<em>In Vitro</em> Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR), a chloride channel located primarily at the apical membranes of epithelial cells, plays a ...

Wayne State University School of Medicine

&#x89C2;&#x5BDF;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; (IL)&#x3001; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x548C;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7; &#xFF08;SARS&#xFF09; &#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x8840;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE; (WBC) &#x8BA1;&#x6570;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5E76;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F24;&#x8005;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x529F;&#x80FD;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x4E0D;&#x5B89;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;&#x4E0E;&#x4E25;&#x91CD;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EFC;&#x5408;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

To observe the changes of serum interleukins (IL), T-lymphocyte subsets, and white blood cell (WBC) count in patients with severe acute respiratory syndrome (SARS), and to investigate the relationship between injured immune function, immune response and disturbed immune adjustment in SARS patients.

The relationship between serum interleukins and T-lymphocyte subsets in patients with severe acute respiratory syndrome.

D&#39;observer les changements de s&eacute;rum interleukines (IL), sous-ensembles de lymphocytes T et nombre de globules blancs (WBC) chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu s&eacute;v&egrave;re (SRAS) et d&#39;&eacute;tablir la relation entre les bless&eacute;s de la fonction immunitaire, la r&eacute;ponse immunitaire et perturb&eacute;e r&eacute;glage syst&egrave;me immunitaire chez les patients atteints du SRAS.

La relation entre les interleukines de s&eacute;rum et de sous-ensembles de lymphocytes T chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu s&eacute;v&egrave;re.

Die Beziehung zwischen Serum Interleukine und T-Lymphozyten-Untergruppen bei Patienten mit schweren akuten respiratorischen Syndroms.

Per osservare i cambiamenti del siero interleuchine (IL), sottoinsiemi dei linfociti T e numero di globuli bianchi (WBC) nei pazienti con sindrome respiratoria acuta grave (SARS) e per indagare la relazione tra funzione immunitaria ferita, risposta immunitaria e disturbata regolazione immunitaria nei pazienti SARS.

Il rapporto tra siero interleuchine e sottoinsiemi dei linfociti T nei pazienti con sindrome respiratoria acuta grave.

&#x8840;&#x6E05;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; (IL), T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CD;&#x75C7;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x5668;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4; (SARS) &#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; (WBC) &#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x90AA;&#x9B54;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8ABF;&#x6574; SARS &#x60A3;&#x8005;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3002;

&#x8840;&#x6E05;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;&#x3068;&#x91CD;&#x75C7;&#x6025;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x5668;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;

&#xD608; &#xCCAD; interleukins (IL), T-&#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; &#xBC0F; &#xC911;&#xC99D; &#xAE09;&#xC131; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; (SARS) &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; (WBC) &#xC218;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xC0C1;&#xB41C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xBC0F; &#xBC29;&#xD574; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC870;&#xC815; SARS &#xD658;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;.

&#xD608; &#xCCAD; interleukins&#xC640; &#xC911;&#xC99D; &#xAE09;&#xC131; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; T-&#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; &#xAC04;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Observar los cambios de suero interleuquinas (IL), T-linfocitarios y recuento de gl&oacute;bulos blancos (WBC) en pacientes con s&iacute;ndrome respiratorio agudo severo (SARS) y para investigar la relaci&oacute;n entre la funci&oacute;n inmune lesionada, respuesta inmune y perturbado regulaci&oacute;n inmune en los pacientes con SRAG.

La relaci&oacute;n entre suero interleucinas y subconjuntos de linfocitos T en pacientes con s&iacute;ndrome respiratorio agudo severo.

Stimolazione di AMP ciclico di GTP cicloidrolasi I (GCH1) fu indagato trascrizione del gene in cellule PC12, la proteina chinasi A deficit PC12 cella linea 126-1B2 e celle C6 utilizzando dosaggi di trasfezione transiente di costrutti reporter promotore prossimale e wild type o dominante negative proteine, immunoprecipitazione della cromatina e PCR quantitativa in tempo reale. Questi studi dimostrano che la chinasi di proteina A &egrave; necessaria e sufficiente per la trascrizione di cAMP-dipendente conferito da sia l&#39;elemento campo normativo e sequenza-casella adiacente. Nelle cellule intatte questi elementi cis-sono stati mostrati per associare cAMP response element binding protein, sequenza enhancer binding protein beta e nuclear factor-Y, con ogni proteina controllando un diverso aspetto della risposta cAMP. AMP ciclico che agisce attraverso proteina chinasi A stimolato reclutamento promotore della sequenza enhancer binding proteina beta, nuclear factor-Y e RNA polimerasi II mentre riducono il promotore di ciclico AMP response element binding protein. Stimolazione della trascrizione di cAMP non era associata con aumentato acetilazione di istoni H3 e H4 presso nucleosomes promotore prossimale, indicando che istone acetiltransferasi non sono coinvolti in questa risposta. Comunque, l&#39;inibizione farmacologica dell&#39;attivit&agrave; di deacetylase dell&#39;istone ha fatto aumentare dell&#39;istone H4 acetilazione e l&#39;assunzione di RNA polimerasi II, indicando che l&#39;istone acetiltransferasi sono normalmente associati con il promotore prossimale. Solo nelle cellule C6, tuttavia, ha fatto inibizione dei deacetylases dell&#39;istone stimolare la trascrizione e sinergizzare con cAMP. Questi esperimenti forniscono il primo assaggio del promotore del gene GCH1 funzionamento all&#39;interno delle cellule intatte e forniscono evidenza del coinvolgimento di istone acetiltransferasi contenenti complessi GCH1 trascrizione del gene.

Reclutamento di proteina chinasi dipendente A della RNA polimerasi II, beta C/EBP e NF-Y per il ratto GTP cicloidrolasi I promotore prossimale si verifica senza alterazioni nell&#39;acetilazione dell&#39;istone.

GTP &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x73AF;-&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x523A;&#x6FC0;&#x6211; (GCH1) &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x7F3A;&#x4E4F;&#x75C7; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF; 126-1B2 &#x548C; C6 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x77AC;&#x65F6;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x8BB0;&#x8005;&#x6784;&#x9020;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6216;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x8425;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x8425;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5143;&#x7D20;&#x53CA;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684; CCAAT &#x6846;&#x6240;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7684;&#x3002;&#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#x653E;&#x6620;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x5143;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; CCAAT-&#x589E;&#x5F3A;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; &beta; &#x548C;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x63A7;&#x5236; cAMP &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x523A;&#x6FC0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x62DB;&#x8058; CCAAT-&#x589E;&#x5F3A;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; &beta;&#x3001; &#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y &#x548C; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x540C;&#x65F6;&#x6D88;&#x8017;&#x5FAA;&#x73AF; AMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x3002;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0D;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H3 &#x548C; H4 &#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x5C0F;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x4E0D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x786E;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; H4 &#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x901A;&#x5E38;&#x4E0E;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x7684;&#x62DB;&#x8058;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x5728; C6 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x672A;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x523A;&#x6FC0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x534F;&#x540C;&#x4E0E;&#x9635;&#x8425;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x5728;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684; GCH1 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x770B;&#x5230;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x542B;&#x6709;&#x590D;&#x5408;&#x4F53; GCH1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II&#xFF0C;C/EBP beta &#x548C; NF-Y &#x5BF9;&#x5927;&#x9F20; GTP &#x73AF;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x4F9D;&#x8D56;&#x62DB;&#x52DF;&#x6211;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;

