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Raymond and Beverly Sackler Foundation

University of Medicine and Dentistry of New Jersey

Raymond and Beverly Sackler Foundation, New Jersey

Rutgers University

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Transcriptional silencing in Saccharomyces requires specific nucleosome modifications promoted in part by a complex of Sir proteins that binds to the modified nucleosomes. Recent evidence suggests that modifications of both the histone amino termini and the core domain of nucleosomes contribute to silencing. We previously identified histone H4 mutations affecting residues in the core of the nucleosome that yield enhanced silencing at telomeres. Here we show that enhanced silencing induced by these mutations increases the proportion of cells in which telomeres and silent mating-type loci are in the silent state. One H4 mutation affects the expression of a subset of genes whose expression is altered by deletion of HTZ1, which encodes the histone variant H2A.Z, suggesting that the mutation may antagonize H2A.Z incorporation into nucleosomes. A second mutation causes the spread of silencing into subtelomeric regions that are not normally silenced in wild-type cells. Mechanistically, this mutation does not significantly accelerate the formation of silent chromatin but, rather, reduces the rate of decay of the silenced state. We propose that these mutations use distinct mechanisms to affect the dynamic interplay between activation and repression at the boundary between active and silent chromatin.

Mutations in the nucleosome core enhance transcriptional silencing.

Transcriptionnelle chez Saccharomyces n&#xE9;cessite des modifications sp&#xE9;cifiques des nucl&#xE9;osomes favoris&#xE9; en partie par un complexe de prot&#xE9;ines Sir qui se lie aux nucl&#xE9;osomes modifi&#xE9;s. Des donn&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent que des modifications &#xE0; la fois des terminaux des histones amin&#xE9;s et le domaine de base de nucl&#xE9;osomes contribuer &#xE0; faire taire. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment identifi&#xE9; des histones H4 mutations affectant les r&#xE9;sidus pr&#xE9;sents dans le noyau du nucl&#xE9;osome que le rendement silence renforc&#xE9;e &#xE0; t&#xE9;lom&#xE8;res. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;inhibition de renforcement induit par ces mutations augmente la proportion de cellules dans lesquelles les t&#xE9;lom&#xE8;res et silencieux d&#x26;#39;accouplement de type loci sont dans l&#x26;#39;&#xE9;tat silencieux. Une mutation H4 affecte l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;un sous-ensemble de g&#xE8;nes dont l&#x26;#39;expression est alt&#xE9;r&#xE9;e par la suppression de HTZ1, qui code pour le variant d&#x26;#39;histone H2A.Z, ce qui sugg&#xE8;re que la mutation peut antagoniser incorporation de H2A.Z dans nucl&#xE9;osomes. Une seconde mutation provoque la propagation de silence dans les r&#xE9;gions subt&#xE9;lom&#xE9;riques qui ne sont pas normalement r&#xE9;duites au silence cellules de type sauvage. M&#xE9;caniquement, cette mutation ne modifie pas significativement acc&#xE9;l&#xE9;rer la formation de la chromatine silencieuse, mais plut&#xF4;t de r&#xE9;duire le taux de d&#xE9;croissance de l&#x26;#39;&#xE9;tat r&#xE9;duit au silence. Nous proposons que ces mutations utiliser les m&#xE9;canismes distincts d&#x26;#39;affecter l&#x26;#39;interaction dynamique entre l&#x26;#39;activation et la r&#xE9;pression &#xE0; la fronti&#xE8;re entre la chromatine active et silencieuse.

Des mutations dans le Core nucl&#xE9;osomes Am&#xE9;liorer le silencing transcriptionnel

Mutationen in den Nukleosomen-Kern zu verbessern transkriptionellen Silencing.

Silenziamento trascrizionale in Saccharomyces richiede modifiche specifiche nucleosome promosse in parte da un complesso di proteine Sir che si lega ai nucleosomes modificati. Recenti evidenze suggeriscono che modifiche di entrambi l&#39;istone amino termini e il dominio principale di nucleosomi contribuiscono a tacere. Abbiamo identificato in precedenza istone H4 mutazioni che interessano i residui nel nucleo del nucleosoma che producono maggiore silenzio a telomeri. Qui vi mostriamo che rafforzata silenziamento indotto da queste mutazioni aumenta la percentuale delle cellule in cui telomeri e silenziosi tipo accoppiamento loci sono nello stato silenzioso. Una mutazione H4 colpisce l&#39;espressione di un sottoinsieme dei geni la cui espressione &egrave; alterata dall&#39;eliminazione di HTZ1, che codifica la variante dell&#39;istone H2A.Z, suggerendo che la mutazione pu&ograve; contrapporrsi H2A.Incorporazione di Z in nucleosomi. Una seconda mutazione provoca la diffusione del silenzio in subtelomerica regioni che non sono normalmente silenziati in cellule wild-type. Meccanicistico, questa mutazione non accelera significativamente la formazione della cromatina silenziosa ma, piuttosto, riduce il tasso di decadimento dello stato silenziato. Proponiamo che queste mutazioni utilizzano meccanismi distinti per influenzare l&#39;interazione dinamica tra attivazione e repressione al confine tra cromatina attiva e silenziosa.

Mutazioni nel nucleo del nucleosoma migliorano silenziamento trascrizionale.

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30FC;&#xB7;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x304C;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x4E2D;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;H4&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x4EA4;&#x914D;&#x578B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304C;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; One H4&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;H2A.Z&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;H2A.Z&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;HTZ1&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x69CB;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x3001;&#x6C88;&#x9ED9;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x7387;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5883;&#x754C;&#x3067;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;

Transcriptional Saccharomyces&#xC5D0; &#xC785;&#xC744; &#xD2B9;&#xC815; nucleosome &#xC218;&#xC815; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; nucleosomes &#xD558;&#xB294; &#xACBD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD544;&#xC694;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC99D;&#xAC70; &#xBAA8;&#xB450;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; nucleosomes&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCE68;&#xBB35;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H4 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; telomeres&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD56D;&#xBCF5; &#xD558;&#xB294; nucleosome&#xC758; &#xD575;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC785;&#xC744; telomeres &#xBC0F; &#xC790;&#xB3D9; &#xC9DD;&#xC9D3;&#xAE30; &#xD615; loci &#xCE68;&#xBB35; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C; H4 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778; &#xC2DD; HTZ1 &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xBCC0;&#xD615; H2A &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.Z, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; H2A &#xBC18;&#xB300; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.Z &#xC5C6;&#xC774; nucleosomes&#xC5D0;. &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE68;&#xBB35; &#xD558;&#xC9C0; subtelomeric &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;. Mechanistically,&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xCE68;&#xBB35; chromatin&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xC18D; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC624;&#xD788;&#xB824;, &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBD80;&#xD328;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACE0;&#xC720; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xCE68;&#xBB35; chromatin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC555; &#xAC04;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nucleosome &#xCF54;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; transcriptional &#xC785;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;.

