140; x 1 &#xB300; 10 (3) &#xC140; x 3. Autofluorescence&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC2A4;&#xD0DD;&#xC744; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC19;&#xC740; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD578;&#xB4DC;&#xD3F0; &#xBC88;&#xD638;&#xC758; 100 &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; &#xC27D;&#xAC8C; &#xAD6C;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xACFC; GFP &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD89;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC04;&#xC12D;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xCCB4; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xC2DD; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC885;&#xC591; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC804;&#xCCB4; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; &#xD5A5;&#xC0C1;.

La prote&iacute;na fluorescente verde (GFP) se ha utilizado para el seguimiento de la c&eacute;lula y expresi&oacute;n g&eacute;nica en superficiales o quir&uacute;rgico de la proyecci&oacute;n de imagen expuesta estructuras. Sin embargo, imagen murino in vivo a menudo est&aacute; limitada por varios factores, incluyendo la dispersi&oacute;n y atenuaci&oacute;n con profundidad y autofluorescencia superpuesta. Las se&ntilde;ales de la autofluorescencia tienen perfiles espectrales que difieren marcadamente del perfil espectral de emisi&oacute;n de GFP. El uso de la proyecci&oacute;n de imagen espectral permite separaci&oacute;n y cuantificaci&oacute;n de estas contribuciones a la se&ntilde;al de fluorescencia total visto en vivo por ponderaci&oacute;n perfiles conocidos componente puro. Separaci&oacute;n de se&ntilde;ales GFP y autofluorescencia relativas no es f&aacute;cilmente posible usando epifluorescente onda continua solo excitaci&oacute;n y emisi&oacute;n bandpass imaging (EFI). Para evaluar los umbrales de detecci&oacute;n mediante estos dos m&eacute;todos, ratones desnudos fueron inyectados por v&iacute;a subcut&aacute;nea con una serie de c&eacute;lulas GFP-expresi&oacute;n. Para EFI, se utilizaron optimizados de excitaci&oacute;n y emisi&oacute;n de filtros pasabanda. Debido a la capacidad de separar las contribuciones de la autofluorescencia de la se&ntilde;al de emisi&oacute;n mediante la proyecci&oacute;n de imagen espectral en comparaci&oacute;n con los aportes mixtos de GFP y autofluorescencia en la se&ntilde;al de emisi&oacute;n grabada por el sistema EFI, logramos una 300-fold mejora en el l&iacute;mite de detecci&oacute;n celular. El l&iacute;mite de detecci&oacute;n fue 3 x 10 (3) las c&eacute;lulas imagen espectral frente a 1 x 10 (6) c&eacute;lulas de EFI. A pesar de las contribuciones a pilas de imagen de autofluorescencia, un rango din&aacute;mico centesimal del n&uacute;mero de c&eacute;lulas en la misma imagen fue visualizado f&aacute;cilmente. Finalmente, la proyecci&oacute;n de imagen espectral fue capaz de separar la interferencia de la se&ntilde;al de la prote&iacute;na fluorescente roja de im&aacute;genes de la GFP y viceversa. Estos resultados demuestran la utilidad del enfoque en la detecci&oacute;n de niveles bajos de m&uacute;ltiples marcadores fluorescentes para aplicaciones en vivo de todo animal.

Mejora los l&iacute;mites de detecci&oacute;n de todo animal in vivo de las verde fluorescente que expresan la prote&iacute;na l&iacute;neas tumorales im&aacute;genes espectrales de la fluorescencia.

DNA &#x68C0;&#x6D4B;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9635;&#x5217;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x5FAE;&#x578B;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x8680;&#x523B;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x675F;&#x4E0A;&#x634F;&#x9020;&#x7684;&#x3002;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9635;&#x5217;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x5177;&#x6709; 700 nm &#x7279;&#x5F81;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x548C; 1 microm &#x4E2D;&#x5FC3;&#x5230;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x644A;&#x4F4D; (&#x7EA6; elements/mm(2)) 1x10(6) &#x6570;&#x7EC4;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5177;&#x6709; 300 nm &#x7279;&#x5F81;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x548C; 500 nm &#x4E2D;&#x5FC3;&#x5230;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7403;&#x573A; (4.6x10(6) &#x6570;&#x7EC4; elements/mm(2))&#x3002;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5B98;&#x80FD;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7403;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x6570;&#x7EC4;&#x662F;&#x6784;&#x9020;&#x548C;&#x7528;&#x4E8E;&#x5E73;&#x884C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7684; DNA &#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9635;&#x5217;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5404;&#x79CD;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x5305;&#x62EC;&#x82CF;&#x4E91;&#x91D1;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC; kurstaki &#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; &#x4E24;&#x79CD;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6218;&#x5242;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x5E8F;&#x5217;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BCA;&#x65AD;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x3002;

&#x6D77;&#x91CF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5149;&#x7EA4;&#x4F20;&#x611F;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x9635;&#x5217;&#x4E0A;&#x7684; DNA &#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Nanoarrays for DNA detection were fabricated on etched nanofiber bundles based on recently developed techniques for microscale arrays. Two different-sized nanoarrays were created: one with 700 nm feature sizes and a 1 microm center-to-center pitch (approximately 1x10(6) array elements/mm(2)) and one with 300 nm feature sizes and a 500 nm center-to-center pitch (4.6x10(6) array elements/mm(2)). A random, multiplexed array composed of oligonucleotide-functionalized nanospheres was constructed and used for parallel detection and analysis of fluorescently labeled DNA targets. We have used these arrays to detect a variety of target sequences including Bacillus thuringiensis kurstaki and vaccina virus sequences, two potential biowarfare agents, as well as interleukin-2 sequences, an immune system modulator that has been used for the diagnosis of HIV.

DNA detection on ultrahigh-density optical fiber-based nanoarrays.

NANOMATRICES pour la d&eacute;tection de l&#39;ADN ont &eacute;t&eacute; fabriqu&eacute;es sur des faisceaux de nanofibres grav&eacute; bas&eacute; sur des techniques r&eacute;cemment d&eacute;velopp&eacute;s pour les tableaux de micro-&eacute;chelle. Deux NANOMATRICES de diff&eacute;rentes tailles ont &eacute;t&eacute; cr&eacute;&eacute;s : un avec des tailles de fonctionnalit&eacute; 700 nm et un terrain de centre &agrave; Centre 1 microm (environ 1x10(6) tableau elements/mm(2)) et l&#39;autre avec des tailles de fonctionnalit&eacute; 300 nm et un terrain centre-&agrave;-centre de 500 nm (4.6x10(6) tableau elements/mm(2)). Un tableau al&eacute;atoire multiplex&eacute; compos&eacute; d&#39;oligonucl&eacute;otide fonctionnalis&eacute;s nanosph&egrave;res a &eacute;t&eacute; construit et utilis&eacute; pour d&eacute;tection parall&egrave;le et l&#39;analyse des cibles d&#39;ADN fluorescent &eacute;tiquet&eacute;s. Nous avons utilis&eacute; ces baies pour d&eacute;tecter une vari&eacute;t&eacute; de s&eacute;quences cibles notamment Bacillus thuringiensis kurstaki et s&eacute;quences du virus vaccina, deux agents potentiels de la guerre, ainsi que des s&eacute;quences de l&#39;interleukine-2, un modulateur du syst&egrave;me immunitaire qui a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour le diagnostic du VIH.

D&eacute;tection de l&#39;ADN sur ultra-haute densit&eacute; NANOMATRICES ax&eacute;e sur la fibre optique.

Nanoarrays f&uuml;r DNA-Detektion wurden auf Grundlage neu entwickelten Techniken f&uuml;r Microscale Arrays ge&auml;tzten Nanofaser-B&uuml;ndel fabriziert. Zwei unterschiedlich gro&szlig;e Nanoarrays wurden erstellt: eine mit Strukturgr&ouml;&szlig;en von 700 nm und einem 1 Microm-Mitte-Mitte-Pitch (etwa 1x10(6) Array elements/mm(2)) und eine mit Strukturgr&ouml;&szlig;en von 300 nm und 500 nm Mitte-Mitte Pitch (4.6x10(6) Array elements/mm(2)). Ein zuf&auml;lliger, Multiplex-Array bestehend aus Oligonukleotid-funktionalisierten TPOT wurde gebaut und f&uuml;r parallele Detektion und Analyse von Leuchtstoff beschrifteten DNA Ziele eingesetzt. Wir haben diese Arrays verwendet, eine Vielzahl von Ziel-Sequenzen Bacillus Thuringiensis Kurstaki und Impfung Virus Sequenzen sowie zwei potenzielle Biowarfare-Agenten und Interleukin-2-Sequenzen, einschlie&szlig;lich einen Modulator des Immunsystems erkennen, die f&uuml;r die Diagnose von HIV verwendet wurde.

DNA-Erkennung auf ultrahigh-density Lichtwellenleiter-basierten Nanoarrays.

Nanoarrays per la rilevazione del DNA sono stati fabbricati su fasci di nanofibra acidato basati su tecniche di recente sviluppati per le matrici di Microscala. Sono stati creati due nanoarrays di dimensioni diverse: uno con 700 nm caratteristica dimensioni e un campo da centro a centro 1 microm (circa elements/mm(2)) di matrice 1x10(6) e uno con 300 nm caratteristica dimensioni e un campo da centro a centro 500 nm (4.6x10(6) matrice elements/mm(2)). Una matrice casuale, multiplex composta di nanosfere funzionalizzati del oligonucleotide &egrave; stata costruita e utilizzata per parallela rilevazione e l&#39;analisi degli obiettivi del DNA fluorescente contrassegnati. Abbiamo utilizzato queste matrici per rilevare una variet&agrave; di sequenze target compreso Bacillus thuringiensis kurstaki e sequenze di virus vaccina, due potenziali agenti di guerra, cos&igrave; come sequenze di interleuchina-2, un modulatore del sistema immunitario che &egrave; stato utilizzato per la diagnosi di HIV.

Rilevazione del DNA su fornisce nanoarrays basata su fibra ottica.