Cyclic-AMP stimulation of GTP cyclohydrolase I (GCH1) gene transcription was investigated in PC12 cells, the protein kinase A-deficient PC12 cell line 126-1B2 and C6 cells using transient transfection assays of proximal promoter reporter constructs and wild type or dominant negative proteins, chromatin immunoprecipitation and real-time quantitative PCR. These studies show that protein kinase A is necessary and sufficient for cAMP-dependent transcription conferred by both the cAMP regulatory element and the adjacent CCAAT-box. In intact cells these cis-elements were shown to bind cAMP response element binding protein, CCAAT-enhancer binding protein beta and nuclear factor-Y, with each protein controlling a different aspect of the cAMP response. Cyclic-AMP acting through protein kinase A stimulated promoter recruitment of CCAAT-enhancer binding protein beta, nuclear factor-Y and RNA polymerase II while depleting the promoter of cyclic-AMP response element binding protein. Stimulation of transcription by cAMP was not associated with increased acetylation of histones H3 and H4 at proximal promoter nucleosomes, indicating that histone acetyltransferases are not involved in this response. Nonetheless, pharmacological inhibition of histone deacetylase activity did increase histone H4 acetylation and the recruitment of RNA polymerase II, indicating that histone acetyltransferases are normally associated with the proximal promoter. Only in C6 cells, however, did inhibition of histone deacetylases stimulate transcription and synergize with cAMP. These experiments provide the first glimpse of the GCH1 gene promoter functioning within intact cells and supply evidence for the involvement of histone acetyltransferase-containing complexes in GCH1 gene transcription.

Protein kinase A-dependent recruitment of RNA polymerase II, C/EBP beta and NF-Y to the rat GTP cyclohydrolase I proximal promoter occurs without alterations in histone acetylation.

Stimulation de l&#39;AMP-cyclique de GTP cyclohydrolase I (GCH1) transcription g&eacute;nique a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e dans les cellules PC12, la prot&eacute;ine kinase A-deficient PC12 cellule ligne 126-1 b 2 et les cellules C6 utilisant la transfection transitoire du promoteur proximale journaliste constructions et prot&eacute;ines n&eacute;gatives de type sauvage ou dominante, immunopr&eacute;cipitation de la chromatine et la PCR quantitative en temps r&eacute;el. Ces &eacute;tudes montrent que cette prot&eacute;ine kinase A est n&eacute;cessaire et suffisant pour la transcription d&eacute;pendante de l&#39;AMPc, conf&eacute;r&eacute;e par l&#39;&eacute;l&eacute;ment r&eacute;glementaire cAMP et la FEF-case adjacente. Dans les cellules intactes ces &eacute;l&eacute;ments-cis ont &eacute;t&eacute; montr&eacute;s pour lier la prot&eacute;ine cAMP response element binding, de fef-renforceur liaison prot&eacute;ine b&ecirc;ta et de facteur nucl&eacute;aire-Y, avec chaque prot&eacute;ine contr&ocirc;lant un aspect diff&eacute;rent de la r&eacute;ponse de l&#39;AMPc. AMP-cyclique par l&#39;interm&eacute;diaire de prot&eacute;ine kinase A stimul&eacute; le recrutement de promoteur de la FEF-enhancer b&ecirc;ta prot&eacute;ine de liaison, facteur nucl&eacute;aire-Y et l&#39;ARN polym&eacute;rase II tout en appauvrissant le promoteur de la prot&eacute;ine AMP-cyclique response element binding. Stimulation de la transcription par le cAMP n&#39;&eacute;tait pas associ&eacute;e &agrave; une augmentation ac&eacute;tylation des histones H3 et H4 &agrave; nucl&eacute;osomes promoteur proximale, indiquant que histones ac&eacute;tyltransf&eacute;rases ne participent pas &agrave; cette r&eacute;ponse. N&eacute;anmoins, l&#39;inhibition pharmacologique de l&#39;activit&eacute; histone deacetylase a augment&eacute; l&#39;ac&eacute;tylation des histones H4 et le recrutement de l&#39;ARN polym&eacute;rase II, indiquant que les histones ac&eacute;tyltransf&eacute;rases sont normalement associ&eacute;s avec le promoteur proximal. Seulement chez les cellules C6, cependant, fait l&#39;inhibition de l&#39;histone d&eacute;sac&eacute;tylases stimulent la transcription et agir en synergie avec le cAMP. Ces exp&eacute;riences fournissent le premier contact avec le promoteur du g&egrave;ne GCH1 fonctionnement dans les cellules intactes et fournissent une preuve pour l&#39;implication des complexes de histone ac&eacute;tyltransf&eacute;rase contenant dans la transcription du g&egrave;ne GCH1.

Recrutement de kinase A d&eacute;pendante de prot&eacute;ine de l&#39;ARN polym&eacute;rase II, beta C/EBP et NF-Y &agrave; la cyclohydrolase rat GTP je promoteur proximale s&#39;effectue sans alt&eacute;rations de l&#39;ac&eacute;tylation des histones.

Zyklischem AMP Stimulierung der GTP-Cyclohydrolase I (GCH1) Gen-Transkription wurde in PC12 Zellen, die Protein-Kinase A-defizienten PC12 Zellen Linie 126-1B2 und C6 Zellen mit transiente Transfektion Proben proximale Promotor Reporter Konstrukte und Wildtyp oder Dominant negative Protein-, Chromatin Immunopr&auml;zipitation und quantitative Echtzeit-PCR untersucht. Diese Studien zeigen, dass die Proteinkinase A ist notwendig und hinreichend f&uuml;r die cAMP-abh&auml;ngige Transkription durch das cAMP regulatorischen Element und die angrenzenden CCAAT /-Box &uuml;bertragen. In intakten Zellen wurden diese Cis-Elemente aufgef&uuml;hrt, cAMP Response Element verbindliches Protein, CCAAT / Enhancer Binding Protein Beta und nuklearer Faktor-Y, mit jedem Protein Kontrolle einen anderen Aspekt der cAMP-Antwort zu binden. Cyclic-AMP handelnd durch Protein-Kinase A stimuliert Projekttr&auml;ger Rekrutierung von CCAAT / Enhancer Binding Protein Beta, nukleare Faktor-Y und der RNS-Polymerase II beim Abbau des Projekttr&auml;gers des zyklischen AMP Antwort Element verbindliches Protein. Stimulation der Transkription von cAMP war nicht verbunden mit erh&ouml;hten Acetylierung der Histone H3 und H4 am proximalen Projekttr&auml;ger Nucleosomes, angibt, dass Histon-Acetyltransferases sind diese Reaktion nicht beteiligt. Dennoch stieg die pharmakologische Hemmung der Histon Deacetylase T&auml;tigkeit, Histon H4 Acetylierung und die Rekrutierung von RNS-Polymerase II, darauf hinweist, dass Histon-Acetyltransferases der proximalen Projekttr&auml;ger normalerweise zugeordnet sind. Nur in C6 Zellen jedoch tat Hemmung der Histon Deacetylases Transkription zu stimulieren und synergize mit cAMP. Diese Experimente bieten den ersten Eindruck von der GCH1 gen Projekttr&auml;ger in intakten Zellen funktionieren und Beweise f&uuml;r die Beteiligung der Histon-Acetyltransferase-haltigen-komplexe in GCH1 gen-Transkription.

Protein-Kinase A-abh&auml;ngigen Rekrutierung von RNS-Polymerase II, C/EBP-Beta und NF-Y, um die Ratte GTP-Cyclohydrolase I proximale Promotor tritt ohne &Auml;nderungen in Histon-Acetylierung.