Silenciamiento transcripcional en Saccharomyces requiere modificaciones espec&#xED;ficas nucleosoma promovidas en parte por un complejo de prote&#xED;nas que se une a Sir los nucleosomas modificados. La evidencia reciente sugiere que las modificaciones de las histonas tanto los extremos amino y el dominio b&#xE1;sico de los nucleosomas contribuir a silenciar. Hemos identificado previamente la histona H4 mutaciones que afectan a los residuos en el n&#xFA;cleo del nucleosoma que el silenciamiento de rendimiento mejorado en los tel&#xF3;meros. Aqu&#xED; nos muestran que una mayor silenciamiento inducido por estas mutaciones aumenta la proporci&#xF3;n de c&#xE9;lulas en las que los tel&#xF3;meros y silenciosos loci tipo de apareamiento se encuentran en el estado de silencio. Una mutaci&#xF3;n H4 afecta a la expresi&#xF3;n de un subconjunto de genes cuya expresi&#xF3;n se ve alterada por la eliminaci&#xF3;n de HTZ1, que codifica la H2A.Z variante de la histona, lo que sugiere que la mutaci&#xF3;n puede antagonizar la incorporaci&#xF3;n H2A.Z en nucleosomas. Una segunda mutaci&#xF3;n hace que la propagaci&#xF3;n del silenciamiento en las regiones subtelomeric que normalmente no est&#xE1;n silenciados en c&#xE9;lulas de tipo salvaje. Mec&#xE1;nica, esta mutaci&#xF3;n no aceleran significativamente la formaci&#xF3;n de la cromatina en silencio, sino m&#xE1;s bien, reduce la velocidad de desintegraci&#xF3;n del estado silenciada. Proponemos que estas mutaciones utilizan distintos mecanismos para afectar a la interacci&#xF3;n din&#xE1;mica entre la activaci&#xF3;n y la represi&#xF3;n en la frontera entre la cromatina activa y en silencio.

Las mutaciones en el nucleosoma Mejorar silenciamiento transcripcional

Analisi di silenziamento trascrizionale in Saccharomyces ha fornito informazioni preziose in funzione e la formazione di eterocromatina. Tuttavia, la maggior parte di questi studi hanno rivelato solo i comportamenti medi delle popolazioni di cellule. Qui, abbiamo esaminato silenziamento trascrizionale monitorando le cellule di lievito individuali che trasportano geni reporter fluorescente distinguibili inseriti in due differenti loci silenziosi. Questi studi hanno mostrato che due loci silenziosi in una singola cella si comportano in modo indipendente, dimostrando che la formazione di eterocromatina &egrave; locus autonoma. Inoltre, alcuni mutanti silenziamento con un fenotipo intermedio, ad esempio sir1, consistono di due popolazioni distinte, una repressa e derepressed, mentre altri mutanti, come quelli inattivanti SAS-io istone H4 K16 acetylase, costituiti da cellule tutte con un livello intermedio di espressione. Infine, sia istituzione e deperimento del silenzio pu&ograve; essere influenzati da attivatori gene specifico, con l&#39;istituzione che si verificano casualmente sopra parecchie generazioni. Cos&igrave;, quantificando tacere in singole cellule rivela aspetti del silenzio non evidente da misurazioni del livello di popolazione.

Cella singola osservazioni rivelano Stati silenziamento trascrizionali intermedi.

&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5F02;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x53EA;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2A;&#x522B;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x884C;&#x533A;&#x5206;&#x8367;&#x5149;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6C89;&#x9ED8;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x72EC;&#x7ACB;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5F02;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x6709;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x95F4;&#x8868;&#x578B;&#xFF0C;&#x5982; sir1&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x79CD;&#x7FA4;&#xFF0C;&#x538B;&#x6291;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; derepressed&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5176;&#x4ED6;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x90A3;&#x4E9B;&#x706D;&#x6D3B; SAS-&#x6211;&#x6240;&#x6709;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x7EA7;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H4 K16 acetylase&#xFF0C;&#x7531;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x8150;&#x70C2;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D7;&#x5230;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E16;&#x4EE3;&#x968F;&#x673A;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E2D;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E0D;&#x660E;&#x663E;&#x4ECE;&#x5168;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x95F4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;

Analysis of transcriptional silencing in Saccharomyces has provided valuable insights into heterochromatin formation and function. However, most of these studies revealed only the average behaviors of populations of cells. Here, we examined transcriptional silencing by monitoring individual yeast cells carrying distinguishable fluorescent reporter genes inserted at two different silent loci. These studies showed that two silent loci in a single cell behave independently, demonstrating that heterochromatin formation is locus autonomous. Furthermore, some silencing mutants with an intermediate phenotype, such as sir1, consist of two distinct populations, one repressed and one derepressed, while other mutants, such as those inactivating the SAS-I histone H4 K16 acetylase, consist of cells all with an intermediate level of expression. Finally, both establishment and decay of silencing can be influenced by specific gene activators, with establishment occurring stochastically over several generations. Thus, quantifying silencing in individual cells reveals aspects of silencing not evident from population-wide measurements.

Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.

Analyse de silencing transcriptionnel chez Saccharomyces a fourni des indications pr&#xE9;cieuses sur la formation h&#xE9;t&#xE9;rochromatine et la fonction. Cependant, la plupart de ces &#xE9;tudes ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les comportements moyens des populations de cellules. Ici, nous avons examin&#xE9; le silencing transcriptionnel par la surveillance des cellules de levure individuelles portant distinguables g&#xE8;nes rapporteurs fluorescents ins&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; deux loci diff&#xE9;rents silencieux. Ces &#xE9;tudes ont montr&#xE9; que deux loci silencieux dans une seule cellule se comporter ind&#xE9;pendamment, ce qui d&#xE9;montre que la formation de l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rochromatine est locus autonome. En outre, certains mutants silencieux avec un ph&#xE9;notype interm&#xE9;diaire, tels que sir1, compos&#xE9;e de deux populations distinctes, l&#x26;#39;une et l&#x26;#39;autre r&#xE9;prim&#xE9;e d&#xE9;r&#xE9;prim&#xE9;e, tandis que d&#x26;#39;autres mutants, tels que ceux inactivation de la SAS-je histone H4 K16 ac&#xE9;tylase, se composent de toutes les cellules avec un interm&#xE9;diaire niveau d&#x26;#39;expression. Enfin, &#xE0; la fois l&#x26;#39;&#xE9;tablissement et la d&#xE9;composition de silence peut &#xEA;tre influenc&#xE9;e par des activateurs de g&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques, avec mise en place produisent stochastiquement sur plusieurs g&#xE9;n&#xE9;rations. Ainsi, la quantification de silence dans des cellules individuelles r&#xE9;v&#xE8;le des aspects de r&#xE9;duire au silence ne ressort pas de la population &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle des mesures.