Nanoarrays DNA &#x691C;&#x51FA;&#x7528;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6280;&#x8853;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AB;&#x30FC;&#x30DC;&#x30F3;&#x30CA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x675F;&#x306B;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E; nanoarrays &#x3067;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF1A; 1 &#x3064;&#x306E; 700 nm &#x6A5F;&#x80FD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068; 1 microm &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D4;&#x30C3;&#x30C1; (&#x7D04; 1x10(6) &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; elements/mm(2)) &#x3068; 1 &#x3064;&#x306E; 300 nm &#x6A5F;&#x80FD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068; 500 nm &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30D4;&#x30C3;&#x30C1; (4.6x10(6) &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; elements/mm(2))&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5B98;&#x80FD;&#x57FA;&#x5316;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A2;&#x306E;&#x4F5C;&#x66F2;&#x3001;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x591A;&#x91CD;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;&#x4E26;&#x5217;&#x691C;&#x51FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DNA &#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D0;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B9; kurstaki &#x3068; vaccina &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x8ECD;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 2 &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x8A3A;&#x65AD; HIV &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5909;&#x8ABF;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8D85;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5149;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; nanoarrays &#x4E0A;&#x306E; DNA &#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;

DNA &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; Nanoarrays&#xC5D0; &#xC5D0;&#xCE6D;&#xB41C; nanofiber &#xBC88;&#xB4E4; microscale &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC870;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; nanoarrays &#xC791;&#xC131;: 700 nm &#xAE30;&#xB2A5; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; 1 microm &#xC13C;&#xD130; &#xC13C;&#xD130; &#xD53C;&#xCE58; (&#xC57D; 1x10(6) &#xBC30;&#xC5F4; elements/mm(2)) &#xBC0F; 300 nm &#xAE30;&#xB2A5; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; 500 nm &#xC13C;&#xD130; &#xC13C;&#xD130; &#xD53C;&#xCE58; (4.6x10(6) &#xBC30;&#xC5F4; elements/mm(2)) &#xD558;&#xB098; &#xD558;&#xB098;. Oligonucleotide functionalized &#xB098;&#xB178; &#xAD6C;&#xC131; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xC784;&#xC758;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBCD1;&#xB82C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xACFC; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; DNA &#xBAA9;&#xD45C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC758; &#xC9C4;&#xB2E8;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; interleukin-2 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; thuringiensis kurstaki &#xBC0F; vaccina &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xB450; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; biowarfare &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC6A9;.

&#xB85C; &#xAD11;&#xC12C;&#xC720; &#xAE30;&#xBC18; nanoarrays&#xC5D0; DNA &#xAC80;&#xCD9C;.

Nanoarrays para la detecci&oacute;n de ADN fueron fabricados en paquetes de nanofibras grabado basados en t&eacute;cnicas recientemente desarrolladas para matrices de microescala. Dos nanoarrays de diferentes tama&ntilde;os fueron creados: uno con tama&ntilde;os de caracter&iacute;stica de 700 nm y un tono de 1 microm centro-a-centro (aproximadamente elements/mm(2)) de la matriz de 1x10(6) y uno con tama&ntilde;os de caracter&iacute;stica de 300 nm y un paso de centro-a-centro 500 de nm (elements/mm(2)) de la matriz de 4.6x10(6). Una matriz aleatoria multiplexada compuesta del oligonucle&oacute;tido-funcionalizados nanoesferas fue construida y utilizada para paralela detecci&oacute;n y an&aacute;lisis de fluorescencia marcados objetivos de ADN. Hemos utilizado estos arreglos de discos para detectar una variedad de secuencias Diana Bacillus thuringiensis kurstaki y secuencias de virus vaccina, dos potenciales agentes de guerra biol&oacute;gica, as&iacute; como secuencias de interleucina-2, un modulador del sistema inmunol&oacute;gico que se ha utilizado para el diagn&oacute;stico de VIH.

Detecci&oacute;n de ADN en ultrahigh-density nanoarrays basadas en fibra &oacute;ptica.

&#x8457;&#x8005;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8840;&#x6DB2;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x5B9F;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x640D;&#x50B7;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5149;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52D5;&#x8108;&#x58C1;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x306E;&#x8840;&#x3002;

&#xC800;&#xC790; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xD3C9;&#xAC00;&#xB97C; &#xBD84;&#xC790; &#xAD11;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xCD08;&#xC810; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xC190;&#xC0C1; &#xD6C4; &#xC950; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5;&#xC774;&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xD608;&#xC561;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC591;&#xC801; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xC218;&#xC220; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC790; &#xC601;&#xC0C1; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xBCBD;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC758; &#xD53C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574;.

Para evaluar una normalizaci&oacute;n de autor desarrollados algoritmo para la proyecci&oacute;n de imagen cuantitativa del &oacute;ptico molecular sondas a trav&eacute;s de la sangre y, en la aorta de rata despu&eacute;s de lesi&oacute;n a&oacute;rtica focal, evaluar la factibilidad de medir la actividad de las proteasas mediante este m&eacute;todo.

Imagen molecular basadas en fluorescencia cuantitativa endovascular mediante sangre de inflamaci&oacute;n de la pared arterial.

&#x8BC4;&#x4EF7;&#x4F5C;&#x8005;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x89C4;&#x8303;&#x5316;&#x7B97;&#x6CD5;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x5206;&#x5B50;&#x63A2;&#x9488;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3001; &#x91CD;&#x70B9;&#x7684;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x5F71;&#x50CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x6DB2;&#x7684;&#x52A8;&#x8109;&#x58C1;&#x708E;&#x75C7;&#x3002;

To evaluate an author-developed normalization algorithm for quantitative imaging of optical molecular probes through blood and to assess, in the rat aorta after focal aortic injury, the feasibility of measuring protease activity by using this method.

Quantitative endovascular fluorescence-based molecular imaging through blood of arterial wall inflammation.

Pour &eacute;valuer une normalisation auteur avanc&eacute;s algorithme pour l&#39;imagerie quantitative d&#39;optique mol&eacute;culaire des sondes par le sang et d&#39;&eacute;valuer, dans l&#39;aorte de rat apr&egrave;s une l&eacute;sion aortique focale, la possibilit&eacute; de mesurer l&#39;activit&eacute; de la prot&eacute;ase en utilisant cette m&eacute;thode.

Endovasculaire quantitatifs bas&eacute;s sur la fluorescence l&#39;imagerie mol&eacute;culaire par le sang de l&#39;inflammation de la paroi art&eacute;rielle.

Ein Autor entwickelten Normalisierung bewerten Sonden Algorithmus f&uuml;r quantitative Imaging optischer Molekulare durch Blut und, in der Ratte-Aorta nach fokalen Verletzung der Aorta, die Messung der Protease-Aktivit&auml;t mithilfe dieser Methode Durchf&uuml;hrbarkeit.

Quantitative endovaskul&auml;re Fluoreszenz-basierte Molekulare Bildgebung durch Blut der Arterienwand Entz&uuml;ndung.

Per valutare un autore sviluppato normalizzazione algoritmo per l&#39;imaging quantitativo di ottica molecolare sonde attraverso il sangue e a valutare, nell&#39;aorta di ratto dopo lesioni focali dell&#39;aorta, la fattibilit&agrave; della misura attivit&agrave; proteasica utilizzando questo metodo.

Endovascolare quantitative basate sulla fluorescenza imaging molecolare attraverso il sangue di infiammazione della parete arteriosa.

&#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xC554; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xCE21;&#xC815; &#xC18C;&#xC124; spectrally &#xC77C;&#xCE58; &#xB4C0;&#xC5BC; fluorophore &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC218;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xB300;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD6C4;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; fluorophore&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC804;&#xB2EC;&#xACFC; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBE5B;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC870;&#xC9C1; &#xD761;&#xC218; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;.&#xAC01; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; spectrally &#xC77C;&#xCE58; &#xD558; &#xC0C1;&#xC218; (&#xBE44; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;) fluorophore&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC804;&#xB2EC;&#xACFC; &#xC870;&#xC9C1; &#xD761;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; fluorophore&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xCE21;&#xC815; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC804;&#xB2EC;&#xACFC; &#xC870;&#xC9C1; &#xD761;&#xC218; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC815;.

&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x75C5;&#x75C7;&#x4ECE;&#x5FC3;&#x810F;&#x75C5;&#x4E0E;&#x764C;&#x75C7;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x5339;&#x914D;&#x53CC;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x6210;&#x50CF;&#x4EEA;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x90A3;&#x540E;&#x751F;&#x7269;&#x9776;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8;&#x5176;&#x8367;&#x5149;&#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x8BB0;&#x5F55;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4E5F;&#x53D7;&#x5230;&#x5176;&#x4ED6;&#x56E0;&#x7D20;&#x5305;&#x62EC;&#x6210;&#x50CF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5438;&#x6536;&#x5149;&#x6FC0;&#x52B1;&#x548C;&#x5E9F;&#x6C14;&#x6392;&#x653E;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x4ECE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x5E73;&#x53F0;&#x4E0A;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5149;&#x8C31;&#x5339;&#x914D;&#x7684;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;&#x975E;&#x53EF;&#x6FC0;&#x6D3B;) &#x8367;&#x5149;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x6B63;&#x786E;&#x3002;&#x4ECE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x8367;&#x5149;&#x88AB;&#x5206;&#x9694;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x63A2;&#x9488;&#x4EA4;&#x8D27;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5438;&#x6536;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x6821;&#x6B63;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

Proteases play important roles in a variety of pathologies from heart disease to cancer. Quantitative measurement of protease activity is possible using a novel spectrally matched dual fluorophore probe and a small animal lifetime imager. The recorded fluorescence from an activatable fluorophore, one that changes its fluorescent amplitude after biological target interaction, is also influenced by other factors including imaging probe delivery and optical tissue absorption of excitation and emission light.Fluorescence from a second spectrally matched constant (non-activatable) fluorophore on each nanoparticle platform can be used to correct for both probe delivery and tissue absorption. The fluorescence from each fluorophore is separated using fluorescence lifetime methods.

Quantitative Measurement of Protease-Activity with Correction of Probe Delivery and Tissue Absorption Effects.