&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x523A;&#x6FC0;&#x79C1; (GCH1) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306F; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x6B20;&#x4E4F; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; 126-1B2 &#x904E;&#x6E21;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x91CF;&#x7684;&#x306A; PCR &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; C6 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x5FC5;&#x8981;&#x304B;&#x3064;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B; CCAAT &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x6388;&#x4E0E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x7528;&#x3067;&#x3059;.&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; cis &#x8981;&#x7D20;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;CCAAT &#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5404;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x6F14;&#x6280;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x52DF;&#x96C6; CCAAT &#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y &#x3068; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; II &#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3 &#x3068; H4 &#x306F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H4 &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; II&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x901A;&#x5E38;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;C6 &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5834;&#x3067;&#x306F;&#x76F8;&#x4E57;&#x52B9;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6A5F;&#x80FD; GCH1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x4E00;&#x898B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;GCH1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; II&#x3001;C/EBP &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068; NF-Y &#x3092;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GTP &#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x4F9D;&#x5B58;&#x52DF;&#x96C6;&#x79C1;&#x306F;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306A;&#x3057;&#x3002;

GTP cyclohydrolase&#xC758; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC790;&#xADF9; &#xB09C; (GCH1) &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; PC12 &#xC138;&#xD3EC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; 126-1B2 &#xACFC;&#xB3C4; transfection &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAE30;&#xC790; &#xAD6C;&#xBB38; &#xBC0F; &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC885;&#xB958;&#xB098; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, chromatin immunoprecipitation &#xBC0F; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC591;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; C6 &#xC140;&#xC5D0; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xB294; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xC0AC; &#xCEA0;&#xD504; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; CCAAT &#xC0C1;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC774; cis &#xC694;&#xC18C; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, CCAAT &#xC99D;&#xAC15; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC0F; &#xD575; &#xC778;&#xC790;-Y &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xAC01; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5F0;&#xAE30; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; AMP &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xC5C6;&#xC560;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; CCAAT&#xB97C; &#xC99D;&#xAC15; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCA0;&#xD0C0;, &#xD575; &#xC778;&#xC790;-Y&#xC640; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3 &#xBC0F; H4 &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferases&#xB294;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; nucleosomes&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; acetylation&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC57D;&#xB9AC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H4 acetylation&#xC640; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferases &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADFC; &#xC704; &#xBAA8;&#xD130;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xC99D;&#xAC00; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; C6 &#xC140;&#xC5D0;&#xB9CC;, &#xC5B5;&#xC81C; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylases&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xC54A;&#xC558;&#xACE0; synergize &#xCEA0;&#xD504;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; GCH1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5FF;&#xBCFC; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC0F; GCH1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferase &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xBA85; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560;.

RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II, C/EBP &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC640; &#xC950; GTP cyclohydrolase NF Y&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xC885;&#xC18D; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB098; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; histone acetylation &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5C6;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Estimulaci&oacute;n de AMP-c&iacute;clico de GTP ciclohidrolasa I (GCH1) transcripci&oacute;n gen&eacute;tica fue investigado en c&eacute;lulas PC12, prote&iacute;na quinasa presentan deficiencia A PC12 celular l&iacute;nea 126-1B2 y c&eacute;lulas C6 mediante ensayos de transfecci&oacute;n transitoria de construcciones de reportero promotor proximal y prote&iacute;nas negativas tipo salvaje o dominante, inmunoprecipitaci&oacute;n de cromatina y PCR cuantitativa en tiempo real. Estos estudios muestran que Kinase de prote&iacute;na A es necesario y suficiente para la transcripci&oacute;n dependiente de campo conferido por el elemento regulador del campo y la caja adyacente a CCAAT. En las c&eacute;lulas intactas estos elementos cis fueron demostrados para enlazar la prote&iacute;na de uni&oacute;n a elemento de respuesta campo, beta de prote&iacute;na de uni&oacute;n a CCAAT potenciador y nuclear factor-Y, con cada prote&iacute;na controla un aspecto diferente de la respuesta del campo. AMP-c&iacute;clico actuando a trav&eacute;s de la prote&iacute;na cinasa A hab&iacute;a estimulado reclutamiento de promotor de la beta de la prote&iacute;na de uni&oacute;n a CCAAT potenciador, factor nuclear-Y y ARN polimerasa II mientras que agotan el promotor de la prote&iacute;na de uni&oacute;n a elemento de respuesta de AMP c&iacute;clico. Estimulaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n por el campamento no se asoci&oacute; con mayor acetilaci&oacute;n de histonas H3 y H4 en nucleosomas promotor proximal, indicando histona Acetiltransferasas no participan en esta respuesta. No obstante, la inhibici&oacute;n farmacol&oacute;gica de la actividad de histona deacetilasa aument&oacute; acetilaci&oacute;n de histona H4 y el reclutamiento de la ARN polimerasa II, indicando que la histona Acetiltransferasas son normalmente asociados con el promotor proximal. S&oacute;lo en c&eacute;lulas C6, sin embargo, inhibici&oacute;n de la histona desacetilasas estimular la transcripci&oacute;n y sinergizar con campamento. Estos experimentos proporcionan el primer vistazo del promotor del gen GCH1 funcionamiento dentro de las c&eacute;lulas intactas y proporcionar evidencia de la participaci&oacute;n de complejos de histona acetiltransferasa que contienen en la transcripci&oacute;n del gen GCH1.

Reclutamiento de prote&iacute;na cinasa dependiente de A de la ARN polimerasa II, C/EBP-beta y NF-Y a la rata GTP ciclohidrolasa I promotor proximal ocurre sin alteraciones en la acetilaci&oacute;n de histonas.

&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A; GC &#x6846;&#x4E2D;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C;&#x8425;&#x4F9D;&#x8D56; GTP Cyclohydrolase &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x6211;&#x4F7F;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x548C;&#x6280;&#x672F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; GC &#x6846;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E09;&#x4F4D;&#x4E00;&#x4F53;&#x7684;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;-&#x53D1;&#x73B0;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Sp1 &#x548C; Sp3&#x3002; Sp1 &#x548C; Sp3 &#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x8425;&#x5730;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E0D;&#x5230;&#x53D1;&#x8D77;&#x4EBA;&#x62DB;&#x52DF;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x679C;&#x8747; SL2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Sp3 &#x5360;&#x636E; GC &#x6846;&#x5185;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x8F6C;&#x5F55;&#x72EC;&#x81EA;&#x884C;&#x4E8B;&#x65F6;&#x548C;&#x534F;&#x540C;&#x4E0E;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y (NF-Y) &#x548C; CCAAT/&#x589E;&#x5F3A;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (C/EBP) beta&#x3001; &#x540C;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x90BB; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;CRE&#xFF09; &#x548C; CCAAT &#x6846; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;Sp1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5185; GC &#x6846;&#x4E2D;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x589E;&#x5F3A;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x9664;&#x975E;&#x7ED3;&#x5408; NF-Y &#x548C; C/EBPbeta&#x3002;SL2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E5F;&#x8868;&#x660E; Sp1 &#x548C; Sp3 &#x4E0D;&#x505A; co-occupy GC &#x6846;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64; Sp1 &#x4E89;&#x593A; Sp3 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6765;&#x538B;&#x5236;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Sp3 &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x5728; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5B8C;&#x6574;&#x7A81;&#x53D8; GC &#x6846;&#x4E2D;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x57FA;&#x5E95;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; cAMP &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6574;&#x4F53;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9; enhanceosome &#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981; Sp1 &#x6216; Sp3.GC &#x6846;&#x66FF;&#x6362; Gal4 &#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x63A8;&#x9500;&#x5546;&#x8D28;&#x7591;&#x4E0E; Gal4 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x548C;&#x4F5C;&#x7528; sp3 &#x4E2D;&#x4FDD;&#x6301;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x76F8;&#x5F53;&#x7684; Sp1 &#x548C; Sp3 &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E;&#x672C;&#x673A;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A; PC12 &#x548C; Rat2 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C; 10 &#x500D;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x8F6C;&#x5F55;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x884C;&#x4E5F;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C; dinucleotides &#x4F4D;&#x4E8E; GC &#x6846;&#x5185;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Sp1 &#x548C; Sp3 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GC &#x6846;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x4F4E;&#x7684; GTP &#x73AF;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FD1;&#x4FA7;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x5F00;&#x653E;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6784;&#x578B;&#x6211;&#x3002;