Monocellulaires observations r&#xE9;v&#xE8;lent interm&#xE9;diaires &#xC9;tats silencing transcriptionnel

Analyse der transcriptional silencing in Saccharomyces hat wertvolle Einblicke in Heterochromatin Bildung und Funktion bereitgestellt. Die meisten dieser Studien zeigte jedoch nur die durchschnittlichen Verhalten der Bev&ouml;lkerung der Zellen. Hier haben wir gepr&uuml;ft, transcriptional silencing durch die &Uuml;berwachung der einzelnen Hefezellen, die Durchf&uuml;hrung unterscheidbar fluoreszierende Reporter-Gene, die an zwei verschiedenen Stille Loci eingef&uuml;gt. Diese Studien zeigten, dass zwei Stille Loci in einer einzelnen Zelle unabh&auml;ngig voneinander Verhalten zeigen, dass Heterochromatin Bildung Locus autonom ist. Dar&uuml;ber hinaus einige silencing Mutanten mit einer zwischengeschalteten Ph&auml;notyp, wie sir1, bestehen aus zwei unterschiedlichen Populationen, unterdr&uuml;ckt und derepressed, w&auml;hrend andere Mutanten, wie die Abt&ouml;tung der SAS-ich Histon H4 K16 Acetylase, alle mit einer mittleren Ebene des Ausdrucks aus Zellen bestehen. Schlie&szlig;lich k&ouml;nnen Aufbau und Zerfall des Unterdr&uuml;ckender durch spezifisches gen Aktivatoren, mit Einrichtung, die &uuml;ber mehrere Generationen stochastisch auftretenden beeinflusst werden. So zeigt die Quantifizierung Unterdr&uuml;ckender in einzelnen Zellen Aspekte zum Schweigen nicht offensichtlich von der Bev&ouml;lkerung-weite Messung.

Einzeller-Beobachtungen zeigen transcriptional silencing Zwischenzust&auml;nde.

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x5024;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;2&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x304C;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SAS-I&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;H4 K16&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;SIR1&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x96C6;&#x56E3;&#x3001;&#x6291;&#x5727;&#x3055;&#x308C;1&#x3068;&#x8131;&#x6291;&#x5236;1&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308A;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3068;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;&#x304C;&#x6570;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304B;&#x3089;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; Saccharomyces transcriptional &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xC12C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xB9CC; &#xC140;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xD615;&#xAD11; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC790;&#xB3D9; loci&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB4E4;&#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; transcriptional &#xC785;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; &#xC790;&#xC728;&#xC740; &#xC12C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC140;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xCE68;&#xBB35; loci &#xD558;&#xC9C0; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, sir1, &#xB4F1; &#xC911;&#xAC04; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBD80; silencing &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAD6C; &#xC5B5;&#xC555;&#xC640; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC548; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; SAS &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; derepressed &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838;-&#xB098; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetylase H4 K16, &#xC140; &#xC2DD;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC124;&#xB9BD;&#xACFC; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xBD80;&#xD328; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; stochastically &#xC124;&#xB9BD; &#xB41C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC5D0; &#xC785;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xC778;&#xAD6C; &#xC804;&#xCCB4; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xC785;&#xC744;&#xC758; &#xC591;&#xC0C1;&#xC744; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xAD00;&#xCE21; &#xC911;&#xAC04; transcriptional silencing &#xC0C1;&#xD0DC; &#xACF5;&#xAC1C;.

An&#xE1;lisis de silenciamiento transcripcional en Saccharomyces ha proporcionado informaci&#xF3;n valiosa sobre la formaci&#xF3;n de heterocromatina y la funci&#xF3;n. Sin embargo, la mayor&#xED;a de estos estudios revelaron s&#xF3;lo los comportamientos promedio de las poblaciones de c&#xE9;lulas. Aqu&#xED;, examinamos el silenciamiento transcripcional mediante el control de las c&#xE9;lulas individuales de levadura que llevan distinguibles genes reporteros fluorescentes insertados en dos loci diferentes en silencio. Estos estudios demostraron que dos loci de silencio en una sola c&#xE9;lula se comporta de forma independiente, lo que demuestra que la formaci&#xF3;n de la heterocromatina es el locus aut&#xF3;noma. Adem&#xE1;s, algunos mutantes silenciamiento con un fenotipo intermedio, tal como SIR1, consisten en dos poblaciones distintas, reprimido uno y un desreprimido, mientras que otros mutantes, como los que la inactivaci&#xF3;n de la SAS-I histona H4 acetilasa K16, consisten en todas las c&#xE9;lulas con un intermedio nivel de expresi&#xF3;n. Por &#xFA;ltimo, tanto el establecimiento y la decadencia del silenciamiento pueden ser influenciados por los activadores de genes espec&#xED;ficos, con el establecimiento que ocurre estoc&#xE1;sticamente largo de varias generaciones. Por lo tanto, la cuantificaci&#xF3;n de silenciamiento en las c&#xE9;lulas individuales revela aspectos de silenciar no sea evidente en toda la poblaci&#xF3;n las medidas.

Unicelulares observaciones revelan los estados intermedios de silenciamiento transcripcional

Nrf2 joue un r&ocirc;le essentiel dans la coordination de la r&eacute;ponse antioxydante et maintien de l&#39;hom&eacute;ostasie redox. Expression Nrf2 est d&eacute;licieusement r&eacute;glement&eacute;e ; Expression Nrf2 est supprim&eacute;e dans des conditions non accentu&eacute;es, mais &eacute;tonnamment induite sous le stress oxydatif. &Eacute;tudes ant&eacute;rieures ont montr&eacute; qu&#39;induite par le stress Nrf2 r&eacute;gulation r&eacute;sulte de deux l&#39;inhibition de la d&eacute;gradation Nrf2 et am&eacute;lior&eacute;e Nrf2 traduction. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous &eacute;lucider contr&ocirc;le traductionnel m&eacute;canisme sous-jacent de Nrf2. Un site interne entr&eacute;e ribosomale (IRES) a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; dans la r&eacute;gion non traduite en 5&#39; de l&#39;ARNm de Nrf2 humaine. Le IRES(Nrf2) contient un site de liaison d&#39;ARNr 18 s hautement conserv&eacute;e (RBS) qui est requis pour l&#39;initiation interne. Ce IRES(Nrf2) contient &eacute;galement un &eacute;pingle &agrave; cheveux structur&eacute;e inhibitrice &eacute;l&eacute;ment (IE) situ&eacute; en amont de la RBS. Suppression de ce IE am&eacute;lior&eacute; remarquablement translation. Significativement, le traitement des cellules avec du peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne (H(2)O(2)) et phyto-oxydant sulforaphane davantage stimul&eacute; IRES (Nrf2)-m&eacute;diation d&#39;initiation de la traduction malgr&eacute; l&#39;att&eacute;nuation de la synth&egrave;se prot&eacute;ique globale. Test de profil polyribosomiques a confirm&eacute; que des mRNAs Nrf2 endog&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; recrut&eacute;s en fractions polysomique dans des conditions de stress oxydatif. Collectivement, ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que Nrf2 traduction est supprim&eacute;e dans les conditions normales et sp&eacute;cifiquement am&eacute;lior&eacute; lors de l&#39;exposition de l&#39;oxydant par initiation interne et fournir une explication m&eacute;caniste de contr&ocirc;le traductionnel de Nrf2 par le stress oxydatif.

