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Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

University of Western Ontario

&#x540C;&#x6E90;&#x5F02;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0; APETALA2 &#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x53D1;&#x5C55;&#x6539;&#x5EFA;&#x3001; &#x6700;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684;&#x96C4;&#x854A;&#x540C;&#x6E90;&#x5F02;&#x578B;&#x82B1;&#x5668;&#x5B98;&#x66FF;&#x6362;&#x4ECE;&#x5FC3;&#x76AE;&#x7684;&#x82B1;&#x74E3;&#x548C;&#x82B1;&#x74E3;&#x5916;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x82B1;&#x65CB;&#x6DA1;&#x4E2D;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5341;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DF2;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5341;&#x4E2A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x53EA;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x3002;Ap2 6 &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x62A5;&#x544A;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x3002;&#x5728; ap2 6 A.T &#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x5355;&#x4E00; G.C &#x6708;&#x5E95;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; 3&#39; &#x5185;&#x542B;&#x5B50; 6 (&#x4F4D;&#x7F6E; 1342&#x5E74;) mRNA &#x4E00;&#x7EA7;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x635F;&#x5931;&#x6240;&#x5BFC;&#x81F4;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x7B26;&#x5408; A.T &#x8FC7;&#x6E21;&#x7834;&#x574F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x62FC;&#x63A5;&#x8BC6;&#x522B;&#x5B88;&#x6052;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6BCD;&#x9898; (&#x94F6;) G.C &#x548C;&#x4E8C;&#x4E0B;&#x4E00;&#x53EF;&#x7528;&#x4E0B;&#x6E38; AG &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684; AP2 &#x5728;&#x7D27;&#x90BB;&#x6B63;&#x5B97; 3&#39; &#x526A;&#x63A5;&#x4F4D;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5F97;&#x5230;&#x627F;&#x8BA4;&#x3002;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x635F;&#x5931;&#x5C06;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x3001; &#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x4E0D;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x548C; AP2 &#x5E8F;&#x5217; AP2-R2 &#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x622A;&#x65AD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FC7;&#x65E9;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x622A;&#x65AD;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x4E25;&#x91CD;&#x5F71;&#x54CD; AP2 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x4E0E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x662F;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x3002;

Ap2 6 &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6666;&#x6DA9;&#x62FC;&#x63A5;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x3002;

Mutations in the homeotic gene APETALA2 of Arabidopsis thaliana cause severe developmental alterations, most prominently homeotic floral organ replacements from petals to carpels and petals to stamens in the outer two floral whorls. To date, ten different alleles have been identified conferring phenotypes of various degrees. Of these ten alleles, only three have been characterized at the sequence level. The identification of the sequence alteration in the ap2-6 allele is reported here. In ap2-6 a single G.C to A.T transition occurred at the 3' end of intron 6 (position 1342) which leads to a dinucleotide loss at the mRNA level. This change is consistent with the G.C to A.T transition destroying a conserved dinucleotide motif (AG) required for proper splice recognition and with the resulting recognition of the next available downstream AG dinucleotide which in AP2 is immediately adjacent to the authentic 3' splice site. The dinucleotide loss will cause a frameshift, the translation of three incorrect amino acids and a premature stop codon resulting in a truncation of the AP2 sequence within the AP2-R2 domain. Such a truncation is predicted to impact severely on the function of AP2 and is consistent with the observed phenotype.

Mutation in the ap2-6 allele causes recognition of a cryptic splice site.

Mutations de la hom&eacute;otiques g&egrave;ne APETALA2 d&#39;Arabidopsis thaliana causent graves alt&eacute;rations du d&eacute;veloppement, surtout des remplacements d&#39;organes floraux hom&eacute;otiques de p&eacute;tales &agrave; carpelles et p&eacute;tales aux &eacute;tamines &agrave; l&#39;ext&eacute;rieurs deux verticilles floraux. A ce jour, dix all&egrave;les diff&eacute;rents ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s en conf&eacute;rant des ph&eacute;notypes de divers degr&eacute;s. Ces all&egrave;les dix, trois seulement ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;s au niveau de la s&eacute;quence. L&#39;identification de l&#39;alt&eacute;ration de la s&eacute;quence de l&#39;all&egrave;le ap2-6 est rapport&eacute;e ici. Ap2-6 un seul G.C &agrave; Abdel de transition s&#39;est produite &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39; de l&#39;intron 6 (position 1342) qui conduit &agrave; une perte de dinucl&eacute;otide au niveau de l&#39;ARNm. Cette modification est conforme avec le G.C &agrave; transition Abdel d&eacute;truisant un motif conserv&eacute; dinucl&eacute;otide (AG) requis pour la reconnaissance de la bonne &eacute;pissure et la reconnaissance qui en r&eacute;sulte de la dinucl&eacute;otide d&#39;AG disponible suivante en aval qui est juste &agrave; c&ocirc;t&eacute; du site d&#39;&eacute;pissage authentique 3&#39; AP2. La perte de dinucl&eacute;otide provoquera un changement de phase, la traduction de trois acides amin&eacute;s incorrectes et un codon stop pr&eacute;matur&eacute; ayant pour r&eacute;sultat une troncation de la s&eacute;quence de l&#39;AP2 dans le domaine de l&#39;AP2-R2. Telle une troncature est pr&eacute;dit &agrave; influer fortement sur la fonction de l&#39;AP2 et est compatible avec le ph&eacute;notype observ&eacute;.

Mutation de l&#39;all&egrave;le ap2-6 entra&icirc;ne la reconnaissance d&#39;un site d&#39;&eacute;pissage cryptique.

Mutation in der AP2-6-Allel verursacht Anerkennung einer kryptischen Splei&#xDF;stelle.

Le mutazioni della omeotici gene APETALA2 di Arabidopsis thaliana causano gravi alterazioni dello sviluppo, pi&ugrave; prominente omeotici sostituzioni organo floreale da petali di carpelli e petali agli stami nell&#39;esterni due verticilli floreali. Fino ad oggi sono stati identificati dieci diversi alleli conferimento fenotipi di vari gradi. Di questi dieci alleli, solo tre sono stati caratterizzati a livello di sequenza. L&#39;identificazione dell&#39;alterazione di sequenza nell&#39;allele ap2-6 &egrave; riportato qui. Ap2-6 un singolo Galetta A.T. la transizione si &egrave; verificato presso l&#39;estremit&agrave; 3&#39; dell&#39;introne 6 (posizione 1342) che conduce ad una perdita di dinucleotide a livello di mRNA. Questa modifica &egrave; coerenza con Galetta A.T. transizione distruggendo un motivo conservate dinucleotide (AG) necessario per splicing corretto riconoscimento e con il conseguente riconoscimento del prossimo disponibile a valle AG dinucleotide che in AP2 &egrave; immediatamente adiacente al sito di splice autentica 3&#39;. La perdita del dinucleotide causer&agrave; un frameshift, la traduzione di tre aminoacidi errati e un codone di stop prematuro risultante in un troncamento della sequenza all&#39;interno del dominio R2 AP2 AP2. Tale un troncamento &egrave; previsto a influire gravemente sulla funzione di AP2 ed &egrave; coerenza con il fenotipo osservato.

Mutazione dell&#39;allele ap2-6 cause di riconoscimento di un sito criptico impiombatura.

&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; APETALA2 &#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; &#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x5909;&#x7570;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x7684;&#x5909;&#x5316;, &#x6700;&#x3082;&#x76EE;&#x7ACB;&#x3064;&#x5FC3;&#x76AE;&#x306E;&#x82B1;&#x3073;&#x3089;&#x3068;&#x82B1;&#x3073;&#x3089;&#x304B;&#x3089;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x82B1;&#x5668;&#x7F6E;&#x63DB;&#x96C4;&#x3057;&#x3079;&#x3092;&#x5916;&#x5074; 2 &#x82B1;&#x8F2A;&#x751F;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65E5;&#x4ED8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;10 &#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5B66;&#x4F4D;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 10 &#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x307F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x8CEA; ap2 6 &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ap2-6 &#x3067;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x751F;&#x7406;-9 A.T &#x9077;&#x79FB;&#x3059;&#x308B; mRNA &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B; 3&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; 6 (1342&#x5E74;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;) &#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x88DC;&#x306F; AP2 &#x3067;&#x672C;&#x683C;&#x7684;&#x306A; 3&#39; &#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6B21;&#x56DE;&#x5229;&#x7528;&#x4E0B;&#x6D41; AG &#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x751F;&#x7406;-9 A.T &#x9077;&#x79FB;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; (AG) &#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x8AA4;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3001;AP2 &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; AP2 R2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x6642;&#x671F;&#x5C1A;&#x65E9;&#x505C;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066; AP2 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ap2 6 &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4E0D;&#x53EF;&#x89E3;&#x306A;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Homeotic &#xC720;&#xC804;&#xC790; Arabidopsis APETALA2 thaliana&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xB450; &#xAF43; whorls &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBCC0;&#xACBD;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xAC8C; homeotic &#xAF43; &#xAE30;&#xAD00; &#xAD50;&#xCCB4; carpels&#xC5D0; &#xAF43;&#xC78E;&#xACFC; &#xAF43;&#xC78E;&#xC5D0;&#xC11C; stamens &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;, 10 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB300;&#xB9BD; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC815;&#xB3C4;&#xC758; &#xACE0;&#xAE30; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 10 &#xAC1C;&#xC758; &#xB300;&#xB9BD;&#xC758; 3 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB808;&#xBCA8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. Ap2-6 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ap2-6 A.T &#xC804;&#xD658; &#xB2E8;&#xC77C; G.C 3&#39;&#xC758; &#xB05D; intron 6 (&#xC704;&#xCE58; 1342) mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (AG)&#xC744; &#xD30C;&#xAD34; &#xD558;&#xB294; A.T &#xC804;&#xD658; G.C&#xC640; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; AG &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB294; AP2 &#xC815;&#xD1B5; 3&#39; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xB85C; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC778;&#xC2DD; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Frameshift, 3 &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBC0F; AP2 R2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB0B4;&#xC758; AP2 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC798;&#xB77C;&#xB0B4;&#xAE30;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC870; &#xC815;&#xC9C0; codon &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC190;&#xC2E4;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC798;&#xB9BC; AP2 &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAD00;&#xCE21;&#xB41C; &#xD615;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;.

Ap2-6 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC774;&#xC0C1;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC778;&#xC2DD;&#xC744; &#xD558;&#xBA74; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las mutaciones en los home&oacute;ticos gen APETALA2 de Arabidopsis thaliana causan graves alteraciones del desarrollo, las cuales home&oacute;ticos reemplazos de &oacute;rganos florales de p&eacute;talos y p&eacute;talos a los carpelos de estambres en los exteriores verticilos florales dos. Hasta la fecha, se han identificado diez distintos alelos que confieren fenotipos de diversos grados. De estos diez alelos, s&oacute;lo tres se han caracterizado en el nivel de la secuencia. La identificaci&oacute;n de la alteraci&oacute;n de la secuencia en el alelo ap2-6 se divulga aqu&iacute;. Ap2-6 una sola G.C A.T transici&oacute;n ocurri&oacute; en el extremo 3&#39; del intr&oacute;n 6 (posici&oacute;n 1342) que conduce a una p&eacute;rdida del dinucle&oacute;tido en el nivel de mRNA. Este cambio es coherente con la G.C A.T transici&oacute;n destruyendo un motivo dinucle&oacute;tido conservado (AG) necesario para reconocimiento de empalme apropiado y con el reconocimiento resultante del siguiente disponible abajo AG dinucle&oacute;tido que en AP2 est&aacute; inmediatamente adyacente al aut&eacute;ntica 3&#39; sitio del empalme. La p&eacute;rdida de dinucle&oacute;tido causar&aacute; un frameshift, la traducci&oacute;n de tres amino&aacute;cidos incorrectos y un cod&oacute;n de parada prematuro, dando por resultado un truncamiento de la secuencia de AP2 dentro del dominio de AP2-R2. Tal un truncamiento se prev&eacute; impactar severamente en la funci&oacute;n de AP2 y es consistente con el fenotipo observado.

Mutaci&oacute;n en el alelo ap2-6 hace reconocimiento de un sitio de empalme cr&iacute;ptico.

&#x867D;&#x7136;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x4ECE;&#x5357;&#x6781;&#x55DC;&#x51B7;&#x83CC;&#xFF0C;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB; raudensis &#x524D;&#x5F80; 241&#xFF0C;&#x5C55;&#x54C1;&#x66F4;&#x4F4E;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF; (34 kD) &#x6BD4;&#x67D0; C.&#x8863;&#x85FB; (41 kD) &#x57FA;&#x4E8E; SDS &#x9875;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x90FD;&#x53EF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x51FA;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x548C;&#x5728;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A; 79%&#x8EAB;&#x4EFD;&#x3002;&#x5584;&#x5F85;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8863;&#x85FB;&#x7269;&#x79CD;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x6216; C.&#x8863;&#x85FB; DeltapetA &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x72EC;&#x7279;&#x4E09;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;-292 &#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x55DC;&#x51B7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x66FF;&#x6362;&#x540E;&#x4FDD;&#x6301;&#x8868;&#x89C2;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x55DC;&#x51B7;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x662F;&#x52A0;&#x70ED;&#x540E;&#x6BD4;&#x67D0;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;C.raudensis&#xFF0C;&#x4E0E; C.&#x8863;&#x85FB;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E0E;&#x5584;&#x5F85;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE; C.raudensis DeltapetA &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x80FD;&#x529B;&#x8FDB;&#x884C;&#x72B6;&#x6001;&#x8F6C;&#x6362;&#x548C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E92;&#x901A;&#x7535;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93; C.&#x8863;&#x85FB;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;C.&#x8863;&#x85FB; petA &#x690D;&#x682A;&#x79EF;&#x7D2F;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; b (6) /f &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x5C55;&#x51FA;&#x5149;&#x9971;&#x548C;&#x7684;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684; O(2) &#x8FDB;&#x5316;&#x6BD4; C.&#x8863;&#x85FB;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f C.raudensis &#x5728;&#x6539;&#x53D8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0D;&#x8003;&#x8651;&#x5BF9;&#x5176;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x72B6;&#x6001;&#x8F6C;&#x6362;&#x6216;&#x5176;&#x53D7;&#x635F;&#x5982;&#x5148;&#x524D;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E92;&#x901A;&#x7535;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8868;&#x89C2;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x8054;&#x5408;&#x8C03;&#x67E5;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4E2D;&#x6E29;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4E0E; psychrophilly &#x65E0;&#x5173;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5FC5;&#x987B;&#x8C28;&#x614E;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x6709;&#x5173;&#x5DEE;&#x5F02;&#x9002;&#x5E94;&#x5BD2;&#x51B7;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4ECE;&#x5357;&#x6781;&#x55DC;&#x51B7;&#x83CC;&#xFF0C;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB; raudensis &#x524D;&#x5F80; 241 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f&#xFF1A; &#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5728;&#x67D0;&#xFF0C;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7684;&#x4E92;&#x8865;&#x3002;

Although cytochrome f from the Antarctic psychrophile, Chlamydomonas raudensis UWO 241, exhibits a lower apparent molecular mass (34 kD) than that of the mesophile C. reinhardtii (41 kD) based on SDS-PAGE, both proteins are comparable in calculated molecular mass and show 79% identity in amino acid sequence. The difference in apparent molecular mass was maintained after expression of petA from both Chlamydomonas species in either E. coli or a C. reinhardtii DeltapetA mutant and after substitution of a unique third cysteine-292 to phenylalanine in the psychrophilic cytochrome f. Moreover, the heme of the psychrophilic form of cytochrome f was less stable upon heating than that of the mesophile. In contrast to C. raudensis, a C. reinhardtii DeltapetA mutant transformed with petA from C. raudensis exhibited the ability to undergo state transitions and a capacity for intersystem electron transport comparable to that of C. reinhardtii wild type. However, the C. reinhardtii petA transformants accumulated lower levels of cytochrome b ( 6 ) /f complexes and exhibited lower light saturated rates of O(2) evolution than C. reinhardtii wild type. We show that the presence of an altered form of cytochrome f in C. raudensis does not account for its inability to undergo state transitions or its impaired capacity for intersystem electron transport as previously suggested. A combined survey of the apparent molecular mass, thermal stability and amino acid sequences of cytochrome f from a broad range of mesophilic species shows unequivocally that the observed differences in cytochrome f structure are not related to psychrophilly. Thus, caution must be exercised in relating differences in amino acid sequence and thermal stability to adaptation to cold environments.