Sp1 &#x548C; Sp3 &#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5927;&#x9F20; GTP &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6211;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6765;&#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;

The role of the proximal promoter GC-box in regulating basal and cAMP-dependent GTP Cyclohydrolase I gene transcription was investigated using a variety of cell lines and techniques. These studies show that the GC-box is composed of a triad of cis-elements that in vitro bind specificity proteins Sp1 and Sp3. Sp1 and Sp3 were found associated with the native proximal promoter in PC12 cells but were not recruited to the promoter during cAMP-dependent transcription. Studies using Drosophila SL2 cells showed that Sp3 occupies two sites within the GC-box and enhances transcription when acting alone and synergistically when combined with nuclear factor-Y (NF-Y) and CCAAT/Enhancer-Binding Protein (C/EBP)beta, cognate binding proteins for the adjacent cAMP response element (CRE) and CCAAT-box cAMP response elements. In contrast, Sp1 bound only one site within the GC-box and did not enhance transcription unless combined with NF-Y and C/EBPbeta. Studies in SL2 cells also showed that Sp1 and Sp3 do not co-occupy the GC-box, and accordingly Sp1 competes for Sp3 binding to repress Sp3-dependent transcription. In PC12 cells, complete mutation of the GC-box reduced basal but not cAMP-dependent transcription, resulting in an overall increase in the cAMP response and demonstrating that formation of this enhanceosome does not require Sp1 or Sp3. Experiments in which the GC-box was replaced with a Gal4 element and the promoter challenged with Gal4 fusion proteins support this conclusion and a role for Sp3 in maintaining high levels of basal transcription in PC12 cells. Equivalent amounts of Sp1 and Sp3 were found associated with the native proximal promoter in PC12 and Rat2 cells, which differ 10-fold in basal transcription. Similar levels of methylation of CpG dinucleotides located within the GC-box were also observed in these two cells lines. These results suggest that Sp1 and Sp3 bound to the GC-box might help to preserve an open chromatin configuration at the proximal promoter in cells which constitutively express low levels of GTP Cyclohydrolase I.

Specificity proteins Sp1 and Sp3 interact with the rat GTP cyclohydrolase I proximal promoter to regulate transcription.

Le r&ocirc;le du promoteur GC-zone proximal dans la r&eacute;gulation basale et d&eacute;pendante de l&#39;AMPc GTP Cyclohydrolase I transcription g&eacute;nique a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e en utilisant une vari&eacute;t&eacute; de lign&eacute;es cellulaires et de techniques. Ces &eacute;tudes montrent que la bo&icirc;te GC se compose d&#39;une triade de cis-&eacute;l&eacute;ments qui ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s des prot&eacute;ines de sp&eacute;cificit&eacute; de liaison in vitro Sp1 et Sp3. Sp1 et Sp3 li&eacute; avec le promoteur proximal natif dans les cellules PC12 mais pas recrut&eacute;s au promoteur pendant la transcription d&eacute;pendante de l&#39;AMPc. En utilisant des cellules de drosophile SL2 des &eacute;tudes ont montr&eacute; que Sp3 occupe deux sites dans la zone de GC et am&eacute;liore la transcription lorsqu&#39;il agit seul et en synergie lorsqu&#39;il est combin&eacute; avec le facteur nucl&eacute;aire-Y (NF-Y) et b&ecirc;ta fef/Enhancer-Binding Protein (C/EBP), prot&eacute;ines apparent&eacute;es pour l&#39;&eacute;l&eacute;ment de r&eacute;ponse de l&#39;AMPc adjacentes (CRE) et les &eacute;l&eacute;ments de r&eacute;ponse au cAMP de fef-bo&icirc;te. En revanche, Sp1 li&eacute; &agrave; un site dans la zone de GC et n&#39;augmente pas la transcription que si combin&eacute; avec NF-Y et C/EBPbeta. &Eacute;tudes dans les cellules SL2 a &eacute;galement montrent que Sp1 et Sp3 ne pas cog&eacute;rer la bo&icirc;te GC, et par cons&eacute;quent Sp1 est en concurrence pour la liaison de Sp3 r&eacute;primer la transcription Sp3-d&eacute;pendante. Dans les cellules PC12, mutation compl&egrave;te de la bo&icirc;te GC r&eacute;duit transcription basale mais pas d&eacute;pendante de l&#39;AMPc, ce qui entra&icirc;ne une augmentation globale de la r&eacute;ponse de l&#39;AMPc et d&eacute;montrant que la formation de cette enhanceosome ne n&eacute;cessite pas de Sp1 ou Sp3. exp&eacute;riences dans lesquelles la bo&icirc;te GC a &eacute;t&eacute; remplac&eacute;e par un &eacute;l&eacute;ment de Gal4 et le promoteur conteste avec l&#39;aide de prot&eacute;ines fusion Gal4 cette conclusion et un r&ocirc;le pour Sp3 dans le maintien de niveaux &eacute;lev&eacute;s de transcription basale dans les cellules PC12. Quantit&eacute;s &eacute;quivalentes de Sp1 et Sp3 trouv&eacute;es associ&eacute;es le promoteur proximal natif dans les cellules PC12 et Rat2, diff&eacute;rant de facteur de transcription basale en. Des niveaux similaires de m&eacute;thylation des dinucl&eacute;otides situ&eacute; &agrave; l&#39;int&eacute;rieur de la bo&icirc;te GC ont aussi &eacute;t&eacute; observ&eacute;s dans ces deux lign&eacute;es cellulaires. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que le Sp1 et Sp3 li&eacute; &agrave; la bo&icirc;te GC pourraient aider &agrave; pr&eacute;server une configuration ouverte de la chromatine au promoteur proximale dans les cellules qui expriment constitutivement faibles niveaux de GTP Cyclohydrolase I.

Sp&eacute;cificit&eacute; prot&eacute;ines Sp1 et Sp3 interagissent avec le rat GTP cyclohydrolase I promoteur proximal pour r&eacute;guler la transcription.