Un site interne entr&eacute;e ribosomale intervient dans la traduction d&#39;oxydo-r&eacute;duction sensible du Nrf2.

Nrf2 &#x53D1;&#x6325;&#x67A2;&#x7EBD;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FDB;&#x884C;&#x534F;&#x8C03;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;&#x7CBE;&#x7F8E;&#x8C03;&#x8282; Nrf2 &#x8868;&#x8FBE; &#xFF1B;Nrf2 &#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x8F7B;&#x58F0;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x538B;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x60CA;&#x4EBA;&#x5730;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x72B6;&#x6001;&#x4E0B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5E94;&#x6FC0; Nrf2 &#x8C03;&#x63A7;&#x7ED3;&#x679C;&#x4ECE; Nrf2 &#x9000;&#x5316;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; Nrf2 &#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F84;&#x6E05; Nrf2 &#x5E73;&#x79FB;&#x57FA;&#x7840;&#x673A;&#x5236;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x4F4D;&#x70B9; (IRES) &#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x5185;&#x4EBA;&#x7C7B; Nrf2 mRNA 5&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x533A;&#x3002;IRES(Nrf2) &#x5305;&#x542B;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684; 18 rRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9; (RBS) &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x542F;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64; IRES(Nrf2) &#x8FD8;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5939;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x5143;&#x7D20; (IE) &#x4F4D;&#x4E8E;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; RBS&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x6B64; IE &#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x5F3A;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22; (&#x841D;&#x535C;&#x786B; H(2)O(2)) &#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x7D20;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x523A;&#x6FC0; IRES (Nrf2)-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5168;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x8870;&#x51CF;&#x3002;Polyribosomal &#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Nrf2 mRNAs &#x53D7;&#x8058;&#x5230; polysomal &#x5206;&#x6570;&#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7684; Nrf2 &#x7FFB;&#x8BD1;&#x9690;&#x542B;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x5185;&#x90E8;&#x5F00;&#x59CB;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x52A0;&#x5F3A;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x63A5;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B; Nrf2 &#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x5E73;&#x79FB;&#x63A7;&#x5236;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;

&#x5185;&#x90E8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4ECB;&#x5BFC; Nrf2 &#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;

Nrf2 plays pivotal roles in coordinating the antioxidant response and maintaining redox homeostasis. Nrf2 expression is exquisitely regulated; Nrf2 expression is suppressed under unstressed conditions but strikingly induced under oxidative stress. Previous studies showed that stress-induced Nrf2 up-regulation results from both the inhibition of Nrf2 degradation and enhanced Nrf2 translation. In the present study, we elucidate the mechanism underlying translational control of Nrf2. An internal ribosomal entry site (IRES) was identified within the 5' untranslated region of human Nrf2 mRNA. The IRES(Nrf2) contains a highly conserved 18S rRNA binding site (RBS) that is required for internal initiation. This IRES(Nrf2) also contains a hairpin structured inhibitory element (IE) located upstream of the RBS. Deletion of this IE remarkably enhanced translation. Significantly, treatment of cells with hydrogen peroxide (H(2)O(2)) and phyto-oxidant sulforaphane further stimulated IRES(Nrf2)-mediated translation initiation despite the attenuation of global protein synthesis. Polyribosomal profile assay confirmed that endogenous Nrf2 mRNAs were recruited into polysomal fractions under oxidative stress conditions. Collectively, these data demonstrate that Nrf2 translation is suppressed under normal conditions and specifically enhanced upon oxidant exposure by internal initiation, and provide a mechanistic explanation for translational control of Nrf2 by oxidative stress.

An internal ribosomal entry site mediates redox-sensitive translation of Nrf2.

Nrf2 spielt zentrale Rolle bei der Koordinierung der Antioxidans-Reaktion und Pflege Redox-Hom&ouml;ostase. Nrf2 Ausdruck ist exquisit geregelt; Nrf2 Ausdruck ist unbetontes Bedingungen unterdr&uuml;ckt aber auffallend unter oxidativer Stress induziert. Fr&uuml;here Studien zeigten, dass Stress-induced Nrf2 bis-Verordnung aus sowohl die Hemmung der Nrf2 Abbau- und verbesserte Nrf2-&Uuml;bersetzung ergibt. In der vorliegenden Studie erl&auml;utern wir die zugrunde liegenden Mechanismus-translational-Kontrolle der Nrf2. Eine interne ribosomale Eintrag Site (IRES) wurde innerhalb der 5&#39; un&uuml;bersetzte Region menschlichen Nrf2-mRNA identifiziert. Die IRES(Nrf2) enth&auml;lt eine stark konservierten 18S rRNA Bindungsstelle (RBS), die f&uuml;r interne Einleitung erforderlich ist. Diese IRES(Nrf2) enth&auml;lt auch eine Haarnadel strukturierte hemmendes Element (IE) befindet sich oberhalb der RSP. L&ouml;schen von diesem IE erweitert bemerkenswert &Uuml;bersetzung. Deutlich, die Behandlung der Zellen mit Wasserstoffperoxid (H(2)O(2)) und Phyto-Oxidationsmittel Sulforaphan weiter stimuliert IRES (Nrf2)-vermittelte &Uuml;bersetzung Einleitung trotz der Abschw&auml;chung der globalen Proteinsynthese. Polyribosomal Profil-Test best&auml;tigt, dass endogene Nrf2-mRNAs in polysomal Fraktionen unter oxidativer Stressbedingungen rekrutiert wurden. Insgesamt zeigen diese Daten, dass Nrf2 &Uuml;bersetzung unterdr&uuml;ckt wird, unter normalen Bedingungen und speziell auf Oxidationsmittel Exposition durch interne Einleitung verbessert und bieten eine mechanistische Erkl&auml;rung f&uuml;r translational Steuerung von Nrf2 durch oxidativen Stress.

Eine interne ribosomale Eintrag-Site vermittelt Redox-Sensitive &Uuml;bersetzung von Nrf2.