Cytochrome f from the Antarctic psychrophile, Chlamydomonas raudensis UWO 241: structure, sequence, and complementation in the mesophile, Chlamydomonas reinhardtii.

Bien que f cytochrome du psychrophile antarctique, Chlamydomonas raudensis UWO 241, pr&#xE9;sente une masse mol&#xE9;culaire apparente inf&#xE9;rieure (34 kD) &#xE0; celle de la m&#xE9;sophile C.reinhardtii (41 kD) bas&#xE9;e sur SDS-PAGE, les deux prot&#xE9;ines sont comparables en masse mol&#xE9;culaire calcul&#xE9;e et afficher une identit&#xE9; de 79% en s&#xE9;quence d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s. La diff&#xE9;rence de masse mol&#xE9;culaire apparente est maintenu apr&#xE8;s l&#x26;#39;expression du petA &#xE0; partir d&#x26;#39;esp&#xE8;ces de Chlamydomonas deux dans E. coli soit ou un mutant de Chlamydomonas reinhardtii DeltapetA et apr&#xE8;s la substitution d&#x26;#39;un troisi&#xE8;me uniques cyst&#xE9;ine-292 en ph&#xE9;nylalanine dans le cytochrome f psychrophile. En outre, l&#x26;#39;h&#xE8;me de la forme de cytochrome psychrophile f est moins stable lors d&#x26;#39;un chauffage &#xE0; celle de la m&#xE9;sophile. Contrairement &#xE0; C. raudensis, un C. reinhardtii DeltapetA mutant transform&#xE9; avec PETA &#xE0; partir raudensis C. d&#xE9;montr&#xE9; sa capacit&#xE9; &#xE0; subir des transitions d&#x26;#39;&#xE9;tat et d&#x26;#39;une capacit&#xE9; de transport d&#x26;#39;&#xE9;lectrons intersyst&#xE8;me comparable &#xE0; celle de C. reinhardtii de type sauvage. Toutefois, le C. reinhardtii petA transformants accumul&#xE9; des niveaux inf&#xE9;rieurs du cytochrome b (6) / f complexes et expos&#xE9;es inf&#xE9;rieurs l&#xE9;gers satur&#xE9;s taux de O (2) l&#x26;#39;&#xE9;volution de C. reinhardtii de type sauvage. Nous montrons que la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une forme alt&#xE9;r&#xE9;e de cytochrome f en raudensis C. ne tient pas compte de son incapacit&#xE9; de se soumettre &#xE0; des transitions d&#x26;#39;&#xE9;tat ou de sa diminution de la capacit&#xE9; pour le transport des &#xE9;lectrons intersyst&#xE8;me comme sugg&#xE9;r&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment. Une enqu&#xEA;te combin&#xE9;e de la masse mol&#xE9;culaire apparente, la stabilit&#xE9; thermique et des s&#xE9;quences d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s de cytochrome f &#xE0; partir d&#x26;#39;un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;esp&#xE8;ces m&#xE9;sophiles montre sans &#xE9;quivoque que les diff&#xE9;rences observ&#xE9;es dans la structure du cytochrome f ne sont pas li&#xE9;s &#xE0; psychrophilly. Ainsi, il faut &#xEA;tre prudent en rapportant les diff&#xE9;rences de s&#xE9;quence d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s et la stabilit&#xE9; thermique &#xE0; l&#x26;#39;adaptation &#xE0; des environnements froids.

Cytochrome f de la psychrophile l&#x26;#39;Antarctique, raudensis Chlamydomonas UWO 241: structure, la s&#xE9;quence, et de compl&#xE9;mentarit&#xE9; dans le m&#xE9;sophiles, Chlamydomonas reinhardtii

Obwohl Cytochrom f aus der Antarktis Kryophile, Chlamydomonas Raudensis UWO-241, eine niedrigere scheinbaren Molekularmasse Exponate (34 kD) als der der Mesophiles C. Reinhardtii (41 kD) basierend auf SDS-PAGE, beide Proteine in berechnete molare Masse vergleichbar sind und 79 % Identit&auml;t in Aminos&auml;uresequenz zeigen. Der Unterschied in der scheinbaren Molekularmasse wurde nach Ausdruck von PetA aus beiden Chlamydomonas-Spezies in E. Coli oder C. Reinhardtii DeltapetA Mutanten und nach Substitution von einer einzigartigen dritten Cystein-292 bis Phenylalanin in der PSYCHROPHILE Cytochrom f aufrechterhalten. Dar&uuml;ber hinaus war das H&auml;m PSYCHROPHILE Form von Cytochrom f weniger stabil beim Erhitzen als die Mesophiles. Im Gegensatz zu C. Raudensis ausgestellt ein C. Reinhardtii DeltapetA Mutant mit PetA von C. Raudensis transformiert die F&auml;higkeit Zustands&uuml;berg&auml;nge und einer Kapazit&auml;t f&uuml;r intersystem Elektronentransport vergleichbar mit der Wildtyp C. Reinhardtii zu unterziehen. Jedoch die C. Reinhardtii PetA Transformationen gesammelt niedrigere Ebenen der Cytochrom b (6) / f komplexe und niedrigere Licht ges&auml;ttigte Raten O(2) Evolution als Wildtyp C. Reinhardtii ausgestellt. Wir zeigen, dass das Vorhandensein von abgewandelter Form von Cytochrom f in C. Raudensis seiner Unf&auml;higkeit Zustands&uuml;berg&auml;nge oder die beeintr&auml;chtigte Handlungsf&auml;higkeit intersystem Electron Transport wie zuvor vorgeschlagen werden nicht ber&uuml;cksichtigt. Eine kombinierte &Uuml;bersicht &uuml;ber die scheinbaren Molekularmasse, thermische Stabilit&auml;t und Aminos&auml;ure-Sequenzen von Cytochrom c aus einem breiten mesophile Arten zeigt eindeutig, dass die beobachteten Unterschiede in der Cytochrom-c-Struktur nicht mit Psychrophilly verbunden sind. Daher ist Vorsicht in zusammenh&auml;ngenden Unterschiede in der Aminos&auml;uresequenz und thermische Stabilit&auml;t zur Anpassung an den kalten Umgebungen auszu&uuml;ben.

Cytochrom f aus der Antarktis Kryophile, Chlamydomonas Raudensis UWO-241: Struktur, Sequenz und Erg&auml;nzung in der Mesophiles, Chlamydomonas Reinhardtii.

Sebbene il citocromo f dall&#39;Antartide Psicrofilo, Chlamydomonas raudensis UWO 241, esibisce una bassa massa molecolare apparente (34 kD) rispetto a quella del mesofilo C. reinhardtii (41 kD) basato su SDS-PAGE, entrambe le proteine sono paragonabili in massa molecolare calcolata e mostrare identit&agrave; 79% nella sequenza aminoacidica. La differenza di massa molecolare apparente &egrave; stata mantenuta dopo un&#39;espressione della petA da entrambe le specie e. coli o un mutante di DeltapetA c. reinhardtii Chlamydomonas e dopo la sostituzione di un unico terzo cisteina-292 di fenilalanina nella psychrophilic citocromo f. Inoltre, l&#39;eme psychrophilic in forma di citocromo f era meno stabili a riscaldamento che il mesofilo. A differenza di c. raudensis, un c. reinhardtii mutante DeltapetA trasformato con petA da c. raudensis esposto la capacit&agrave; di subire le transizioni di stato e una capacit&agrave; di trasporto degli elettroni intersistema paragonabile a quella di c. reinhardtii wild type. Tuttavia, il c. reinhardtii petA transformants accumulato livelli inferiori di complessi di citocromo b (6) /f ed esposte tariffe saturi luce inferiore dell&#39;apparato evoluzione rispetto a c. reinhardtii wild type. Mostriamo che la presenza di una forma alterata di citocromo f in c. raudensis non tiene conto per la sua incapacit&agrave; a subire le transizioni di stato o capacit&agrave; ridotta per il trasporto di elettroni intersistema come suggerito in precedenza. Un&#39;indagine combinata della apparente massa molecolare, termiche stabilit&agrave; e amminoacido sequenze di citocromo f da una vasta gamma di specie mesofile dimostra inequivocabilmente che le differenze osservate nella struttura di citocromo f non sono legate ai psychrophilly. Quindi, cautela deve essere esercitato relative differenze nella sequenza amminoacidica e stabilit&agrave; termica di adattamento ad ambienti freddi.

Citocromo f dall&#39;Antartide Psicrofilo, Chlamydomonas raudensis UWO 241: struttura, sequenza e complementazione in mesofile, Chlamydomonas reinhardtii.

&#x5357;&#x6975;&#x306E;&#x597D;&#x51B7;&#x83CC;&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;raudensis UWO 241&#x306F;&#x3001;SDS-PAGE&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E2D;&#x6E29;&#x83CC;C. reinhardtii&#x306E;&#xFF08;41 kD&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x3044;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#xFF08;34 kD&#xFF09;&#x306E;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E21;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;79&#xFF05;&#x306E;&#x540C;&#x4E00;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3084;C. reinhardtii&#x306E;DeltapetA&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x3068;&#x597D;&#x51B7;&#x6027;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x3067;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;-292&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5F8C;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x7A2E;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30DA;&#x30BF;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5F8C;&#x306B;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x306E;&#x597D;&#x51B7;&#x5F62;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6E29;&#x83CC;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52A0;&#x71B1;&#x3057;&#x305F;&#x969B;&#x306E;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; C&#x306E;raudensis&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;C. raudensis&#x304B;&#x3089;&#x30DA;&#x30BF;&#x3067;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;C. reinhardtii&#x306E;DeltapetA&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x72B6;&#x614B;&#x9077;&#x79FB;&#x3068;C. reinhardtii&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x8F38;&#x9001;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;C. reinhardtii&#x306E;&#x30DA;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;b&#x306E;&#x4E0B;&#x4F4D;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#xFF08;6&#xFF09;/ f&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;O&#xFF08;2&#xFF09;C. reinhardtii&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x5149;&#x98FD;&#x548C;&#x7387;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;C. raudensis&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x5F62;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x72B6;&#x614B;&#x9077;&#x79FB;&#x3084;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x529B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x3001;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E2D;&#x6E29;&#x7A2E;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;f&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x304C;psychrophilly&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x767D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6CE8;&#x610F;&#x304C;&#x51B7;&#x305F;&#x3044;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x6CE8;&#x610F;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5357;&#x6975;&#x306E;&#x597D;&#x51B7;&#x83CC;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;Raudensis UWO 241&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;F&#xFF1A;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E2D;&#x6E29;&#x83CC;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;

&#xBE44;&#xB85D; &#xB0A8;&#xADF9; psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f &#xC804;&#xC2DC; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9; (34 kD) mesophile C. reinhardtii &#xBCF4;&#xB2E4; (41 kD) SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18; &#xB450; &#xACC4;&#xC0B0;&#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; 79%&#xAC00; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xB610;&#xB294; C. reinhardtii DeltapetA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Chlamydomonas &#xC885; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB2E8;&#xCCB4;&#xC758; &#xC2DD; &#xD6C4;, psychrophilic &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC5D0;&#xC11C; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; 292&#xB97C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD55C; &#xD6C4; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f psychrophilic &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; heme&#xB294; mesophile &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB09C;&#xBC29; &#xC2DC;&#xC124;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB35C; &#xC548;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. C. raudensis&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; C. reinhardtii C. raudensis&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB2E8;&#xCCB4;&#xC640; &#xBCC0;&#xD615; DeltapetA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC804;&#xD658; &#xBC0F; intersystem &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; C. reinhardtii &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD615;&#xC2DD; &#xBE44;&#xAD50;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xC218; &#xC804;&#xC2DC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, C. reinhardtii petA transformants &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; b (6) /f &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xBC0F; C. reinhardtii &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785; &#xBCF4;&#xB2E4; O(2) &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBE5B; &#xD3EC;&#xD654; &#xC728; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f C. raudensis&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC804;&#xD658; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; intersystem &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xC870;&#xC0AC;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f mesophilic &#xC885;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBC0F; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xCC28;&#xC774; psychrophilly &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xCD94;&#xC6B4; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC11C; &#xC5F4; &#xBC0F; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xCC28;&#xC774;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC758; &#xD589;&#xC0AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0A8;&#xADF9; psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f: &#xAD6C;&#xC870;, &#xC21C;&#xC11C;, &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131;&#xC5D0; mesophile, Chlamydomonas reinhardtii.