Die Rolle des proximalen Projekttr&auml;gers GC-Box bei der Regulierung der basalen und Lager-abh&auml;ngige GTP-Cyclohydrolase I Gen-Transkription wurde untersucht, mit einer Vielzahl von Zelllinien und Techniken. Diese Studien zeigen, dass die GC-Box besteht aus einem Dreiklang der Cis-Elemente, die in-vitro-Bind Spezifit&auml;t Proteine Sp1 und Sp3. Sp1 und Sp3 gefunden wurden, die mit dem native proximalen Projekttr&auml;ger in PC12 Zellen aber wurden nicht an den Projekttr&auml;ger w&auml;hrend der Lager-abh&auml;ngige Transkription angeworben. Studien mit Drosophila SL2 Zellen zeigte, dass Sp3 zwei Standorte innerhalb der GC-Box belegt und Transkription verbessert, wenn allein gehandelt und synergistisch kombiniert mit nuklearen Faktor-Y (NF-Y) und CCAAT / / Enhancer-Binding Protein (C/EBP) Beta, cognate bindende Proteine f&uuml;r die angrenzenden cAMP Response-Element (CRE) und CCAAT /-Box-cAMP Response-Elemente. Im Gegensatz dazu Sp1 gebunden nur einem Standort innerhalb der GC-Box und, st&auml;rken nicht Transkription, wenn kombiniert mit NF-Y und C/EBPbeta. Untersuchungen SL2 Zellen zeigte auch, dass Sp1 und Sp3 nicht der GC-Box Co-Occupy, und dementsprechend Sp1 konkurriert f&uuml;r Sp3 Bindung Sp3-abh&auml;ngige Transkription zu unterdr&uuml;cken. Komplette Mutation der GC-Box reduziert PC12 Zellen basale aber nicht Lager-abh&auml;ngige Transkription, was ein Anstieg der cAMP-Antwort und zeigen, dass die Bildung dieser Enhanceosome erfordert keine Sp1 oder Sp3. Experimente in der GC-Box mit einem Gal4-Element ersetzt wurde und der Projekttr&auml;ger herausgefordert mit Unterst&uuml;tzung von Gal4 Fusion Proteine diese Schlussfolgerung und eine Rolle f&uuml;r Sp3 Erhaltung hohe basale Transkription in PC12 Zellen. Entsprechende Mengen von Sp1 und Sp3 wurden gefunden, verbunden mit dem systemeigenen proximalen Projekttr&auml;ger in Zellen PC12 und Rat2, die 10fach verbesserter in basalen Transkription unterscheiden. &Auml;hnliches Niveau der Methylierung des CpG-Dinucleotides befindet sich in der GC-Box wurden auch in diesen Zeilen zwei Zellen beobachtet. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Sp1 und Sp3 an GC-Feld gebunden, um eine offene Chromatin-Konfiguration bei der proximalen Projekttr&auml;ger in Zellen zu bewahren, die konstitutiv geringe GTP-Cyclohydrolase Ausdr&uuml;cken helfen k&ouml;nnte ich.

Spezifit&auml;t Proteine Sp1 und Sp3 interagieren mit der Ratte-GTP-Cyclohydrolase I proximale Promotor, Transkription zu regulieren.

Il ruolo del promotore prossimale GC-box nella regolazione basale e cAMP-dependent GTP cicloidrolasi I trascrizione del gene &egrave; stata studiata utilizzando una variet&agrave; di linee cellulari e tecniche. Questi studi dimostrano che il GC-box &egrave; composto da una triade di cis-elementi che sono state trovate in vitro legano proteine specificit&agrave; Sp1 e Sp3. Sp1 e Sp3 associati con il promotore prossimale nativo in cellule PC12 ma non sono stati assunti al promotore durante la trascrizione cAMP-dipendente. Gli studi che utilizzano cellule di Drosophila SL2 ha mostrato che Sp3 occupa due siti all&#39;interno della casella di GC e migliora la trascrizione quando agiscono da soli e in sinergia, quando combinato con nuclear factor-Y (NF-Y) e sequenza/Enhancer-Binding Protein (C/EBP) beta, proteine leganti affine per l&#39;elemento adiacente campo risposta (CRE) e gli elementi di risposta cAMP-sequenza-box. Al contrario, Sp1 associato un solo sito all&#39;interno della casella di GC e non ha fatto aumentare la trascrizione solo se combinato con NF-Y e C/EBPbeta. Studi su cellule SL2 ha mostrato inoltre che Sp1 e Sp3 non co-occupy il GC-box, e di conseguenza Sp1 compete per l&#39;associazione di Sp3 reprimere la trascrizione Sp3-dipendente. In cellule PC12, mutazione completa della GC-box ridotto trascrizione basale ma non cAMP-dipendente, con conseguente aumento globale nel campo risposta e dimostrando che non richiedono formazione di questo enhanceosome Sp1 o Sp3. esperimenti in cui il GC-box &egrave; stato sostituito con un elemento Gal4 e promotore impugnata con il supporto di proteine di fusione di Gal4 questa conclusione e un ruolo per Sp3 mantenendo alti livelli di trascrizione basale in cellule PC12. Quantit&agrave; equivalenti di Sp1 e Sp3 sono stati trovati associati con il promotore prossimale nativo in cellule PC12 e Rat2, che differiscono di 10 volte in trascrizione basale. Simili livelli di metilazione di dinucleotidi che si trova all&#39;interno della GC-box sono stati osservati anche in queste righe di due celle. Questi risultati suggeriscono che il Sp1 e Sp3 associato alla casella di GC potrebbe aiutare a preservare una configurazione della cromatina aperta presso il promotore prossimale in cellule che esprimono costitutivamente bassi livelli di deficit di GTP cicloidrolasi I.

Proteine specificit&agrave; Sp1 e Sp3 interagiscono con il ratto GTP cicloidrolasi I promotore prossimale per regolare la trascrizione.

&#x57FA;&#x5E95;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x3068;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F; cis - &#x306F; in vitro &#x3067; bind &#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Sp1 Sp3 &#x3068; Sp3&#x3002; Sp1 &#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30C9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x4E2D;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8; SL2 &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;Sp3 GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;-Y &#xFF08;NF-Y&#xFF09; &#x3068; CCAAT/&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (C/EBP) &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306F;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20; &#xFF08;CRE&#xFF09; &#x3068; CCAAT &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x540C;&#x7A2E;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3067;&#x306F;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Sp1 GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B; NF-Y &#x3068; C/ebp &#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x9650;&#x308A;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;SL2 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x307E;&#x305F; Sp1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Sp3 GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092; co-occupy &#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066; Sp1 Sp3 &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B; Sp3 &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E; GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30BB;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5F62;&#x6210; Sp1 &#x307E;&#x305F;&#x306F; GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; Gal4 &#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Sp3&#x3002; &#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Gal4 &#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x5F79;&#x5272; Sp3 &#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x6311;&#x6226;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x57FA;&#x5E95;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5341;&#x500D;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B; PC12 &#x3057; Rat2 &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Sp1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Sp3 &#x306E;&#x76F8;&#x5F53;&#x91CF;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5185;&#x306B;&#x3042;&#x308B; CpG &#x306E;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x3068;&#x8A8D;&#x3081;&#x305F;&#x3002;Sp1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Sp3 GC &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x6210;&#x3067;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x79C1;&#x306F;&#x3002;

&#x5BFE;&#x8A71;&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Sp1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Sp3 &#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3002;