Nrf2 interpreta ruoli cardine nel coordinare la risposta antiossidante e mantenere l&#39;omeostasi redox. Nrf2 espressione squisitamente &egrave; regolata; Nrf2 espressione &egrave; repressa in condizioni non accentate ma sorprendentemente indotta sotto stress ossidativo. Precedenti studi hanno dimostrati che lo stress-induced Nrf2 up-regolamento risultati dall&#39;inibizione della degradazione di Nrf2 e rafforzata Nrf2 traduzione. Nel presente studio, abbiamo delucidare il controllo translational sottostante meccanismo di Nrf2. All&#39;interno della regione 5&#39; non tradotta del mRNA Nrf2 umano &egrave; stato identificato un sito voce ribosomiale interno (IRES). Il IRES(Nrf2) contiene un sito di legame rRNA 18S altamente conservata (RBS) che &egrave; necessario per l&#39;apertura interna. Questo IRES(Nrf2) contiene inoltre un tornante strutturato inibitorio elemento (IE) si trova a monte della RBS. Eliminazione di questo IE notevolmente migliorato traduzione. Significativamente, il trattamento delle cellule con perossido di idrogeno (H(2)O(2)) e fito-ossidante sulforafano ulteriormente stimolato IRES (Nrf2)-mediata iniziazione traduzione nonostante l&#39;attenuazione della sintesi proteica globale. Analisi del profilo polyribosomal ha confermato che mRNAs Nrf2 endogeni sono stati reclutati nelle frazioni polysomal in condizioni di stress ossidativo. Collettivamente, questi dati dimostrano che Nrf2 traduzione &egrave; stata soppressa in condizioni normali e in particolare grazie all&#39;esposizione di ossidante iniziazione interna e fornire una spiegazione meccanicistica per controllo translational di Nrf2 dallo stress ossidativo.

Un sito di voce ribosomiale interno media redox-sensibili alla traduzione di Nrf2.

Nrf2 &#x306B;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Nrf2 &#x5F0F;&#x306F;&#x7D76;&#x5999;&#x306B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;;Nrf2 &#x5F0F;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x3072;&#x3068;&#x304D;&#x308F;&#x4E0B;&#x3067;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x8D77; Nrf2 &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;-&#x898F;&#x5236;&#x4E21;&#x65B9; Nrf2 &#x52A3;&#x5316;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Nrf2 &#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304B;&#x3089;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Nrf2 &#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x4E26;&#x9032;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#xFF08;IRES) &#x306F; 5&#39; &#x975E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x9818;&#x57DF;&#x4EBA;&#x9593; Nrf2 mRNA &#x306E;&#x5185;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;IRES(Nrf2) &#x306B;&#x306F;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 18S rRNA &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D; (RBS) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; IRES(Nrf2) &#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x963B;&#x5BB3;&#x8981;&#x7D20;&#x3082; (IE) &#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059; RBS &#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x3002;&#x3053;&#x306E; IE &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x3001;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3001;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642; (H(2)O(2)) &#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8; &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x523A;&#x6FC0; IRES &#xFF08;Nrf2&#xFF09;-&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;Polyribosomal &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;Nrf2 Mrna &#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E; polysomal &#x306E;&#x5206;&#x6570;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; Nrf2 &#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x9732;&#x51FA;&#x6642;&#x306B;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Nrf2 &#x306E;&#x4E26;&#x9032;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5185;&#x90E8;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Nrf2 &#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30FB;&#x9084;&#x5143;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Nrf2 &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; redox &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Nrf2 &#xC2DD; &#xADDC;&#xC81C; &#xC815;&#xAD50; &#xD558; &#xAC8C; &#xC774;&#xB2E4;; Nrf2 &#xC2DD; &#xAC15;&#xC138; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC555; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xADF8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; Nrf2 &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; Nrf2 &#xC800;&#xD558; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; Nrf2 &#xBC88;&#xC5ED; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; nrf2&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBCC0;&#xD658; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBA85;&#xB8CC;. &#xB0B4;&#xBD80; ribosomal &#xD56D;&#xBAA9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (IRES) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Nrf2 Mrna&#xC758; 5&#39; &#xB9DE;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IRES(Nrf2) &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; 18S rRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (RBS) &#xB0B4;&#xBD80; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; IRES(Nrf2) &#xB610;&#xD55C; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; (IE)&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; RBS&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xC774; IE&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xD06C;&#xAC8C;, &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;&#xC640; &#xC140;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; (H(2)O(2)) &#xBC0F; &#xD53C;&#xD1A0; &#xC81C; sulforaphane &#xB354;&#xC6B1; &#xC790;&#xADF9; IRES (Nrf2)-&#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC911;&#xC7AC;. Polyribosomal &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD; Nrf2 mRNAs &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; polysomal &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB41C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Nrf2 &#xBC88;&#xC5ED; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558; &#xACE0; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C; &#xB178;&#xCD9C; &#xC2DC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; nrf2&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC6A9; &#xAE30;&#xACC4; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0B4;&#xBD80; ribosomal &#xD56D;&#xBAA9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC911;&#xC7AC; nrf2&#xC758; redox &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC88;&#xC5ED;.

Nrf2 juega un papel fundamental en la coordinaci&oacute;n de la respuesta antioxidante y mantener la homeostasis redox. Expresi&oacute;n de Nrf2 est&aacute; exquisitamente regulada; Expresi&oacute;n de Nrf2 es suprimido bajo condiciones unstressed pero sorprendentemente inducida por estr&eacute;s oxidativo. Estudios previos demostraron que stress-induced Nrf2 para arriba-regulaci&oacute;n resulta de ambos la inhibici&oacute;n de la degradaci&oacute;n de Nrf2 y traducci&oacute;n de Nrf2 mejorada. En el presente estudio, que esclarecer el control traduccional subyacente mecanismo de Nrf2. Un sitio de entrada ribosomal interna (IRES) fue identificado dentro de la regi&oacute;n 5&#39; no traducida de mRNA de Nrf2 humana. El IRES(Nrf2) contiene un sitio de uni&oacute;n del rRNA 18S altamente conservado (RBS) que se requiere para la iniciaci&oacute;n interna. Este IRES(Nrf2) contiene tambi&eacute;n un horquilla estructurado elemento inhibitorio (IE) situado aguas arriba del RBS. Eliminaci&oacute;n de este IE notablemente hab&iacute;a mejorado traducci&oacute;n. Significativamente, el tratamiento de c&eacute;lulas con per&oacute;xido de hidr&oacute;geno (H(2)O(2)) y Fito-oxidante sulforafano m&aacute;s estimulado IRES (Nrf2)-mediada por la iniciaci&oacute;n de la traducci&oacute;n a pesar de la atenuaci&oacute;n de la s&iacute;ntesis proteica global. Perfil de polyribosomal ensayo confirm&oacute; que reclutaron a mRNAs end&oacute;genas de Nrf2 en fracciones polysomal bajo condiciones de estr&eacute;s oxidativo. Colectivamente, estos datos demuestran que Nrf2 traducci&oacute;n se suprime en condiciones normales y espec&iacute;ficamente con la exposici&oacute;n de oxidante acompa&ntilde;ada de iniciaci&oacute;n interna y proporcionar una explicaci&oacute;n mecanicista para control traduccional de Nrf2 por estr&eacute;s oxidativo.

Un sitio de entrada ribosomal interna media redox sensible traducci&oacute;n de Nrf2.