Aunque f citocromo del psychrophile Ant&#xE1;rtico, raudensis Chlamydomonas UWO 241, exhibe una masa molecular aparente inferior (34 kD) que la de la mes&#xF3;filo C. reinhardtii (41 kD), basado en SDS-PAGE, ambas prote&#xED;nas son comparables en masa molecular calculada y mostrar 79% de identidad en la secuencia de amino&#xE1;cidos. La diferencia en masa molecular aparente se mantuvo despu&#xE9;s de la expresi&#xF3;n de peta de ambas especies Chlamydomonas, ya sea en E. coli o una C. reinhardtii DeltapetA mutante y despu&#xE9;s de la sustituci&#xF3;n de un tercio &#xFA;nica ciste&#xED;na-292 a la fenilalanina en la f citocromo psicr&#xF3;filos. Adem&#xE1;s, el hemo de la forma psicr&#xF3;filos de citocromo f era menos estable tras el calentamiento que la del mes&#xF3;filo. En contraste con C. raudensis, un C. reinhardtii DeltapetA mutante transformada con peta de raudensis C. exhibi&#xF3; la capacidad de experimentar transiciones de estado y una capacidad de transporte de electrones entre sistemas comparable a la de tipo C. reinhardtii salvaje. Sin embargo, la C. reinhardtii peta transformantes acumularon niveles m&#xE1;s bajos de citocromo b (6) / f complejos y exhibi&#xF3; tasas m&#xE1;s bajas de luz saturada de O (2) la evoluci&#xF3;n del tipo de C. reinhardtii salvaje. Se demuestra que la presencia de una forma alterada de citocromo C en raudensis C no da cuenta de su incapacidad para someterse a las transiciones de estado o su alteraci&#xF3;n en la capacidad para entre sistemas de transporte de electrones, como se sugiri&#xF3; anteriormente. Un estudio combinado de la masa molecular aparente, estabilidad t&#xE9;rmica y las secuencias de amino&#xE1;cidos de citocromo f de una amplia gama de especies mes&#xF3;filas muestra inequ&#xED;vocamente que las diferencias observadas en la estructura f citocromo no est&#xE1;n relacionados con psychrophilly. Por lo tanto, se debe tener cuidado al relacionar las diferencias en la secuencia de amino&#xE1;cidos y la estabilidad t&#xE9;rmica a la adaptaci&#xF3;n a los ambientes fr&#xED;os.

El citocromo C de la Psychrophile Ant&#xE1;rtico, Chlamydomonas Raudensis UWO 241: estructura, secuencia, y de Complementaci&#xF3;n en el mes&#xF3;filo, Chlamydomonas reinhardtii

&#x6709;&#x5F88;&#x591A;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x4E3A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x662F;&#x5426;&#x4F7F;&#x7528; arogenate&#x3001; &#x4E19;&#x916E;&#xFF0C;&#x6216;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F3A;&#x5236;&#x6027;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x81B3;&#x98DF;&#x7684;&#x5FC5;&#x9700;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x90FD;&#x4E0D;&#x786E;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5DF2;&#x62A5;&#x544A;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#x548C; arogenate &#x63A5;&#x53D7; decarboxylative &#x8131;&#x6C34;&#x690D;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7; arogenate &#xFF08;ADT&#xFF09; &#x6216;&#x9884;&#x82EF;&#x9178; (PDT) dehydratases &#xFF1B; &#x884C;&#x52A8;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;enzyme(s) &#x548C; gene(s) &#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x90FD;&#x4E0D;&#x88AB;&#x5B64;&#x7ACB;&#x6216;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x8FDB;&#x884C;&#x6570;&#x636E;&#x6316;&#x6398;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BD5;&#x56FE;&#x786E;&#x5B9A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; PDT &#x6837;&#x548C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5F62;&#x6210; dehydratase(s) &#x7684;&#x7845;&#x3002;&#x6B64;&#x6570;&#x636E;&#x6316;&#x6398;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#xFF0C;&#x5176;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x5C06;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5206;&#x6210;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5206;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A; PDT &#x6837;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x968F;&#x540E;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x5BA1;&#x67E5;&#x6240;&#x6709;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7136;&#x540E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8868;&#x793A; Nus &#x878D;&#x5408;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x5176;&#x57FA;&#x677F;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4E86;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; ADT1 &#x7684;&#x4E09;&#x4E2A; (At1g11790)&#xFF0C;ADT2 (At3g07630) &#x548C; ADT6 &#xFF08;At1g08250&#xFF09;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5229;&#x7528; arogenate &#x6BD4;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4F59;&#x4E09;&#x4E2A;&#xFF0C;ADT3 (At2g27820) ADT4 (At3g44720) &#x548C; ADT5 (At5g22630) &#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x53EA;&#x96C7;&#x7528;&#x4E86; arogenate&#x3002;ADT1&#x3001; ADT2 &#x548C; ADT6 &#x4E86; 1050&#x5E74;&#x3001; 7650&#xFF0C;&#x548C; 1560 k (cat) /Km &#x503C;&#x4E3A; 38&#x3001; 240&#xFF0C;&#x4E0E;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#xFF0C;&#x4E3A; 16 M(-1) S(-1) arogenate M(-1) S(-1) &#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4F59;&#x4E09;&#x4E2A;&#xFF0C;ADT3&#xFF0C;ADT4 &#x548C; ADT5&#xFF0C;&#x6709; 1140&#xFF0C;k (cat) /Km &#x503C; 490 &#x548C; 620 M(-1) S(-1)&#xFF0C;&#x4E0E;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#x4E0D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x9664;&#x975E;&#x591A;&#x4F59;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; (&gt; 150 microg/&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x6682;&#x65F6;&#x5F52;&#x7C7B;&#x4E3A; arogenate dehydratases &#x548C;&#x662F;&#x6307;&#x5B9A; ADT1 ADT6&#x3002;

&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x7684;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C; arogenate dehydratases &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

There is much uncertainty as to whether plants use arogenate, phenylpyruvate, or both as obligatory intermediates in Phe biosynthesis, an essential dietary amino acid for humans. This is because both prephenate and arogenate have been reported to undergo decarboxylative dehydration in plants via the action of either arogenate (ADT) or prephenate (PDT) dehydratases; however, neither enzyme(s) nor encoding gene(s) have been isolated and/or functionally characterized. An in silico data mining approach was thus undertaken to attempt to identify the dehydratase(s) involved in Phe formation in Arabidopsis, based on sequence similarity of PDT-like and ACT-like domains in bacteria. This data mining approach suggested that there are six PDT-like homologues in Arabidopsis, whose phylogenetic analyses separated them into three distinct subgroups. All six genes were cloned and subsequently established to be expressed in all tissues examined. Each was then expressed as a Nus fusion recombinant protein in Escherichia coli, with their substrate specificities measured in vitro. Three of the resulting recombinant proteins, encoded by ADT1 (At1g11790), ADT2 (At3g07630), and ADT6 (At1g08250), more efficiently utilized arogenate than prephenate, whereas the remaining three, ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720), and ADT5 (At5g22630) essentially only employed arogenate. ADT1, ADT2, and ADT6 had k(cat)/Km values of 1050, 7650, and 1560 M(-1) S(-1) for arogenate versus 38, 240, and 16 M(-1) S(-1) for prephenate, respectively. By contrast, the remaining three, ADT3, ADT4, and ADT5, had k(cat)/Km values of 1140, 490, and 620 M(-1) S(-1), with prephenate not serving as a substrate unless excess recombinant protein (>150 microg/assay) was used. All six genes, and their corresponding proteins, are thus provisionally classified as arogenate dehydratases and designated ADT1-ADT6.

Phenylalanine biosynthesis in Arabidopsis thaliana. Identification and characterization of arogenate dehydratases.

Il y a beaucoup d&#39;incertitude quant &agrave; savoir si plantes utilisent arog&eacute;nate, le ph&eacute;nylpyruvate ou les deux comme des interm&eacute;diaires obligatoires dans la biosynth&egrave;se de Phe, un aminoacide essentiel alimentaire pour l&#39;homme. C&#39;est parce que les pr&eacute;ph&eacute;nate et arog&eacute;nate ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s &agrave; subir une d&eacute;shydratation d&eacute;carboxylante chez les plantes par l&#39;interm&eacute;diaire de l&#39;action d&#39;arog&eacute;nate (ADT) ou pr&eacute;ph&eacute;nate (PDT) d&eacute;shydratases ; Toutefois, ni enzymes, ni encodage ou des g&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s ou caract&eacute;ris&eacute;e sur le plan fonctionnel. Un in silico, approche d&#39;extraction de donn&eacute;es visait donc &agrave; essayer d&#39;identifier les dehydratase(s) impliqu&eacute;s dans la formation de Phe dans Arabidopsis, bas&eacute; sur la similarit&eacute; des s&eacute;quences des domaines Loi-type et PDT en bact&eacute;ries. Cette approche d&#39;extraction de donn&eacute;es sugg&egrave;re qu&#39;il y a six homologues PDT-comme dans le genre Arabidopsis, s&eacute;par&eacute;s en trois sous-groupes distincts dont les analyses phylog&eacute;n&eacute;tiques. Tous les six g&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; clon&eacute;s et par la suite mis en place pour s&#39;exprimer dans tous les tissus examin&eacute;s. Chacun a ensuite exprim&eacute; comme une prot&eacute;ine recombinante de fusion Nus chez Escherichia coli, avec leurs sp&eacute;cificit&eacute;s de substrat mesur&eacute;es in vitro. Trois des prot&eacute;ines recombinantes qui en r&eacute;sulte, cod&eacute;es par ADT1 (At1g11790), ADT2 (At3g07630) et ADT6 (At1g08250), utilis&eacute; plus efficacement arog&eacute;nate que pr&eacute;ph&eacute;nate, tandis que les autres trois, ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720) et ADT5 (At5g22630) essentiellement seulement employ&eacute;es arog&eacute;nate. ADT1, ADT2 et ADT6 avaient des valeurs/km k (des entreprises TSAE) de 1050, 7650 et 1560 M(-1) S(-1) pour arog&eacute;nate contre 38 240 et 16 M(-1) S(-1) pour pr&eacute;ph&eacute;nate, respectivement. En revanche, les autres trois, ADT3, ADT4 et ADT5, avaient valeurs/km k (des entreprises TSAE) de 1140, 490 et 620 M(-1) S(-1), avec pr&eacute;ph&eacute;nate ne pas servir comme substrat &agrave; moins que l&#39;exc&egrave;s de prot&eacute;ine recombinante (&gt; 150 microgrammes/test) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;. Tous les six g&egrave;nes et leurs prot&eacute;ines correspondantes, sont donc provisoirement class&eacute;es comme arog&eacute;nate d&eacute;shydratases et d&eacute;sign&eacute;s ADT1-ADT6.

Biosynth&egrave;se de ph&eacute;nylalanine chez Arabidopsis thaliana. Identification et caract&eacute;risation des arog&eacute;nate peroxysomal.

Es gibt viel Unsicherheit, ob Pflanzen Arogenate, Phenylpyruvate oder beides als obligatorische Zwischenprodukte Phe-Biosynthese, eine essentielle Aminos&auml;ure f&uuml;r Nahrung f&uuml;r den Menschen verwenden. Dies ist, weil sowohl die Arogenate als auch die Prephenate gemeldet wurden decarboxylative Dehydratation in Pflanzen &uuml;ber die Aktion von Arogenate (ADT) oder Prephenate (PDT) Dehydratases zu unterziehen; jedoch haben die weder Enzyme(s) noch Codierung geh&auml;uft isoliert bzw. funktional charakterisiert worden. Ein in Silico Daten Mining-Ansatz damit unternommen wurde, um versuchen, die Dehydratase(s) Phe Bildung in Arabidopsis, basierend auf der Reihenfolge &Auml;hnlichkeit der PDT-Like und ACT-&auml;hnlichen Dom&auml;nen in Bakterien beteiligt zu identifizieren. Dieser Daten-Bergbau-Ansatz vorgeschlagen, dass gibt es sechs PDT-&auml;hnlichen Homologen in Arabidopsis, deren phylogenetischen Analysen sie in drei unterschiedlichen Untergruppen unterteilt. Alle sechs Gene wurden geklont und etablierte anschlie&szlig;end ausgedr&uuml;ckt in allen Geweben untersucht. Jeder wurde dann als ein Nus rekombinantes Fusionsprotein in Escherichia coli, mit ihrem Substrat Besonderheiten in Vitro gemessen ausgedr&uuml;ckt. Drei von den resultierenden rekombinante Proteine, die durch ADT1 kodiert (At1g11790), ADT2 (At3g07630), und ADT6 (At1g08250), effizienter genutzt Arogenate als Prephenate, w&auml;hrend die &uuml;brigen drei, ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720), und ADT5 (At5g22630) im Wesentlichen nur besch&auml;ftigt Arogenate. ADT1, ADT2 und ADT6 hatte k (Katze) / km Werte von 1050, 7650 und 1560 M(-1) S(-1) f&uuml;r Arogenate im Vergleich zu 38, 240 und 16 M(-1) S(-1) f&uuml;r Prephenate, beziehungsweise. Dagegen k (Katze) / km Werte von 1140, hatten die &uuml;brigen drei, ADT3, ADT4 und ADT5, 490 und 620 M(-1) S(-1), mit Prephenate nicht als Substrat dienen, es sei denn, rekombinanten Proteine &uuml;bersch&uuml;ssige (&gt; 150 Microg/Assay) verwendet wurde. Alle sechs Gene und ihre entsprechenden Proteine sind daher vorl&auml;ufig als Arogenate Dehydratases und benannten ADT1-ADT6.

Phenylalanin-Biosynthese in Arabidopsis Thaliana. Identifizierung und Charakterisierung von Arogenate Dehydratases.