&#xAE30;&#xC800;&#xC640; &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; GTP Cyclohydrolase &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; GC &#xC0C1;&#xC790; &#xC5ED;&#xD560; &#xB098; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; GC &#xC0C1;&#xC790; cis-s p 1&#xC640; s p 3. s p 1&#xC640; s p 3 &#xCCB4; &#xC678; bind &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; 3 &#xC778;&#xC870;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB179;&#xC74C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; SL2 &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; s p 3 GC &#xC0C1;&#xC790; &#xB0B4;&#xC758; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC0AC; &#xD63C;&#xC790; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; synergistically &#xD575; &#xC778;&#xC790;-Y (NF-Y) &#xBC0F; CCAAT/&#xC99D;&#xAC15; &#xC778;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (C/EBP) &#xBCA0;&#xD0C0;, &#xB3D9;&#xC871; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (CRE) &#xBC0F; CCAAT &#xC0C1;&#xC790; &#xCEA0;&#xD504; &#xBC18;&#xC751; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xB420; &#xB54C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, s p 1 GC &#xAE30;&#xBCF8; &#xB0B4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD558;&#xB098;&#xB9CC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xBA70; NF-Y&#xC640; C/Ebpbeta&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD55C; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. SL2 &#xC140;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; s p 1&#xC640; s p 3 GC &#xC0C1;&#xC790; co-occupy &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; Sp1 Sp3 &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC5B5; &#xB204;&#xB974;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; s p 3&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD558;&#xB294; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; GC &#xAE30;&#xBCF8;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC10;&#xC18C; &#xAE30;&#xC800; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC;, &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; Sp1 &#xB610;&#xB294; s p 3. &#xC2E4;&#xD5D8; GC &#xC0C1;&#xC790; Gal4 &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xC774; enhanceosome&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB3C4;&#xC804; Gal4 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC774; &#xACB0;&#xB860; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xD560; sp3 PC12 &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC800; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;. S p 1&#xC640; s p 3&#xC758; &#xC0C1;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xAE08;&#xC561; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC0AC;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC800; &#xC804;&#xC0AC; PC12 &#xBC0F; Rat2 &#xC140;&#xC5D0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; CpG &#xADF8; GC &#xC0C1;&#xC790; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294;&#xC758; &#xB610;&#xD55C;&#xC774; &#xB450; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; s p 1&#xC640; s p 3 GC &#xC0C1;&#xC790;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; constitutively &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC800;&#xAE09; GTP Cyclohydrolase &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC624;&#xD508; chromatin &#xAD6C;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB09C;.

&#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; s p 1&#xC640; s p 3&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC950; GTP cyclohydrolase &#xB098; &#xC804;&#xC0AC; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;.

El papel del promotor proximal GC-caja en la regulaci&oacute;n basal y dependiente de campo GTP ciclohidrolasa I transcripci&oacute;n gen&eacute;tica fue investigada usando una variedad de l&iacute;neas celulares y t&eacute;cnicas. Estos estudios muestran que el GC-box est&aacute; compuesto por una tr&iacute;ada de cis-elementos que atar in vitro especificidad prote&iacute;nas Sp1 y Sp3. Sp1 y Sp3 se encuentran asociados con el promotor proximal nativo en c&eacute;lulas PC12 pero no fueron reclutados al promotor durante la transcripci&oacute;n dependiente de campo. Estudios con c&eacute;lulas de Drosophila SL2 demostraron que Sp3 ocupa dos sitios dentro de la caja GC y realza la transcripci&oacute;n al actuar solo y sin&eacute;rgico al combinarse con el factor nuclear-Y (NF-Y) y beta de la prote&iacute;na de uni&oacute;n a CCAAT/Enhancer (C/EBP), cognado proteinas para el elemento de respuesta campo adyacente (CRE) y elementos de campo respuesta a CCAAT-caja. Por el contrario, Sp1 hab&iacute;a limitado solamente un sitio dentro de la caja GC y no mejoran la transcripci&oacute;n a menos que combinado con NF-Y y C/EBPbeta. Estudios en c&eacute;lulas SL2 tambi&eacute;n demostraron que Sp1 y Sp3 no co-occupy el GC-box, y por consiguiente Sp1 compite por la Uni&oacute;n de Sp3 a reprimir la transcripci&oacute;n Sp3-dependiente. En las c&eacute;lulas PC12, mutaci&oacute;n completa de la GC-caja redujo transcripci&oacute;n basal pero no dependiente de campo, resultando en un aumento general en la respuesta al campo y demostrando que la formaci&oacute;n de este enhanceosome no requiere Sp1 o Sp3. experimentos en los que el GC-box fue reemplazado con un elemento Gal4 y el promotor desafi&oacute; con la ayuda de prote&iacute;nas de fusi&oacute;n Gal4 esta conclusi&oacute;n y un papel para Sp3 en el mantenimiento de altos niveles de transcripci&oacute;n basal en c&eacute;lulas PC12. Cantidades equivalentes de Sp1 y Sp3 se encontraron asociados con el promotor proximal nativo en c&eacute;lulas PC12 y Rat2, que diferencian la transcripci&oacute;n basal en 10 veces. Tambi&eacute;n se observaron niveles similares de metilaci&oacute;n de dinucle&oacute;tidos CpG situado dentro de la caja de GC en estas l&iacute;neas dos c&eacute;lulas. Estos resultados sugieren que el Sp1 y Sp3 a la GC-caja pueden ayudar a preservar una configuraci&oacute;n abierta de la cromatina en el promotor proximal en las c&eacute;lulas que expresan constitutivamente bajos niveles de GTP ciclohidrolasa I.

Especificidad prote&iacute;nas Sp1 y Sp3 interact&uacute;an con la rata GTP ciclohidrolasa I promotor proximal para regular la transcripci&oacute;n.

&#x708E;&#x75C7;&#x5728;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x5982;&#x7F3A;&#x8840;&#x518D;&#x704C;&#x6CE8;&#x635F;&#x4F24;&#x3001; &#x52A8;&#x8109;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x3001; &#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3001; &#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x80A0;&#x75C5;&#x7B49;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x53D1;&#x708E;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x53D7;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D78;&#x6DA6;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9010;&#x6E10;&#x5411;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#x3002;&#x5DF2;&#x62A5;&#x544A; CXC &#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; CXCR2 &#x548C;&#x5176;&#x7279;&#x5B9A;&#x914D;&#x4F53;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5982;&#x4F55; CXCR2 &#x4E13;&#x95E8;&#x5BF9;&#x5176;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50;&#x8026;&#x5408;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; PDZ &#x652F;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D; NHERF1 &#x5BF9;&#x5176;&#x4E0B;&#x6E38;&#x6548;&#x5E94;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; C &#xFF08;PLC&#xFF09; &#x592B;&#x5987; CXCR2-&beta; 2&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x3001; &#x901A;&#x8FC7;&#x57FA;&#x4E8E; PDZ &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EC4;&#x88C5;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x5408;&#x4F53; CXCR2&middot;NHERF1&middot;PLC-&beta; 2 &#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x79CD;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7531; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE; permeant CXCR2 &#x7279;&#x5B9A;&#x80BD; (&#x542B; PDZ &#x6BCD;&#x9898;) &#x6270;&#x4E71;&#x590D;&#x6742;&#x6291;&#x5236;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x52A8;&#x5458;&#x3001; &#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x548C; &mdash; &#x8DE8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x8FC1;&#x79FB; CXCR2 &#x542B;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x6742;&#x662F;&#x5173;&#x952E; CXCR2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;PDZ &#x4F9D;&#x8D56; CXCR2 &#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x9488;&#x5BF9;&#x590D;&#x6742;&#x7684; CXCR2 &#x4E0D;&#x80B2;&#x75C7;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6218;&#x7565;&#x4E3A;&#x67D0;&#x4E9B;&#x708E;&#x75C7;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; CXCR2 &#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Inflammation plays an important role in a wide range of human diseases such as ischemia-reperfusion injury, arteriosclerosis, cystic fibrosis, inflammatory bowel disease, etc. Neutrophilic accumulation in the inflamed tissues is an essential component of normal host defense against infection, but uncontrolled neutrophilic infiltration can cause progressive damage to the tissue epithelium. The CXC chemokine receptor CXCR2 and its specific ligands have been reported to play critical roles in the pathophysiology of various inflammatory diseases. However, it is unclear how CXCR2 is coupled specifically to its downstream signaling molecules and modulates cellular functions of neutrophils. Here we show that the PDZ scaffold protein NHERF1 couples CXCR2 to its downstream effector phospholipase C (PLC)-Î²2, forming a macromolecular complex, through a PDZ-based interaction. We assembled a macromolecular complex of CXCR2Â·NHERF1Â·PLC-Î²2 in vitro, and we also detected such a complex in neutrophils by co-immunoprecipitation. We further observed that the CXCR2-containing macromolecular complex is critical for the CXCR2-mediated intracellular calcium mobilization and the resultant migration and infiltration of neutrophils, as disrupting the complex with a cell permeant CXCR2-specific peptide (containing the PDZ motif) inhibited intracellular calcium mobilization, chemotaxis, and transepithelial migration of neutrophils. Taken together, our data demonstrate a critical role of the PDZ-dependent CXCR2 macromolecular signaling complex in regulating neutrophil functions and suggest that targeting the CXCR2 multiprotein complex may represent a novel therapeutic strategy for certain inflammatory diseases.

A chemokine receptor CXCR2 macromolecular complex regulates neutrophil functions in inflammatory diseases.

L&#39;inflammation joue un r&ocirc;le important dans un large &eacute;ventail de maladies humaines telles que l&#39;isch&eacute;mie-reperfusion, art&eacute;rioscl&eacute;rose, fibrose kystique, la maladie inflammatoire de l&#39;intestin, etc.. Neutrophiles accumulation dans les tissus enflamm&eacute;s est une composante essentielle de la d&eacute;fense de l&#39;h&ocirc;te normal contre l&#39;infection, mais l&#39;infiltration de neutrophile non contr&ocirc;l&eacute;e peut causer des dommages progressifs &agrave; l&#39;&eacute;pith&eacute;lium tissu. Les r&eacute;cepteurs de chimiokines CXC CXCR2 et ses ligands sp&eacute;cifiques ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s &agrave; jouent un r&ocirc;le crucial dans la physiopathologie des diverses maladies inflammatoires. Cependant, on comprend mal comment CXCR2 est associ&eacute; sp&eacute;cifiquement &agrave; ses mol&eacute;cules de signalisation en aval et module des fonctions cellulaires des neutrophiles. Ici, nous montrons que la prot&eacute;ine d&#39;&eacute;chafaudage PDZ NHERF1 couples CXCR2 &agrave; son effecteur phospholipase C (PLC)-&beta;2, formant un complexe macromol&eacute;culaire, gr&acirc;ce &agrave; une interaction ax&eacute;e sur le PDZ. Nous avons r&eacute;uni un complexe macromol&eacute;culaire de CXCR2&middot;NHERF1&middot;PLC-&beta;2 in vitro et nous avons aussi d&eacute;tect&eacute; un tel complexe des neutrophiles par co-immunopr&eacute;cipitation. De plus, nous avons observ&eacute; que le complexe macromol&eacute;culaire contenant CXCR2 est critique pour la mobilisation du calcium intracellulaire CXCR2 m&eacute;di&eacute;e par la migration qui en r&eacute;sulte et l&#39;infiltration de neutrophiles, comme perturbant le complexe avec un peptide de cellule sp&eacute;cifique CXCR2 perm&eacute;ant (contenant le motif PDZ) inhibe la migration trans&eacute;pith&eacute;lial, chimiotactisme et mobilisation de calcium intracellulaire des neutrophiles. Pris ensemble, nos donn&eacute;es d&eacute;montrent un r&ocirc;le crucial de la signalisation macromol&eacute;culaires de CXCR2 PDZ-d&eacute;pendant du complex dans la r&eacute;gulation de fonctions neutrophiles et sugg&egrave;rent que ciblant le complexe de multiprotein CXCR2 peut-&ecirc;tre repr&eacute;senter une nouvelle strat&eacute;gie th&eacute;rapeutique pour certaines maladies inflammatoires.

Un complexe macromol&eacute;culaire de chemokine r&eacute;cepteur CXCR2 r&eacute;gule les fonctions de neutrophiles dans les maladies inflammatoires.

Entz&uuml;ndung spielt eine wichtige Rolle in einer Vielzahl von Krankheiten wie z.B. Isch&auml;mie-Reperfusion Verletzung, Arteriosklerose, zystische Fibrose, entz&uuml;ndliche Darmerkrankungen, etc.. Neutrophile, Akkumulation im entz&uuml;ndeten Gewebe ist ein wesentlicher Bestandteil der normalen Host Verteidigung gegen Infektion, aber unkontrollierten neutrophile Infiltration kann progressive Sch&auml;den an das Epithel Gewebe verursachen. Haben berichtet, dass der CXC-Chemokin-Rezeptor CXCR2 und seine spezifischen Liganden kritische Rolle in der Pathophysiologie von verschiedenen entz&uuml;ndlichen Erkrankungen. Jedoch ist unklar, wie CXCR2 ist speziell auf die nachgelagerten signalisierende Molek&uuml;le gekoppelt und moduliert Zellfunktionen der Neutrophilen. Hier zeigen wir, dass das PDZ-Ger&uuml;st-Protein NHERF1 CXCR2 zu seiner nachgeschaltete Effektor-Phospholipase C (PLC) Paare-&szlig;2, bilden eine Makromolekulare komplexe, durch eine Interaktion PDZ-basierte. Wir versammelt einen makromolekularen Komplex von CXCR2&middot;NHERF1&middot;PLC-&szlig;2 in-vitro-, und wir stellten au&szlig;erdem so komplex in Neutrophilen von co-Immunopr&auml;zipitation. Wir beobachteten weiter, dass der CXCR2-haltigen Makromolekulare Komplex kritisch f&uuml;r die CXCR2 vermittelt intrazellul&auml;ren Calcium-Mobilisierung und die daraus resultierenden Migration und Infiltration von Neutrophilen, wie St&ouml;rung des Komplexes mit ein permeant CXCR2-spezifischen Peptid (mit das PDZ-Motiv) intrazellul&auml;res Kalzium Mobilisierung, Chemotaxis und transepithelialen Migration von Neutrophilen gehemmt. Zusammen genommen unsere Daten zeigen eine entscheidende Rolle der PDZ-abh&auml;ngige CXCR2 Makromolekulare signalisieren bei der Regulierung von neutrophiler Funktionen komplexe und schlagen vor, da&szlig; die Ausrichtung auf die CXCR2 Multiprotein komplexe eine neuartige therapeutische Strategie f&uuml;r bestimmte darstellen kann entz&uuml;ndliche Erkrankungen.

Ein Chemokin-Rezeptor CXCR2 makromolekularer Komplex reguliert neutrophile Funktionen bei entz&uuml;ndlichen Erkrankungen.

L&#39;infiammazione svolge un ruolo importante in una vasta gamma di malattie umane come danno da ischemia-riperfusione, arteriosclerosi, fibrosi cistica, malattie infiammatorie intestinali, ecc. Neutrofila accumulo nei tessuti infiammati &egrave; una componente essenziale della difesa ospite normale contro le infezioni, ma incontrollata infiltrazione neutrofila pu&ograve; causare danni progressivi per l&#39;epitelio del tessuto. Il recettore delle chemochine CXC CXCR2 e suoi ligandi specifici sono stati segnalati a giocano un ruolo fondamentale nella fisiopatologia di diverse malattie infiammatorie. Tuttavia, non &egrave; chiaro come CXCR2 &egrave; accoppiato in particolare per le molecole di segnalazione a valle e modula le funzioni cellulari dei neutrofili. Qui vi mostriamo che la proteina dell&#39;impalcatura PDZ NHERF1 coppie CXCR2 alla sua effector downstream fosfolipasi C (PLC)-&beta;2, formando un complesso macromolecolare, attraverso un&#39;interazione basata su PDZ. Abbiamo assemblato un complesso macromolecolare di CXCR2&middot;NHERF1&middot;PLC-&beta;2 in vitro e abbiamo anche rilevato un tale complesso nei neutrofili di co-immunoprecipitazione. Abbiamo ulteriormente osservato che il complesso macromolecolare contenente CXCR2 &egrave; critico per la mobilizzazione del calcio intracellulare mediata CXCR2 e la conseguente migrazione e infiltrazione dei neutrofili, come perturbare il complesso con un peptide specifico CXCR2 permeant cellulare (contenente il motivo del PDZ) inibito migrazione Transepiteliale, chemiotassi e mobilizzazione di calcio intracellulare dei neutrofili. Presi insieme, i nostri dati dimostrano un ruolo critico del PDZ-dipendente CXCR2 macromolecolare segnale complesso nel regolare le funzioni del neutrofilo e suggeriscono che targeting del multiprotein CXCR2 complesso pu&ograve; rappresentare una nuova strategia terapeutica per talune malattie infiammatorie.

Un complesso macromolecolare chemokine recettore di CXCR2 regola le funzioni del neutrofilo nelle malattie infiammatorie.

&#x708E;&#x75C7;&#x306F;&#x865A;&#x8840;&#x518D;&#x704C;&#x6D41;&#x969C;&#x5BB3;&#x3001;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x8178;&#x75BE;&#x60A3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x96C6;&#x7A4D;&#x611F;&#x67D3;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x9632;&#x5FA1;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6D78;&#x6F64;&#x7D44;&#x7E54;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306B;&#x9032;&#x884C;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CXC &#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; CXCR2 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C; CXCR2 &#x306E;&#x7279;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; CXCR2 &#x305D;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; C (PLC) &#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E; PDZ &#x8DB3;&#x5834;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; NHERF1 &#x8868;&#x793A;-&beta; 2, PDZ &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; CXCR2&middot; &#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;NHERF1&middot;&#x307E;&#x305F; PLC &beta; 2 in vitro&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x3044;&#x3063;&#x305F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E; co-&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;(PDZ &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;)&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078; CXCR2-&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3001;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E0A;&#x76AE;&#x79FB;&#x884C;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068; CXCR2 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C; CXCR2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x54E1;&#x3068;&#x7D50;&#x679C;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; PDZ &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; CXCR2 &#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x306E; CXCR2 &#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6226;&#x7565;&#x304C;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8868;&#x3059;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3002;

&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; CXCR2 &#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5FC;&#xC99D;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD5C8; &#xD608; reperfusion &#xBD80;&#xC0C1;, &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;, &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;, &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658;, &#xB4F1; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;. &#xC5FC;&#xC99D;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB41C; neutrophilic, &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD1B5;&#xC81C; neutrophilic &#xCE68;&#xD22C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CXC chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; CXCR2 &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; ligands&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0; &#xBD84;&#xBA85; CXCR2 &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xC870;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; PDZ &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; NHERF1 cxcr2&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; phospholipase C (PLC)&#xC5D0; &#xCEE4;&#xD50C; &#xC1FC;-&beta;2, PDZ &#xAE30;&#xBC18; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;. &#xC6B0;&#xB9AC; cxcr2&middot;&#xC758; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB294; &#xC870;&#xB9BD;NHERF1&middot;PLC-&beta;2 &#xCCB4; &#xC678;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; co-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB610;&#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0;. &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3D9;&#xC6D0;, chemotaxis, &#xBC0F; transepithelial &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC800;&#xD574; (PDZ &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;) &#xC140; permeant CXCR2 &#xD2B9;&#xC815; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC29;&#xD574;&#xB85C; CXCR2 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xC740; CXCR2 &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xCE68;&#xD22C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD638; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; PDZ &#xC885;&#xC18D; CXCR2 &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; CXCR2 multiprotein&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xD2B9;&#xC815; &#xC81C;&#xC548; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;.

Chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; CXCR2 &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

La inflamaci&oacute;n juega un papel importante en una amplia gama de enfermedades humanas como la lesi&oacute;n de la isquemia-reperfusi&oacute;n, arterioesclerosis, fibrosis qu&iacute;stica, enfermedad inflamatoria intestinal, etc.. Neutrof&iacute;lica acumulaci&oacute;n en los tejidos inflamados es un componente esencial de la defensa del hu&eacute;sped normal contra la infecci&oacute;n, pero la infiltraci&oacute;n neutrof&iacute;lica incontrolada puede causar da&ntilde;o progresivo al epitelio tejido. El receptor de quimioquinas CXC CXCR2 y sus ligandos espec&iacute;ficos se han divulgado para desempe&ntilde;an un papel fundamental en la fisiopatolog&iacute;a de diversas enfermedades inflamatorias. Sin embargo, no est&aacute; claro c&oacute;mo CXCR2 se une espec&iacute;ficamente a sus mol&eacute;culas de se&ntilde;alizaci&oacute;n aguas abajo y modula las funciones celulares de neutr&oacute;filos. Aqu&iacute; demostramos que la prote&iacute;na PDZ NHERF1 parejas CXCR2 a su efector downstream fosfolipasa C (PLC)-&beta;2, formando un complejo macromolecular, a trav&eacute;s de una interacci&oacute;n basada en PDZ. Hemos reunido un complejo macromolecular de CXCR2&middot;NHERF1&middot;PLC-&beta;2 in vitro y hemos detectado tambi&eacute;n tan complejo en neutr&oacute;filos por co-inmunoprecipitaci&oacute;n. Adem&aacute;s observamos que el complejo macromolecular que contienen CXCR2 es cr&iacute;tico para la movilizaci&oacute;n de calcio intracelular mediada por CXCR2 y la migraci&oacute;n resultante y la infiltraci&oacute;n de neutr&oacute;filos, como interrumpir el complejo con un p&eacute;ptido espec&iacute;fico CXCR2 Florescente de celular (contiene el motivo PDZ) inhibe la migraci&oacute;n transepitelial, Quimiotaxis y movilizaci&oacute;n de calcio intracelular de neutr&oacute;filos. Tomados en conjunto, nuestros datos muestran un papel cr&iacute;tico de se&ntilde;alizaci&oacute;n dependiente PDZ CXCR2 macromoleculares complejo en la regulaci&oacute;n de las funciones de neutr&oacute;filos y sugieren que contra el complejo proteico de CXCR2 puede representar una nueva estrategia terap&eacute;utica para ciertas enfermedades inflamatorias.

Yanning Wu

Department of Biochemistry & Molecular Biology

Wayne State University School of Medicine

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

Yanning Wu

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Wayne State University School of Medicine

In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes

Department of Biochemistry & Molecular Biology