&#x76EE;&#x7684;&#xFF1A; &#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 2 (Nrf2) &#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x62B5;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8C03;&#x67E5;&#x65B0;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34; Nrf2 &#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E00;&#x4E2A;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x8026;&#x5408;&#x4E0E; LTQ Orbitrap LC/MS/MS&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5BF9; Nr2 &#x7531;&#x65B0;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684; IQGAP1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; (&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x7684; IQ &#x6BCD;&#x9898;)&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x548C; LTQ Orbitrap LC/MS/MS&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x5B9A; IQGAP1 &#x65B0; Nrf2 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;&#x9A8C;&#x8BC1; IQGAP1 &#x548C; Nrf2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916; GST &#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5F55;/&#x7FFB;&#x8BD1;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5229;&#x7528; Nrf2 &#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;Dsredm IQGAP1 &#x548C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; Nrf2 &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; Nrf2 &#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4F55; 1 Nrf2 &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x786E;&#x8BA4;&#x5BF9; Nrf2&#xFF0C;&#x6572;&#x95E8;&#x51FB;&#x843D; IQGAP1 IQGAP1 &#x4F7F;&#x7528; siIQGAP1 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x51CF;&#x6BD2;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Nrf2&#xFF0C;&#x4F55;-1 &#x86CB;&#x767D;&#x548C; Nrf2 &#x9776;&#x57FA;&#x56E0; GSTpi&#x3001; GCLC &#x548C; NQO1&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;IQGAP1 &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (MEF) &#x7EC6;&#x80DE;&#x6025;&#x5267;&#x4E0B;&#x8DCC; Nrf2 &#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; IQGAP1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x9499;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x8868;&#x660E; IQGAP1/Nrf2 &#x7684;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#xFF0C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x9499;&#x6697;&#x793A; IQGAP1 &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D; Nrf2 &#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7; IQGAP1&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x9499;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A; Nrf2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4F55; 1 &#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Nrf2 &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x521B;&#x65B0;&#xFF1A; &#x603B;&#x7684;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F53;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x6807;&#x8BC6;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x70B9;&#x65B0; Nrf2 &#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x86CB;&#x767D; IQGAP1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x5982;&#x4F55; 1 Nrf2 &#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x65B0; Nrf2 &#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34; IQGAP1&#xFF1A; &#x5728;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C; Nrf2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Aims: Nuclear factor-erythroid-related factor 2 (Nrf2) is a critical transcriptional factor in regulating cellular defense against oxidative stress. This study is aimed to investigate new interacting protein partners of Nrf2 using one-strep tag pull-down coupled with LTQ Orbitrap LC/MS/MS, and to examine the impact on Nr2 signaling by the newly identified IQGAP1 (IQ motif containing GTPase activating protein 1). Results: Using the One-strep tag pull-down and LTQ Orbitrap LC/MS/MS, we identified IQGAP1 as a new Nrf2 interacting partner. Direct interactions between IQGAP1 and Nrf2 proteins were verified using in vitro GST pull-down, transcription/translation assays, and in vivo utilizing Nrf2 over-expressing cells. Co-expression of Dsredm-IQGAP1 and eGFP-Nrf2 increased the stability of eGFP-Nrf2 and enhanced the expression of Nrf2-target gene HO-1. To confirm the functional role of IQGAP1 on Nrf2, knock-downed IQGAP1 using siIQGAP1 attenuated the expression of endogenous Nrf2, HO-1 proteins, and Nrf2-target genes GSTpi, GCLC and NQO1. Furthermore, the stability of Nrf2 was dramatically decreased in IQGAP1 deficient mouse embryonic fibroblast (MEF) cells. Since IQGAP1 signaling could be mediated by calcium, treating the cells with calcium showed the translocation of IQGAP1/Nrf2 complex into the nucleus, suggesting IQGAP1 may play a critical role in Nrf2 stability. Interestingly, consistent with calcium signaling for IQGAP1, treating the cells with calcium functionally enhanced Nrf2-mediated ARE-transcription activity and enhanced the expression of endogenous Nrf2-target gene HO-1. Innovation: In the aggregate, our current study identifies and functionally characterizes a new Nrf2 partner protein IQGAP1, which may contribute to Nrf2's regulation of antioxidant enzymes such as HO-1.

Identification and Functional Studies of a New Nrf2 partner IQGAP1: A critical role in the stability and transactivation of Nrf2.

Buts : Facteur li&eacute; au facteur-erythroid 2 (Nrf2) est un facteur de transcription critique dans la r&eacute;gulation cellulaire d&eacute;fense contre le stress oxydatif. Cette &eacute;tude vise &agrave; &eacute;tudier la nouvelle interaction partenaires prot&eacute;iques de Nrf2 utilisant un strep-balise menu d&eacute;roulant coupl&eacute; avec le LTQ Orbitrap valant LC/MS/MS et d&#39;examiner l&#39;impact sur Nr2 signalisation par le IQGAP1 nouvellement identifi&eacute;s (motif de IQ contenant lancement GTPase 1). R&eacute;sultats : En utilisant la balise strep-un menu d&eacute;roulant et LTQ Orbitrap valant LC/MS/MS, nous avons identifi&eacute; IQGAP1 comme nouveau partenaire Nrf2 qui interagissent. Les interactions directes entre les prot&eacute;ines IQGAP1 et Nrf2 ont &eacute;t&eacute; v&eacute;rifi&eacute;es &agrave; l&#39;aide de GST in vitro pull-down, essais de transcription/traduction, et in vivo utilisant Nrf2 surexprimant les cellules. Co-expression de Dsredm-IQGAP1 et eGFP-Nrf2 accrue de la stabilit&eacute; du eGFP-Nrf2 et l&#39;expression du g&egrave;ne cible Nrf2 HO-1. Pour confirmer le r&ocirc;le fonctionnel de IQGAP1 sur Nrf2, IQGAP1 knock-qui s&#39;est &eacute;cras&eacute; &agrave; l&#39;aide de siIQGAP1 a att&eacute;nu&eacute; l&#39;expression de Nrf2 endog&egrave;ne, HO-1 des prot&eacute;ines et des g&egrave;nes Nrf2-cible GSTpi, GCLC et NQO1. En outre, la stabilit&eacute; du Nrf2 a consid&eacute;rablement diminu&eacute;e dans les cellules de fibroblastes embryonnaires (MEF) de souris d&eacute;ficientes IQGAP1. Puisque IQGAP1 signalisation pourrait &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par le calcium, traitant les cellules avec le calcium a montr&eacute; la translocation du IQGAP1/Nrf2 complexe dans le noyau, sugg&eacute;rant IQGAP1 peut jouer un r&ocirc;le crucial dans Nrf2 stabilit&eacute;. Fait int&eacute;ressant, coh&eacute;rente avec le calcium la signalisation pour IQGAP1, en traitant les cellules avec le calcium fonctionnellement a augment&eacute; l&#39;activit&eacute; de transcription Nrf2 m&eacute;diation sont et am&eacute;lior&eacute; l&#39;expression du g&egrave;ne endog&egrave;ne de Nrf2-cible HO-1. Innovation : dans l&#39;ensemble, notre &eacute;tude identifie et caract&eacute;rise fonctionnellement une nouvelle prot&eacute;ine Nrf2 de partenaire IQGAP1, ce qui peut contribuer au r&egrave;glement de Nrf2 des enzymes antioxydantes telles que HO-1.