C&#39;&egrave; molta incertezza se piante utilizzano arogenato, phenylpyruvate o entrambi come obbligatori intermedi nella biosintesi di Phe, un amminoacido essenziale dietetico per gli esseri umani. Questo &egrave; perch&eacute; sia prefenato e arogenato sono stati segnalati a subire disidratazione decarboxylative nelle piante attraverso l&#39;azione di arogenato (ADT) o prefenato (PDT) dehydratases; Tuttavia, n&eacute; enzyme(s) n&eacute; codifica il gene (i) sono state isolate o funzionalmente caratterizzato. Un in silico approccio di estrazione mineraria di dati cos&igrave; &egrave; stato intrapreso per tentare di identificare il dehydratase(s) coinvolti nella formazione di Phe in Arabidopsis, basato su somiglianza di sequenza di domini simili a PDT e ACT-come nei batteri. Questo approccio di estrazione mineraria di dati suggerisce che ci sono sei PDT-come omologhi in Arabidopsis, cui analisi filogenetiche li separati in tre sottogruppi distinti. Tutti e sei i geni sono stati clonati e successivamente stabiliti per essere espresso in tutti i tessuti esaminati. Ciascuno &egrave; stata quindi espressa come una proteina recombinant di fusione Nus in Escherichia coli, con la loro specificit&agrave; di substrato misurata in vitro. Tre delle proteine recombinant risultante, codificate da ADT1 (At1g11790), ADT2 (At3g07630) e ADT6 (At1g08250), utilizzato in modo pi&ugrave; efficiente arogenato rispetto prefenato, mentre i rimanenti tre, ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720) e ADT5 (At5g22630) essenzialmente impiegati solo arogenato. ADT1, ADT2 e ADT6 avevano valori /Km k (cat) di 1050, 7650 e 1560 M(-1) S(-1) per arogenato versus 38, 240 e 16 M(-1) S(-1) per prefenato, rispettivamente. Al contrario, i rimanenti tre, ADT3, ADT4 e ADT5, avevano valori /Km k (cat) di 1140, 490 e 620 M(-1) S(-1), con prefenato non serve come substrato a meno che l&#39;eccesso di proteine ricombinanti (&amp;gt; 150 microg/dosaggio) &egrave; stato utilizzato. Tutti e sei i geni e le proteine corrispondenti, sono cos&igrave; provvisoriamente classificate come arogenato dehydratases e designate ADT1-ADT6.

Biosintesi di fenilalanina in Arabidopsis thaliana. Identificazione e caratterizzazione di arogenato dehydratases.

&#x690D;&#x7269;&#x304C;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;phenylpyruvate&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9; Phe &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7FA9;&#x52D9;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3001;&#x98DF;&#x990C;&#x7642;&#x6CD5;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x9593;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x4E0D;&#x78BA;&#x5B9F;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178; decarboxylative &#x8131;&#x6C34;&#x690D;&#x7269;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;ADT&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178; (&#x592A;&#x5E73;&#x6D0B;&#x590F;&#x6642;&#x9593;) dehydratases &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x96E2;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x66F4;&#x65B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30DE;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3046;&#x3051;&#x3066; Phe &#x5F62;&#x6210;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E; PDT &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3068;&#x884C;&#x70BA;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E; dehydratase(s) &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x306A; in silico&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x624B;&#x6CD5;&#x305D;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x533A;&#x5207;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x516D;&#x3064;&#x306E; PDT &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x5168;&#x3066;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C; Nus &#x878D;&#x5408;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066; in vitro &#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ADT1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; 3 &#x3064; (At1g11790) ADT2 (At3g07630) &#x3068; ADT6 &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#xFF08;At1g08250&#xFF09; &#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E; ADT3 (At2g27820)&#x3001;ADT4 (At3g44720) &#x3068; ADT5 (At5g22630) &#x306F;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x307F;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ADT1&#x3001;ADT2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ADT6 &#x3042;&#x3063;&#x305F; 1050&#x5E74;&#x3001;7650&#x3001;1560&#x5E74;&#x306E; k &#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/&#x30AD;&#x30ED;&#x5024; M(-1) S(-1) &#x5BFE; 38, 240, &#x3068; 16 M(-1) S(-1) &#x7528;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E; ADT3&#x3001;ADT4&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ADT5&#x3001;1140 &#x5E74;&#x306E; k &#xFF08;&#x732B;&#xFF09;/&#x30AD;&#x30ED;&#x5024;&#x3044;&#x305F; 490&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x904E;&#x5270; 620 M(-1) S(-1)&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x9664;&#x304D;&#x3001;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C; &#xFF08;&#x76EE; 150 0.5&#x3001;5&#x3001;50&#x3001;500/&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;) &#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x66AB;&#x5B9A;&#x7684;&#x5206;&#x985E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178; dehydratases &#x3042;&#x308A; ADT1 ADT6 &#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178; dehydratases&#x3002;

&#xC2DD;&#xBB3C;&#xC740; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; arogenate, phenylpyruvate, &#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xB2E4; &#xD398; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xC758;&#xBB34; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;, &#xD544;&#xC218; &#xC2DD;&#xC774; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xBD88;&#xD655;&#xC2E4;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; prephenate &#xBC0F; arogenate arogenate (ADT) &#xB610;&#xB294; prephenate (PDT) dehydratases;&#xC758; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; decarboxylative &#xD0C8;&#xC218;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, enzyme(s)&#xB3C4; gene(s) &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xAC00; &#xB418;&#xC5B4; &#xC808;&#xC5F0; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC2DC;&#xB0B4; silico &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9C8;&#xC774;&#xB2DD; &#xC811;&#xADFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; PDT &#xAC19; &#xBC0F; &#xBC95; &#xAC19;&#xC740; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; Arabidopsis&#xC758; Phe &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; dehydratase(s)&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xACE0;&#xC5D0; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9C8;&#xC774;&#xB2DD; &#xC811;&#xADFC; Arabidopsis, phylogenetic &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; 6 &#xCD08; &#xAC19;&#xC740; homologues &#xC81C;&#xC548;. &#xBAA8;&#xB4E0; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xD6C4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xC2F1;&#xAC00;&#xD3EC;&#xB974; &#xAD6D;&#xB9BD; &#xB300;&#xD559; &#xD4E8;&#xC804; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. Adt1&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 3 (At1g11790) ADT2 (At3g07630) &#xBC0F; ADT6 (At1g08250) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC6A9; arogenate &#xBCF4;&#xB2E4; prephenate, &#xBC18;&#xBA74; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xC138; &#xAC1C;&#xC758; ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720) &#xBC0F; ADT5 (At5g22630) &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; arogenate &#xACE0;&#xC6A9;. ADT1, ADT2, &#xBC0F; ADT6 &#xD588;&#xB2E4; 1050, 7650, 1560&#xC758; k (&#xACE0;&#xC591;&#xC774;) /Km &#xAC12; M(-1) S(-1) &#xB300; 38, 240, prephenate&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 16 M(-1) S(-1) arogenate&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC01;&#xAC01;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, 1140 &#xB144;&#xC758; k (&#xACE0;&#xC591;&#xC774;) /Km &#xAC12; &#xD588;&#xB2E4; 3, ADT3, ADT4, &#xBC0F; ADT5, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; 490, &#xBC0F; 620 M(-1) S(-1), prephenate &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD55C;&#xACFC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC; (&amp;gt; 150 microg/&#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;) &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD574;&#xB2F9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC7A0;&#xC815;&#xC801; arogenate dehydratases&#xB85C; &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; ADT1 adt6&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; Arabidopsis thaliana&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; arogenate dehydratases&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hay mucha incertidumbre en cuanto a si las plantas utilizan arogenate, fenilpiruvato o ambos como obligatorios intermediarios en la bios&iacute;ntesis de Phe, un amino&aacute;cido diet&eacute;tico esencial para los seres humanos. Esto es porque han reportado tanto Prefenato y arogenate a decarboxylative deshidrataci&oacute;n en las plantas mediante la acci&oacute;n de arogenate (ADT) o Deshidratasas Prefenato (PDT); sin embargo, ni enzyme(s) ni codificaci&oacute;n de genes la actitud hayan sido aislado y caracterizado funcionalmente. Un silico en enfoque de miner&iacute;a de datos se realiz&oacute; as&iacute; para intentar identificar el dehydratase(s) implicado en la formaci&oacute;n de Phe en Arabidopsis, basado en la semejanza de la secuencia de PDT y ACT dominios en bacterias. Este enfoque de miner&iacute;a de datos sugiere que hay seis hom&oacute;logos de PDT-como en Arabidopsis, cuyos an&aacute;lisis filogen&eacute;ticos separaban en tres subgrupos distintos. Todos los seis genes fueron clonados y posteriormente estableci&oacute; a expresarse en todos los tejidos examinados. Luego cada uno se expres&oacute; como una prote&iacute;na recombinante de fusi&oacute;n del Nus en Escherichia coli, con sus especificidades de sustrato medidos in vitro. Tres de las prote&iacute;nas recombinantes resultantes, codificadas por ADT1 (At1g11790), ADT2 (At3g07630) y ADT6 (At1g08250), utilizada m&aacute;s eficientemente arogenate que Prefenato, mientras que los restantes tres, ADT3 (At2g27820), ADT4 (At3g44720) y ADT5 (At5g22630) esencialmente s&oacute;lo emple&oacute; arogenate. ADT1, ADT2 y ADT6 tuvieron k (gato) / km valores de 1050, 7650 y 1560 M(-1) S(-1) para arogenate contra 38, 240 y 16 S(-1) de M(-1) para Prefenato, respectivamente. Por el contrario, los restantes tres, ADT3, ADT4 y ADT5, tuvieron valores de k (gato) / km de 1140, 490 y 620 M(-1) S(-1), con Prefenato no sirve como sustrato a menos que el exceso de prote&iacute;na recombinante (&gt; 150 microg/ensayo) fue utilizado. Todos los seis genes y sus prote&iacute;nas correspondientes, son as&iacute; provisionalmente clasificados como arogenate Deshidratasas y se&ntilde;alados ADT1-ADT6.

Bios&iacute;ntesis de fenilalanina en Arabidopsis thaliana. Identificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de arogenate Deshidratasas.

&#x4ECE;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB; raudensis &#x524D;&#x5F80; 241 &#x55DC;&#x51B7;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x5177;&#x6709;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x5176; c &#x578B;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x548C;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF;&#x662F;&#x6BD4;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x6E29;&#x7EFF;&#x85FB;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x4F4E; 7 kDa&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x5408;&#x5B9A;&#x70B9;&#x8BF1;&#x53D8;&#x3001; &#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x8F6C;&#x5316;&#x548C;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x878D;&#x5408;&#x521B;&#x9020;&#x6784;&#x9020;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7279;&#x5B9A;&#x57DF;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x5BF9;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f&#x3001; &#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x5149;&#x5408;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E92;&#x901A;&#x7535;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5C0F;&#x57DF;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E26;&#x7535;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x5927;&#x57DF;&#x4E2D;&#x6539;&#x53D8;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5F71;&#x54CD; c &#x578B;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#xFF0C;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x4E0B;&#x53F6;&#x7EFF;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6C2F;&#x9709;&#x7D20;&#xFF0C;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x6216;&#x5149;&#x5408;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E92;&#x901A;&#x7535;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x80FD;&#x529B;&#x8861;&#x91CF;&#x4F5C;&#x4E3A; e-/ P700&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0E; [14 C] &#x6807;&#x8BB0;&#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x918B;&#x9178;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x8C03;&#x8282;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x79EF;&#x7D2F;&#x4E2D; C.&#x6E29;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8863;&#x85FB;&#x8F6C;&#x5316;&#x5E76;&#x4ECE;&#x55DC;&#x51B7;&#x83CC;&#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x6784;&#x9020;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f C.&#x8863;&#x85FB;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; b6/f &#x590D;&#x6742;&#x672C;&#x673A;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x88AB;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4F53;&#x819C; C.raudensis &#x524D;&#x5F80; 241 &#x9002;&#x5E94;&#x5BD2;&#x51B7;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

&#x4ECE;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB; raudensis &#x524D;&#x5F80; 241 &#x55DC;&#x51B7;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x5C0F;&#x57DF;&#x8C03;&#x8282;&#x8868;&#x89C2;&#x5206;&#x5B50;&#x8D28;&#x91CF;&#x5E76;&#x964D;&#x4F4E;&#x67D0;&#x83B1;&#x8335;&#x8863;&#x85FB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; f &#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;

Cytochrome f from the psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241 has a lower thermostability of its c-type heme and an apparent molecular mass that is 7 kDa lower than that of the model mesophilic green alga Chlamydomonas reinhardtii. We combined chloroplast transformation, site-directed mutagensis, and the creation of chimeric fusion constructs to assess the contribution of specific domains and (or) amino acids residues to the structure, stability, and accumulation of cytochrome f, as well as its function in photosynthetic intersystem electron transport. We demonstrate that differences in the amino acid sequence of the small domain and specific charged amino acids in the large domain of cytochrome f alter the physical properties of this protein but do not affect either the thermostability of the c-type heme, the apparent half-life of cytochrome f in the presence of the chloroplastic protein synthesis inhibitor chloramphenicol, or the capacity for photosynthetic intersystem electron transport, measured as e-/P700. However, pulse-labeling with [14C]acetate, combined with immunoblotting, indicated that the negative autoregulation of cytochrome f accumulation observed in mesophilic C. reinhardtii transformed with chimeric constructs from the psychrophile was likely the result of the defective association of the chimeric forms of cytochrome f with the other subunits of the cytochrome b6/f complex native to the C. reinhardtii wild type. These results are discussed in terms of the unique fatty acid composition of the thylakoid membranes of C. raudensis UWO 241 adapted to cold environments.

The small domain of cytochrome f from the psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241 modulates the apparent molecular mass and decreases the accumulation of cytochrome f in the mesophile Chlamydomonas reinhardtii.

Cytochrome f from the psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241 a une thermostabilit&eacute; inf&eacute;rieure de l&#39;h&egrave;me de type c et une masse mol&eacute;culaire apparente qui est inf&eacute;rieur &agrave; celui de l&#39;algue verte Chlamydomonas reinhardtii de mod&egrave;le m&eacute;sophiles 7 kDa. Nous avons combin&eacute; la transformation chloroplastique, mutagen&egrave;se dirig&eacute;e, et la cr&eacute;ation de chim&egrave;re fusion construit afin d&#39;&eacute;valuer la contribution des domaines sp&eacute;cifiques et (ou) des r&eacute;sidus d&#39;acides amin&eacute;s &agrave; la structure, la stabilit&eacute; et l&#39;accumulation de cytochrome f, ainsi que sa fonction de transport d&#39;&eacute;lectrons photosynth&eacute;tique intersyst&egrave;me. Nous d&eacute;montrons que les diff&eacute;rences dans la s&eacute;quence d&#39;acides amin&eacute;s du domaine petit et des acides amin&eacute;s charg&eacute;s dans le grand domaine du cytochrome f alt&eacute;rer les qualit&eacute;s physiques de cette prot&eacute;ine mais n&#39;affectent pas la thermostabilit&eacute; de l&#39;h&egrave;me de type c, la demi-vie apparente du cytochrome f en pr&eacute;sence le chloramph&eacute;nicol d&#39;inhibiteur de synth&egrave;se de prot&eacute;ine chloroplastique, soit la capacit&eacute; de transport d&#39;&eacute;lectrons entre les syst&egrave;mes photosynth&eacute;tique, mesur&eacute; comme e-/ P700. Cependant, impulsion-&eacute;tiquetage [14C] ac&eacute;tate, combin&eacute; avec l&#39;immunobuvardage, a indiqu&eacute; que l&#39;autor&eacute;gulation n&eacute;gative de l&#39;accumulation de cytochrome f observ&eacute;e chez m&eacute;sophile C. reinhardtii transform&eacute;e avec des constructions chim&eacute;riques from the psychrophile &eacute;tait probablement le r&eacute;sultat de l&#39;association d&eacute;fectueux des formes chim&eacute;riques du cytochrome f avec les autres sous-unit&eacute;s de type sauvage c. reinhardtii le complexe originaire de cytochrome b6/f. Ces r&eacute;sultats sont discut&eacute;s en ce qui concerne la composition unique des acides gras des membranes thylako&iuml;des des c. raudensis UWO 241 adapt&eacute;e aux environnements froids.