Prot&eacute;ases jouent un r&ocirc;le important dans une vari&eacute;t&eacute; de pathologies et de maladies cardiaques au cancer. Mesure quantitative de l&#39;activit&eacute; de la prot&eacute;ase est possible en utilisant une sonde spectralement appari&eacute;s fluorophore double roman et un imageur de petite vie animale. La fluorescence enregistr&eacute;e d&#39;un fluorophore activable, celle qui modifie son amplitude fluorescent apr&egrave;s interaction cible biologique, est aussi influenc&eacute;e par d&#39;autres facteurs, y compris la livraison de sonde d&#39;imagerie et d&#39;absorption optique de tissu d&#39;excitation et &eacute;mission de lumi&egrave;re.La fluorescence d&#39;un second fluorophore spectralement appari&eacute;s constante (non-activable) sur chaque plate-forme de nanoparticules peut servir &agrave; corriger pour livraison de sonde et absorption du tissu. La fluorescence de chaque mol&eacute;cule est s&eacute;par&eacute;e &agrave; l&#39;aide de m&eacute;thodes de dur&eacute;e de vie de fluorescence.

Mesure quantitative de l&#39;activit&eacute; de la prot&eacute;ase avec Correction de sonde de livraison et les effets de l&#39;Absorption tissulaire.

Proteasen spielen wichtige Rollen in einer Vielzahl von Pathologien von Herzkrankheiten, Krebs. Quantitative Messung der Protease-Aktivit&auml;t ist m&ouml;glich mit einer neuartigen Spektral &uuml;bereinstimmenden dual Fluorophor-Sonde und einer kleinen tierischen Lebens-Imager. Die aufgezeichnete Fluoreszenz aus einem aktivierbaren Fluorophor, einer, der seine fluoreszierende Amplitude nach biologischen Ziel Interaktion, &auml;ndert wird auch durch andere Faktoren einschlie&szlig;lich bildgebenden Sonde Lieferung und optische Gewebe Absorption des Anregungs- und Lichts beeinflusst.Fluoreszenz von einer zweiten (nicht aktivierbar) spektral &uuml;bereinstimmende Konstante Fluorophor auf jeder Plattform Nanopartikel kann verwendet werden, um Sonde Lieferung und Gewebe Resorption zu korrigieren. Die Fluoreszenz von jedem Fluorophor ist getrennt mit Fluoreszenz-Lebensdauer-Methode.

Quantitative Messung der Protease-Aktivit&auml;t mit Korrektur der Sonde Lieferung und Gewebe Absorption Effekte.

Le proteasi svolgono un ruolo importante in una variet&agrave; di patologie da malattie cardiache, cancro. Misura quantitativa dell&#39;attivit&agrave; proteasica &egrave; possibile utilizzando una sonda spettralmente abbinati fluoroforo dual romanzo e un imager piccola vita animale. La fluorescenza registrata da un fluoroforo attivabile, uno che cambia l&#39;ampiezza fluorescente dopo interazione biologica bersaglio, &egrave; influenzata anche da altri fattori, tra cui consegna sonda imaging e assorbimento ottico tessuto della luce di eccitazione e di emissione.Fluorescenza da un secondo fluoroforo spettralmente abbinati costante (non attivabile) su ogni piattaforma nanoparticella pu&ograve; essere utilizzato per correggere la sonda mandata sia di assorbimento dei tessuti. La fluorescenza da ogni fluoroforo &egrave; separata utilizzando metodi di vita di fluorescenza.

Misura quantitativa dell&#39;attivit&agrave; proteasica con correzione di sonda di mandata e gli effetti di assorbimento dei tessuti.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5FC3;&#x81D3;&#x75C5;&#x304B;&#x3089;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x6574;&#x5408;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; fluorophore &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x5C0F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; fluorophore&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x304B;&#x3089;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x306F;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3084;&#x52B1;&#x8D77;&#x3068;&#x653E;&#x5C04;&#x5149;&#x306E;&#x5149;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5438;&#x53CE;&#x306A;&#x3069;&#x4ED6;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x6574;&#x5408;&#x5B9A;&#x6570; (&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;) fluorophore &#x5404;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x7D44;&#x7E54;&#x5438;&#x53CE;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404; fluorophore &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x914D;&#x4FE1;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x5438;&#x53CE;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x88DC;&#x6B63;&#x3068;&#x306F;&#x3002;

Proteasas juegan papeles importantes en una variedad de patolog&iacute;as de enfermedades del coraz&oacute;n, c&aacute;ncer. Para la medici&oacute;n cuantitativa de la actividad de la proteasa es posible usando una sonda de fluor&oacute;foro dual espectralmente emparejado novela y un sensor de vida animal peque&ntilde;o. La fluorescencia grabada de un fluor&oacute;foro activatable, uno que cambia su amplitud fluorescente tras la interacci&oacute;n del destino biol&oacute;gico, tambi&eacute;n se ve influida por otros factores, incluyendo entrega im&aacute;genes de sonda y absorci&oacute;n del tejido &oacute;ptico de excitaci&oacute;n y emisi&oacute;n de luz.Fluorescencia de un fluor&oacute;foro espectralmente emparejado constante (no-activatable) segundo en cada plataforma de nanopart&iacute;culas puede utilizarse para corregir para entrega de sonda y absorci&oacute;n del tejido. La fluorescencia de cada fluor&oacute;foro se separa mediante m&eacute;todos de por vida de fluorescencia.

Para la medici&oacute;n cuantitativa de la actividad de la proteasa con correcci&oacute;n de la punta de prueba de entrega y efectos de la absorci&oacute;n del tejido.

&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x4F7F;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x521D;&#x6B65;&#x610F;&#x89C1;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269; &#xFF1B; &#x6311;&#x6218;&#x957F;&#x671F;&#x6301;&#x6709;&#x7684;&#x4FE1;&#x5FF5;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x5DF2;&#x5448;&#x73B0;&#x91CD;&#x70B9;&#x7684;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x54CD;&#x5E94;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x4EA4;&#x4E92;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7ED3;&#x5408;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x9677;&#x9631;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5149;&#x5B66;&#x954A;&#x5B50;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7CBE;&#x81F4;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x5176;&#x653E;&#x7F6E;&#x5728;&#x9760;&#x8FD1;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7531;&#x8FD0;&#x7B97;&#x7B26;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x805A;&#x5408;&#x73E0;&#x548C;&#x6D3B;&#x3001; &#x81F4;&#x75C5;&#x6709;&#x673A;&#x4F53; (&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x548C;&#x9709;&#x83CC;) &#x5149;&#x88AB;&#x56F0;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x7834;&#x574F;&#x6027;&#x529B;&#x91CF;&#x548C;&#x79FB;&#x52A8;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x541E;&#x566C;&#x540E;&#x88AB;&#x56F0;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x5149;&#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7535;&#x5F71;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5177;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#xFF0C;&#x6297; CD3 &#x805A;&#x5408;&#x73E0;&#x88AB;&#x4E5F;&#x88AB;&#x56F0;&#x548C;&#x7A97;&#x4F53;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x64CD;&#x63A7;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5EF6;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x8FD8;&#x83B7;&#x5F97;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6D3B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7CBE;&#x7EC6;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6355;&#x83B7;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6781;&#x5C0F;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x548C;&#x53EF;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F3A;&#x5927;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x65E9;&#x671F;&#x5148;&#x5929;&#x548C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x9677;&#x9631;&#x3002;

The application of live cell imaging allows direct visualization of the dynamic interactions between cells of the immune system. Some preliminary observations challenge long-held beliefs about immune responses to microorganisms; however, the lack of spatial and temporal control between the phagocytic cell and microbe has rendered focused observations into the initial interactions of host response to pathogens difficult. This paper outlines a method that advances live cell imaging by integrating a spinning disk confocal microscope with an optical trap, also known as an optical tweezer, in order to provide exquisite spatial and temporal control of pathogenic organisms and place them in proximity to host cells, as determined by the operator. Polymeric beads and live, pathogenic organisms (Candida albicans and Aspergillus fumigatus) were optically trapped using non-destructive forces and moved adjacent to living cells, which subsequently phagocytosed the trapped particle. High resolution, transmitted light and fluorescence-based movies established the ability to observe early events of phagocytosis in living cells. To demonstrate the broad applicability of this method to immunological studies, anti-CD3 polymeric beads were also trapped and manipulated to form synapses with T cells in vivo, and time-lapse imaging of synapse formation was also obtained. By providing a method to exert fine control of live pathogens with respect to immune cells, cellular interactions can be captured by fluorescence microscopy with minimal perturbation to cells and can yield powerful insight into early responses of innate and adaptive immunity.

Control and manipulation of pathogens with an optical trap for live cell imaging of intercellular interactions.

L&#x26;#39;application de l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes permet la visualisation directe des interactions dynamiques entre les cellules du syst&#xE8;me immunitaire. Quelques observations pr&#xE9;liminaires d&#xE9;fi &#xE0; long croyances au sujet de la r&#xE9;ponse immunitaire &#xE0; des micro-organismes, mais le manque de contr&#xF4;le spatial et temporel entre la cellule phagocytaire et microbe a rendus port&#xE9; observations sur les interactions initiales de r&#xE9;ponse de l&#x26;#39;h&#xF4;te aux agents pathog&#xE8;nes difficiles. Le pr&#xE9;sent document d&#xE9;crit une m&#xE9;thode que les progr&#xE8;s vivre l&#x26;#39;imagerie cellulaire par l&#x26;#39;int&#xE9;gration d&#x26;#39;un microscope confocal &#xE0; disque rotatif un pi&#xE8;ge optique, &#xE9;galement connu sous le nom une pince optique, afin de fournir exquise de contr&#xF4;le spatial et temporel d&#x26;#39;organismes pathog&#xE8;nes et de les placer &#xE0; proximit&#xE9; des cellules h&#xF4;tes, tel que d&#xE9;termin&#xE9; par l&#x26;#39;op&#xE9;rateur. Les granules et les organismes vivants pathog&#xE8;nes (Candida albicans et Aspergillus fumigatus) ont &#xE9;t&#xE9; captur&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide optiquement non-destructrices des forces et a d&#xE9;m&#xE9;nag&#xE9; &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; de cellules vivantes, qui ont ensuite phagocyt&#xE9;es la particule pi&#xE9;g&#xE9;e. Haute r&#xE9;solution, transmise films l&#xE9;gers et bas&#xE9; sur la fluorescence cr&#xE9;&#xE9; la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;observer les &#xE9;v&#xE9;nements pr&#xE9;coces de la phagocytose dans les cellules vivantes. Pour d&#xE9;montrer la large applicabilit&#xE9; de cette m&#xE9;thode pour des &#xE9;tudes immunologiques, anti-CD3 perles polym&#xE8;res ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; pris au pi&#xE8;ge et manipul&#xE9;es pour former des synapses avec les cellules T in vivo, et imagerie time-lapse de formation de la synapse ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; obtenues. En fournissant une m&#xE9;thode d&#x26;#39;exercer un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis de pathog&#xE8;nes vivants en ce qui concerne les cellules immunitaires, les interactions cellulaires peuvent &#xEA;tre captur&#xE9;s par microscopie &#xE0; fluorescence avec une perturbation minimale pour les cellules et peut donner un aper&#xE7;u puissante dans les r&#xE9;ponses au d&#xE9;but de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e et adaptative.

Contr&#xF4;le et la manipulation des agents pathog&#xE8;nes d&#x26;#39;un pi&#xE8;ge optique pour l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes des interactions intercellulaires

Die Anwendung von live Cell Imaging erm&ouml;glicht direkte Visualisierung der dynamischen Wechselwirkungen zwischen Zellen des Immunsystems. Einige Vorbemerkungen fordern lang gehegte &Uuml;berzeugungen &uuml;ber Immunantworten zu Mikroorganismen; Allerdings hat die mangelnde r&auml;umliche und zeitliche Kontrolle zwischen dem phagozytische Zelle und Mikrobe gezielte Beobachtungen in die ersten Interaktionen der Wirtsantwort gegen Krankheitserreger schwierig gerendert. Dieses Papier legt eine Methode, dass Fortschritte Zelle Darstellung Leben durch die Integration eines drehenden Scheibe Konfokales Mikroskops mit einer optischen Falle, auch eine optische Pinzette, um exquisite r&auml;umliche und zeitliche Steuerung der pathogenen Organismen und legen Sie sie in der N&auml;he Wirtszellen, wie vom Betreiber bestimmt. Polymer Perlen und live, pathogenen Organismen (Candida Albicans und Aspergillus Fumigatus) wurden optisch gefangen, mittels nicht-destruktive Kr&auml;fte und angrenzend an lebenden Zellen, die anschlie&szlig;end das aufgefangene Partikel phagozytierte verschoben. Hohe Aufl&ouml;sung, &uuml;bertrug Licht und Fluoreszenz basierenden Filmen etabliert die F&auml;higkeit, Fr&uuml;he Veranstaltungen der Phagozytose in lebenden Zellen beobachten. Um die breite Anwendbarkeit dieser Methode auf immunologische Studien zu demonstrieren, wurden Anti-CD3 Polymer Perlen auch gefangen in Form Synapsen mit T-Zellen in vivo manipuliert und Zeitraffer Bildgebung Synapse-Formation wurde auch erhalten. Durch die Bereitstellung einer Methode, um feine Kontrolle Leben Krankheitserreger in Bezug auf Immunzellen, zellul&auml;re Interaktionen durch Fluoreszenzmikroskopie mit minimaler St&ouml;rung auf Zellen erfasst werden k&ouml;nnen und leistungsf&auml;hige Einblick in fr&uuml;hen Antworten der angeborenen und erworbenen Immunit&auml;t ergeben k&ouml;nnen.

Kontrolle und Manipulation von Krankheitserregern mit einer optischen Falle f&uuml;r live Cell Imaging interzellul&auml;re Wechselwirkungen.

L&#39;applicazione di imaging cellulare diretta permette la visualizzazione diretta delle interazioni dinamiche tra le cellule del sistema immunitario. Alcune osservazioni preliminari sfidano lunga convinzioni sulla risposta immunitaria ai microrganismi; Tuttavia, la mancanza di controllo spaziale e temporale tra la cellula fagocitaria e microbo ha reso difficile osservazioni mirate nelle interazioni iniziali della risposta ospite ad agenti patogeni. Questo documento delinea un metodo che anticipi live imaging cellulare integrando un microscopio confocale del disco rotante con un&#39;ottica trappola, noto anche come una pinzetta ottica, al fine di fornire squisito controllo spaziale e temporale degli organismi patogeni e posizionarli in prossimit&agrave; di cellule ospiti, come determinato dall&#39;operatore. PERLINE polimerici e organismi vivi, patogeni (Candida albicans e Aspergillus fumigatus) erano intrappolati otticamente usando le forze non-distruttive e spostato adiacenti alle cellule viventi, che successivamente phagocytosed la particella intrappolata. Luce emessa ad alta risoluzione e filmati basati sulla fluorescenza stabilirono la possibilit&agrave; di osservare i primi eventi della fagocitosi in cellule viventi. Per dimostrare l&#39;ampia applicabilit&agrave; di questo metodo per studi immunologici, anti-CD3 polimerici perline erano anche intrappolati e manipolati a forma sinapsi con le cellule T in vivo, e time-lapse imaging di formazione sinapsi anche &egrave; stato ottenuto. Fornendo un metodo per esercitare un controllo accurato del live patogeni nei confronti di cellule del sistema immunitario, interazioni cellulari possono essere catturate da microscopia di fluorescenza con minima perturbazione alle cellule e possono produrre potente intuizione prime risposte dell&#39;immunit&agrave; innata e adattiva.

Controllo e la manipolazione di agenti patogeni con un&#39;ottica trappola per l&#39;acquisizione diretta delle cellule delle interazioni intercellulari.

&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x7684;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x9577;&#x5E74;&#x306E;&#x4FE1;&#x5FF5;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D76;&#x5999;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5149;&#x5B66;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x3068;&#x30B9;&#x30D4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;as&#x6F14;&#x7B97;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3084;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x751F;&#x7269;&#xFF08;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF09;&#x306F;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7834;&#x58CA;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x4F7F;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x8CAA;&#x98DF;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x5149;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3078;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6297;CD3&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x3001;in 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La aplicaci&#xF3;n de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas permite la visualizaci&#xF3;n directa de las interacciones din&#xE1;micas entre las c&#xE9;lulas del sistema inmune. Algunas observaciones preliminares desafiar a las viejas creencias acerca de la respuesta inmune a los microorganismos, sin embargo, la falta de control espacial y temporal entre la c&#xE9;lula fagoc&#xED;tica y el microbio ha hecho observaciones se centr&#xF3; en las interacciones iniciales de la respuesta del hu&#xE9;sped a los pat&#xF3;genos dif&#xED;ciles. Este documento describe un m&#xE9;todo que avanza vivo im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas mediante la integraci&#xF3;n de un microscopio confocal de disco giratorio con una trampa &#xF3;ptica, tambi&#xE9;n conocida como una pinza &#xF3;ptica, a fin de proporcionar un exquisito control espacial y temporal de organismos pat&#xF3;genos y colocarlos en la proximidad de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped, seg&#xFA;n lo determinado por el operador. Perlas de pol&#xED;mero y de los organismos vivos, pat&#xF3;genos (Candida albicans y Aspergillus fumigatus) quedaron atrapados &#xF3;pticamente usando no destructivas fuerzas y se traslad&#xF3; junto a las c&#xE9;lulas vivas, que posteriormente fagocitados la part&#xED;cula atrapada. De alta resoluci&#xF3;n, transmite pel&#xED;culas de luz y fluorescencia basada en establecer la capacidad de observar los acontecimientos iniciales de la fagocitosis de las c&#xE9;lulas vivas. Para demostrar la amplia aplicabilidad de este m&#xE9;todo para los estudios inmunol&#xF3;gicos, anti-CD3 perlas polim&#xE9;ricas fueron atrapados tambi&#xE9;n y se manipula para formar sinapsis con las c&#xE9;lulas T in vivo, y el tiempo de im&#xE1;genes a intervalos de formaci&#xF3;n de sinapsis se obtuvo tambi&#xE9;n. Al proporcionar un m&#xE9;todo para ejercer un control preciso de pat&#xF3;genos vivos con respecto a las c&#xE9;lulas inmunes, las interacciones celulares pueden ser capturados por microscop&#xED;a de fluorescencia con un m&#xED;nimo de perturbaci&#xF3;n a las c&#xE9;lulas y pueden producir una poderosa comprensi&#xF3;n de las respuestas iniciales de la inmunidad innata y adaptativa.

Control y la manipulaci&#xF3;n de pat&#xF3;genos con una trampa &#xF3;ptica de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas de las interacciones intercelulares

Fagocitaria risposte sono fondamentali per la difesa ospite efficace contro patogeni fungini opportunisti. Il phagosomal contenuto di esempio i macrofagi e orchestrare la risposta immunitaria innata. Recettore toll-like 9 (TLR9) riconosce unmethylated CpG DNA e viene attivata dal DNA fungino. Qui dimostriamo che innesco specifico di TLR9 reclutamento alla membrana phagosomal dei macrofagi &egrave; una caratteristica conservata di funghi di origini filogenetiche distinte, tra cui la Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Malassezia furfur e Cryptococcus neoformans. La capacit&agrave; di innescare phagosomal TLR9 assunzione non &egrave; stata colpita da una perdita dell&#39;integrit&agrave; di attuabilit&agrave; o parete cellulare fungina. Deficit di TLR9 &egrave; stato collegato a maggiore resistenza a candidosi murino e restrizione della crescita fungina in vivo. Macrofagi manca TLR9 dimostrano una capacit&agrave; paragonabile per fagocitosi e la normale maturazione phagosomal rispetto al wild-type macrofagi. Mostriamo ora che TLR9 deficit aumenta la produzione di macrofagi fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-&alpha;) in risposta a c. albicans e Saccharomyces cerevisiae, indipendente della vitalit&agrave; del lievito. L&#39;aumento della produzione di TNF-&alpha; &egrave; stato reversibile di complementazione funzionale del gene TLR9, confermando che TLR9 era responsabile della modulazione negativa della risposta delle citochine. Coerentemente, TLR9 deficit migliorata la risposta effettrice macrofago aumentando la produzione di ossido nitrico macrofago. Inoltre, attivit&agrave; microbicida contro la c. albicans e Saccharomyces cerevisiae &egrave; stato pi&ugrave; efficiente nel TLR9 macrofagi knockout (TLR9KO) che nei macrofagi wild-type. In conclusione, i nostri dati dimostrano che TLR9 &egrave; compartimentato selettivamente a phagosomes fungine e modula negativamente le funzioni effettrici antimicotico macrofago. I nostri dati supportano un modello in cui orchestrazione dell&#39;immunit&agrave; innata antimicotico comporta una complessa interazione di combinazioni ligando fungine, riarrangiamenti di macchinari di host cell e cooperazione TLR e antagonismo.

Recettore toll-like 9 modula la funzione antimicotica effettrici dei macrofagi durante il riconoscimento innato di Candida albicans e Saccharomyces cerevisiae.

&#x541E;&#x566C;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x673A;&#x4F1A;&#x4E3B;&#x4E49;&#x75C5;&#x539F;&#x771F;&#x83CC;&#x6709;&#x6548;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x672C; phagosomal &#x5185;&#x5BB9;&#x548C;&#x7F16;&#x6392;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; 9 (TLR9) &#x627F;&#x8BA4; unmethylated &#x7684; CpG DNA&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x7531;&#x771F;&#x83CC; DNA &#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5177;&#x4F53;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; phagosomal &#x819C; TLR9 &#x62DB;&#x52DF;&#x662F;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x8D77;&#x6E90;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x3001; &#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x3001; &#x7CE0;&#x79D5;&#x9A6C;&#x62C9;&#x8272;&#x83CC;&#x548C;&#x65B0;&#x751F;&#x9690;&#x7403;&#x83CC;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x89E6;&#x53D1; phagosomal TLR9 &#x62DB;&#x52DF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4E0D;&#x53D7;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;TLR9 &#x7F3A;&#x4E86;&#x6302;&#x94A9;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x62B5;&#x6297;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5411;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F; TLR9 &#x5C55;&#x793A;&#x5BB9;&#x91CF;&#x76F8;&#x5F53;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38; phagosomal &#x6210;&#x719F;&#x76F8;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x663E;&#x793A; TLR9 &#x7F3A;&#x9677;&#x589E;&#x52A0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; (TNF-&alpha;) &#x751F;&#x4EA7;&#x54CD;&#x5E94; C.&#x767D;&#x8272;&#x548C;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x9175;&#x6BCD;&#x6D3B;&#x529B;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x751F;&#x4EA7;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x662F;&#x53EF;&#x9006;&#x7684; TLR9 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4; TLR9 &#x8D1F;&#x8D23;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8D1F;&#x8C03;&#x8282;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x3002;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5982;&#x4E00;&#xFF0C;TLR9 &#x865A;&#x589E;&#x5F3A;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6548;&#x5E94;&#x54CD;&#x5E94;&#x7531;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x751F;&#x4EA7;&#x65E5;&#x76CA;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53CD;&#x5BF9; C.&#x767D;&#x8272;&#x548C;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6BD4;&#x7684;&#x6316;&#x7A7A;&#x6548;&#x679C; (TLR9KO) &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; TLR9 &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x66F4;&#x9AD8;&#x4E86;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; TLR9 &#x88AB;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x5BF9;&#x771F;&#x83CC; phagosomes &#x548C;&#x6D88;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x4E1A;&#x52A1;&#x6D41;&#x7A0B;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x914D;&#x4F53;&#x7EC4;&#x5408;&#x3001; &#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x68B0;&#x91CD;&#x6392;&#xFF0C;&#x548C;&#x5355;&#x53CD;&#x5408;&#x4F5C;&#x548C;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; 9 &#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x548C;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x5929;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x8BC6;&#x522B;&#x8C03;&#x8282;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Phagocytic responses are critical for effective host defense against opportunistic fungal pathogens. Macrophages sample the phagosomal content and orchestrate the innate immune response. Toll-like receptor 9 (TLR9) recognizes unmethylated CpG DNA and is activated by fungal DNA. Here we demonstrate that specific triggering of TLR9 recruitment to the macrophage phagosomal membrane is a conserved feature of fungi of distinct phylogenetic origins, including Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Malassezia furfur, and Cryptococcus neoformans. The capacity to trigger phagosomal TLR9 recruitment was not affected by a loss of fungal viability or cell wall integrity. TLR9 deficiency has been linked to increased resistance to murine candidiasis and to restriction of fungal growth in vivo. Macrophages lacking TLR9 demonstrate a comparable capacity for phagocytosis and normal phagosomal maturation compared to wild-type macrophages. We now show that TLR9 deficiency increases macrophage tumor necrosis factor alpha (TNF-Î±) production in response to C. albicans and S. cerevisiae, independent of yeast viability. The increase in TNF-Î± production was reversible by functional complementation of the TLR9 gene, confirming that TLR9 was responsible for negative modulation of the cytokine response. Consistently, TLR9 deficiency enhanced the macrophage effector response by increasing macrophage nitric oxide production. Moreover, microbicidal activity against C. albicans and S. cerevisiae was more efficient in TLR9 knockout (TLR9KO) macrophages than in wild-type macrophages. In conclusion, our data demonstrate that TLR9 is compartmentalized selectively to fungal phagosomes and negatively modulates macrophage antifungal effector functions. Our data support a model in which orchestration of antifungal innate immunity involves a complex interplay of fungal ligand combinations, host cell machinery rearrangements, and TLR cooperation and antagonism.

Toll-like receptor 9 modulates macrophage antifungal effector function during innate recognition of Candida albicans and Saccharomyces cerevisiae.

R&#xE9;ponses phagocytaires sont essentielles pour la d&#xE9;fense d&#x26;#39;accueil efficace contre les pathog&#xE8;nes fongiques opportunistes. Les macrophages d&#xE9;guster le contenu du phagosome et orchestrer la r&#xE9;ponse immunitaire inn&#xE9;e. Toll-like receptor 9 (TLR9) reconna&#xEE;t l&#x26;#39;ADN CpG non m&#xE9;thyl&#xE9;s et activ&#xE9;e par l&#x26;#39;ADN fongique. Nous d&#xE9;montrons ici que d&#xE9;clenchement sp&#xE9;cifique du TLR9 de recrutement &#xE0; la membrane du macrophage phagosome est une caract&#xE9;ristique conserv&#xE9;e de champignons d&#x26;#39;origines phylog&#xE9;n&#xE9;tiques distinctes, y compris Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Malassezia furfur, et Cryptococcus neoformans. La capacit&#xE9; de d&#xE9;clencher phagosomale TLR9 de recrutement n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9; par une perte de viabilit&#xE9; des champignons ou &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; des parois cellulaires. TLR9 d&#xE9;ficit a &#xE9;t&#xE9; li&#xE9;e &#xE0; une r&#xE9;sistance accrue &#xE0; la candidose murin et de restriction de la croissance fongique in vivo. Les macrophages d&#xE9;pourvus TLR9 preuve d&#x26;#39;une capacit&#xE9; comparable pour la phagocytose et la maturation du phagosome normale par rapport &#xE0; la souche sauvage de type macrophages. Nous montrons maintenant que TLR9 d&#xE9;ficit augmente macrophages facteur de n&#xE9;crose tumorale alpha (TNF-&#x3B1;) de production en r&#xE9;ponse &#xE0; C. albicans et S. cerevisiae, ind&#xE9;pendante de la viabilit&#xE9; des levures. L&#x26;#39;augmentation de TNF-&#x3B1; la production &#xE9;tait r&#xE9;versible par compl&#xE9;mentation fonctionnelle du g&#xE8;ne TLR9, confirmant que TLR9 &#xE9;tait responsable de la modulation n&#xE9;gative de la r&#xE9;ponse des cytokines. Constamment, TLR9 d&#xE9;ficit am&#xE9;lior&#xE9; la r&#xE9;ponse des macrophages effecteur en augmentant les macrophages production d&#x26;#39;oxyde nitrique. En outre, l&#x26;#39;activit&#xE9; microbicide contre C. albicans et S. cerevisiae a &#xE9;t&#xE9; plus efficace dans TLR9 knock-out (TLR9KO) que dans les macrophages de type sauvage macrophages. En conclusion, nos donn&#xE9;es montrent que TLR9 est compartiment&#xE9; de mani&#xE8;re s&#xE9;lective &#xE0; phagosomes fongiques et module n&#xE9;gativement macrophages antifongiques fonctions effectrices. Nos donn&#xE9;es appuient un mod&#xE8;le dans lequel l&#x26;#39;orchestration de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e antifongique implique une interaction complexe de combinaisons de ligands fongiques, des r&#xE9;arrangements de la cellule h&#xF4;te des machines, et de la coop&#xE9;ration TLR et d&#x26;#39;antagonisme.

Toll-like Receptor 9 Modulation de macrophages Fonction antifongique Effector Pendant reconnaissance inn&#xE9;e de Candida albicans et de Saccharomyces cerevisiae

Phagozytische Antworten sind entscheidend f&uuml;r die effektive Host Verteidigung gegen opportunistische pilzartigen Krankheitserregern. Makrophagen Beispielinhalt der phagosomal und der angeborenen Immunantwort zu orchestrieren. Toll-Like-Rezeptor 9 (TLR9) erkennt unmethylated CpG-DNA und wird durch Pilz-DNA aktiviert. Hier zeigen wir, dass bestimmte Ausl&ouml;sen von TLR9 Rekrutierung durch die Makrophagen phagosomal Membran eine konservierte Pilze der unterschiedlichen phylogenetischen Ursprung, einschlie&szlig;lich Candida Albicans, Saccharomyces Cerevisiae, Malassezia Furfur und Cryptococcus Neoformans ist. Die F&auml;higkeit, phagosomal TLR9 Rekrutierung ausl&ouml;sen wurde nicht durch einen Verlust der pilzartigen Lebensf&auml;higkeit oder Zellwand Integrit&auml;t beeintr&auml;chtigt. TLR9-Mangel ist mit erh&ouml;hten Widerstand murinen Candidose und Beschr&auml;nkung der Pilzbefall in-vivo verbunden war. Makrophagen fehlt TLR9 zeigen eine vergleichbare Kapazit&auml;t f&uuml;r Phagozytose und normale phagosomal Reifung im Vergleich zu Wildtyp Makrophagen. Wir zeigen nun, dass TLR9-Mangel erh&ouml;ht die Makrophagen Tumornekrosefaktor Alpha (TNF-&alpha;) Produktion als Reaktion auf C. Albicans und S. Cerevisiae, unabh&auml;ngig von der Hefe-Lebensf&auml;higkeit. Der Anstieg der TNF-&alpha;-Produktion war reversibel durch funktionale Erg&auml;nzung im TLR9-gen, best&auml;tigen, dass TLR9 f&uuml;r negative Modulation der Zytokin-Antwort verantwortlich war. Konsequent, verbesserte TLR9-Mangel die Makrophage-Effektor-Antwort von Makrophagen Stickstoffmonoxid-Produktion erh&ouml;hen. Dar&uuml;ber hinaus war Mikrobizide Aktivit&auml;t gegen C. Albicans und S. Cerevisiae effizienter in TLR9 ko (TLR9KO) Makrophagen als in Wildtyp Makrophagen. Abschlie&szlig;end zeigen unsere Daten, dass TLR9 selektiv zu Pilz-Phagosomen aufgeteilt ist und negativ Makrophagen antimykotische Effektor-Funktionen moduliert. Unsere Daten unterst&uuml;tzen ein Modell, in dem Orchestrierung der Antimykotika angeborenen Immunit&auml;t ein komplexes Zusammenspiel von Pilz-Ligand-Kombinationen, Antagonismus, Host Zelle Maschinen Umlagerungen, und TLR Zusammenarbeit beinhaltet.

Toll-Like-Rezeptor 9 moduliert Makrophagen antimykotische Effektor-Funktion w&auml;hrend der angeborenen Erkennung von Candida Albicans und Saccharomyces Cerevisiae.

&#x8CAA;&#x98DF;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x65E5;&#x548C;&#x898B;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x9632;&#x5FA1;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x5BB9;&#x3092;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3002; Toll&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;9&#xFF08;TLR9&#xFF09;&#x306E;CpG&#x306E;DNA&#x3092;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x771F;&#x83CC;DNA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x306B;TLR9&#x63A1;&#x7528;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x3001;&#x765C;&#x98A8;&#x83CC;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B3;&#x30C3;&#x30AB;&#x30B9; - &#x30CD;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x83CC;&#x985E;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;TLR9&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x83CC;&#x985E;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TLR9&#x6B20;&#x640D;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x75C7;&#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TLR9&#x3092;&#x6B20;&#x304F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3057;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6210;&#x719F;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;TLR9&#x6B20;&#x640D;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;C.&#x30A2;&#x30EB;&#x30D3;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;S.cerevisiae&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3B1;&#xFF08;TNF-&#x3B1;&#xFF09;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TNF-&#x3B1;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;TLR9&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;TLR9&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;TLR9&#x6B20;&#x4E4F;&#x306F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;C.&#x30A2;&#x30EB;&#x30D3;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;S.cerevisiae&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x6BBA;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3088;&#x308A;TLR9&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#xFF08;TLR9KO&#xFF09;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;TLR9&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x83CC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x533A;&#x753B;&#x3057;&#x3001;&#x8CA0;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B1;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x83CC;&#x306E;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;TLR&#x306E;&#x5354;&#x529B;&#x3068;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Toll&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;9&#x5148;&#x5929;&#x6027;Candida albicans&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

Phagocytic &#xC751;&#xB2F5; &#xAE30;&#xD68C; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; phagosomal &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC815;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; 9 (TLR9) unmethylated CpG DNA&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; DNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; macrophage phagosomal &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; TLR9 &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB9C1;&#xC740; &#xBCC4;&#xAC1C; phylogenetic &#xAE30;&#xC6D0;, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Malassezia furfur Cryptococcus neoformans &#xB4F1;&#xC758; &#xBC84;&#xC12F;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6A9;&#xB7C9; phagosomal TLR9 &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC0DD;&#xC874; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0;. TLR9 &#xACB0;&#xD54D; murine &#xCE78;&#xB514; &#xB2E4; &#xC99D; &#xBC0F; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC131;&#xC7A5;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC81C;&#xD55C; &#xC800;&#xD56D; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. TLR9 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; phagosomal &#xC131;&#xC219; &#xB3D9;&#xAE09; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; TLR9 &#xACB0;&#xD54D; C. albicans&#xC640; S. cerevisiae, &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; macrophage &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; (TNF-&alpha;) &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. TNF-&alpha; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; TLR9 cytokine &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC74C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xD655;&#xC778; TLR9 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C;, TLR9 &#xACB0;&#xD54D; macrophage &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xB298;&#xB824; macrophage &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xB610;&#xD55C;, C. albicans&#xC640; S. cerevisiae&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; microbicidal &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; TLR9 &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; (TLR9KO) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; TLR9 &#xADE0; phagosomes&#xC744; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB4E4; &#xC5D0;&#xAC8C;&#xB9CC; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xC870; macrophage &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; effector &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC81C;&#xC758; &#xC624;&#xCF00;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC870;&#xD569;&#xACFC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xAE30;&#xACC4; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; &#xBC0F; TLR &#xD611;&#xB825; &#xC801;&#xAC1C;&#xC2EC;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; 9 Candida albicans &#xBC0F; Saccharomyces cerevisiae&#xC758; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xC778;&#xC2DD; &#xC911; macrophage &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xC870;.

Respuestas fagoc&#xED;ticas son fundamentales para la defensa del hu&#xE9;sped eficaz contra los hongos pat&#xF3;genos oportunistas. Los macr&#xF3;fagos probar el contenido phagosomal y orquestar la respuesta inmune innata. Toll-like receptor 9 (TLR9) reconoce unmethylated CpG ADN y se activa por el ADN de hongos. Aqu&#xED; demostramos que la activaci&#xF3;n espec&#xED;fica de TLR9 de contrataci&#xF3;n a la membrana de los macr&#xF3;fagos phagosomal es una caracter&#xED;stica conservada de los hongos de los or&#xED;genes filogen&#xE9;ticos distintos, incluyendo Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Malassezia furfur, y Cryptococcus neoformans. La capacidad de desencadenar phagosomal TLR9 de contrataci&#xF3;n no se vio afectada por una p&#xE9;rdida de la viabilidad de hongos o la integridad de la pared celular. TLR9 deficiencia ha sido relacionada con una mayor resistencia a la candidiasis murino y de restricci&#xF3;n del crecimiento f&#xFA;ngico en vivo. Los macr&#xF3;fagos que carecen de TLR9 demostrar una capacidad similar para la fagocitosis y la maduraci&#xF3;n phagosomal normal en comparaci&#xF3;n con los macr&#xF3;fagos de tipo salvaje. Ahora demuestran que la deficiencia de TLR9 de macr&#xF3;fagos aumenta el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-&#x3B1;) de producci&#xF3;n en respuesta a C. albicans y S. cerevisiae, independiente de la viabilidad de la levadura. El aumento de TNF-&#x3B1; producci&#xF3;n fue reversible por complementaci&#xF3;n funcional del gen TLR9, confirmando que TLR9 era responsable de modulaci&#xF3;n negativa de la respuesta de citoquinas. Por ello, la deficiencia de TLR9 mejorado la respuesta efectora de los macr&#xF3;fagos por aumentar la producci&#xF3;n de &#xF3;xido n&#xED;trico de macr&#xF3;fagos. Por otra parte, la actividad microbicida contra C. albicans y S. cerevisiae fue m&#xE1;s eficiente en TLR9 knockout (TLR9KO) que en los macr&#xF3;fagos de tipo salvaje macr&#xF3;fagos. En conclusi&#xF3;n, nuestros datos demuestran que TLR9 est&#xE1; compartimentado de forma selectiva a los fagosomas hongos y negativamente modula las funciones efectoras de los macr&#xF3;fagos antif&#xFA;ngicos. Nuestros datos apoyan un modelo en el que la orquestaci&#xF3;n de la inmunidad innata antif&#xFA;ngico implica una compleja interacci&#xF3;n de las combinaciones de ligandos por hongos, reordenamientos de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped maquinaria, y la cooperaci&#xF3;n de TLR y el antagonismo.

Toll-like receptor 9 Modula macr&#xF3;fagos efector funci&#xF3;n antif&#xFA;ngica En reconocimiento innato de Candida albicans y Saccharomyces cerevisiae

&#x5A01;&#x80C1;&#x751F;&#x547D;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4EBA;&#x6570;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5728;&#x53D7;&#x635F;&#x7684;&#x75C5;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC6;&#x522B;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x89C4;&#x5219;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x5236;&#x5B9A;&#x66F4;&#x597D;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x5BF9;&#x75C5;&#x539F;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x548C; Dectin-1&#xFF0C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8BC6;&#x522B;&#x53D7;&#x4F53;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x5230;&#x6B64;&#x7684;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x4E86;&#x89E3;&#x5BF9;&#x6E90;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x969C;&#x788D;&#x662F;&#x591A;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5076;&#x5BF9;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x89E3;&#x5256;&#x7528;&#x6765;&#x8BC6;&#x522B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x673A;&#x5236;&#x3001; &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&quot;&#x771F;&#x83CC;&#x50CF;&#x7C92;&#x5B50;&quot;&#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x73E0;&#xFF0C;&#x6A21;&#x4EFF;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x5305;&#x8986;&#x7EAF; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x6765;&#x81EA;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&Beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x5C42;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x3001; &#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x68C0;&#x67E5;&#x3002;&Beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x5BF9;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x5851;&#x6599;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x8054;&#x7CFB;&#x73E0;&#x7F6E;&#x4E8E;&#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x540E;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x7531;&#x9884;&#x5904;&#x7406; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x73E0;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A; &beta;-1&#xFF0C;3-gluconase&#xFF0C;laminarinase&#xFF0C;&#x53CD;&#x5E94;&#x6027;&#x7684;&#x6297;-&beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x6297;&#x4F53;&#x88AB;&#x6B63;&#x5F0F;&#x5E9F;&#x6B62;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; K &#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x73E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D82;&#x5C42;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x4E5F;&#x523A;&#x6FC0;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x6E90;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x73E0;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; &beta;-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x3001; &#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x3001; &#x65E0;&#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; &beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x4E0E;&#x6DF7;&#x5408;&#x6D82;&#x5C42;&#x7684;&#x73E0;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&beta;-1&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x73E0;&#x88AB;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-Dectin-1 &#x8868;&#x793A;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6620;&#x50CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&Beta;-1&#xFF0C;3-&#x73E0;&#x5728;&#x51E0;&#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x5360;&#x7528;&#x548C;&#x4FDD;&#x7559;&#x800C;&#x65E0;&#x6D82;&#x5C42;&#x73E0; phagosome Dectin 1 &#x62DB;&#x52DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8BF4;&#x660E;&#x5C06;&#x5141;&#x8BB8;&#x7814;&#x7A76;&#x63A2;&#x7D22;&#x4E2D;&#x6D3E;&#x751F;&#x75C5;&#x539F;&#x771F;&#x83CC;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6297;&#x539F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x771F;&#x83CC;&#x6D3E;&#x751F;&#x591A;&#x7CD6;&#x5171;&#x8F6D;&#x7C92;&#x5B50;&#x63A2;&#x6D4B; Dectin 1 &#x54CD;&#x5E94;&#x5728;&#x5929;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

The number of life-threatening fungal infections has risen in immunocompromised patients, and identification of the rules that govern an appropriate immune response is essential to develop better diagnostics and targeted therapeutics. The outer cell wall component on pathogenic fungi consists of Î²-1,3-glucan, and Dectin-1, a pattern recognition receptor present on the cell surface of innate immune cells, binds specifically to this carbohydrate. A barrier in understanding the exact immunological response to pathogen-derived carbohydrate epitopes is the presence of multiple types of carbohydrate moieties on fungal cell walls. To dissect the immunological mechanisms used to recognize pathogens, a system of "fungal like particles" was developed that consisted of polystyrene beads, which mimicked the three dimensional shape of the fungus, coated covalently with purified Î²-1,3-glucan derived from Saccharomyces cerevisiae. The morphology of the Î²-1,3-glucan layer was examined by immunofluorescence, flow cytometery, and immuno-transmission electron microscopy. The covalent linkages of the Î²-1,3-glucan to the polystyrene surface were stable after subjecting the beads to detergents. By pre-treating Î²-1,3-glucan beads with laminarinase, a specific Î²-1,3-gluconase, the reactivity of the anti-Î²-1,3-glucan antibody was abrogated in comparison to treatment with proteinase K indicating that the coating of these beads was predominantly Î²-1,3-glucan. TNF-Î± was also measured by stimulating bone-marrow derived macrophages with the Î²-1,3-glucan beads, and showed a dose dependent response compared to soluble Î²-glucan, insoluble Î²-1,3-glucan, uncoated beads, and soluble Î²-1,3-glucan mixed with uncoated beads. Finally, Î²-1,3-glucan beads were incubated with GFP-Dectin-1 expressing macrophages and imaged using confocal microscopy. Î²-1,3-beads were taken up within minutes and retained Dectin-1 recruitment to the phagosome as compared to uncoated beads. These data describe a unique fungal-like particle system that will permit immunologists to probe the critical steps in early recognition of pathogen-derived fungal carbohydrate antigens by innate immune cells.

Use of fungal derived polysaccharide-conjugated particles to probe Dectin-1 responses in innate immunity.

Le nombre de la vie en danger des infections fongiques a augment&#xE9; chez les patients immunod&#xE9;prim&#xE9;s, et l&#x26;#39;identification des r&#xE8;gles qui r&#xE9;gissent une r&#xE9;ponse immunitaire appropri&#xE9;e est essentiel de d&#xE9;velopper de meilleurs diagnostics et des th&#xE9;rapies cibl&#xE9;es. Le composant de cellule paroi ext&#xE9;rieure sur les champignons pathog&#xE8;nes comprend &#x3B2;-1 ,3-glucane, et Dectin-1, un r&#xE9;cepteur pr&#xE9;sent sur la reconnaissance des formes de surface cellulaire de cellules immunitaires inn&#xE9;es, se lie sp&#xE9;cifiquement &#xE0; cet hydrate de carbone. Une barri&#xE8;re &#xE0; la compr&#xE9;hension de la r&#xE9;ponse exacte immunologique &#xE0; &#xE9;pitopes glucidiques d&#xE9;riv&#xE9;e du pathog&#xE8;ne est la pr&#xE9;sence de plusieurs types de groupements glucidiques sur les parois des cellules fongiques. Afin de diss&#xE9;quer les m&#xE9;canismes immunologiques utilis&#xE9;s pour reconna&#xEE;tre les agents pathog&#xE8;nes, un syst&#xE8;me de &#x26;quot;champignons comme des particules&#x26;quot; a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;labor&#xE9; qui se composait de billes de polystyr&#xE8;ne, qui imitaient la forme tridimensionnelle du champignon, enduits de fa&#xE7;on covalente avec purifi&#xE9; &#x3B2;-1 ,3-glucan issu de Saccharomyces cerevisiae. La morphologie de la couche &#x3B2;-1 ,3-glucane a &#xE9;t&#xE9; examin&#xE9; par immunofluorescence, cytometery d&#xE9;bit, et d&#x26;#39;immuno-microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission. Les liaisons covalentes du &#x3B2;-1 ,3-glucane &#xE0; la surface de polystyr&#xE8;ne sont stables apr&#xE8;s avoir soumis les perles de d&#xE9;tergents. Par pr&#xE9;-traitement &#x3B2;-1 ,3-glucane billes avec laminarinase, une sp&#xE9;cifique &#x3B2;-1 ,3-gluconase, la r&#xE9;activit&#xE9; de l&#x26;#39;anticorps anti-&#x3B2;-1 ,3-glucane a &#xE9;t&#xE9; abrog&#xE9;e en comparaison &#xE0; un traitement avec de la prot&#xE9;inase K, indiquant que le rev&#xEA;tement de ces perles est essentiellement &#x3B2;-1 ,3-glucane. TNF-&#x3B1; a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e par la stimulation de la moelle osseuse macrophages d&#xE9;riv&#xE9;s avec les &#x3B2;-1 ,3-glucane perles, et ont montr&#xE9; une r&#xE9;ponse dose-d&#xE9;pendante par rapport &#xE0; &#x3B2;-glucanes solubles, insolubles &#x3B2;-1 ,3-glucane, billes non recouvertes, et soluble dans &#x3B2;-1 ,3-glucane m&#xE9;lange avec les perles non enrob&#xE9;es. Enfin, &#x3B2;-1 ,3-glucane billes ont &#xE9;t&#xE9; incub&#xE9;es avec la GFP-Dectin-1 macrophages exprimant et imag&#xE9;s par microscopie confocale. &#x3B2;-1 ,3-perles ont &#xE9;t&#xE9; prises en quelques minutes et conserv&#xE9;s Dectin-1 de recrutement pour le phagosome par rapport &#xE0; billes non recouvertes. Ces donn&#xE9;es d&#xE9;crivent un syst&#xE8;me unique de particules fongiques comme &#xE7;a permettra immunologistes pour sonder les &#xE9;tapes critiques dans la reconnaissance pr&#xE9;coce des agents pathog&#xE8;nes fongiques d&#xE9;riv&#xE9;s antig&#xE8;nes glucidiques par les cellules immunitaires inn&#xE9;es.

L&#x26;#39;utilisation de d&#xE9;riv&#xE9;s de polysaccharides fongiques conjugu&#xE9;s particules pour sonder Dectin-1 R&#xE9;ponses de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e

Die Anzahl der lebensbedrohlichen Pilzinfektionen gestiegen bei immungeschw&auml;chten Patienten und Identifizierung von Regeln eine entsprechende Immunantwort ist wesentlich bessere Diagnose und gezielte Therapien zu entwickeln. Die &auml;u&szlig;ere Zellwand-Komponente auf pathogene Pilze besteht aus &beta;-1, 3-Glucan und Dectin-1, ein Muster-Anerkennung-Rezeptor auf der Zelloberfl&auml;che des angeborenen immunen Zellen bindet spezifisch an dieser Kohlenhydrat. Eine Barriere verstehen, die genaue immunologische Reaktion auf Krankheitserreger abgeleitete Kohlenhydrate Epitopes ist das Vorhandensein mehrerer Arten von Kohlenhydraten Adsorptionseigenschaften auf pilzartige Zellw&auml;nde. Um die immunologischen Mechanismen verwendet, um Krankheitserreger erkennen zu zergliedern, wurde ein System von &quot;Pilz-wie Partikel&quot; entwickelt, die bestand aus Polystyrol-Perlen, die die drei nachgeahmt dreidimensionale Form des Pilzes, kovalent beschichtet mit gereinigtem &beta;-1, 3-Glucan aus Saccharomyces Cerevisiae abgeleitet. Die Morphologie der &beta;-1, 3-Glucan Ebene wurde durch Immunfluoreszenz, Fluss Cytometery und Immuno-Transmissionselektronenmikroskop untersucht. Die kovalenten Verbindungen zwischen der &beta;-1, 3-Glucan auf der Polystyrol-Oberfl&auml;che waren stabil nach Detergenzien die Perlen zu unterwerfen. Von pre-treating &beta;-1, 3-Glucan-Perlen mit Laminarinase, eine spezifische &beta;-1, 3-Gluconase, wurde die Reaktivit&auml;t des Antik&ouml;rpers Anti-&beta;-1, 3-Glucan im Vergleich zur Behandlung mit Proteinase K gibt an, dass die Beschichtung von diesen Perlen &uuml;berwiegend &beta;-1, 3-Glucan wurde aufgehoben. TNF-&alpha; wurde auch gemessen durch anregende Knochenmark abgeleitet Makrophagen mit der &beta;-1, 3-Glucan-Perlen, zeigte eine Dosis-abh&auml;ngige-Response, die im Vergleich zu l&ouml;slichen &beta;-Glucan, unl&ouml;sliche &beta;-1, 3-Glucan, unbeschichtete Perlen und l&ouml;slichen &beta;-1, 3-Glucan beigemischt unbeschichtete Perlen. Schlie&szlig;lich wurden &beta;-1, 3-Glucan Perlen mit GFP-Dectin-1 zum Ausdruck Makrophagen und abgebildet mit confocal Mikroskopie inkubiert. &Beta;-1, 3-Perlen wurden innerhalb von Minuten aufgenommen und beibehalten Dectin-1 Anwerbung f&uuml;r die Phagosom im Vergleich zu unbeschichteten Perlen. Diese Daten beschreiben eine einzigartiges Pilz-wie Partikel-System, die Immunologen zu sondieren die wichtige Schritte in der Fr&uuml;herkennung von Pathogen-abgeleitete pilzartige Kohlenhydrat-Antigene durch angeborene immune Zellen erm&ouml;glichen.

Verwendung von Pilzen abgeleiteten Polysaccharid-konjugierten Teilchen zu Dectin-1 Antworten in der angeborenen Immunit&auml;t zu sondieren.

Il numero di infezioni fungine pericolose per la vita &egrave; aumentato in pazienti immunodepressi, e identificazione delle regole che governano una risposta immunitaria adeguata &egrave; essenziale sviluppare meglio diagnosi e terapie mirate. Il componente della parete cellulare esterna su funghi patogeni &egrave; costituito da &beta;-1,3-glucano e Dectin-1, un recettore di riconoscimento di pattern presente sulla superficie cellulare delle cellule del sistema immunitario innate, si lega specificamente a questo tipo di carboidrati. Una barriera nella comprensione esatta risposta immunologica ad epitopi carboidrati derivati da agente patogeno &egrave; la presenza di molteplici tipi di moiety carboidrati sulle pareti delle cellule fungine. Per sezionare i meccanismi immunologici utilizzati per riconoscere gli agenti patogeni, &egrave; stato sviluppato un sistema di &quot;fungine come particelle&quot; che consisteva in perle di polistirene, che imitavano le tre forma dimensionale del fungo, rivestito covalentemente con &beta;-1,3-glucano purificato derivato da Saccharomyces cerevisiae. La morfologia del livello 1,3-&beta;-glucano &egrave; stata esaminata da immunofluorescenza, flusso cytometery e immuno-transmission electron microscopy. I legami covalenti del &beta;-1,3-glucano sulla superficie di polistirolo erano stabili dopo sottoponendo le perline ai detersivi. Da pre-treating 1,3-&beta;-glucano perline con laminarinase, una specifica &beta;-1,3-gluconase, &egrave; stata abrogata la reattivit&agrave; dell&#39;anticorpo anti-&beta;-1,3-glucano rispetto al trattamento con proteinasi K che indica che il rivestimento di queste perle &egrave; stato prevalentemente &beta;-1,3-glucano. TNF-&alpha; &egrave; stato misurato dai macrofagi derivato del midollo osseo stimolando con i branelli di 1,3-&beta;-glucano e ha mostrato una risposta dipendente dalla dose rispetto a &beta;-glucano solubile, &beta;-1,3-glucano insolubile, non rivestiti di perline, e &beta;-1,3-glucano solubile mescolato con perle di carta non patinate. Infine, &beta;-1,3-glucano perline sono stati incubati con GFP-Dectin-1 esprimendo macrofagi e stampati mediante microscopia confocale. &Beta;-1,3-perline sono presi in pochi minuti e mantenuto reclutamento Dectin-1 per il Fagosoma rispetto alle perle di carta non patinate. Questi dati descrivono un sistema unico fungine come particella che consentir&agrave; di immunologi per sondare i passaggi critici nel riconoscimento precoce di antigeni derivati da patogeni fungini carboidrati da cellule del sistema immunitario innate.

Uso delle particelle derivate fungine polisaccaride coniugato a sonda Dectin-1 risposte nell&#39;immunit&agrave; innata.

&#x751F;&#x547D;&#x3092;&#x8105;&#x304B;&#x3059;&#x771F;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3068;&#x6A19;&#x7684;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x6210;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30C7;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;-1&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x8A8D;&#x8B58;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7CD6;&#x9396;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7CD6;&#x9396;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x969C;&#x58C1;&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x4E0A;&#x306E;&#x70AD;&#x6C34;&#x5316;&#x7269;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x88AB;&#x8986;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x83CC;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x771F;&#x4F3C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3001;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066; 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TNF-&#x3B1;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x523A;&#x6FC0;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x3B2;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3001;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3068;&#x30B3;&#x30FC;&#x200B;&#x200B;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3B2;-1&#x3001;3  - &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x306E;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;GFP-&#x30C7;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;-1&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x64AE;&#x50CF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 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&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306B;&#x30C7;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;-1&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x771F;&#x83CC;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x591A;&#x7CD6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;

Immunocompromised &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xBA85;&#xC744; &#xC704;&#xD611; &#xD558;&#xB294; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC218;&#xB294; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xCE59;&#xC758; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xD45C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;&#xC5D0; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAD6C;&#xC131; &#xAE00; &#xB8E8; &beta;-1, 3-&#xCE78;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xB294; &#xD328;&#xD134; &#xC778;&#xC2DD; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Dectin-1&#xC774;&#xC774; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; &#xD2B9;&#xD788; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; epitopes &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC5D0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; moieties &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD574; &#xBD80;, &quot;&#xC785;&#xC790; &#xCC98;&#xB7FC; &#xACF0; &#xD321; &#xC774;&quot;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xC720;&#xC0AC; &#xC138; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xAE00; &#xB8E8; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &beta;-1, 3-&#xCE78; &#x70AD; &#xCF54;&#xD305; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;&#xC758; &#xCE58;&#xC218; &#xBAA8;&#xC591; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;. &Beta;-1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xD615;&#xD0DC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xD750;&#xB984; cytometery &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAE00; &#xB8E8;&#xB294; &beta;-1, 3-&#xCE78; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xACF5;&#xC720; &#xACB0;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD6C;&#xC2AC; &#xC138;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC4F0;&#xB294; &#xD6C4; &#xC548;&#xC815;. Laminarinase&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &beta;-1, 3-gluconase, &#xD568;&#xAED8; pre-treating &beta;-1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xD2F0;-&beta;-1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;&#xC758; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; K &#xC131;&#xBD84;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;&#xC774; &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC758; &#xCF54;&#xD305;&#xC740; &#xAE00; &#xB8E8; &#xC8FC;&#xB85C; &beta;-1, 3-&#xCE78;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. TNF-&alpha;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &beta;-1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; &#xAD6C;&#xC2AC; &#xACE8; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &beta;-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;, &#xAE00; &#xB8E8; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &beta;-1, 3-&#xCE78;, uncoated &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xC751;&#xB2F5; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAE00; &#xB8E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &beta;-1, 3-&#xCE78; &#xC11E;&#xC778; uncoated &#xAD6C;&#xC2AC;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &beta;-1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; &#xAD6C;&#xC2AC; GFP-Dectin-1 &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370; incubated &#xD588;&#xB2E4;. &Beta;-1, 3-&#xBE44;&#xC988; &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; &#xBD88;&#xB824; &#xACE0; uncoated &#xAD6C;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; phagosome Dectin 1 &#xCC44;&#xC6A9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; immunologists &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xC785;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC81C;&#xC5D0; Dectin-1 &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958; &#xD65C;&#xC6A9; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;.

El n&#xFA;mero de infecciones mortales por hongos ha aumentado en los pacientes inmunodeprimidos, y la identificaci&#xF3;n de las normas que rigen una respuesta inmune adecuada es esencial para desarrollar mejores diagn&#xF3;sticos y terapias destinadas. El componente de la pared celular externa sobre hongos pat&#xF3;genos consta de &#x3B2;-1 ,3-glucano, y Dectina 1-, un reconocimiento de patrones receptor presente en la superficie celular de las c&#xE9;lulas inmunes, se une espec&#xED;ficamente a este carbohidrato. Una barrera en la comprensi&#xF3;n de la respuesta inmunol&#xF3;gica a ep&#xED;topos exacta de carbohidratos derivados de pat&#xF3;genos es la presencia de m&#xFA;ltiples tipos de restos de carbohidrato en las paredes celulares de los hongos. Para diseccionar los mecanismos inmunol&#xF3;gicos para el reconocimiento de pat&#xF3;genos, un sistema de &#x26;quot;hongos como las part&#xED;culas&#x26;quot; se ha desarrollado, que consist&#xED;a en perlas de poliestireno, que imitaban la forma tridimensional del hongo, recubiertas de forma covalente con &#x3B2;-purificada 1 ,3-glucano derivado de Saccharomyces cerevisiae. La morfolog&#xED;a de la capa de &#x3B2;-1 ,3-glucano fue examinado por inmunofluorescencia, cytometery flujo, e inmuno-microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n. Los enlaces covalentes de la &#x3B2;-1 ,3-glucano a la superficie de poliestireno eran estables despu&#xE9;s de someter las perlas a los detergentes. Al pre-tratamiento de &#x3B2;-1 ,3-glucano perlas con laminarinasa, una espec&#xED;fica &#x3B2;-1 ,3-gluconase, la reactividad del anticuerpo anti-&#x3B2;-1 ,3-glucano fue abrogada en comparaci&#xF3;n con el tratamiento con proteinasa K que indica que el revestimiento de estas perlas era predominantemente &#x3B2;-1 ,3-glucano. TNF-&#x3B1; tambi&#xE9;n se midi&#xF3; por estimulantes de la m&#xE9;dula &#xF3;sea macr&#xF3;fagos derivados con las &#x3B2;-1 ,3-glucano perlas, y mostraron una respuesta dependiente de la dosis en comparaci&#xF3;n con solubles glucano &#x3B2;-, insoluble en &#x3B2;-1 ,3-glucano, perlas no revestidas, y soluble en &#x3B2;-1 ,3-glucano mezclado con perlas no revestidas. Finalmente, &#x3B2;-1 ,3-glucano cuentas fueron incubadas con las buenas pr&#xE1;cticas agrarias Dectin-1 que expresan los macr&#xF3;fagos y utilizando im&#xE1;genes de microscop&#xED;a confocal. &#x3B2;-1 ,3-perlas se recogi&#xF3; en cuesti&#xF3;n de minutos y retenido Dectina-1 a la contrataci&#xF3;n fagosoma en comparaci&#xF3;n con perlas no revestidas. Estos datos describen un &#xFA;nico fungicida-como sistema de part&#xED;culas que permitir&#xE1; a los inmun&#xF3;logos para investigar los pasos cr&#xED;ticos en el reconocimiento temprano de los derivados de pat&#xF3;genos f&#xFA;ngicos ant&#xED;genos de hidratos de carbono de las c&#xE9;lulas inmunes.

Jenny M. Tam

Department of Medicine,
Division of Infectious Diseases,
Department of Medicine, Division of Infectious Diseases

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Jenny M. Tam

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Medicine,Division of Infectious Diseases,Department of Medicine, Division of Infectious Diseases

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Department of Medicine,
Division of Infectious Diseases,
Department of Medicine, Division of Infectious Diseases