Identification et &eacute;tudes fonctionnelles d&#39;un Nrf2 nouveau partenaire IQGAP1 : un r&ocirc;le essentiel dans la stabilit&eacute; et la transactivation de Nrf2.

Ziele: Nuclear Faktor-Erythroid-bezogenen Faktor 2 (Nrf2) ist ein kritischer transkriptionelle Faktor bei der Regulierung der zellul&auml;ren Abwehr gegen oxidativen Stress. Diese Studie richtet neue zusammenwirkendes Protein Partner von Nrf2 mit eins-Strep-Tag Pulldown-gekoppelt mit LTQ Orbitrap LC/MS/MS zu untersuchen und die Auswirkungen auf die Nr2 Signalisierung durch die neu identifizierten IQGAP1 zu untersuchen (IQ-Motiv, enth&auml;lt GTPase aktivierendes Protein 1). Ergebnisse: Mit dem One-Strep-Tag Pulldown- und LTQ Orbitrap LC/MS/MS, identifiziert wir IQGAP1 als neuer Nrf2 interagierenden Partner. Direkte Interaktionen zwischen IQGAP1 und Nrf2-Proteine wurden mit in-vitro-GST Pulldown-Transkription/&Uuml;bersetzung-Assays, &uuml;berpr&uuml;ft und in-vivo unter Verwendung von Nrf2-over-expressing-Zellen. Koexpression von Dsredm-IQGAP1 und eGFP-Nrf2 erh&ouml;ht die Stabilit&auml;t der eGFP-Nrf2 und verbesserte die Expression Nrf2-Ziel-Gens HO-1. Best&auml;tigen die funktionale Rolle des IQGAP1 auf Nrf2, Knock-abgeschossen IQGAP1 mit siIQGAP1 vermindert den Ausdruck des endogenen Nrf2 HO-1 Proteine und Nrf2-Zielgene, GSTpi, GCLC und NQO1. Dar&uuml;ber hinaus wurde die Stabilit&auml;t der Nrf2 in IQGAP1 mangelhaft Maus embryonalen Fibroblasten (MEF) Zellen drastisch gesenkt. Da IQGAP1 Signalisierung durch Calcium vermittelt werden konnte, kann Behandlung der Zellen mit Kalzium zeigte die Umsiedlung von IQGAP1/Nrf2 in den Zellkern komplexe, vorschlagen IQGAP1 eine entscheidende Rolle in Nrf2 Stabilit&auml;t spielen. Interessanterweise mit Kalzium Signalisierung f&uuml;r IQGAP1, Behandlung der Zellen mit Kalzium funktional erweiterte Nrf2-vermittelte sind-Transkription Aktivit&auml;t sowie verst&auml;rkte den Ausdruck des endogenen Nrf2-Ziel-Gens HO-1. Innovation: In Summe unserer aktuellen Studie identifiziert und funktional charakterisiert ein neues Nrf2-Partner-Protein IQGAP1, die Nrf2s-Verordnung von antioxidativen Enzymen wie HO-1 beitragen k&ouml;nnen.

Identifizierung und funktionelle Studien &uuml;ber eine neue Nrf2-partner-IQGAP1: eine entscheidende Rolle in der Stabilit&auml;t und Transactivation von Nrf2.

Obiettivi: Fattore nucleare di fattore-eritroidi legate 2 (Nrf2) &egrave; un fattore trascrizionale critico nella regolazione della difesa cellulare contro lo stress ossidativo. Questo studio ha lo scopo di studiare nuovi interazione proteina partner di Nrf2 utilizzando uno strep etichetta pull-down accoppiato con LTQ Orbitrap LC/MS/MS e di esaminare l&#39;impatto sulla Nr2 segnalazione dalla IQGAP1 recentemente identificata (motivo IQ contenenti proteina d&#39;attivazione 1 GTPase). Risultati: Utilizzando il tag uno strep pull-down e LTQ Orbitrap LC/MS/MS, abbiamo identificato IQGAP1 come nuovo partner interagenti Nrf2. Interazioni dirette tra le proteine IQGAP1 e Nrf2 sono state verificate utilizzando in vitro GST pull-down, dosaggi di trascrizione e traduzione, e in vivo utilizzando Nrf2 cellule del momento. Co-Expression di Dsredm-IQGAP1 ed eGFP Nrf2 aumentato la stabilit&agrave; di eGFP Nrf2 e rafforzata l&#39;espressione del gene Nrf2-obiettivo HO-1. Per confermare il ruolo funzionale della IQGAP1 su Nrf2, knock-abbattuto IQGAP1 utilizzando siIQGAP1 attenuato l&#39;espressione di Nrf2 endogena, HO 1 proteine e geni Nrf2-bersaglio, GSTpi, GCLC e NQO1. Inoltre, la stabilit&agrave; di Nrf2 era drasticamente diminuita in cellule di fibroblasti embrionali (MEF) IQGAP1 mouse carenti. Poich&eacute; IQGAP1 segnalazione potrebbe essere mediato dal calcio, trattando le cellule con il calcio ha mostrato la traslocazione di IQGAP1/Nrf2 complesso nel nucleo, suggerendo IQGAP1 possa svolgere un ruolo fondamentale nella stabilit&agrave; Nrf2. &Egrave; interessante notare che, coerente con il calcio segnalazione per IQGAP1, trattando le cellule con calcio funzionalmente avanzata attivit&agrave; sono-trascrizione Nrf2-mediata e rafforzata l&#39;espressione del gene endogeno Nrf2-obiettivo HO-1. Innovazione: nell&#39;aggregato, il nostro studio corrente identifica e caratterizza funzionalmente una nuova proteina partner Nrf2 IQGAP1, che possono contribuire alla regolazione di Nrf2 di enzimi antiossidanti come HO-1.

Identificazione e studi funzionali di un nuovo Nrf2 partner IQGAP1: un ruolo fondamentale nella stabilit&agrave; e transactivation di Nrf2.