Le petit domaine du cytochrome f from the psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241 module la masse mol&eacute;culaire apparente et diminue l&#39;accumulation de cytochrome f dans le mesophile Chlamydomonas reinhardtii.

Cytochrom f aus der Kryophile Chlamydomonas Raudensis UWO 241 besitzt eine niedrigere Temperaturstabilit&auml;t von seiner H&auml;m c-Typ und eine scheinbare Molmasse, die niedriger als die von dem Modell mesophile gr&uuml;ne Alge Chlamydomonas Reinhardtii 7 kDa ist. Wir kombinierten Chloroplast Transformation, Site-verwiesene Mutagensis, und die Schaffung von Chim&auml;ren Fusion erstellt, um den Beitrag von bestimmten Dom&auml;nen zu bewerten und (oder) Aminos&auml;uren R&uuml;ckst&auml;nde und die Struktur, Stabilit&auml;t und Anh&auml;ufung von Cytochrom f, als auch seine Funktion in photosynthetisch aktiven intersystem Elektronentransport. Wir zeigen, dass Unterschiede in der Aminos&auml;ure-Sequenz der kleinen Dom&auml;ne und bestimmte geladene Aminos&auml;uren im gro&szlig;en Bereich der Cytochrom f die physikalischen Eigenschaften dieses Proteins &auml;ndern aber sich nicht auf die Temperaturstabilit&auml;t von der c-Typ-H&auml;m, die scheinbare Halbwertzeit von Cytochrom c in Anwesenheit der chloroplastic Protein-Synthese-Hemmer Chloramphenikol, oder die Kapazit&auml;t f&uuml;r photosynthetische intersystem Elektronentransport wirken, gemessen als e-/ P700. Puls-Kennzeichnung mit [14C] Acetat, kombiniert mit Immunoblotting, zufolge jedoch die negative Selbstregelung Cytochrom-c-Akkumulation in mesophilen C. beobachtet, war Reinhardtii verwandelt mit Chim&auml;ren Konstrukten aus der Kryophile wahrscheinlich das Ergebnis der defekten Vereinigung der Chim&auml;ren Formen der Cytochrom f mit den anderen Untereinheiten des Cytochrom b6/f Komplex Einheimischen zu den Wildtyp C. Reinhardtii. Diese Ergebnisse werden im Hinblick auf die einzigartige Fetts&auml;ure-Zusammensetzung der Thylakoid Membranen von C. Raudensis UWO 241 an kalten Umgebungen angepasst behandelt.

Die kleine Dom&auml;ne des Cytochrom f von der Kryophile Chlamydomonas Raudensis UWO 241 moduliert die scheinbare Molekularmasse und vermindert die Anh&auml;ufung von Cytochrom f in der Mesophiles Chlamydomonas Reinhardtii.

Citocromo f da Psicrofilo Chlamydomonas raudensis UWO 241 ha una bassa termostabilit&agrave; della sua eme di tipo c e un&#39;apparente massa molecolare che &egrave; inferiore a quello del modello mesofili verde alga Chlamydomonas reinhardtii 7 kDa. Abbiamo combinato la trasformazione del cloroplasto, diretto dal sito mutagensis, e la creazione di fusione chimerico costruisce per valutare il contributo di domini specifici e (o) residui di aminoacidi per la struttura, la stabilit&agrave; e l&#39;accumulo di citocromo f, come pure la sua funzione fotosintetica intersistema trasporto degli elettroni. Ci dimostrano che le differenze nella sequenza amminoacidica del dominio piccolo e specifici amminoacidi caricate del grande dominio del citocromo f alterare le propriet&agrave; fisiche di questa proteina ma non influenzano la termostabilit&agrave; dell&#39;eme di tipo c, l&#39;emivita apparente di citocromo f alla presenza il cloramfenicolo inibitore di sintesi della proteina chloroplastic, o la capacit&agrave; per il trasporto di elettroni fotosintetico intersistema, misurata come e-/ P700. Tuttavia, pulse-etichettatura con [14C] acetato, combinato con immunoblotting, ha indicato che l&#39;autoregolazione negativa dell&#39;accumulazione di citocromo f osservata in mesofili C. reinhardtii trasformato con costrutti chimerici dal Psicrofilo era probabilmente il risultato dell&#39;associazione difettosa delle forme chimerica di citocromo f con le altre subunit&agrave; del nativo complesso citocromo b6/f a c. reinhardtii wild type. Questi risultati sono discussi in termini la composizione in acidi grassi unico delle membrane thylakoid del raudensis c. 241 UWO adattato ad ambienti freddi.

Il piccolo dominio di citocromo f da Psicrofilo Chlamydomonas raudensis UWO 241 modula l&#39;apparente massa molecolare e diminuisce l&#39;accumulo di citocromo f nella Chlamydomonas reinhardtii mesofile.

&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x4F4E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; raudensis &#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3; &#x30FB; &#x30AA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EA;&#x30AA; 241 &#x305D;&#x306E; c &#x578B;&#x30D8;&#x30E0;&#x3068; 7 kDa &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x4E2D;&#x6E29;&#x6027;&#x7DD1;&#x85FB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x3044;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8449;&#x7DD1;&#x4F53;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3001;&#x76E3;&#x7763;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; mutagensis &#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x5275;&#x9020;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3066; (&#x307E;&#x305F;&#x306F;) &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x5149;&#x5408;&#x6210;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x96FB;&#x5B50;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x76F8;&#x9055;&#x70B9;&#x3068;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8377;&#x96FB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7269;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x304C; c &#x578B;&#x30D8;&#x30E0;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB; &#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x306E;&#x8010;&#x71B1;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5149;&#x5408;&#x6210;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x9593;&#x96FB;&#x5B50;&#x8F38;&#x9001;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;e - &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;/P700&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; [14 c] &#x9162;&#x9178;&#x306E;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E2D;&#x6E29; C. &#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x4F4E;&#x6E29;&#x304B;&#x3089;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6B20;&#x9665;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x5F62;&#x614B; C. &#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3078;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; b6/f &#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3068;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;C. raudensis &#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3; &#x30FB; &#x30AA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EA;&#x30AA;&#x4F4E;&#x6E29;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x305F; 241 &#x306E;&#x30C1;&#x30E9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x819C;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f &#x4F4E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; raudensis &#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3; &#x30FB; &#x30AA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30EA;&#x30AA; 241 &#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0; f mesophile &#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; c-&#xD0C0;&#xC785; heme&#xACFC; 7 kDa &#xBAA8;&#xB378; mesophilic &#xADF8;&#xB9B0; &#xC870;&#xB958; Chlamydomonas reinhardtii &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB0B4;&#xC5F4;&#xC131;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5FD;&#xB85D;&#xCCB4; &#xBCC0;&#xD658;, mutagensis &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; chimeric &#xD4E8;&#xC804; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; (&#xB610;&#xB294;) &#xAD6C;&#xC870;, &#xC548;&#xC815;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAD11;&#xD569;&#xC131; intersystem &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;. &#xC791;&#xC740; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC758; &#xD070; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; c &#xD0C0;&#xC785; heme chloroplastic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD398;&#xB2C8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504;&#xC758; &#xB0B4;&#xC5F4;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xAD11;&#xD569;&#xC131; intersystem &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0;e-&#xCE21;&#xC815; / p 700. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, immunoblotting&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCD08; &#xC0B0; [14 c] &#xD384;&#xC2A4; &#xB77C;&#xBCA8; reinhardtii&#xB294; psychrophile&#xC5D0;&#xC11C; chimeric &#xAD6C;&#xBB38;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD615; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; C. reinhardtii &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC720;&#xD615; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; b 6 &#xCE35; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f chimeric &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f &#xCD95;&#xC801;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; autoregulation &#xAD00;&#xCC30; mesophilic C.&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; C. raudensis UWO 241 &#xCD94;&#xC6B4; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751;&#xC758; thylakoid &#xB9C9;&#xC740; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xAD6C;&#xC131; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Psychrophile Chlamydomonas raudensis UWO 241&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; mesophile Chlamydomonas reinhardtii&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; f&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Citocromo f de la psicr&oacute;filo Chlamydomonas raudensis UWO 241 tiene una menor termoestabilidad de su hemo de tipo c y una masa molecular aparente que es m&aacute;s bajo que el de la modelo mes&oacute;filas alga verde Chlamydomonas reinhardtii 7 kDa. Combinamos la transformaci&oacute;n del cloroplasto, dirigida mutagensis, y la creaci&oacute;n de fusi&oacute;n quim&eacute;rica construye para evaluar la contribuci&oacute;n de dominios espec&iacute;ficos y (o) residuos de amino&aacute;cidos a la estructura, la estabilidad y la acumulaci&oacute;n de citocromo f, as&iacute; como su funci&oacute;n en intersist&eacute;mica fotosint&eacute;tico del transporte del electr&oacute;n. Demostramos que las diferencias en la secuencia del amino&aacute;cido del peque&ntilde;o dominio y amino&aacute;cidos espec&iacute;ficos cargadas en el gran dominio del citocromo f alterar las propiedades f&iacute;sicas de esta prote&iacute;na pero no afecta ni la termoestabilidad de la heme de tipo c, la vida media aparente de citocromo f en presencia de la cloranfenicol de inhibidor de la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas cloropl&aacute;sticas, ni la capacidad para el transporte de electrones intersist&eacute;mica fotosint&eacute;tica, medido como e-/ P700. Sin embargo, pulso-etiquetado con [14C] acetato, combinado con immunoblotting, indic&oacute; que la autorregulaci&oacute;n negativa de acumulaci&oacute;n de citocromo f observado en mes&oacute;filas C. reinhardtii transformado con construcciones quim&eacute;ricas de la psicr&oacute;filo fue probablemente el resultado de la Asociaci&oacute;n defectuosa de las formas quim&eacute;ricas del citocromo f con las otras subunidades de la citocromo b6/f complejos nativa el tipo salvaje de C. reinhardtii. Estos resultados se discuten en t&eacute;rminos de la composici&oacute;n &uacute;nica de &aacute;cidos grasos de las membranas tilacoides de C. raudensis 241 UWO adaptadas a ambientes fr&iacute;os.

El peque&ntilde;o dominio de citocromo f de la psicr&oacute;filo Chlamydomonas raudensis 241 UWO modula la masa molecular aparente y disminuye la acumulaci&oacute;n de citocromo f en el mes&oacute;filo Chlamydomonas reinhardtii.

&#x6838;&#x5B54;&#x590D;&#x5408;&#x7269; (&#x56FD;&#x5BB6;&#x7B79;&#x5907;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A;) &#x5BF9;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6C9F;&#x901A;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x4EBA;&#x5927;&#x76F8;&#x5173; TREX 2 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;Nup1&#xFF0C;nucleoporin &#x901A;&#x8FC7;&#x4EBA;&#x5927;&#x951A;&#x5B9A;&#x548C; mRNA &#x51FA;&#x53E3;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x5357;&#x82A5; TREX 2 &#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x5176;&#x951A;&#x56FA; nucleoporin &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; orthologs &#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x6807;&#x8BC6; Thp1 &#x548C; Nup1&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; Sac3 &#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;TREX 2 &#x5047;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x51FA;&#x4EBA;&#x610F;&#x6599;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x6240;&#x9700;&#x7684; mRNA &#x51FA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x6307;&#x51FA;&#x4E24;&#x4E2A; Cdc31 &#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; Sus1 &#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;TREX 2 &#x590D;&#x6742;&#x7269;&#x7406;&#x534F;&#x4F1A;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B; TREX 2 &#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x540C;&#x6E90;&#x7684; DSS1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;TREX 2 &#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x6307;&#x8BA4;&#x7684;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5; TREX 2 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x4E3A;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x5960;&#x5B9A;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD; TREX 2 mRNA &#x51FA;&#x53E3;&#x590D;&#x6742;&#xFF1A; &#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C;&#x951A;&#x56FA; nucleoporin&#x3002;

Nuclear pore complexes (NPCs) are vital to nuclear-cytoplasmic communication in eukaryotes. The yeast NPC-associated TREX-2 complex, also known as the Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1 complex, is anchored on the NPC via the nucleoporin Nup1, and is essential for mRNA export. Here we report the identification and characterization of the putative Arabidopsis thaliana TREX-2 complex and its anchoring nucleoporin. Physical and functional evidence support the identification of the Arabidopsis orthologs of yeast Thp1 and Nup1. Of three Arabidopsis homologs of yeast Sac3, two are putative TREX-2 components, but, surprisingly, none are required for mRNA export as they are in yeast. Physical association of the two Cdc31 homologs, but not the Sus1 homolog, with the TREX-2 complex was observed. In addition to identification of these TREX-2 components, direct interactions of the Arabidopsis homolog of DSS1, which is an established proteasome component in yeast and animals, with both the TREX-2 complex and the proteasome were observed. This suggests the possibility of a link between the two complexes. Thus this work has identified the putative Arabidopsis TREX-2 complex and provides a foundation for future studies of nuclear export in Arabidopsis.

Arabidopsis homolog of the yeast TREX-2 mRNA export complex: components and anchoring nucleoporin.

Complexes des pores nucl&#xE9;aires (NPCs) sont vitales pour nucl&#xE9;o-cytoplasmique de communication chez les eucaryotes. La levure NPC-associ&#xE9; TREX-2 complexe, aussi connu comme le complexe THP1-Sac3-Cdc31-SUS1, est ancr&#xE9; sur le PNJ via le nucl&#xE9;oporine Nup1, et est essentielle pour l&#x26;#39;exportation d&#x26;#39;ARNm. Nous rapportons ici l&#x26;#39;identification et la caract&#xE9;risation de l&#x26;#39;Arabidopsis thaliana putatif TREX-2 complexe et son ancrage nucl&#xE9;oporine. Soutien preuves mat&#xE9;rielles et fonctionnelles de l&#x26;#39;identification de l&#x26;#39;Arabidopsis orthologues de la levure et THP1 Nup1. Sur les trois homologues d&#x26;#39;Arabidopsis de levure Sac3, deux sont putatif TREX-2 composants, mais, &#xE9;tonnamment, aucune n&#x26;#39;est requise pour l&#x26;#39;exportation d&#x26;#39;ARNm comme ils sont dans la levure. Association physique des deux Cdc31 homologues, mais pas l&#x26;#39;homologue SUS1, avec le complexe TREX-2 a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e. En plus de l&#x26;#39;identification de ces TREX-2 composants, des interactions directes de l&#x26;#39;homologue d&#x26;#39;Arabidopsis DSS1, qui est une composante &#xE9;tablie prot&#xE9;asome dans la levure et d&#x26;#39;animaux, &#xE0; la fois avec le complexe TREX-2 et le prot&#xE9;asome ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s. Cela sugg&#xE8;re la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;un lien entre les deux complexes. Ainsi, ce travail a identifi&#xE9; l&#x26;#39;Arabidopsis putatif TREX-2 complexe et fournit une base pour de futures &#xE9;tudes de l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire dans Arabidopsis.

Homolog Arabidopsis de la levure TREX-2 Complexe exportation ARNm: Composants et ancrage nucl&#xE9;oporine

Nuclear Pore komplexe (NPCs) sind entscheidend f&uuml;r nukleare zytoplasmatischen Kommunikation in Eukaryoten. Die Hefe NPC-assoziierte TREX-2-Anlage, auch bekannt als der Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1-Komplex, ist auf der NPC &uuml;ber die Nucleoporin Nup1 verankert und ist essentiell f&uuml;r mRNA Export. Hier berichten wir die Identifizierung und Charakterisierung von der vermeintlichen Arabidopsis Thaliana TREX-2-komplex und seine Verankerung Nucleoporin. Physischen und funktionalen Beweise unterst&uuml;tzen die Identifizierung der Arabidopsis Orthologen Hefe Thp1 und Nup1. Von drei Arabidopsis UCP1 Hefe Sac3 sind zwei vermeintliche TREX-2-Komponenten, aber &uuml;berraschenderweise keine ist f&uuml;r mRNA Export erforderlich, wie sie in der Hefe sind. K&ouml;rperliche Vereinigung der beiden Cdc31 UCP1, aber nicht die Sus1 Homolog, mit dem TREX-2-Komplex wurde beobachtet. Neben der Identifizierung dieser TREX-2-Komponenten wurden direkte Interaktionen der Arabidopsis-Homolog von DSS1, die eine etablierte Proteasom Komponente Hefe und Tiere, mit dem TREX-2-komplex und das Proteasom beobachtet. Dies legt die M&ouml;glichkeit einer Verbindung zwischen den beiden komplexen. Diese Arbeit hat somit die vermeintliche Arabidopsis TREX-2-Anlage und bietet eine Grundlage f&uuml;r zuk&uuml;nftige Studien der nuklearen Export in Arabidopsis.

Arabidopsis Homolog des Komplexes Hefe TREX-2 mRNA Export: Komponenten und Verankerung Nucleoporin.

Complessi di poro nucleare (NPC) sono vitali al nucleare citoplasmatico comunicazione negli eucarioti. Il complesso di lievito associato al NPC TREX-2, anche conosciuto come il complesso Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1, &egrave; ancorato sull&#39;ANP tramite il nucleoporin Nup1 ed &egrave; essenziale per l&#39;esportazione del mRNA. Qui riportiamo l&#39;identificazione e la caratterizzazione di Arabidopsis thaliana TREX-2 complesso putativo e suo ancoraggio nucleoporin. Prove fisiche e funzionali supportano l&#39;identificazione dell&#39;Arabidopsis orthologs di lievito Thp1 e Nup1. Di tre omologhi di Arabidopsis di lievito Sac3, due sono putativi TREX-2 componenti, ma, sorprendentemente, nessuno sono richiesti per l&#39;esportazione del mRNA come sono nel lievito. Associazione fisica dei due omologhi di Cdc31, ma non l&#39;omologo Sus1, con il complesso di TREX-2 &egrave; stata osservata. Oltre all&#39;identificazione di questi componenti TREX-2, sono state osservate interazioni dirette dell&#39;Arabidopsis omologo di DSS1, che &egrave; un componente del proteasoma stabilito nel lievito e animali, sia con il complesso di TREX-2 e del proteasoma. Questo suggerisce la possibilit&agrave; di un collegamento tra i due complessi. Cos&igrave; questo lavoro ha identificato il complesso putativo di Arabidopsis TREX-2 e fornisce una base per gli studi futuri di esportazione nucleare in Arabidopsis.

Arabidopsis omologo del lievito TREX-2 mRNA export complesso: Componenti e nucleoporin l&#39;ancoraggio.

&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;NPC&#x306F;&#xFF09;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x6838; - &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;NPC&#x95A2;&#x9023;TREX-2&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x9175;&#x6BCD;&#x306F;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;Nup1&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;NPC&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;mRNA&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;TREX-2&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Thp1&#x306E;&#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x3068;Nup1&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;Sac3&#x306E;3&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x3001;&#x4E8C;&#x4EBA;&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;TREX-2&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x5F53;&#x7136;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x3082;mRNA&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; TREX-2&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;2&#x3064;&#x306E;&#x7269;&#x7406;Cdc31&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Sus1&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;TREX-2&#x6210;&#x5206;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x3084;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;DSS1&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;TREX-2&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x306E;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;TREX-2&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;TREX-2 mRNA&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF1A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;

&#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xB2E8;&#xC9C0; (NPCs)&#xB294; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; NPC &#xAD00;&#xB828; TREX 2 &#xCF64;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; Thp1-Sac3-Cdc31-Sus1 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; Nup1, nucleoporin &#xD1B5;&#xD574; NPC&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815; &#xB418; &#xACE0; mRNA &#xC218;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; putative Arabidopsis thaliana TREX 2 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC815;&#xBC15; nucleoporin&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC99D;&#xAC70; &#xD6A8; Arabidopsis orthologs&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; Thp1 &#xBC0F; Nup1. &#xD6A8; Sac3 3 Arabidopsis homologs&#xC758; &#xB450; &#xC0C1; TREX 2 &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC758;&#xC678;&#xB85C;, &#xC544;&#xBB34;&#xB3C4; mRNA &#xC218;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;. TREX 2 &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; Cdc31 homologs &#xD558;&#xC9C0; Sus1 &#xCCB4;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xD611;&#xD68C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; TREX 2 &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; TREX 2 &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC778; dss1&#xC758; Arabidopsis &#xCCB4;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB450; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;&#xC774; &#xC791;&#xC5C5; &#xC0C1; Arabidopsis TREX 2 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; Arabidopsis &#xD575; &#xC218;&#xCD9C;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD6A8; &#xBAA8; TREX 2 mRNA &#xC218;&#xCD9C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; Arabidopsis &#xCCB4;: &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC815;&#xBC15; nucleoporin.

Complejos de poro nuclear (CPN) son vitales para la comunicaci&#xF3;n n&#xFA;cleo-citoplasma en las c&#xE9;lulas eucariotas. La levadura CNP-asociado TREX-2 complejo, tambi&#xE9;n conocido como el complejo THP1-Sac3-Cdc31-SUS1, est&#xE1; anclado en el CNP a trav&#xE9;s de la nucleoporin Nup1, y es esencial para la exportaci&#xF3;n del mRNA. Aqu&#xED; se presenta la identificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n de la Arabidopsis thaliana supuesta TREX-2 complejo y su nucleoporin anclaje. Apoyo a la evidencia f&#xED;sica y funcional de la identificaci&#xF3;n de la Arabidopsis orthologs de la levadura y la THP1 Nup1. De tres hom&#xF3;logos de Arabidopsis de levadura Sac3, dos son putativo TREX-2 componentes, pero, sorprendentemente, ninguno se requieren para la exportaci&#xF3;n de ARNm como lo son en la levadura. Asociaci&#xF3;n f&#xED;sica de las dos Cdc31 hom&#xF3;logos, pero no el hom&#xF3;logo SUS1, con el complejo TREX-2 se observ&#xF3;. Adem&#xE1;s de la identificaci&#xF3;n de estos TREX-2 componentes, interacciones directas del hom&#xF3;logo de Arabidopsis de DSS1, que es un componente establecida proteasoma en la levadura y los animales, tanto con el complejo TREX-2 y el proteasoma se observaron. Esto sugiere la posibilidad de un v&#xED;nculo entre los dos complejos. As&#xED;, este trabajo ha identificado la Arabidopsis supuesta TREX-2 complejos y proporciona una base para futuros estudios de las exportaciones nucleares en Arabidopsis.

Hom&#xF3;logo de Arabidopsis de la levadura-2 TREX complejo mRNA de exportaci&#xF3;n: Componentes y anclaje Nucleoporin

&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D; (&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;) &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x94C1;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x8840;&#x6D46;&#x4E2D;&#x94C1;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5177;&#x6709;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x6709;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x7528;&#x9014;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6297;&#x83CC;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x7684;&#x591A;&#x4EFB;&#x52A1;&#x6027;&#x8D28;&#x4F7F;&#x5B83;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x5546;&#x4E1A;&#x5E94;&#x7528;&#x4EF7;&#x503C;&#x6781;&#x9AD8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x6210;&#x529F;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8D28;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x4E2D;&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x690D;&#x7269;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x91CD;&#x7EC4; (r) &#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x690D;&#x7269;&#x662F; rhTf &#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7D2F;&#x79EF;&#x7684; 0.25%&#x603B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D; (TSP) &#xFF08;&#x6216;&#x8FBE;&#x5230; 33.5 microg/g &#x65B0;&#x9C9C;&#x53F6;&#x91CD;&#xFF09; &#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x690D;&#x7269;&#x6E90;&#x6027; rhTf &#x4FDD;&#x7559;&#x672C;&#x673A;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x7684;&#x4EE3;&#x540D;&#x8BCD;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F88;&#x591A;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;rhTf &#x53EF;&#x9006;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x94C1;&#x4F53;&#x5916;&#x3001; &#x5C55;&#x54C1;&#x6291;&#x83CC;&#x3001; &#x652F;&#x6301;&#x5728;&#x65E0;&#x8840;&#x6E05;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5438;&#x6536;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x690D;&#x7269; rhTf &#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x9886;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x524D;&#x666F;&#x3002;&#x7279;&#x522B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#x690D;&#x7269; rhTf &#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7528;&#x4E8E;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6216;&#x53E3;&#x5934;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x86CB;&#x767D;/&#x591A;&#x80BD;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x5982;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53E6;&#x5916;&#x8868;&#x793A;&#x542B;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x6837;&#x80BD; 1 (GLP-1&#xFF09; &#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x5176;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x690D;&#x7269;&#x6E90;&#x6027;&#x5BFC;&#x70ED;&#x6CB9;-GLP-1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4FDD;&#x7559;&#x65F6;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4F53;&#x5916;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x690D;&#x7269;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D;&#x6F14;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

Human serum transferrin (hTf) is the major iron-binding protein in human plasma, having a vital role in iron transport. Additionally, hTf has many other uses including antimicrobial functions and growth factor effects on mammalian cell proliferation and differentiation. The multitask nature of hTf makes it highly valuable for different therapeutic and commercial applications. However, the success of hTf in these applications is critically dependent on the availability of high-quality hTf in large amounts. In this study, we have developed plants as a novel platform for the production of recombinant (r)hTf. We show here that transgenic plants are an efficient system for rhTf production, with a maximum accumulation of 0.25% total soluble protein (TSP) (or up to 33.5 microg/g fresh leaf weight). Furthermore, plant-derived rhTf retains many of the biological activities synonymous with native hTf. In particular, rhTf reversibly binds iron in vitro, exhibits bacteriostatic activity, supports cell proliferation in serum-free medium and can be internalized into mammalian cells in vitro. The success of this study validates the future application of plant rhTf in a variety of fields. Of particular interest is the use of plant rhTf as a novel carrier for cell-specific or oral delivery of protein/peptide drugs for the treatment of human diseases such as diabetes.To demonstrate this hypothesis, we have additionally expressed an hTf fusion protein containing glucagon-like peptide 1 (GLP-1) or its derivative in plants. Here, we show that plant-derived hTf-GLP-1 fusion proteins retain the ability to be internalized by mammalian cells when added to culture medium in vitro.

Plant-derived recombinant human serum transferrin demonstrates multiple functions.

Transferrine s&eacute;rique humaine (hTf) est la principale prot&eacute;ine de fixation du fer dans le plasma humain, ayant un r&ocirc;le essentiel dans le transport du fer. En outre, FASS a de nombreux autres usages, y compris les fonctions antimicrobiennes et facteur de croissance des effets sur la prolif&eacute;ration des cellules de mammif&egrave;res et de la diff&eacute;renciation. La nature multit&acirc;che de FASS rend tr&egrave;s pr&eacute;cieux pour des applications th&eacute;rapeutiques et commerciales diff&eacute;rentes. Cependant, le succ&egrave;s de FASS dans ces applications est critique d&eacute;pend de la disponibilit&eacute; de FASS de haute qualit&eacute; en grande quantit&eacute;. Dans cette &eacute;tude, nous avons d&eacute;velopp&eacute; des plantes comme une nouvelle plateforme pour la production de FASS recombinant (r). Nous montrons ici que les plantes transg&eacute;niques sont un syst&egrave;me efficace pour la production de rhTf, avec une accumulation maximale de 0,25 % prot&eacute;ines solubles totales (TSP) (ou jusqu&#39;&agrave; 33,5 microg/g de poids de feuilles fra&icirc;ches). En outre, rhTf d&#39;origine v&eacute;g&eacute;tale conserve de nombreux de l&#39;activit&eacute; biologique et synonyme de FASS native. En particulier, rhTf r&eacute;versible lie fer in vitro, pr&eacute;sente une activit&eacute; bact&eacute;riostatique, prend en charge la prolif&eacute;ration des cellules dans un milieu sans s&eacute;rum et peut &ecirc;tre internalis&eacute; dans in vitro des cellules mammaliennes. Le succ&egrave;s de cette &eacute;tude valide l&#39;application future de la plante rhTf dans des domaines vari&eacute;s. Particuli&egrave;rement int&eacute;ressant est l&#39;utilisation de plantes rhTf comme nouveau transporteur pour livraison sp&eacute;cifique des cellules ou par voie orale de m&eacute;dicaments de prot&eacute;ines/peptides pour le traitement des maladies humaines telles que le diab&egrave;te.Pour d&eacute;montrer cette hypoth&egrave;se, nous avons en outre exprim&eacute; une prot&eacute;ine de fusion de FASS contenant le glucagon-like peptide 1 (GLP-1) ou ses d&eacute;riv&eacute;s chez les plantes. Ici, nous montrons que les prot&eacute;ines v&eacute;g&eacute;tales hTf-GLP-1 conservent la possibilit&eacute; d&#39;&ecirc;tre internalis&eacute;s par lors de l&#39;ajout au milieu de culture in vitro des cellules mammaliennes.

Transferrine de s&eacute;rum humain recombinant v&eacute;g&eacute;tale montre des fonctions multiples.

Menschliches Serum Transferrin (hTf) ist die gro&szlig;e Eisen-verbindliches Protein im Blutplasma, nachdem eine entscheidende Rolle in der Eisen-Transport. HTf hat dar&uuml;ber hinaus viele weitere Bedeutungen einschlie&szlig;lich antimikrobielle Funktionen und Wachstumsfaktor Auswirkungen auf S&auml;ugetier-Zellproliferation und Differenzierung. Die Multitask-Natur von hTf macht es sehr wertvoll f&uuml;r verschiedene therapeutische und kommerzielle Anwendungen. Jedoch h&auml;ngt der Erfolg der hTf in diesen Anwendungen kritisch die Verf&uuml;gbarkeit von qualitativ hochwertigen hTf in gro&szlig;en Mengen. In dieser Studie haben wir eine neuartige Plattform f&uuml;r die Herstellung von rekombinanten (R)-hTf Pflanzen entwickelt. Wir zeigen hier, dass transgene Pflanzen ein effizientes System f&uuml;r die RhTf Produktion, mit einer maximalen Anh&auml;ufung von 0,25 % l&ouml;sliche Gesamtprotein (TSP) (oder bis zu 33,5 &micro;g/g frischer Blatt Gewicht). Dar&uuml;ber hinaus beh&auml;lt pflanzlichen RhTf viele gleichbedeutend mit native hTf biologischen Aktivit&auml;ten. Insbesondere RhTf reversibel bindet Eisen in-vitro, Exponate bakteriostatische T&auml;tigkeit, Zellproliferation in serumfreien Medium unterst&uuml;tzt und kann in den S&auml;ugetier-Zellen in vitro verinnerlicht werden. Der Erfolg dieser Studie &uuml;berpr&uuml;ft die k&uuml;nftige Anwendung der Pflanze RhTf in einer Vielzahl von Feldern. Von besonderem Interesse ist die Verwendung von pflanzlichen RhTf als neuartige Carrier f&uuml;r zellspezifische oder m&uuml;ndlichen Lieferung von Protein/Peptid-Medikamente zur Behandlung von Krankheiten wie Diabetes.Um diese Hypothese zu demonstrieren, haben wir zus&auml;tzlich ein hTf-Fusionsprotein mit Glucagon-Like Peptid 1 (GLP-1) ge&auml;u&szlig;ert oder ihre Ableitung in Pflanzen. Hier zeigen wir, dass pflanzlichen hTf-GLP-1-Fusionsproteine behalten die F&auml;higkeit, von S&auml;ugetierzellen beim in-vitro-Kulturmedium hinzugef&uuml;gt verinnerlicht werden.

Pflanzlichen rekombinantem humanem Serum Transferrin demonstriert mehrere Funktionen.

Transferrina siero umano (hTf) &egrave; la principale proteina ferro nel plasma umano, avendo un ruolo fondamentale nel trasporto del ferro. Inoltre, hTf ha molti altri usi compreso le funzioni antimicrobiche e gli effetti del fattore di crescita su cellule di mammifero proliferazione e differenziazione. La natura multitask di hTf rende altamente prezioso per le diverse applicazioni terapeutiche e commerciale. Tuttavia, il successo di hTf in queste applicazioni dipende criticamente dalla disponibilit&agrave; di alta qualit&agrave; hTf in grandi quantit&agrave;. In questo studio, abbiamo sviluppato impianti come una romanzo piattaforma per la produzione di hTf ricombinante (r). Mostriamo qui che le piante transgeniche sono un sistema efficiente per la produzione di rhTf, con un accumulo massimo di 0,25% proteine solubili totali (TSP) (o fino a 33,5 microg/g peso fresco foglia). Inoltre, rhTf vegetali mantiene molte delle attivit&agrave; biologiche sinonimo hTf nativo. In particolare, rhTf reversibilmente lega ferro in vitro, esibisce attivit&agrave; batteriostatica, supporta la proliferazione cellulare in mezzo senza siero e pu&ograve; essere interiorizzato in cellule di mammifero in vitro. Il successo di questo studio convalida l&#39;applicazione futura della pianta rhTf in una variet&agrave; di campi. Di particolare interesse &egrave; l&#39;uso di rhTf pianta come un romanzo vettore per la consegna orale o cellula-specifico di farmaci proteine/peptidi per il trattamento delle malattie umane come il diabete.Per dimostrare questa ipotesi, abbiamo inoltre espresso una proteina di fusione hTf contenente glucagon-like peptide 1 (GLP-1) o suoi derivati nelle piante. Qui, ci mostra che le proteine vegetali hTf-GLP-1 fusione mantengono la capacit&agrave; di essere internalizzati dalle cellule dei mammiferi quando aggiunto al terreno di coltura in vitro.

Transferrina siero umano ricombinante vegetali illustra molteplici funzioni.

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rhTf &#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x69D8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; 1 (GLP-1&#xFF09; &#x3092;&#x542B;&#x3080; hTf &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;&#x6D3E;&#x751F; hTf GLP 1 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C; in vitro &#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x6DB2;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x690D;&#x7269;&#x7531;&#x6765;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608; &#xCCAD; transferrin (hTf) &#xCCA0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xCCA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, hTf &#xD56D;&#xADE0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB4F1; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Htf&#xC758; &#xBA40;&#xD2F0;&#xD0DC;&#xC2A4;&#xD0B9; &#xC790;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC560;&#xD50C;&#xB9AC;&#xCF00;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; Htf&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740;-&#xD488;&#xC9C8; Htf&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; (r) Htf&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD;&#xBB3C; (&#xB610;&#xB294; 33.5 microg/g &#xC2E0;&#xC120;&#xD55C; &#xC78E; &#xBB34;&#xAC8C;) 0.25% &#xCD1D; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (TSP)&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; rhTf &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xB798; rhTf &#xB9CE;&#xC740; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; Htf&#xC758; &#xB300;&#xBA85;&#xC0AC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0;. &#xD2B9;&#xD788;, rhTf &#xC5ED; &#xCCA0; &#xCCB4; &#xC678;, bacteriostatic &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC2DC;, &#xD608; &#xCCAD; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC131;&#xACF5; &#xACF5;&#xC7A5; rhTf &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;/&#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xAD6C;&#xB450; &#xC18C;&#xC124; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBB3C; Rhtf&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;.&#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC785;&#xC99D;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xAC19;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (GLP-1) 1 hTf &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA85; &#xB610;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD;. &#xC790;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xB798; hTf-GLP-1 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4; &#xC218; &#xBA74; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC;.

&#xC2DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xB798; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; &#xD608; &#xCCAD; transferrin &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Suero humano transferrina (hTf) es la principal prote&iacute;na fijadora de hierro en plasma humano, teniendo un papel vital en el transporte del hierro. Adem&aacute;s, hTf tiene muchos otros usos incluyendo antimicrobianas funciones y efectos del factor de crecimiento en la diferenciaci&oacute;n y proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas de mam&iacute;fero. La multitarea de hTf hacen que sea muy valiosa para diferentes aplicaciones terap&eacute;uticas y comerciales. Sin embargo, el &eacute;xito de hTf en estas aplicaciones depende cr&iacute;ticamente de la disponibilidad de hTf de alta calidad en grandes cantidades. En este estudio, hemos desarrollado plantas como una nueva plataforma para la producci&oacute;n de hTf recombinante (r). Aqu&iacute; demostramos que las plantas transg&eacute;nicas son un sistema eficiente para la producci&oacute;n de rhTf, con una m&aacute;xima acumulaci&oacute;n de prote&iacute;na soluble total (TSP) de 0.25% (o hasta 33,5 microg/g de peso fresco de hoja). Adem&aacute;s, rhTf de origen vegetal conserva muchas de las actividades biol&oacute;gicas sin&oacute;nimas de hTf nativa. En particular, rhTf reversible se une hierro in vitro, exhibe actividad bacteriost&aacute;tica, apoya la proliferaci&oacute;n celular en medio libre de suero y puede ser internalizado en c&eacute;lulas de mam&iacute;fero in vitro. El &eacute;xito de este estudio valida la futura aplicaci&oacute;n de rhTf de la planta en una variedad de campos. De particular inter&eacute;s es el uso de rhTf de la planta como un portador de la novela para la entrega de c&eacute;lulas espec&iacute;ficas o oral de f&aacute;rmacos de prote&iacute;na/p&eacute;ptido para el tratamiento de enfermedades humanas como la diabetes.Para demostrar esta hip&oacute;tesis, adem&aacute;s hemos expresado una prote&iacute;na de fusi&oacute;n de hTf que contiene el p&eacute;ptido similar al glucag&oacute;n 1 (GLP-1) o su derivado en plantas. A continuaci&oacute;n, os mostramos que prote&iacute;nas de origen vegetal hTf-GLP-1 fusi&oacute;n conservan la capacidad de ser internalizados por cuando se a&ntilde;ade al medio de cultivo in vitro de c&eacute;lulas de mam&iacute;fero.

Transferrina del suero humano recombinante de origen vegetal muestra m&uacute;ltiples funciones.

Le fasi finali della biosintesi di fenilalanina (Phe) in batteri, funghi e piante possono verificarsi tramite phenylpyruvate o arogenato intermedi. Questi itinerari sono determinati dalla presenza di prefenato deidratasi (PDT, EC4.2.1.51), che forma phenylpyruvate da prefenato, o arogenato deidratasi (ADT, EC4.2.1.91), che forma la fenilalanina direttamente da arogenato. Abbiamo confrontato le sequenze da selezionare lievito specie a quelli di Arabidopsis thaliana. La in silico analisi ha mostrato che pianta ADTs e lievito PDTs condividono molte caratteristiche comuni permettendo loro di agire come deidratasi/decarboxylases. Tuttavia, sequenze di pianta e lievito chiaramente gruppo indipendente che conferisce specificit&agrave; di substrato distinti. Complementazione del mutante Saccharomyces cerevisiae pha2, che manca di attivit&agrave; PDT e non pu&ograve; crescere in assenza di Phe esogena, &egrave; stato utilizzato per testare l&#39;attivit&agrave; di PDT di a. thaliana ADTs in vivo. Precedente caratterizzazione biochimica ha dimostrato che tutte le sei AtADTs avuto alta attivit&agrave; catalitica con arogenato come substrato, mentre AtADT1, AtADT2 e AtADT6 era limitata anche attivit&agrave; con prefenato. Coerentemente con questi risultati, il test di complementazione ha mostrato che atadt2 prontamente recuperato il fenotipo pha2 dopo &sim;6 crescita giorni a 30 &deg; C, mentre AtADT1 richiesto &sim;13 giorni per mostrare la crescita visibile. Di contrasto, AtADT6 (attivit&agrave; minima PDT) e AtADT3-5 (nessuna attivit&agrave; PDT) erano in grado di recuperare il fenotipo. Questi risultati suggeriscono che solo AtADT1 e AtADT2, ma non le altre quattro ADTs da Arabidopsis, hanno attivit&agrave; funzionale PDT in vivo, mostrando che ci sono due distinti gruppi funzionali. Ipotizziamo che pianta che ADTS hanno evoluto per utilizzare il percorso arogenato per la sintesi di Phe mantenendo alcune attivit&agrave; residua PDT.

Complementazione del mutante di lievito pha2 suggerisce le differenze funzionali per arogenato dehydratases thaliana di Arabidopsis.

&#x7EC6;&#x83CC;&#x3001; &#x771F;&#x83CC;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; (&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;) &#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6700;&#x540E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E19;&#x916E;&#x6216; arogenate &#x53D1;&#x751F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x6761;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#x8131;&#x6C34; EC4.2.1.51 &#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5;&#xFF09; &#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x4ECE;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#x4E19;&#x916E;&#x6216; arogenate &#x8131;&#x6C34; EC4.2.1.91 ADT&#xFF09; &#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x76F4;&#x63A5;&#x4ECE; arogenate &#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4ECE;&#x9009;&#x62E9;&#x5E8F;&#x5217;&#x9175;&#x6BCD;&#x5BF9;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x5728;&#x7845;&#x4E2D;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x690D;&#x7269; ADTs &#x548C;&#x9175;&#x6BCD; PDTs &#x5171;&#x4EAB;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5145;&#x5F53;&#x8131;&#x6C34;/decarboxylases &#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x5171;&#x540C;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x690D;&#x7269;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x5E8F;&#x5217;&#x6E05;&#x695A;&#x5206;&#x7EC4;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5730;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E0D;&#x540C;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; pha2 &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x5916;&#x6E90;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0D;&#x80FD;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684; A.&#x5357;&#x82A5; ADTs &#x4F53;&#x5185; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x6709;&#x516D;&#x4E2A; AtADTs &#x6709;&#x9AD8;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0E; arogenate &#x4F5C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x6750;&#xFF0C;&#x800C; AtADT1&#x3001; AtADT2 &#x548C; AtADT6 &#x4E5F;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0E;&#x9884;&#x82EF;&#x9178;&#x3002;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;&#x4E92;&#x8865;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E; AtADT2 &#x968F;&#x65F6; pha2 &#x578B;&#x540E;&#x6062;&#x590D; &sim;6 &#x5929;&#x589E;&#x957F;&#x5728; 30 &deg; C&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6240;&#x9700;&#x7684; AtADT1 &sim;13 &#x5929;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x51FA;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;AtADT6 &#xFF08;&#x6700;&#x4F4E; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF09; &#x548C; AtADT3-5 &#xFF08;&#x6CA1;&#x6709; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF09; &#x672A;&#x80FD;&#x6536;&#x56DE;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x53EA;&#x6709; AtADT1 &#x548C; AtADT2&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x56DB;&#x4E2A; ADTs &#x4ECE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#xFF0C;&#x6709;&#x529F;&#x80FD; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B; ADTs &#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684; PDT &#x6D3B;&#x52A8;&#x540C;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E; arogenate &#x8DEF;&#x7EBF;&#x90A3;&#x79CD;&#x690D;&#x7269;&#x3002;

Pha2 &#x9175;&#x6BCD;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E92;&#x8865;&#x8868;&#x660E;&#x4ECE;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E3A; arogenate dehydratases &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

The final steps of phenylalanine (Phe) biosynthesis in bacteria, fungi and plants can occur via phenylpyruvate or arogenate intermediates. These routes are determined by the presence of prephenate dehydratase (PDT, EC4.2.1.51), which forms phenylpyruvate from prephenate, or arogenate dehydratase (ADT, EC4.2.1.91), which forms phenylalanine directly from arogenate. We compared sequences from select yeast species to those of Arabidopsis thaliana. The in silico analysis showed that plant ADTs and yeast PDTs share many common features allowing them to act as dehydratase/decarboxylases. However, plant and yeast sequences clearly group independently conferring distinct substrate specificities. Complementation of the Saccharomyces cerevisiae pha2 mutant, which lacks PDT activity and cannot grow in the absence of exogenous Phe, was used to test the PDT activity of A. thaliana ADTs in vivo. Previous biochemical characterization showed that all six AtADTs had high catalytic activity with arogenate as a substrate, while AtADT1, AtADT2 and AtADT6 also had limited activity with prephenate. Consistent with these results, the complementation test showed AtADT2 readily recovered the pha2 phenotype after âˆ¼6 days growth at 30 Â°C, while AtADT1 required âˆ¼13 days to show visible growth. By contrast, AtADT6 (lowest PDT activity) and AtADT3-5 (no PDT activity) were unable to recover the phenotype. These results suggest that only AtADT1 and AtADT2, but not the other four ADTs from Arabidopsis, have functional PDT activity in vivo, showing that there are two functional distinct groups. We hypothesize that plant ADTs have evolved to use the arogenate route for Phe synthesis while keeping some residual PDT activity.

Complementation of the pha2 yeast mutant suggests functional differences for arogenate dehydratases from Arabidopsis thaliana.

Les derni&egrave;res &eacute;tapes de la biosynth&egrave;se de la ph&eacute;nylalanine (Phe) dans les bact&eacute;ries, les champignons et les plantes peuvent se produire via ph&eacute;nylpyruvate ou arog&eacute;nate interm&eacute;diaires. Ces itin&eacute;raires sont d&eacute;termin&eacute;s par la pr&eacute;sence de pr&eacute;ph&eacute;nate d&eacute;shydratase (PDT, EC4.2.1.51), qui forme le ph&eacute;nylpyruvate de pr&eacute;ph&eacute;nate, ou arog&eacute;nate d&eacute;shydratase (ADT, EC4.2.1.91), qui forme la ph&eacute;nylalanine directement &agrave; partir d&#39;arog&eacute;nate. Nous avons compar&eacute; les s&eacute;quences de select levure esp&egrave;ces &agrave; celles de l&#39;Arabidopsis thaliana. L&#39;in silico analyse a montr&eacute; que planter ADTs et PDTs de levure partagent de nombreux points communs, ce qui leur permet d&#39;agir comme d&eacute;shydratase/d&eacute;carboxylases. Cependant, les s&eacute;quences de plantes et de levure groupe clairement conf&eacute;rant ind&eacute;pendamment des sp&eacute;cificit&eacute;s de substrat distinctes. La compl&eacute;mentation du mutant pha2 Saccharomyces cerevisiae, qui n&#39;a pas d&#39;activit&eacute; de la PDT et ne peut pas se d&eacute;velopper en l&#39;absence de Phe exog&egrave;ne, a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour tester l&#39;activit&eacute; de PDT d&#39;a. thaliana ADTs in vivo. Caract&eacute;risation biochimique pr&eacute;c&eacute;dente a montr&eacute; que tous les six AtADTs avaient une activit&eacute; catalytique &eacute;lev&eacute;e avec arog&eacute;nate comme substrat, tandis que AtADT1, AtADT2 et AtADT6 activit&eacute; avec pr&eacute;ph&eacute;nate avaient aussi limit&eacute;e. Conform&eacute;ment &agrave; ces r&eacute;sultats, le test de compl&eacute;mentation a montr&eacute; Qu&#39;atadt2 facilement r&eacute;cup&eacute;r&eacute; le ph&eacute;notype pha2 apr&egrave;s 6 jours de croissance &agrave; 30 &deg; C, tandis que AtADT1 n&eacute;cessaire &minus;13 jours d&#39;afficher une croissance visible. En revanche, AtADT6 (activit&eacute; plus faible de PDT) et AtADT3-5 (aucune activit&eacute; PDT) n&#39;ont pas pu r&eacute;cup&eacute;rer le ph&eacute;notype. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que seulement AtADT1 et AtADT2, mais pas les quatre autres ADTs d&#39;Arabidopsis, activit&eacute; PDT fonctionnelle in vivo, montrant qu&#39;il existe deux groupes distincts fonctionnelles. Nous &eacute;mettons l&#39;hypoth&egrave;se que plante Qu&#39;adts ont &eacute;volu&eacute; pour utiliser la route arog&eacute;nate pour Phe synth&egrave;se tout en gardant une activit&eacute; r&eacute;siduelle de la PDT.

La compl&eacute;mentation du mutant pha2 levure sugg&egrave;re des diff&eacute;rences fonctionnelles pour arog&eacute;nate d&eacute;shydratases d&#39;Arabidopsis thaliana.

Die letzten Schritte der Phenylalanin (Phe)-Biosynthese in Bakterien, Pilzen und Pflanzen k&ouml;nnen &uuml;ber Phenylpyruvate oder Arogenate Zwischenprodukte auftreten. Diese Routen werden bestimmt durch die Anwesenheit von Prephenate-Dehydratase (PDT, EC4.2.1.51), die Phenylpyruvate aus Prephenate bildet oder Arogenate-Dehydratase (ADT, EC4.2.1.91), die Phenylalanin direkt aus Arogenate bildet. Wir verglichen Sequenzen w&auml;hlen Sie aus Hefe-Arten zu denen von Arabidopsis Thaliana. Die Analyse zeigte, dass Pflanzen ADTs und Hefe PDTs Teilen in Silico viele Gemeinsamkeiten, sodass sie als Dehydratase/Decarboxylases dienen. Jedoch Gruppe Pflanzen und Hefe Sequenzen deutlich zur &Uuml;bertragung unabh&auml;ngig voneinander verschiedene Substrat Besonderheiten. Erg&auml;nzung von der Saccharomyces Cerevisiae pha2 Mutant, die PDT Aktivit&auml;t fehlt und kann nicht wachsen, ohne exogene Phe, wurde verwendet, um die PDT-Aktivit&auml;t von A. Thaliana ADTs in-vivo-test. Vorherige biochemische Charakterisierung zeigte, dass alle sechs AtADTs hohe katalytische Aktivit&auml;t mit Arogenate als Substrat, hatte w&auml;hrend AtADT1, AtADT2 und AtADT6 auch nur T&auml;tigkeit mit Prephenate begrenzte. In &Uuml;bereinstimmung mit diesen Ergebnissen, zeigte der Erg&auml;nzung-Test AtADT2 leicht erholt der pha2-Ph&auml;notyp nach &sim;6 Tage Wachstum bei 30 &deg; C, w&auml;hrend AtADT1 &sim;13 Tage sichtbar Wachstum erforderlich. Durch Kontrast, AtADT6 (niedrigste PDT-Aktivit&auml;t) und AtADT3-5 (keine PDT-Aktivit&auml;t) waren nicht der Ph&auml;notyp zu erholen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass nur AtADT1 und AtADT2, aber nicht die anderen vier ADTs von Arabidopsis, funktionelle PDT-Aktivit&auml;t in vivo zeigt haben, gibt es zwei funktionelle Gruppen. Wir vermuten die Pflanze, die ADTs entwickelt haben, um die Arogenate-Route f&uuml;r Phe-Synthese zu verwenden, und dabei einige PDT-Restaktivit&auml;t.

Erg&auml;nzung von der pha2 Hefe Mutant schl&auml;gt Funktionsunterschiede f&uuml;r Arogenate Dehydratases von Arabidopsis Thaliana.

&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; (Phe) &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x83CC;&#x985E;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;phenylpyruvate &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x304B;&#x3089; phenylpyruvate &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;PDT&#x3001;EC4.2.1.51&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;ADT&#x3001;EC4.2.1.91&#xFF09; &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x7A2E;&#x3092;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;Silico &#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;ADTs &#x690D;&#x7269;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E; Pdt &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5171;&#x6709;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;/&#x70AD;&#x9178;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PDT &#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027; Phe &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x80B2;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD; pha2 &#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC; PDT &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3; &#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA; ADTs in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x524D;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA; AtADT1&#x3001;AtADT2&#x3001;AtADT6 &#x3082;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x9593;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x516D;&#x3064;&#x306E; AtADTs &#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x8A66;&#x9A13; AtADT1 &sim;13 &#x65E5;&#x76EE;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C; AtADT2 &#x5BB9;&#x6613;&#x306B; pha2 &#x8868;&#x73FE;&#x578B; 30 &#x2103; &sim;6 &#x65E5;&#x6210;&#x9577;&#x5F8C;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;AtADT6 &#xFF08;&#x6700;&#x4F4E; PDT &#x6D3B;&#x52D5;&#xFF09; &#x3068; AtADT3-5 (PDT &#x672A;&#x8D70;&#x884C;&#xFF09; &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306E;&#x307F; AtADT1 &#x3068; AtADT2&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; 4 &#x3064; ADTs &#x3068;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x304B;&#x3089;&#x6A5F;&#x80FD; PDT &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092; in vivo &#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Adt &#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E; PDT &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089; Phe &#x5408;&#x6210;&#x7528;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Pha2 &#x9175;&#x6BCD;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x7531;&#x6765;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x9178; dehydratases &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x76F8;&#x9055;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;, &#xACF0; &#xD321;&#xC774;, &#xC2DD;&#xBB3C; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (Phe) &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCD5C;&#xC885; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; phenylpyruvate &#xB610;&#xB294; arogenate&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; prephenate&#xC5D0;&#xC11C; phenylpyruvate&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; prephenate dehydratase (PDT, EC4.2.1.51), &#xB610;&#xB294; arogenate&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; arogenate dehydratase (ADT, EC4.2.1.91)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; Arabidopsis thaliana&#xC758; &#xC885; &#xD6A8; &#xBAA8;. Silico&#xC5D0; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xC7A5; Adts&#xC640; PDTs &#xD6A8; &#xBAA8; dehydratase/decarboxylases&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB9CE;&#xC740; &#xACF5;&#xD1B5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2DD;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xADF8;&#xB8F9;. A. thaliana ADTs vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; PDT &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; exogenous Phe&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB2E4;, Saccharomyces cerevisiae pha2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; AtADT1, AtADT2 &#xBC0F; Atadt6&#xB3C4; prephenate&#xC640; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBAA8;&#xB4E0; 6 &#xAC1C;&#xC758; Atadts&#xB97C; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; arogenate&#xC640; &#xB192;&#xC740; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; AtADT2 &#xC27D;&#xAC8C; &#xBCF5;&#xAD6C; pha2 &#xD615; 30 &deg; C&#xC5D0;&#xC11C; &sim;6 &#xC77C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD6C4; AtADT1 &#xD544;&#xC218; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &sim;13 &#xC77C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, AtADT6 (&#xCD5C;&#xC800; PDT &#xD65C;&#xB3D9;) AtADT3-5 (PDT &#xD65C;&#xB3D9;) phenotype&#xC744; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; AtADT1 &#xBC0F; AtADT2, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB978; 4 &#xAC1C;&#xC758; ADTs Arabidopsis&#xC5D0;&#xC11C; in vivo &#xAE30;&#xB2A5; PDT &#xD65C;&#xB3D9; &#xB450; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC00;&#xC124; Adts&#xB294; Phe &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; arogenate &#xACBD;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xBD80; &#xC794;&#xC5EC; PDT &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD654;&#xB294; &#xC2DD;&#xBB3C;.

Pha2 &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; Arabidopsis thaliana&#xC5D0;&#xC11C; arogenate dehydratases&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xCC28;&#xC774; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los pasos finales de la bios&iacute;ntesis de la fenilalanina (Phe) en bacterias, hongos y plantas pueden ocurrir a trav&eacute;s de fenilpiruvato o arogenate intermedios. Estas rutas est&aacute;n determinadas por la presencia de prefenato deshidratasa (PDT, EC4.2.1.51), que forma fenilpiruvato de prefenato o dehydratase arogenate (ADT, EC4.2.1.91), que forma fenilalanina directamente arogenate. Se compararon las secuencias de seleccionar especies que de Arabidopsis thaliana de levadura. El in silico an&aacute;lisis demostr&oacute; que planta ADTs y levadura PDTs comparten muchas caracter&iacute;sticas comunes, lo que les permite actuar como deshidratasa/decarboxilasas. Sin embargo, la planta y levadura secuencias grupo claramente independientemente que confieren las especificidades distintas del sustrato. Complementaci&oacute;n del mutante pha2 Saccharomyces cerevisiae, que carece de actividad de PDT y no puede crecer en ausencia de Phe ex&oacute;geno, se utiliz&oacute; para probar la actividad PDT de a. thaliana ADTs in vivo. Caracterizaci&oacute;n bioqu&iacute;mica anterior demostr&oacute; que todos seis AtADTs ten&iacute;an alta actividad catal&iacute;tica con arogenate como sustrato, mientras que AtADT1, AtADT2 y AtADT6 tambi&eacute;n hab&iacute;an actividad con Prefenato limitada. De acuerdo con estos resultados, la prueba de complementaci&oacute;n demostr&oacute; que atadt2 recuperado f&aacute;cilmente el fenotipo pha2 despu&eacute;s de &sim;6 crecimiento de d&iacute;as a 30 &deg; C, mientras que AtADT1 requiere &sim;13 d&iacute;as para mostrar crecimiento visible. Por el contrario, AtADT6 (menor actividad de PDT) y AtADT3-5 (sin actividad del PDT) fueron incapaces de recuperarse el fenotipo. Estos resultados sugieren que s&oacute;lo AtADT1 y AtADT2, pero no los otros cuatro ADTs de Arabidopsis, tienen actividad funcional de la PDT en vivo, mostrando que hay dos grupos funcionales. Presumimos planta que ADTS han evolucionado para utilizar la ruta arogenate para s&iacute;ntesis de Phe manteniendo cierta actividad residual del PDT.

Susanne E. Kohalmi

Department of Biology

University of Western Ontario

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Susanne E. Kohalmi

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University of Western Ontario

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Department of Biology