&#x76EE;&#x7684;: &#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x95A2;&#x9023;&#x56E0;&#x5B50; 2 (Nrf2) &#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9632;&#x5FA1;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x713C;&#x5165;&#x308C; Orbitrap LC/MS/MS &#x3067;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7403;&#x83CC;&#x30BF;&#x30B0; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; Nrf2 &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;Nr2 &#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; IQGAP1 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B; &#xFF08;IQ &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; GTPase &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;:&#x3001;1 &#x3064;&#x9023;&#x9396;&#x7403;&#x83CC;&#x30BF;&#x30B0; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x713C;&#x5165;&#x308C; Orbitrap LC/MS/MS &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;IQGAP1 Nrf2 &#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IQGAP1 &#x3068; Nrf2 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;in vitro GST &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30FB;&#x8EE2;&#x5199;&#x30FB;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7;&#x30B7;&#x30E7; in vivo Nrf2 &#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x767A;&#x73FE; Dsredm IQGAP1 &#x3068; eGFP Nrf2 &#x306E; eGFP Nrf2 &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;Nrf2 &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; HO 1 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SiIQGAP1 &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; Nrf2&#x3001;IQGAP1 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3057;&#x305F;&#x4E0A; IQGAP1 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x5F31;&#x6BD2;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; Nrf2 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; HO 1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068; Nrf2 &#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; GSTpi&#x3001;GCLC&#x3001;NQO1&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Nrf2 &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027; IQGAP1 &#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE; (MEF) &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.IQGAP1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; IQGAP1/Nrf2 &#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642; IQGAP1 &#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272; Nrf2 &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6CBB;&#x7642; IQGAP1 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; Nrf2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; Nrf2 &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; HO 1 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30CE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;: &#x96C6;&#x8A08;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; Nrf2 &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Nrf2 &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; HO 1 &#x306A;&#x3069;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044; IQGAP1 &#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC; IQGAP1 &#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; Nrf2: &#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3001;Nrf2 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xBAA9;&#xD45C;: &#xD575; &#xC694;&#xC18C; erythroid &#xAD00;&#xB828; &#xC694;&#xC778; 2 (Nrf2) &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xC5B4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; transcriptional &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; Nrf2 &#xD55C; strep &#xD0DC;&#xADF8; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; LTQ Orbitrap LC/MS/MS&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xB41C; &#xB41C; iqgap1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; nr2&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1; (IQ &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; GTPase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;). &#xACB0;&#xACFC;: 1-strep &#xD0DC;&#xADF8; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBC0F; LTQ Orbitrap LC/MS/MS&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; Nrf2 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; IQGAP1 &#xC2DD;&#xBCC4;. IQGAP1 &#xBC0F; Nrf2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC678; GST &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC804;&#xC0AC;/&#xBC88;&#xC5ED; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; in vivo Nrf2 &#xD65C;&#xC6A9; over-expressing &#xC138;&#xD3EC;. Co-expression Dsredm-IQGAP1 &#xBC0F; eGFP Nrf2 eGFP Nrf2 &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; Nrf2 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD638; 1&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;. Nrf2, &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xB2D0;&#xAE4C; iqgap1&#xC5D0; iqgap1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; Siiqgap1&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC1E0; &#xC0DD; Nrf2, &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC778;&#xC9C0; &#xD638;-1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; GSTpi, GCLC &#xBC0F; NQO1 Nrf2 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xB610;&#xD55C;, Nrf2 &#xC548;&#xC815;&#xC131; IQGAP1 &#xACB0;&#xD54D; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; (MEF) &#xC140;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xD6C4; IQGAP1 &#xC2E0;&#xD638; &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB420; &#xC218;, &#xCE7C;&#xC298; IQGAP1/Nrf2 &#xC804; &#xD575;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC81C;&#xC548; IQGAP1 &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; Nrf2 &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; IQGAP1, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC; Nrf2 &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xACE0; &#xAC15;&#xD654; &#xC0DD; Nrf2 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD638; 1 &#xC2DD;. &#xD601;&#xC2E0;: &#xC9D1;&#xACC4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; Nrf2 &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; IQGAP1 nrf2&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xD638; 1 &#xB4F1; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC74C;.

&#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; nrf2&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; IQGAP1: &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; Nrf2 transactivation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

Objetivos: Nuclear factor-eritroide-relacionado con el factor 2 (Nrf2) es un factor transcripcional cr&iacute;tico en la regulaci&oacute;n de defensa celular contra el estr&eacute;s oxidativo. Este estudio pretende investigar nuevos interacci&oacute;n prote&iacute;na socios de Nrf2 usando uno-estreptococos etiqueta desplegable junto con LTQ Orbitrap LC/MS/MS y examinar el impacto en Nr2 se&ntilde;alizaci&oacute;n por el IQGAP1 nuevamente identificado (adorno de IQ que contiene prote&iacute;na 1 activadora de GTPasa). Resultados: Usando la etiqueta de uno-estreptococos desplegable y LTQ Orbitrap LC/MS/MS, identificamos IQGAP1 como un nuevo socio de interacci&oacute;n Nrf2. Interacciones directas entre prote&iacute;nas IQGAP1 y Nrf2 fueron verificadas mediante in vitro GST pull-down, ensayos de transcripci&oacute;n y traducci&oacute;n, y in vivo utilizando Nrf2 c&eacute;lulas sobreexpresi&oacute;n sistema est&aacute; da&ntilde;ado. Coexpresi&oacute;n de Dsredm-IQGAP1 y eGFP-Nrf2 aument&oacute; la estabilidad de eGFP-Nrf2 y hab&iacute;a mejorado la expresi&oacute;n del gen Nrf2 objetivo HO-1. Para confirmar el papel funcional de IQGAP1 en Nrf2, golpear-tragado IQGAP1 usando siIQGAP1 aten&uacute;a la expresi&oacute;n de Nrf2 end&oacute;geno, HO-1 prote&iacute;nas y genes de Nrf2-Diana GSTpi, GCLC y NQO1. Adem&aacute;s, la estabilidad de Nrf2 disminuy&oacute; dram&aacute;ticamente en c&eacute;lulas de fibroblastos embrionarios (MEF) IQGAP1 rat&oacute;n deficiente. Desde IQGAP1 se&ntilde;alizaci&oacute;n podr&iacute;a estar mediado por calcio, tratamiento de las c&eacute;lulas con calcio demostrada la translocaci&oacute;n de IQGAP1/Nrf2 complejo en el n&uacute;cleo, sugiriendo IQGAP1 puede desempe&ntilde;ar un papel cr&iacute;tico en Nrf2 estabilidad. Curiosamente, consistente con calcio se&ntilde;alizaci&oacute;n para IQGAP1, tratar las c&eacute;lulas con calcio funcionalmente son-transcripci&oacute;n Nrf2 mediada por actividad y hab&iacute;a mejorado la expresi&oacute;n del gen end&oacute;geno de Nrf2 objetivo HO-1. Innovaci&oacute;n: en conjunto, nuestro actual estudio identifica y caracteriza funcionalmente una nueva prote&iacute;na de socio de Nrf2 IQGAP1, que pueden contribuir a la regulaci&oacute;n de Nrf2 de enzimas antioxidantes como HO-1.

Identificaci&oacute;n y estudios funcionales de un nuevo Nrf2 asociado IQGAP1: un papel fundamental en la estabilidad y la transactivaci&oacute;n de Nrf2.

Eugenia Y. Xu

Raymond and Beverly Sackler Foundation

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately