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Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

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New York University School of Medicine

Malgr&eacute; son importance pour la maturation de l&#39;ARN et de la d&eacute;gradation chez Escherichia coli, on conna&icirc;t la structure de la RNase E ou son m&eacute;canisme d&#39;action. Nous avons mod&eacute;lis&eacute; la structure tridimensionnelle d&#39;un domaine essentiel d&#39;amino-terminale de RNase E sur la base de son homologie de s&eacute;quence pour la famille S1 de domaines de liaison &agrave; l&#39;ARN. Chacun des cinq r&eacute;sidus aromatiques surface expos&eacute;e et surtout les 14 r&eacute;sidus basiques de ce domaine RNase E ont &eacute;t&eacute; remplac&eacute;s par alanine pour d&eacute;terminer leur importance pour la fonction de RNase E. Tous les r&eacute;sidus de surface essentielles pour la croissance et la r&eacute;troaction la r&eacute;gulation cellulaire de la synth&egrave;se de RNase E mapp&eacute;e &agrave; une extr&eacute;mit&eacute; du domaine. Des essais in vitro indiquent que ces r&eacute;sidus essentiels tombent dans deux groupes fonctionnellement distinctes qui forment des grappes discr&egrave;tes sur des faces oppos&eacute;es du domaine S1. Un groupe, compos&eacute; de Phe-57, Phe-67 et Lys-112 [corrig&eacute;], est d&#39;importance g&eacute;n&eacute;rale pour l&#39;activit&eacute; de la ribonucl&eacute;ase de RNase E, tandis que l&#39;autre groupe, compos&eacute; de Lys-37 et Tyr-60, est tout &agrave; fait dispensable pour l&#39;activit&eacute; catalytique in vitro. Les cha&icirc;nes lat&eacute;rales de deux r&eacute;sidus pr&eacute;c&eacute;demment consid&eacute;r&eacute;es comme sites de mutations thermosensibles se trouvent enterr&eacute;s directement sous la zone de surface d&eacute;finie par Phe-57, Phe-67 et 112-Lys [corrig&eacute;], qui renforce probablement l&#39;activit&eacute; RNase E gr&acirc;ce &agrave; une contribution cruciale &agrave; la liaison du substrat RNAs. &Agrave; la diff&eacute;rence du domaine S1, un domaine de liaison &agrave; l&#39;ARN riches en arginine dans le carboxyle moiti&eacute; de RNase E semble d&#39;avoir un r&ocirc;le plus p&eacute;riph&eacute;rique en fonction de la RNase E, car il n&#39;est pas n&eacute;cessaire pour le r&egrave;glement de vos commentaires, activit&eacute; de croissance ou de la ribonucl&eacute;ase de cellules.

Deux r&eacute;gions distinctes sur la surface d&#39;un domaine de liaison &agrave; l&#39;ARN sont cruciales pour la fonction de RNase E.

&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5B83;&#x5BF9; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x7ED3;&#x6784;&#x6216;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53C2;&#x7167;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x7684; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684; S1 &#x5BB6;&#x5C5E;&#x53CA;&#x5176;&#x5E8F;&#x5217;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E94;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x82B3;&#x9999;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C; 14 &#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x8BE5;&#x57DF;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x88AB;&#x66FF;&#x6362;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x8868;&#x9762;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x57DF;&#x7684;&#x4E00;&#x7AEF;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x957F;&#x548C;&#x53CD;&#x9988;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#x6784;&#x6210;&#x76F8;&#x53CD;&#x8138;&#x7684; S1 &#x57DF;&#x4E0A;&#x7684;&#x79BB;&#x6563;&#x7FA4;&#x96C6;&#x3002;&#x4E00;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x516C;&#x5171;&#x5C4B; &#xE473; 57&#x3001; &#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; 67 &#x548C; Lys-112 [&#x66F4;&#x6B63;]&#xFF0C;&#x662F;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E&#x3001; &#x4E00;&#x822C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x800C;&#x53E6;&#x4E00;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210; Lys-37 &#x548C; Tyr-60&#xFF0C;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E3A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4FA7;&#x94FE;&#x7531;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; 57&#x3001; &#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; 67 &#x548C; Lys-112 [&#x66F4;&#x6B63;]&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3A;&#x57FA;&#x677F; RNAs &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x51FA;&#x5173;&#x952E;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x6D3B;&#x52A8;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x533A;&#x57DF;&#x4E0B;&#x65B9;&#x76F4;&#x63A5;&#x8EBA;&#x57CB;&#x3002;&#x4E0E; S1 &#x57DF;&#xFF0C;&#x5BCC;&#x542B;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x7684; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x4E00;&#x534A;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x53CD;&#x9988;&#x8C03;&#x8282;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6709;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5916;&#x56F4;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x6216;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x529F;&#x80FD;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Despite its importance for RNA processing and degradation in Escherichia coli, little is known about the structure of RNase E or its mechanism of action. We have modelled the three-dimensional structure of an essential amino-terminal domain of RNase E on the basis of its sequence homology to the S1 family of RNA-binding domains. Each of the five surface-exposed aromatic residues and most of the 14 basic residues of this RNase E domain were replaced with alanine to determine their importance for RNase E function. All the surface residues essential for cell growth and feedback regulation of RNase E synthesis mapped to one end of the domain. In vitro assays indicate that these essential residues fall into two functionally distinct groups that form discrete clusters on opposite faces of the S1 domain. One group, comprising Phe-57, Phe-67 and Lys-112 [corrected], is of general importance for the ribonuclease activity of RNase E, whereas the other group, comprising Lys-37 and Tyr-60, is entirely dispensable for catalytic activity in vitro. The side-chains of two residues previously identified as sites of temperature-sensitive mutations lie buried directly beneath the surface region defined by Phe-57, Phe-67 and Lys-112 [corrected], which probably enhances RNase E activity by making a crucial contribution to the binding of substrate RNAs. In contrast to the S1 domain, an arginine-rich RNA-binding domain in the carboxyl half of RNase E appears to have a more peripheral role in RNase E function, as it is not required for feedback regulation, cell growth or ribonuclease activity.

Two distinct regions on the surface of an RNA-binding domain are crucial for RNase E function.

Trotz seiner Bedeutung f&uuml;r RNA-Verarbeitung und Abbau in Escherichia coli ist wenig &uuml;ber die Struktur der RNase E oder seinen Wirkmechanismus bekannt. Wir haben die dreidimensionale Struktur einer wesentlichen amino-Terminal-Dom&auml;ne von RNase E auf der Grundlage ihrer Sequenz-Homologie der S1-Familie von RNA bindenden Dom&auml;nen modelliert. Jede der f&uuml;nf Oberfl&auml;che exponierten aromatische R&uuml;ckst&auml;nde und die meisten der 14 grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde dieser RNase E-Dom&auml;ne wurden ersetzt mit Alanin ihrer Bedeutung f&uuml;r die RNase E-Funktion zu bestimmen. Oberfl&auml;che R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r Zelle Wachstum und Feedback Verordnung der RNase E-Synthese, ein Ende der Dom&auml;ne zugeordnet. In-vitro-Tests zeigen, dass diese wesentlichen R&uuml;ckst&auml;nde in zwei funktionell unterschiedliche Gruppen fallen, die diskrete Clustern auf gegen&uuml;berliegenden Fl&auml;chen der S1 Dom&auml;ne bilden. Eine Gruppe, bestehend aus Phe-57, Phe-67 und Lys-112 ist [behoben], von allgemeiner Bedeutung f&uuml;r die Ribonuklease-Aktivit&auml;t von RNase E, w&auml;hrend die andere Gruppe, bestehend aus Lys-37 und Tyr-60, f&uuml;r in-vitro-katalytische Aktivit&auml;t ganz entbehrlich ist. Die Seitenketten von zwei R&uuml;ckst&auml;nden, die vorher als Orte der temperaturempfindliche Mutationen identifiziert liegen direkt unter den Fl&auml;chenbereich Phe-57, Phe-67 und Lys-112 [behoben], die wahrscheinlich RNase E Aktivit&auml;t verbessert, dadurch, dass einen entscheidenden Beitrag zur Bindung von Substrat RNAs festgelegten begraben. Im Gegensatz zu der S1-Dom&auml;ne, eine Arginin-reiche RNA-bindende Dom&auml;ne in der H&auml;lfte der RNase E erscheint Karboxyl-eine mehr periphere Rolle in RNase E-Funktion haben, wie es nicht f&uuml;r R&uuml;ckmeldungen Verordnung ben&ouml;tigt, Zelle Wachstum oder Ribonuklease-Aktivit&auml;t.

Zwei verschiedene Regionen auf der Oberfl&auml;che von einer RNA-bindende Dom&auml;ne sind entscheidend f&uuml;r RNase E-Funktion.

Nonostante la sua importanza per l&#39;elaborazione di RNA e degradazione in Escherichia coli, poco si sa circa la struttura della RNAsi E o il suo meccanismo d&#39;azione. Noi abbiamo modellato la struttura tridimensionale di un dominio amino-terminale essenziale della RNAsi E sulla base della sua omologia di sequenza della famiglia S1 di domini di RNA-binding. Ognuno dei cinque residui aromatici superficie esposta e la maggior parte dei residui di questo dominio di RNAsi E base 14 sono stati sostituiti con alanina per determinare la loro importanza per la funzione E la RNasi. Tutte le superfici residui essenziali per cella crescita e feedback regolazione della sintesi di RNAsi E mappata a un&#39;estremit&agrave; del dominio. Saggi in vitro indicano che questi residui essenziali si dividono in due gruppi funzionalmente distinti che formano grappoli discreti su facce opposte del dominio S1. Un gruppo, comprendente Phe-57, Phe-67 e Lys-112 [Risolto], &egrave; di importanza generale per l&#39;attivit&agrave; della ribonucleasi di RNAsi E, mentre l&#39;altro gruppo, composto da Lys-37 e Tyr-60, &egrave; interamente superfluo per attivit&agrave; catalitica in vitro. Le catene laterali di due residui precedentemente identificati come siti di temperatura sensibili mutazioni riposano direttamente sotto la superficie area definita da Phe-57, Phe-67 e Lys-112 [Risolto], che probabilmente migliora attivit&agrave; RNasi E apportando un contributo fondamentale per il legame del substrato RNAs. In contrasto con il dominio di S1, un dominio di RNA-binding di arginina-ricco in carbossilico met&agrave; della RNAsi E appare avere un ruolo pi&ugrave; periferico in funzione di RNAsi E, come non &egrave; obbligatoria per regolamento feedback, cella attivit&agrave; crescita o ribonucleasi.

Due distinte regioni sulla superficie di un dominio di RNA-binding sono cruciali per la funzione E la RNasi.

RNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x52A3;&#x5316;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3084;&#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; RNase E &#x306E; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; S1 &#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5FC5;&#x9808;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404; 5 &#x8868;&#x9762;&#x9732;&#x51FA;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3053;&#x306E; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; 14 &#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x672B;&#x5C3E;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x5408;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3002;&#x8A66;&#x9A13;&#x7BA1;&#x5185;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x79CB; S1 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5411;&#x304B;&#x3044;&#x5408;&#x3046;&#x9762;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lys 37 &#x3068; Tyr 60 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092; in vitro &#x3067;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3001;Phe 57&#x3001;Phe 67 &#x304A;&#x3088;&#x3073; Lys 112 &#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B; [&#x4FEE;&#x6B63;] rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5168;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5074;&#x9396; Phe 57&#x3001;Phe 67&#x3001;Lys-[&#x4FEE;&#x6B63;] &#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; RNase E &#x6D3B;&#x6027;&#x57FA;&#x8CEA; Rna &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B; 112 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x9818;&#x57DF;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; &#x30FB; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x3067; S1 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;RNase E &#x95A2;&#x6570;&#x3088;&#x308A;&#x672B;&#x68A2;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3002;

RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306F; RNase E &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

RNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC57D;&#xAC04; RNase E&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xB610;&#xB294; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; S1 &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; homology &#xAE30;&#xCD08; RNase E&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01;&#xAC01; 5 &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; &#xD5A5;&#xAE30;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774; RNase E &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; 14 &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; RNase E &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xCCB4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD45C;&#xBA74; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD55C;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; RNase E &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; S1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBC18;&#xB300; &#xBA74;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; &#xB9AC;&#xC2A4;-37&#xACFC; Tyr 60 &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC740; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xCCB4; &#xC678; &#xD544;&#xC218; Phe-57, Phe-67 &#xBC0F; &#xB9AC;&#xC2A4;-112&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xD55C; &#xADF8;&#xB8F9; RNase E&#xC758; ribonuclease &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC774;&#xB2E4; [&#xC218;&#xC815;]. &#xC628;&#xB3C4; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xB450; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xAC70;&#xC9D3;&#xB9D0; Phe-57, Phe-67&#xACFC; &#xB9AC;&#xC2A4;-112 [&#xC218;&#xC815;] &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xAE30;&#xD310; Rnas&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xD558; &#xC5EC; RNase E &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC601;&#xC5ED; &#xBC14;&#xB85C; &#xC544;&#xB798;&#xC5D0; &#xBB3B;&#xD600; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. S1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; RNase E&#xC758; &#xC808;&#xBC18; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4; carboxyl&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC73C;&#xB85C; RNase E &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; ribonuclease &#xD65C;&#xB3D9;.

RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xC601;&#xC5ED; RNase E &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

A pesar de su importancia para el proceso del ARN y la degradaci&oacute;n en Escherichia coli, poco se sabe sobre la estructura de RNasa E o su mecanismo de acci&oacute;n. Nosotros hemos modelado de la estructura tridimensional de un dominio amino-terminal esencial de RNasa E sobre la base de su homolog&iacute;a de secuencia a la familia S1 de dominios de uni&oacute;n de ARN. Cada uno de los cinco residuos arom&aacute;ticos de superficie expuesta y la mayor&iacute;a de los 14 residuos b&aacute;sicos de este dominio RNasa E fueron reemplazados con alanina para determinar su importancia para la funci&oacute;n de RNasa E. Toda los superficies residuos esenciales para la regulaci&oacute;n de crecimiento y la regeneraci&oacute;n celular de s&iacute;ntesis de RNasa E asignado a un extremo del dominio. Ensayos in vitro indican que estos residuos esenciales se dividen en dos grupos funcionalmente distintos que forman racimos discretos en caras opuestas del dominio S1. Un grupo compuesto por Phe-57, Phe-67 y Lys-112 [corregido], es de importancia general para la actividad de la ribonucleasa de RNasa E, mientras que el otro grupo, compuesto por Lys-37 y Tyr-60, es totalmente prescindible para la actividad catal&iacute;tica in vitro. Las cadenas laterales de dos residuos identificados previamente como sitios de mutaciones termosensibles se encuentran enterradas directamente debajo de la superficie regi&oacute;n definida por Phe-57, Phe-67 y Lys-112 [corregido], que probablemente mejora la actividad RNasa E haciendo una contribuci&oacute;n crucial a la Uni&oacute;n del sustrato RNAs. En contraste con el dominio de S1, un dominio de uni&oacute;n de ARN ricos en arginina en el carboxilo mitad de RNasa E aparece tener un papel m&aacute;s perif&eacute;rico en funci&oacute;n de la RNasa E, ya que no es necesaria para la regulaci&oacute;n de la retroalimentaci&oacute;n, crecimiento o ribonucleasa actividad de la c&eacute;lula.

Dos regiones distintas en la superficie de un dominio de uni&oacute;n de ARN son cruciales para la funci&oacute;n de RNasa E.

&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x662F;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x53D1;&#x6325; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x4E2D;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x50CF;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x53CA;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x663E;&#x793A;&#x627F;&#x62C5;&#x82F7;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x6216;&#x7F9F;&#x57FA;&#xFF0C;&#x5728; 5&#39; &#x7AEF;&#x7684;&#x5288;&#x5F00; RNAs &#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x503E;&#x5411;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; 5 &prime; &#x7AEF;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F71;&#x54CD;&#x9065;&#x8FDC;&#x88C2;&#x89E3;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G &#x6765;&#x66F4;&#x7CBE;&#x786E;&#x5730;&#x91CF;&#x5316;&#x548C;&#x5BB9;&#x6613;&#x6BD4;&#x7684; RNA &#x8367;&#x5149;&#x886C;&#x5E95;&#x4E4B;&#x524D;&#x3002;E &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G &#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x7247;&#x7684;&#x88C2;&#x89E3;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; monophosphorylation 5&#39; &#x52A0;&#x5FEB;&#x4E86;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6539;&#x5584;&#x57FA;&#x6750;&#x7684;&#x7C98;&#x5408;&#xFF0C;&#x800C;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7528;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x58EE;&#x9633;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;5&#39; &#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5288;&#x88C2;&#x9009;&#x5740;&#x5185; RNA &#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5355;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G &#x53EF;&#x4EE5;&#x780D; RNA&#xFF0C;RNA &#x57FA;&#x677F;&#x5176; 5&#39; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x52A0;&#x4EE5;&#x533A;&#x522B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x9700;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x591A;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x5E10;&#x6237;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5728;&#x54EA; 5&#39; &#x7AEF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7531;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#x8F6C;&#x578B;&#x52A0;&#x5FEB; RNA &#x5288;&#x88C2;&#x4E86;&#x7531;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;

Multimeric E &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C; 5&#39;-monophosphorylated rna &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G&#x3002;

RNase E is an endonuclease that plays a central role in RNA processing and degradation in Escherichia coli. Like its E. coli homolog RNase G, RNase E shows a marked preference for cleaving RNAs that bear a monophosphate, rather than a triphosphate or hydroxyl, at the 5' end. To investigate the mechanism by which 5'-terminal phosphorylation can influence distant cleavage events, we have developed fluorogenic RNA substrates that allow the activity of RNase E and RNase G to be quantified much more accurately and easily than before. Kinetic analysis of the cleavage of these substrates by RNase E and RNase G has revealed that 5' monophosphorylation accelerates the reaction not by improving substrate binding, but rather by enhancing the catalytic potency of these ribonucleases. Furthermore, the presence of a 5' monophosphate can increase the specificity of cleavage site selection within an RNA. Although monomeric forms of RNase E and RNase G can cut RNA, the ability of these enzymes to discriminate between RNA substrates on the basis of their 5' phosphorylation state requires the formation of protein multimers. Among the molecular mechanisms that could account for these properties are those in which 5'-end binding by one enzyme subunit induces a protein structural change that accelerates RNA cleavage by another subunit.

Catalytic activation of multimeric RNase E and RNase G by 5'-monophosphorylated RNA.

RNase E est une endonucl&eacute;ase qui joue un r&ocirc;le central dans la maturation de l&#39;ARN et la d&eacute;gradation chez Escherichia coli. Comme son homologue d&#39;e. coli G RNase, RNase E montre une pr&eacute;f&eacute;rence marqu&eacute;e pour les ARN de clivage qui portent un monophosphate, plut&ocirc;t qu&#39;un triphosphate ou hydroxyle, &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39;. Pour &eacute;tudier le m&eacute;canisme par lequel 5&#39;-terminale phosphorylation peut influencer les &eacute;v&eacute;nements de clivage lointain, nous avons d&eacute;velopp&eacute; des substrats fluorog&eacute;niques RNA qui permettent &agrave; l&#39;activit&eacute; de la RNase E et G de la RNase quantifier plus pr&eacute;cis&eacute;ment et facilement qu&#39;avant. L&#39;analyse cin&eacute;tique de la rupture de ces substrats par la RNase E et G de la RNase a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que 5&#39; monophosphorylation acc&eacute;l&egrave;re la r&eacute;action, ne pas en am&eacute;liorant la liaison du substrat, mais plut&ocirc;t en am&eacute;liorant l&#39;activit&eacute; catalytique de ces ribonucl&eacute;ases. En outre, la pr&eacute;sence d&#39;un 5&#39; monophosphate peut augmenter la sp&eacute;cificit&eacute; de la s&eacute;lection de site de clivage sur un ARN. Bien que les formes monom&egrave;res de RNase E et G de la RNase peuvent couper RNA, la capacit&eacute; de ces enzymes d&#39;&eacute;tablir une distinction entre les substrats de RNA en fonction de leur &eacute;tat de phosphorylation de la 5&#39; requiert la formation de multim&egrave;res de prot&eacute;ine. Parmi les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui pourraient expliquer ces propri&eacute;t&eacute;s sont celles dans laquelle 5&#39;-fin de liaison de la sous-unit&eacute; de l&#39;un enzyme induit un changement de structure de prot&eacute;ine qui acc&eacute;l&egrave;re le clivage RNA par une autre sous-unit&eacute;.

Activation catalytique des multim&egrave;res RNase E et G de la RNase de 5&#39;-monophosphorylated RNA.

RNase E ist eine Endonuklease, die spielt eine zentrale Rolle in der RNA-Verarbeitung und Abbau in Escherichia coli. Wie seine E. Coli Homolog RNase-G zeigt RNase E eine deutliche Pr&auml;ferenz f&uuml;r die RNAs, die am 5&#39;-Ende eine Monophosphat, anstatt ein Triphosphat oder Hydroxyl, zu tragen. Um den Mechanismus zu untersuchen, durch die 5&#39;-Terminal Phosphorylierung entfernten Spaltung Ereignisse beeinflussen kann, haben wir entwickelt, RNA Fluorogenic Substrate, mit denen die T&auml;tigkeit der RNase E und RNase G wesentlich genauer quantifiziert werden und leichter als vor. Kinetische Analyse der Spaltung dieser Substrate von RNase E und RNase-G hat ergeben, dass das 5&#39;-Monophosphorylation, beschleunigt die Reaktion nicht durch bessere Substrat Bindung, sondern vielmehr durch die St&auml;rkung der katalytischen Wirksamkeit von diesen Hydrolase. Au&szlig;erdem kann das Vorhandensein einer 5&#39;-Monophosphat die Spezifit&auml;t der Spaltung Standortwahl innerhalb einer RNA erh&ouml;hen. Obwohl Monomere Formen der RNase E und RNase G RNA schneiden k&ouml;nnen, erfordert die F&auml;higkeit dieser Enzyme zu unterscheiden zwischen RNA Substrate auf der Grundlage ihrer Phosphorylierung Zustand 5&#39; die Bildung von Protein-Multimere. Zu den molekularen Mechanismen, die k&ouml;nnten entfallen diese Eigenschaften z&auml;hlen in die 5&#39;-enden Bindung durch ein Enzym-Untereinheit Strukturwandel Protein induziert, der RNA-Spaltung durch einen anderen Untereinheit beschleunigt.

Katalytische Aktivierung werden RNase E und RNase G von 5&#39;-Monophosphorylated-RNA.

E RNasi &egrave; un&#39;endonucleasi che gioca un ruolo centrale nell&#39;elaborazione di RNA e il degrado in Escherichia coli. Come il suo omologo di e. coli RNasi G, RNasi E mostra una spiccata preferenza per RNAs fende che recano un monofosfato, piuttosto che un trifosfato o ossidrile, all&#39;estremit&agrave; 5&#39;. Per studiare il meccanismo di cui 5&#39;-fosforilazione terminale pu&ograve; influenzare gli eventi lontani scissione, abbiamo sviluppato RNA fluorogenic substrati che permettono l&#39;attivit&agrave; di RNAsi E e G RNasi a essere quantificate in modo molto pi&ugrave; preciso e facilmente rispetto a prima. Analisi cinetica di scissione di questi substrati di RNAsi E e RNasi G ha rivelato che 5&#39; monophosphorylation accelera la reazione non migliorando il legame del substrato, ma piuttosto di aumentare la potenza di questi ribonucleasi catalitica. Inoltre, la presenza di un 5&#39; monofosfato pu&ograve; aumentare la specificit&agrave; della selezione del sito di clivaggio all&#39;interno di un RNA. Anche se forme monomeriche di RNAsi E e G RNasi possono tagliare RNA, la capacit&agrave; di questi enzimi per discriminare tra substrati di RNA in base allo stato di fosforilazione di 5&#39; richiede la formazione dei multimeri di proteine. Tra i meccanismi molecolari che potrebbero tenere conto di queste propriet&agrave; sono quelli in cui 5&#39;-associazione fine da subunit&agrave; di un enzima induce un cambiamento strutturale della proteina che accelera la scissione di RNA da un&#39;altra subunit&agrave;.

Attivazione catalitica di RNAsi E multimerica e RNasi G da 5&#39;-monophosphorylated RNA.

Rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x52A3;&#x5316; RNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0; RNase G &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3084;&#x6C34;&#x9178;&#x57FA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;5&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x8CA0;&#x62C5;&#x5272;&#x65AD; rna &#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x597D;&#x307F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E; 5 &#39; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;-&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9060;&#x3044;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x3068; RNase G &#x3088;&#x308A;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3088;&#x308A;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x86CD;&#x5149; RNA &#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x3068; RNase G &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x305D;&#x306E; 5&#39; monophosphorylation &#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x80FD;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x52A0;&#x901F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;5&#39; &#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9078;&#x629E;&#x5185; RNA &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x3068; RNase G RNA &#x3092;&#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E; 5&#39; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; RNA &#x57FA;&#x677F;&#x9593;&#x3092;&#x5224;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;5&#39; &#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x9593;&#x3067;-&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; 1 &#x9175;&#x7D20;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; RNA &#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x5225;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52A0;&#x901F;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4F1A;&#x5408; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068; RNase G &#x306B;&#x3088;&#x308B; 5&#39;-monophosphorylated RNA&#x3002;

RNase E RNA &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xC7AC;&#xC0DD; endonuclease &#xC774;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xCCB4; RNase G &#xCC98;&#xB7FC; RNase E 5&#39; &#xB05D;&#xC5D0;&#xB294; monophosphate &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; &#xB610;&#xB294; &#xC218; &#xC0B0; &#xAE30;, &#xACF0; cleaving Rnas&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5&#39; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBA3C; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;&#xD560; RNase E&#xC758; RNase G &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; fluorogenic RNA &#xAE30;&#xD310; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC804;&#xC5D0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xD310; RNase E&#xC640; G Rnase&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; monophosphorylation 5&#39; &#xAC00;&#xC18D; &#xBC18;&#xC751; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC1C;&#xC120;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC544;&#xB2D9;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; ribonucleases&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC1D;&#xD78C; &#xBC14; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, monophosphate 5&#39;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; RNA &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB192;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Monomeric &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; RNase E RNase G RNA&#xB97C; &#xC790;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; 5&#39; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xADFC;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; RNA &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xC744; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; multimers&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC218; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC788;&#xB294; 5&#39;-&#xB05D;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; RNA &#xBD84;&#xC5F4; &#xAC00;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB294;.

Multimeric RNase E&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; RNase G 5&#39;-monophosphorylated RNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;.

RNasa E es una endonucleasa que juega un papel central en el proceso del ARN y la degradaci&oacute;n en Escherichia coli. Igual que su hom&oacute;logo de e. coli RNasa G, RNasa E muestra una preferencia marcada para RNAs Hendedoras que llevan un monofosfato, en lugar de un trifosfato o hidroxilo, en el extremo 5&#39;. Para investigar el mecanismo por el cual 5&#39;-terminal fosforilaci&oacute;n puede influir en los acontecimientos de escote distante, hemos desarrollado fluorogenic RNA sustratos que permiten la actividad de RNasa E y G de la RNasa a cuantificarse de forma mucho m&aacute;s precisa y f&aacute;cilmente que antes. An&aacute;lisis cin&eacute;tico de la ruptura de estos sustratos por la RNasa E y G de RNasa ha revelado que monophosphorylation 5&#39; acelera la reacci&oacute;n no por mejorar la Uni&oacute;n del sustrato, sino por mejorar la potencia catal&iacute;tica de estos ribonucleasas. Adem&aacute;s, la presencia de un 5&#39; monofosfato puede aumentar la especificidad de la selecci&oacute;n del sitio de clivaje dentro de un RNA. Aunque las formas monom&eacute;ricas de RNasa E y G de RNasa pueden cortar RNA, la capacidad de estas enzimas para discriminar entre sustratos de RNA en base a su estado de fosforilaci&oacute;n de 5&#39; requiere la formaci&oacute;n de prote&iacute;na Mult&iacute;meros. Entre los mecanismos moleculares que podr&iacute;an cuenta de estas propiedades son aquellos en que extremo 5&#39;-vinculante por la subunidad de una enzima induce un cambio estructural de la prote&iacute;na que acelera el escote de RNA por otra subunidad.

Activaci&oacute;n catal&iacute;tica de multim&eacute;rica RNasa E y G de la RNasa por RNA 5&#39;-monophosphorylated.

&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x53D7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4F53; CCR5 &#x6216; CXCR4 &#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8F93;&#x5165;&#x5185;&#x5BB9;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4FE1;&#x5C01;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; gp120 &#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A; (V3) &#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6B64;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x91CF;&#x533A;&#x57DF;&#x662F;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x75AB;&#x82D7;&#x6240;&#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x4EE3;&#x8868;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6297; V3 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E; V3 &#x80BD;&#x3001; &#x590D;&#x6742;&#x63ED;&#x793A; V3 &#x7684;&#x5B98;&#x65B9;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A;&#x5B88;&#x6052;&#x7ED3;&#x6784;&#x8981;&#x7D20;&#xFF1A; &#x62F1;&#x3001; &#x4E50;&#x961F;&#x3001; &#x758F;&#x6C34;&#x6838;&#x5FC3;&#x548C;&#x80BD;&#x9AA8;&#x5E72;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x90FD;&#x662F;&#x8981;&#x4E48;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216;&#x53D7;&#x5230;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x5F02;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x533A;&#x57DF;&#x8DE8;&#x8FDB;&#x5316;&#x4E2D;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F81;&#x6C42;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x84DD;&#x56FE;&#x3002;

&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x7684; V3 &#x7687;&#x51A0;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;

Binding of the third variable region (V3) of the HIV-1 envelope glycoprotein gp120 to the cell-surface coreceptors CCR5 or CXCR4 during viral entry suggests that there are conserved structural elements in this sequence-variable region. These conserved elements could serve as epitopes to be targeted by a vaccine against HIV-1. Here we perform a systematic structural analysis of representative human anti-V3 monoclonal antibodies in complex with V3 peptides, revealing that the crown of V3 has four conserved structural elements: an arch, a band, a hydrophobic core and the peptide backbone. These are either unaffected by or are subject to minimal sequence variation. As these regions are targeted by cross-clade neutralizing human antibodies, they provide a blueprint for the design of vaccine immunogens that could elicit broadly cross-reactive protective antibodies.

Conserved structural elements in the V3 crown of HIV-1 gp120.

Liaison de la troisi&#xE8;me r&#xE9;gion variable (V3) de la glycoprot&#xE9;ine gp120 du VIH-1 enveloppe &#xE0; des co-r&#xE9;cepteurs de surface cellulaire CCR5 ou CXCR4 pendant l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus indiquent que les &#xE9;l&#xE9;ments structurels sont conserv&#xE9;es dans cette r&#xE9;gion de s&#xE9;quence variable. Ces &#xE9;l&#xE9;ments conserv&#xE9;s pourrait servir &#xE9;pitopes &#xEA;tre cibl&#xE9;s par un vaccin contre le VIH-1. Ici nous effectuons une analyse syst&#xE9;matique structurelle de repr&#xE9;sentant des anticorps humains anti-V3 anticorps monoclonaux dans le complexe avec des peptides V3, r&#xE9;v&#xE9;lant que la couronne de V3 dispose de quatre &#xE9;l&#xE9;ments structurels conserv&#xE9;s: un arc, une bande, un noyau hydrophobe et le squelette peptidique. Ce sont soit pas affect&#xE9; par ou sont soumis &#xE0; une variation de s&#xE9;quence minimale. Comme ces r&#xE9;gions sont cibl&#xE9;es par la Croix-clade anticorps neutralisants de l&#x26;#39;homme, ils fournissent un mod&#xE8;le pour la conception d&#x26;#39;immunog&#xE8;nes des vaccins qui pourraient suscitent g&#xE9;n&#xE9;ralement une r&#xE9;action crois&#xE9;e des anticorps protecteurs.

Conserves &#xE9;l&#xE9;ments structurels dans la Couronne V3 du VIH-1 gp120

Bindung der dritten Variable Region (V3) der HIV-1 Umschlag-Glykoprotein gp120 an der Zelloberfl&auml;che Corezeptors CCR5 oder CXCR4 w&auml;hrend virale Eintrag zufolge gibt es in dieser Sequenz-Variable Region konservierten Strukturelemente. Diese konservierten Elemente k&ouml;nnte als Epitope an Ziel von einen Impfstoff gegen HIV-1 dienen. Hier f&uuml;hren wir eine systematische Strukturanalyse von repr&auml;sentativen menschlichen Anti-V3 monoklonale Antik&ouml;rper im Komplex mit V3 Peptide, offenbart, dass die Krone des V3 vier konservierte Strukturelemente hat: ein Bogen, ein Band, einen hydrophoben Kern und das Peptid-R&uuml;ckgrat. Dies sind entweder unber&uuml;hrt oder minimale Sequenz Variation unterliegen. Da diese Regionen durch Kreuz-Klade neutralisierenden Antik&ouml;rper ausgerichtet sind, bieten sie eine Blaupause f&uuml;r die Gestaltung der Impfstoff Immunogenen, die weitgehend kreuzreagierenden sch&uuml;tzender Antik&ouml;rper ausl&ouml;sen k&ouml;nnte.

Konservierten Strukturelemente in der V3-Krone des HIV-1 gp120.

Associazione della terza regione variabile (V3) l&#39;HIV-1 busta glicoproteina gp120 per la superficie della cellula coreceptors CCR5 o CXCR4 durante entrata virale suggerisce che ci sono conservati gli elementi strutturali in questa regione variabile di sequenza. Questi elementi conservati potrebbero servire come epitopi a essere preso di mira da un vaccino contro l&#39;HIV-1. Qui eseguiamo un&#39;analisi strutturale sistematica di anticorpi monoclonali anti-V3 umana rappresentante nel complesso con peptidi V3, rivelando che la corona di V3 ha quattro elementi strutturali conservati: un arco, una band, un core idrofobico e la spina dorsale del peptide. Queste sono influenzate da o sono soggetti a variazione di sequenza minimale. Queste regioni sono bersaglio di croce-clade neutralizzando gli anticorpi umani, forniscono un modello per la progettazione di immunogeni vaccino che potrebbero suscitare anticorpi protettivi ampiamente interferenti.

Conservati gli elementi strutturali della corona V3 di HIV-1 gp120.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x5171;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;CCR5&#x307E;&#x305F;&#x306F;CXCR4&#x3078;&#x306E;HIV-1&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;gp120&#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;V3&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x305D;&#x3053;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8981;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x3001;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30B3;&#x30A2;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x9AA8;&#x683C;&#xFF1A;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;V3&#x306E;&#x51A0;&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;V3&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;V3&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x4E2D;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x9632;&#x5FA1;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9752;&#x5199;&#x771F;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

HIV-1 gp120&#x306E;V3&#x30AF;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBD09;&#xD22C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; gp120 &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; coreceptors CCR5 &#xB098; CXCR4 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9; &#xC911;&#xC5D0; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCC0;&#xC218; &#xC601;&#xC5ED; (V3)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC694;&#xC18C; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC694;&#xC18C; epitopes V-1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xC548;&#xD2F0;-v 3 &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; V3 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; v 3&#xC758; &#xC655;&#xAD00;&#xC740; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;: &#xC544;&#xCE58;, &#xBC34;&#xB4DC;, &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xCF54;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC31;&#xBCF8;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC740; &#xC5B4;&#xB290; &#xCABD;&#xC774; &#xB4E0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xB610;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xD615; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xB294; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; clade &#xC911;&#xD654; &#xC778;&#xAC04; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; cross-reactive &#xBCF4;&#xD638; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; &#xC218; &#xBC31;&#xC2E0; immunogens&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAD;&#xC0AC;&#xC9C4;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 gp120 V3 &#xC655;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC694;&#xC18C;.

La uni&#xF3;n de la regi&#xF3;n tercera variable (V3) de la glicoprote&#xED;na gp120 del VIH-1 sobre los correceptores de la superficie celular CCR5 o CXCR4 durante la entrada viral sugiere que hay se conservan elementos estructurales en esta regi&#xF3;n de la secuencia variable. Estos elementos conservados podr&#xED;a servir como ep&#xED;topos para ser dirigidos por una vacuna contra el VIH-1. Aqu&#xED; llevamos a cabo un an&#xE1;lisis sistem&#xE1;tico estructural de representaci&#xF3;n humanos anti-V3 anticuerpos monoclonales en el complejo con p&#xE9;ptidos V3, revelando que la corona de la V3 tiene cuatro elementos conservados estructurales: un arco, una banda, un n&#xFA;cleo hidrof&#xF3;bico y el esqueleto del p&#xE9;ptido. Estos son ya sea afectado por o est&#xE1;n sujetas a variaci&#xF3;n de la secuencia m&#xED;nima. A medida que estas regiones son el objetivo de neutralizar clado cruz-anticuerpos humanos, que proporcionan un modelo para el dise&#xF1;o de inmun&#xF3;genos de vacunas que podr&#xED;an provocan amplia reactividad cruzada de anticuerpos protectores.

Conserva elementos estructurales de la Corona V3 de la gp120 del VIH-1

V3 &#x5FAA;&#x73AF;&#x662F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x7684;&#x4E2D;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20; B &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x970D;&#x4E71; &#xFF08;&#x57CE;&#x5DF4;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x6210;&#x5728; gp120 &#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;V3 &#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53; (&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;) V3 &#x7684; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E24;&#x4E2A; V3 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6784;&#x9020; (V3 CTB&#xFF09;&#x3002;&#x5168;&#x957F;&#x7684; V3 &#x57CE;&#x5728;&#x6A21;&#x4EFF; gp120 &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x65B9;&#x9762;&#x63D0;&#x51FA;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684; V3 &#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x7684; 24 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x77ED; V3 &#x57CE;&#x4ECB;&#x7ECD; V3 &#x7247;&#x6BB5;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E2D; 447 52D &#x6676;&#x5706;&#x5382;&#xFF0C;&#x914D;&#x5408;&#x5C55;&#x51FA;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6B64;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x5154;&#x4F7F;&#x7528; DNA &#x603B;&#x7406;/&#x86CB;&#x767D;&#x5347;&#x538B;&#x534F;&#x8BAE;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x5168;&#x957F; V3-&#x57CE;&#x5DF4;&#x4E0E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9AD8;&#x53CD; V3 &#x6548;&#x4EF7;&#x5148;&#x5929;&#x62B5;&#x6D88;&#x591A;&#x4E2A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x75C5;&#x6BD2;&#x682A;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x4E2D;&#x3002;&#x77ED;&#x7684; V3 &#x57CE;&#x662F;&#x65E0;&#x6548;&#x7684;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x7684;&#x5F88;&#x7A84;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x5173;&#x8054; Ab &#x53CD;&#x5E94;&#x6B20;&#x4F73;&#x3002;&#x5177;&#x6709;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6D3B;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x8BF1;&#x53D1;&#x9C81;&#x68D2; Ab &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x6307;&#x5BFC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C; CTB &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x4E0A;&#x5448;&#x73B0;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 V3 &#x5FAA;&#x73AF;&#x6297;&#x539F;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

V3 loop is a major neutralizing determinant of the HIV-1 gp120. Using 3D structures of cholera toxin B subunit (CTB), complete V3 in the gp120 context, and V3 bound to a monoclonal antibody (mAb), we designed two V3-scaffold immunogen constructs (V3-CTB). The full-length V3-CTB presenting the complete V3 in a structural context mimicking gp120 was recognized by the large majority of our panel of 24 mAbs. The short V3-CTB presenting a V3 fragment in the conformation observed in the complex with the 447-52D Fab, exhibited high-affinity binding to this mAb. The immunogens were evaluated in rabbits using DNA-prime/protein-boost protocol. Boosting with the full-length V3-CTB induced high anti-V3 titers in sera that potently neutralize multiple HIV virus strains. The short V3-CTB was ineffective. The results suggest that very narrow antigenic profile of an immunogen is associated with poor Ab response. An immunogen with broader antigenic activity elicits robust Ab response.

Structure-guided design and immunological characterization of immunogens presenting the HIV-1 gp120 V3 loop on a CTB scaffold.

La boucle V3 est un d&#xE9;terminant majeur de neutralisation de la gp120 du VIH-1. L&#x26;#39;utilisation de structures 3D de sous-unit&#xE9; B de la toxine du chol&#xE9;ra (CTB), V3 compl&#xE8;te dans le contexte gp120, et V3 li&#xE9; &#xE0; un anticorps monoclonal (mAb), nous avons con&#xE7;u deux V3-&#xE9;chafaudage constructions immunog&#xE8;ne (V3-CTB). La pleine longueur V3-CTB pr&#xE9;sentant la V3 compl&#xE8;te dans un contexte structurel imitant la gp120 a &#xE9;t&#xE9; reconnue par la grande majorit&#xE9; de notre panel de 24 anticorps monoclonaux. Le court-V3 CTB pr&#xE9;sentant un fragment V3 dans la conformation observ&#xE9; dans le complexe avec le Fab 447-52D, expos&#xE9; &#xE0; haute affinit&#xE9; de liaison &#xE0; cette mAb. Les immunog&#xE8;nes ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;s chez des lapins &#xE0; l&#x26;#39;aide DNA-prime/protein-boost protocole. Stimuler les sur toute la longueur V3-CTB induits &#xE9;lev&#xE9;s contre-V3 titres dans le s&#xE9;rum que puissamment neutraliser plusieurs souches du virus VIH. Le court-V3 CTB a &#xE9;t&#xE9; inefficace. Les r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le profil antig&#xE9;nique tr&#xE8;s &#xE9;troite d&#x26;#39;un immunog&#xE8;ne est associ&#xE9; &#xE0; une mauvaise Ab r&#xE9;ponse. Un immunog&#xE8;ne avec une activit&#xE9; plus large antig&#xE9;nique provoque une forte r&#xE9;ponse Ab.

Structure-guid&#xE9;e Conception et Caract&#xE9;risation immunologique des immunog&#xE8;nes Pr&#xE9;sentation du VIH-1 gp120 boucle V3 sur un &#xE9;chafaudage CTB

V3-Loop ist ein ausschlaggebender neutralisierende Faktor f&uuml;r die HIV-1 gp120. Mit 3D Strukturen der Cholera Toxin B Untereinheit (CTB), komplette V3 im Zusammenhang mit gp120 und V3 verpflichtet, ein monoklonaler Antik&ouml;rper (mAb), gestalteten wir zwei V3-Ger&uuml;st Immunogen Konstrukte (V3-CTB). Der in V3-CTB pr&auml;sentiert die komplette V3 in einem strukturellen Kontext imitiert gp120 wurde von der gro&szlig;en Mehrheit unserer Panel von 24 mAbs anerkannt. Die kurze V3-CTB pr&auml;sentieren ein V3-Fragment in der Konformation beobachtet in dem Komplex mit der 447-52D Fab, hoher Affinit&auml;t binden an diese mAb ausgestellt. Bewertet wurden die Immunogenen bei Kaninchen mit DNA-Regierungschef/Protein-Boost-Protokoll. F&ouml;rderung mit der in V3-CTB induziert hohe Anti-V3-Titer im Serum, die mehrere HIV-Virusst&auml;mme dabei wirksam neutralisieren. Die kurze V3-CTB war unwirksam. Die Ergebnisse legen nahe, dass sehr schmale Antigene Profil ein Immunogen Armen Ab Antwort zugeordnet ist. Ein Immunogen mit breiteren Antigene Aktivit&auml;t l&ouml;st robuste Ab Antwort.

Struktur-gef&uuml;hrte Design und immunologische Charakterisierung von Immunogenen die HIV-1 gp120 V3-Schleife auf leski CTB zu pr&auml;sentieren.

V3 loop &egrave; un determinante neutralizzante della gp120 di HIV-1. Utilizzando strutture 3D di sottounit&agrave; di tossina B colera (CTB), completa V3 nel contesto gp120, V3 e legato ad un anticorpo monoclonale (mAb), abbiamo disegnato due costrutti di immunogeno V3-impalcatura (V3-CTB). Il full-length V3-CTB presentando il V3 completo in un contesto strutturale mimando gp120 &egrave; stata riconosciuta la grande maggioranza del nostro pannello di 24 mAbs. Il breve V3-CTB presentando un frammento V3 nella conformazione osservato nel complesso con il Fab 447-52D, esibito legame ad alta affinit&agrave; per questa mAb. Gli immunogeni sono stati valutati in conigli utilizzando il protocollo del DNA-primo/proteina-boost. Aumentando con il full-length V3-CTB indotta da titoli di alto anti-V3 in sieri che potentemente neutralizzano pi&ugrave; ceppi del virus HIV. Il breve V3-CTB era inefficace. I risultati suggeriscono che il profilo antigenico molto stretta di un immunogeno &egrave; associato con scarsa risposta Ab. Un immunogeno con ampia attivit&agrave; antigenica suscita robusta risposta Ab.

Progettazione struttura-guidato e caratterizzazione immunologica di immunogeni presentando l&#39;HIV-1 gp120 V3 loop su un patibolo CTB.

V3&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;HIV-1 gp120&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E2D;&#x548C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30B3;&#x30EC;&#x30E9;&#x6BD2;&#x7D20;B&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;CTB&#xFF09;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;mAb&#xFF09;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;gp120&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;V3&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;V3&#x306E;3D&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;2&#x3064;&#x200B;&#x200B;&#x306E;V3-&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#xFF08;V3-CTB&#xFF09;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; gp120&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;V3&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577;V3-CTB&#x306F;24 mAb&#x306E;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; 447-52D&#x306E;Fab&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;V3&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x77ED;&#x3044;V3-CTB&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306F;DNA-prime/protein-boost&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F37;&#x529B;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;HIV&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x682A;&#x3092;&#x4E2D;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x8840;&#x6E05;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;V3-CTB&#x8A98;&#x5C0E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6297;V3&#x6297;&#x4F53;&#x4FA1;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3002; V3-CTB&#x77ED;&#x3044;&#x304C;&#x7121;&#x52B9;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x72ED;&#x3044;&#x6297;&#x539F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x304C;&#x60AA;&#x3044;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306F;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

CTB&#x8DB3;&#x5834;&#x4E0A;&#x3067;HIV-1 gp120&#x306E;V3&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;

V3 &#xB8E8;&#xD504; HIV 1 gp120&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xD654; &#xD589;&#xB82C;&#xC2DD; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; V3-&#xBE44; &#xACC4; immunogen &#xAD6C;&#xBB38; (V3-CTB) &#xC124;&#xACC4; &#xCF5C;&#xB808;&#xB77C; &#xB3C5; &#xC18C; B &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (CTB) &#xC804;&#xCCB4; gp120 &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; v 3&#xC640; v 3 &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; (mAb)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; V3 CTB gp120 &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; v 3&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; 24 Mabs&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD328;&#xB110;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC815; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC9E7;&#xC740; V3 CTB &#xC81C;&#xC2DC;&#xC774; Mab&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC804;&#xC2DC; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; v 3 &#xC870;&#xAC01; 447-52D &#xD339;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30;. Immunogens &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD80;&#xC2A4;&#xD2B8; DNA &#xD504;&#xB77C;&#xC784; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD1A0;&#xB07C;&#xC5D0; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; V3 CTB&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED; potently &#xC5EC;&#xB7EC; HIV &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885; &#xC911;&#xD654; &#xC138;&#xB77C;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xBC29;&#xC9C0;-V3 titers &#xC720;&#xBC1C;. &#xC9E7;&#xC740; V3 CTB &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801; &#xC774;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; immunogen&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC881;&#xC740; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC740; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; Ab &#xC751;&#xB2F5;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD65C;&#xB3D9; immunogen &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; Ab &#xC751;&#xB2F5; elicits.

&#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; immunogens V 1 gp120 V3 &#xB8E8;&#xD504; CTB &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC758;.

V3 bucle es un determinante principal de neutralizaci&#xF3;n de la gp120 del VIH-1. Uso de estructuras en 3D de la subunidad B de la toxina del c&#xF3;lera (CTB), V3 completa en el contexto de la gp120, y V3 unido a un anticuerpo monoclonal (mAb), se dise&#xF1;aron dos andamios V3-construcciones inmun&#xF3;geno (V3-CTB). La larga duraci&#xF3;n V3-CTB presentar el V3 completa en un contexto estructural que imita la gp120 fue reconocida por la gran mayor&#xED;a de nuestro panel de 24 mAbs. El corto V3-CTB presentar un fragmento V3 en la conformaci&#xF3;n observada en el complejo con el Fab 447-52D, exhiben alta afinidad de uni&#xF3;n a este mAb. Los inmun&#xF3;genos se evaluaron en conejos utilizando DNA-prime/protein-boost protocolo. Impulsar con los de larga duraci&#xF3;n en V3-CTB inducidos por altas anti-V3 en los t&#xED;tulos de los sueros que neutralizan m&#xFA;ltiples cepas potencialmente el virus del VIH. El corto V3-CTB fue ineficaz. Los resultados sugieren que el perfil antig&#xE9;nico muy estrecha de un inmun&#xF3;geno se asocia con pobre respuesta Ab. Un inmun&#xF3;geno con actividad antig&#xE9;nica m&#xE1;s amplio provoca robusta respuesta Ab.

Estructura guiada Dise&#xF1;o y caracterizaci&#xF3;n inmunol&#xF3;gica de inmun&#xF3;genos La presentaci&#xF3;n de la pandemia del VIH-1 gp120 V3 en un andamio CTB

V3 &#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x662F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53; (NAbs) &#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x548C; V3 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0; gp120 DNA &#x542F;&#x52A8;&#x540E;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#x8BF1; NAbs &#x4F7F;&#x5154;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30;&#x662F;&#x5426;&#x4E0E;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5408;&#x7406; V3 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x65F6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6539;&#x8FDB;&#x5E7F;&#x5EA6;&#x548C;&#x70C8;&#x5EA6;&#x7684; NAb &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5154;&#x4E0E;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x4F18;&#x5316;&#x8FDB;&#x5316; C gp120 DNA &#x5F15;&#x7269;&#xFF0C;&#x63D0;&#x632F;&#x4E86;&#x4E0E;&#x4E94;&#x4E2A; V3 &#x970D;&#x4E71;&#x6BD2;&#x7D20; B &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; V3 &#x4F1A;&#x8003;&#x4E4B;&#x4E00;&#x6216;&#x53CC;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6297;&#x539F;&#x63D2;&#x5165;&#x90FD;&#x88AB;&#x4E3A;&#x4E86;&#x663E;&#x793A; V3 &#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5168;&#x7403;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x682A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x3002;V3 CTB &#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5408;&#x901A;&#x5E38;&#x5F15;&#x8D77;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x548C;&#x70C8;&#x6027; NAbs &#x6BD4;&#x63D0;&#x5347;&#x4E0E;&#x5355;&#x4E2A; V3 CTB &#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x7528;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB; NAbs &#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x643A;&#x5E26;&#x5171;&#x8BC6; &#x300B; V3 &#x7684;&#x8FDB;&#x5316; C V3-&#x57CE;&#x5DF4; (V3(C)-CTB)&#xFF0C;&#x6216;&#x4E0E; V3 CTB &#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC; V3 (C) &#x57CE;-&#x53CC;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C; 1 &#x548C; 2 &#x5C42; pseudoviruses clades AG&#x3001; B &#x548C; C &#x4ECE;&#x548C;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; (PBMC) &#x548C;-&#x6210;&#x957F;&#x4E3B;&#x8981;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECE; clades A&#x3001; &#x94F6;&#x548C; B &#x53D6;&#x5F97;&#xFF0C;&#x6F14;&#x793A;&#x8BE5;&#x542F;&#x52A8;&#x5177;&#x6709;&#x6709;&#x6548;&#x8DDF;&#x4E0E; V3 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x6297;&#x539F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684; gp120 DNA &#x8BF1;&#x53D1;&#x8DE8;&#x514B;&#x62C9;&#x5FB7; NAbs&#x3002;V3 &#x533A;&#x57DF;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E00;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x9488;&#x5BF9;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5177;&#x6709;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684; Env&#xFF0C;&#x8FDB;&#x5316;&#x5230;&#x4E0D;&#x826F;&#x8BF1;&#x5BFC; NAbs &#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C4F;&#x853D;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x6700;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x4FDD;&#x62A4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F7F;&#x7528;&#x6218;&#x7565;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

&#x8DE8;&#x514B;&#x62C9;&#x5FB7;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x540E;&#x9884;&#x5145;&#x7684; gp120 DNA &#x7684; V3 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x539F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;

The V3 epitope is a known target for HIV-1 neutralizing antibodies (NAbs), and V3-scaffold fusion proteins used as boosting immunogens after gp120 DNA priming were previously shown to induce NAbs in rabbits. Here, we evaluated whether the breadth and potency of the NAb response could be improved when boosted with rationally designed V3-scaffold immunogens. Rabbits were primed with codon-optimized clade C gp120 DNA and boosted with one of five V3-cholera toxin B fusion proteins (V3-CTBs) or with double combinations of these. The inserts in these immunogens were designed to display V3 epitopes shared by the majority of global HIV-1 isolates. Double combinations of V3-CTB immunogens generally induced more broad and potent NAbs than did boosts with single V3-CTB immunogens, with the most potent and broad NAbs elicited with the V3-CTB carrying the consensus V3 of clade C (V3(C)-CTB), or with double combinations of V3-CTB immunogens that included V3(C)-CTB. Neutralization of tier 1 and 2 pseudoviruses from clades AG, B, and C and of peripheral blood mononuclear cell (PBMC)-grown primary viruses from clades A, AG, and B was achieved, demonstrating that priming with gp120 DNA followed by boosts with V3-scaffold immunogens effectively elicits cross-clade NAbs. Focusing on the V3 region is a first step in designing a vaccine targeting protective epitopes, a strategy with potential advantages over the use of Env, a molecule that evolved to protect the virus by poorly inducing NAbs and by shielding the epitopes that are most critical for infectivity.

Cross-clade HIV-1 neutralizing antibodies induced with V3-scaffold protein immunogens following priming with gp120 DNA.

L&#x26;#39;&#xE9;pitope V3 est une cible connue pour le VIH-1 anticorps neutralisants (ACN), et V3-&#xE9;chafaudage de prot&#xE9;ines de fusion utilis&#xE9;s comme immunog&#xE8;nes stimulant apr&#xE8;s la gp120 d&#x26;#39;amor&#xE7;age d&#x26;#39;ADN ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; pour induire NAb chez les lapins. Ici, nous avons &#xE9;valu&#xE9; si l&#x26;#39;ampleur et la puissance de la r&#xE9;ponse NAb pourrait &#xEA;tre am&#xE9;lior&#xE9;e si amplifi&#xE9; avec rationnellement con&#xE7;us V3-&#xE9;chafaudage immunog&#xE8;nes. Les lapins ont &#xE9;t&#xE9; amorc&#xE9;e avec codon-optimis&#xE9; clade C gp120 de l&#x26;#39;ADN et un rappel avec l&#x26;#39;une des cinq prot&#xE9;ines de toxines V3-chol&#xE9;ra de fusion B (V3-CTB) ou avec des combinaisons doubles de ces derniers. Les encarts dans ces immunog&#xE8;nes ont &#xE9;t&#xE9; con&#xE7;us pour afficher des &#xE9;pitopes V3 partag&#xE9;es par la majorit&#xE9; des mondiaux isolats VIH-1. Combinaisons doubles de V3-CTB immunog&#xE8;nes g&#xE9;n&#xE9;ralement induite NAb plus larges et puissantes que fait boosts avec un seul V3-CTB immunog&#xE8;nes, avec les NAb les plus puissants et larges a suscit&#xE9; avec le V3-CTB portant le V3 consensus de clade C (V3 (C) - CTB), ou avec des combinaisons doubles de V3-CTB immunog&#xE8;nes inclus V3 (C)-CTB. Neutralisation de la cat&#xE9;gorie 1 et 2 pseudovirus de clades AG, B, et C et de la cellule mononucl&#xE9;aires du sang p&#xE9;riph&#xE9;rique (CMSP) de virus cultiv&#xE9;s primaires de clades A AG, et B a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e, d&#xE9;montrant que l&#x26;#39;amor&#xE7;age avec la gp120 ADN suivie par boosts avec V3 -&#xE9;chafaudage immunog&#xE8;nes suscite effectivement cross-clade NAb. En se concentrant sur la r&#xE9;gion V3 est une premi&#xE8;re &#xE9;tape dans la conception d&#x26;#39;un vaccin ciblant les &#xE9;pitopes de protection, une strat&#xE9;gie avec des avantages potentiels par rapport &#xE0; l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;Env, une mol&#xE9;cule qui a &#xE9;volu&#xE9; pour prot&#xE9;ger du virus par le mauvais induire NAb et en prot&#xE9;geant les &#xE9;pitopes qui sont le plus critique pour infectiosit&#xE9;.

Croix-clade du VIH-1 anticorps neutralisants induits par V3-prot&#xE9;ine d&#x26;#39;&#xE9;chafaudage immunog&#xE8;nes amor&#xE7;age Apr&#xE8;s concertation avec l&#x26;#39;ADN Gp120

Die V3-Epitop ist ein bekanntes Ziel f&uuml;r HIV-1 neutralisierende Antik&ouml;rper (NAbs) und V3-Ger&uuml;st Schmelzverfahrensproteine als Steigerung der Immunogenen nach gp120 DNA Grundierung verwendet wurden zuvor gezeigt, NAbs bei Kaninchen zu veranlassen. Hier wir gepr&uuml;ft, ob die Breite und St&auml;rke der NAb Antwort verbessert werden k&ouml;nnte, wenn mit Rational gestalteten V3-Ger&uuml;st Immunogenen gesteigert. Kaninchen wurden grundiert mit Codon-optimierte Klade C gp120 DNA und verst&auml;rkt mit einem der f&uuml;nf V3-Cholera-Toxin B-Fusionsproteine (V3-CTBs) oder mit doppelten Kombinationen davon. Die Einf&uuml;gungen in diese Immunogenen wurden entwickelt, um V3 Epitopes, die gemeinsam von der Mehrheit der globalen HIV-1-Isolaten anzuzeigen. Doppelte Kombinationen von V3-CTB Immunogenen induziert in der Regel mehr Breite und starke NAbs als steigert mit einzelnen V3-CTB Immunogenen, mit potenten und breit NAbs l&ouml;ste mit der Durchf&uuml;hrung des Konsens V3 der Klade C V3-CTB (V3(C)-CTB), oder mit doppelten Kombinationen von V3-CTB Immunogenen, die V3 (C)-CTB enthalten. Neutralisierung der Stufe 1 und 2 Pseudoviruses aus Kladen AG, B und C und der peripheren mononukle&auml;ren Zellen (PBMC)-gewachsen prim&auml;re Viren aus Kladen A, AG und B erreicht wurde, demonstrieren, dass Grundierung mit gp120 DNA gefolgt von steigert mit V3-Ger&uuml;st Immunogenen effektiv Kreuz-Klade NAbs entlockt. Konzentration auf die V3-Region ist ein erster Schritt in der Entwicklung eines Impfstoffs f&uuml;r sch&uuml;tzende Epitopes, eine Strategie mit potenziellen Vorteile gegen&uuml;ber der Verwendung von Env, ein Molek&uuml;l, das sich entwickelt, um das Virus zu sch&uuml;tzen, durch schlecht induzierende NAbs und Abschirmung der Epitopes, die kritischsten f&uuml;r Infektiosit&auml;t sind.

Cross-Klade HIV-1 neutralisierende Antik&ouml;rper induzierte mit V3-Ger&uuml;st Protein Immunogenen nach Grundierung mit gp120 DNA.

L&#39;epitopo V3 &egrave; una destinazione conosciuta per gli anticorpi neutralizzanti di HIV-1 (NAbs) e proteine di fusione V3-ponteggio usate come incrementare immunogeni dopo adescamento DNA gp120 erano precedentemente indicate per indurre NAbs nei conigli. Qui, abbiamo valutato se l&#39;ampiezza e la potenza della risposta NAb potrebbe essere migliorate quando potenziato con razionalmente progettati V3-ponteggio immunogeni. Conigli erano innescati con codone-ottimizzato clade C gp120 DNA e potenziati con una delle proteine di fusione di cinque V3-colera tossina B (V3-CTBs) o con doppi combinazioni di questi. Gli inserti in questi immunogeni sono stati progettati per la visualizzazione V3 epitopi condivisi dalla maggioranza degli isolati di HIV-1 globali. Doppie combinazioni di V3-CTB immunogeni indotta generalmente pi&ugrave; ampio e potente NAbs di fatto aumenta con singolo V3-CTB immunogeni, con la pi&ugrave; ampia e potente NAbs ha suscitato con il V3-CTB portando il consenso V3 di clade C (V3(C)-CTB), o con doppie combinazioni di immunogeni V3-CTB che comprendeva V3 (C)-CTB. Neutralizzazione di pseudoviruses tier 1 e 2 da cladi AG, B e C e di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC)-coltivato primario virus da cladi A, AG e B &egrave; stato raggiunto, dimostrando che innesco con DNA gp120 seguito da spinte con V3-ponteggio immunogeni efficacemente suscita NAbs cross-clade. Messa a fuoco sulla regione V3 &egrave; un primo passo nella progettazione di un vaccino targeting epitopi protettivi, una strategia con potenziali vantaggi rispetto l&#39;uso di Env, una molecola che si &egrave; evoluto per proteggere il virus inducendo scarsamente NAbs e da schermatura gli epitopi che sono pi&ugrave; critici di infettivit&agrave;.

Anticorpi neutralizzanti di HIV-1 Cross-clade indussero con V3-impalcatura proteica immunogeni seguito adescamento con DNA gp120.

V3&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;HIV-1&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;NAbs&#xFF09;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;gp120&#x306E;DNA&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;V3-&#x8DB3;&#x5834;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x3067;NAbs&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;V3-&#x8DB3;&#x5834;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x3067;&#x30D6;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x6642;NAB&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5E45;&#x5E83;&#x3055;&#x3068;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;C gp120&#x306E;DNA&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;5&#x3064;&#x306E;V3-&#x30B3;&#x30EC;&#x30E9;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;B&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;V3-CTBS&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x30D6;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;HIV-1&#x5206;&#x96E2;&#x682A;&#x306E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x304C;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;V3&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; - &#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x304B;&#x3064;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;NAbs&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;V3-CTB&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x3001;&#x3068;&#x30D6;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;V3&#x3092;&#x904B;&#x3076;V3-CTB&#x3067;&#x8A98;&#x767A;C&#xFF08;V3&#xFF08;C&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x3082;V3-CTB&#x306E;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x304B;&#x3064;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;NAbs&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;CTB&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;V3&#xFF08;C&#xFF09;-CTB&#x542B;&#x307E;V3-CTB&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3002;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;AG&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x305F;&#x4E3B;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;Tier 1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;AG&#x3001;B&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x304B;&#x3089;2 pseudoviruses&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;PBMC&#xFF09;&#x306E;&#x4E2D;&#x548C;&#x306F;&#x3001;V3&#x3068;&#x30D6;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;gp120&#x306E;DNA&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#xB7;&#x8DB3;&#x5834;&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;NAbs&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x3002; V3&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7740;&#x76EE;&#x3059;&#x308B;&#x3068;Env&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;NAbs&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9032;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x906E;&#x853D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3001;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

V3-&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;HIV-1&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;gp120&#x306E;DNA&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;

V3 epitope &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; (NAbs)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xBA70; V3-&#xBE44; &#xACC4; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; gp120 DNA &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xD55C; &#xD6C4; immunogens&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD1A0;&#xB07C;&#xC5D0;&#xC11C; NAbs &#xC720;&#xB3C4;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xACE0; NAb &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; V3-&#xBE44; &#xACC4; immunogens&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB54C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xD1A0;&#xB07C; codon &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; clade C gp120 DNA&#xC640; &#xC561; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; 5 V3 &#xCF5C;&#xB808;&#xB77C; &#xB3C5; &#xC18C; B &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (V3 CTBs) &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xB4E4;&#xC758; &#xB354;&#xBE14; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; immunogens&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; V3 epitopes &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xACA9;&#xB9AC;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xC720;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. V3 CTB immunogens &#xB354;&#xBE14; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; NAbs &#xB4E4;&#xACE0; clade C&#xC758; &#xD569;&#xC758; V3 V3 CTB&#xB85C; elicited&#xC640; &#xB2E8;&#xC77C; V3 CTB immunogens&#xB85C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD55C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; NAbs &#xC720;&#xB3C4; (V3(C)-CTB), &#xB610;&#xB294; V3 (C)-CTB &#xD3EC;&#xD568; V3 CTB immunogens&#xC758; &#xC774;&#xC911; &#xC870;&#xD569;. Clades AG&#xB294;, B &#xBC0F; C&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xCE35; 1 &#xBC0F; 2 pseudoviruses&#xC758;&#xC640; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; (PBMC)&#xC758; &#xC911;&#xD654;-&#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; clade NAbs elicits gp120 dna &#xB4A4; V3-&#xBE44; &#xACC4; immunogens&#xC640; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; clades A, AG, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; B&#xB294; &#xB2EC;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;. V3 &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xBCF4;&#xD638; epitopes, &#xD658;&#xACBD;, &#xC800;&#xC870;&#xD55C; NAbs &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; infectivity epitopes&#xB97C; &#xCC28;&#xD3D0; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC9C4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xC810; &#xD568;&#xAED8; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xC124;&#xACC4; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; clade HIV 1 &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC720;&#xB3C4; gp120 DNA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; V3-&#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; immunogens&#xC640; &#xD568;&#xAED8;.

El ep&#xED;topo V3 es un objetivo conocido para VIH-1 anticuerpos neutralizantes (NABS), y V3-andamios prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n se utilizan como inmun&#xF3;genos impulsar despu&#xE9;s de cebado del ADN gp120 se indica anteriormente para inducir Nabs en conejos. Aqu&#xED;, evaluamos si la amplitud y la potencia de la respuesta NAb podr&#xED;a mejorarse si se intensifica con racionalmente dise&#xF1;adas V3-andamio inmun&#xF3;genos. Los conejos fueron cebados con codones optimizados gp120 subtipo C del ADN y se impulsar&#xE1; con uno de los cinco V3-c&#xF3;lera prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n toxina B (V3-CTBS) o con combinaciones dobles de los mismos. Los insertos en estos inmun&#xF3;genos fueron dise&#xF1;ados para mostrar ep&#xED;topos V3 compartidos por la mayor&#xED;a de globales de VIH-1 aislados. Combinaciones dobles de V3-CTB inmun&#xF3;genos inducida general Nabs m&#xE1;s amplios y potentes que hizo aumenta con un solo CTB-V3, con los inmun&#xF3;genos Nabs m&#xE1;s potentes y amplia suscit&#xF3; con la V3-CTB llevar el V3 consenso de subtipo C (V3 (C) - CTB), o con combinaciones dobles de V3-CTB inmun&#xF3;genos que inclu&#xED;an V3 (C)-CTB. La neutralizaci&#xF3;n de nivel 1 y 2 pseudoviruses de clados AG, B y C y de c&#xE9;lulas mononucleares de sangre perif&#xE9;rica (CMSP)-cultivadas virus primarios de clados A AG, y B se logr&#xF3;, demostrando que el cebado con gp120 ADN seguido por aumenta con V3 -andamio inmun&#xF3;genos efectivamente provoca clado cruz-Nombrado. Centr&#xE1;ndose en la regi&#xF3;n V3 es un primer paso en el dise&#xF1;o de una vacuna focalizaci&#xF3;n epitopos protectores, una estrategia con ventajas potenciales sobre el uso de Env, una mol&#xE9;cula que se desarroll&#xF3; para proteger el virus por el mal inducir Nabs y protegiendo los ep&#xED;topos que son m&#xE1;s cr&#xED;ticos para infectividad.

Clado de la Cruz-VIH-1 anticuerpos neutralizantes inducidos con V3-andamio de prote&#xED;nas inmun&#xF3;genos cebado sigue con gp120 ADN

&#x4F18;&#x60E0;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7F16;&#x7801; &#xFF08;Abs&#xFF09; &#x6297;&#x4F53;&#x5BF9;&#x5404;&#x79CD;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; (Ig) &#x57FA;&#x56E0;&#x5F88;&#x5C11;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x4E0D;&#x5927;&#x6E05;&#x695A;&#x7684; Ig &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x9650;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x9884;&#x5148;&#x89C4;&#x5B9A;&#x6297;&#x4F53;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684; 18 &#x4EBA;&#x53CD; V3 &#x5355;&#x514B;&#x9686; Abs (Mab) &#x4ECE;&#x65E0;&#x5173;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x90FD;&#x4F18;&#x5148;&#x4F7F;&#x7528; VH5 51 &#x548C; VL lambda &#x57FA;&#x56E0;&#x914D;&#x5BF9;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x751F;&#x6210;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x4E94; VH5-51/VL lambda &#x7F16;&#x7801;&#x6676;&#x5706;&#x7EDC;&#x5408;&#x5404;&#x79CD; V3 &#x80BD;&#x4E0E;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x5F62;&#x72B6;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E92;&#x8865;&#x786E;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF; (CDR) &#x91CD;&#x91D1;&#x5C5E; (H) &#x548C; (L) &#x8F7B;&#x94FE;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x5E38;&#x89C1;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E09;&#x7EF4; (3D)&#xFF1A; &#x5177;&#x4F53;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;H1&#x3001; H2&#x3001; L1 &#x548C; L2 &#x7684;&#x57DF;&#x3002;CDR H3 &#x57DF;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x52A9;&#x957F;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x6709;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3001; &#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x3002;&#x540C;&#x4E00;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86; V3 &#x80BD;&#x4E0E;&#x6676;&#x5706;&#x5382;&#xFF0C;&#x5145;&#x5206;&#x9002;&#x5E94;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x548C;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x6B8B;&#x7559;&#xFF0C;&#x4E94;&#x4E2A;&#x6676;&#x5706;&#x5382;&#x91CD;&#x578B;&#x548C;&#x8F7B;&#x578B;&#x94FE;&#x4E2D;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x80DA;&#x7CFB;&#x7F16;&#x7801;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x8868;&#x73B0;&#x76F8;&#x540C;&#x9AA8;&#x5E72;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;VH5 51 &#x53CD; V3 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x786E;&#x8BA4;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x7684; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x627F;&#x8BA4; VH5 51 &#x6E90;&#x6027;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7531;&#x5176;&#x4ED6; V3 Mab &#x5355;&#x6DD8;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7531;&#x4E2D;&#x548C;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4F18;&#x5148;&#x4F7F;&#x7528; Ig &#x57FA;&#x56E0;&#x9274;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x540C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x5C01;&#x7684;&#x754C;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x5B88;&#x6052;&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#x3002;&#x8FD9;&#x5C06;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x6765;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x75AB;&#x82D7;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x8DE8;&#x548C; Abs&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6297; V3 &#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684; VH5-51/VL lambda &#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x7F16;&#x7801;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Preferential usage of immunoglobulin (Ig) genes that encode antibodies (Abs) against various pathogens is rarely observed and the nature of their dominance is unclear in the context of stochastic recombination of Ig genes. The hypothesis that restricted usage of Ig genes predetermines the antibody specificity was tested in this study of 18 human anti-V3 monoclonal Abs (mAbs) generated from unrelated individuals infected with various subtypes of HIV-1, all of which preferentially used pairing of the VH5-51 and VL lambda genes. Crystallographic analysis of five VH5-51/VL lambda-encoded Fabs complexed with various V3 peptides revealed a common three dimensional (3D) shape of the antigen-binding sites primarily determined by the four complementarity determining regions (CDR) for the heavy (H) and light (L) chains: specifically, the H1, H2, L1 and L2 domains. The CDR H3 domain did not contribute to the shape of the binding pocket, as it had different lengths, sequences and conformations for each mAb. The same shape of the binding site was further confirmed by the identical backbone conformation exhibited by V3 peptides in complex with Fabs which fully adapted to the binding pocket and the same key contact residues, mainly germline-encoded in the heavy and light chains of five Fabs. Finally, the VH5-51 anti-V3 mAbs recognized an epitope with an identical 3D structure which is mimicked by a single mimotope recognized by the majority of VH5-51-derived mAbs but not by other V3 mAbs. These data suggest that the identification of preferentially used Ig genes by neutralizing mAbs may define conserved epitopes in the diverse virus envelopes. This will be useful information for designing vaccine immunogen inducing cross-neutralizing Abs.

Human anti-V3 HIV-1 monoclonal antibodies encoded by the VH5-51/VL lambda genes define a conserved antigenic structure.

Utilisation pr&#xE9;f&#xE9;rentielle des immunoglobulines (Ig) des g&#xE8;nes qui codent pour des anticorps (Ac) contre divers agents pathog&#xE8;nes est rarement observ&#xE9;e et la nature de leur position dominante n&#x26;#39;est pas clair dans le contexte de la recombinaison stochastique des g&#xE8;nes des immunoglobulines. L&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que l&#x26;#39;usage restreint de g&#xE8;nes Ig pr&#xE9;d&#xE9;termine la sp&#xE9;cificit&#xE9; des anticorps a &#xE9;t&#xE9; test&#xE9; dans cette &#xE9;tude de 18 anticorps humains anti-V3 Abs monoclonaux (mAb) g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s &#xE0; partir des individus non apparent&#xE9;s infect&#xE9;s par diff&#xE9;rents sous-types du VIH-1, qui tous utilis&#xE9;s pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement au jumelage de l&#x26;#39;VH5 -51 et VL g&#xE8;nes lambda. L&#x26;#39;analyse cristallographique de cinq VH5-51/VL lambda-cod&#xE9;es Fabs complex&#xE9;s avec des peptides V3 divers r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; trois communes dimensions (3D) la forme des sites de liaison d&#x26;#39;antig&#xE8;ne principalement d&#xE9;termin&#xE9;es par la compl&#xE9;mentarit&#xE9; quatre r&#xE9;gions de d&#xE9;termination (CDR) pour la lourde (H) et de lumi&#xE8;re (L): les cha&#xEE;nes sp&#xE9;cifiquement, le H1, H2, L1 et L2 domaines. Le CDR H3 de domaine n&#x26;#39;a pas contribu&#xE9; &#xE0; la forme de la poche de liaison, comme il l&#x26;#39;avait longueurs diff&#xE9;rentes, les s&#xE9;quences et les conformations pour chaque mAb. La forme m&#xEA;me du site de liaison a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par la conformation &#xE9;pine dorsale identiques pr&#xE9;sent&#xE9;es par V3 peptides en complexe avec Fabs qui ont pleinement adapt&#xE9;es &#xE0; la poche de liaison et les m&#xEA;mes r&#xE9;sidus de contacts cl&#xE9;s, principalement la lign&#xE9;e germinale-cod&#xE9;es dans les cha&#xEE;nes lourdes et l&#xE9;g&#xE8;res de cinq Fabs . Enfin, les VH5-51 anti-V3 mAbs reconnu un &#xE9;pitope avec une structure identique 3D qui est mim&#xE9; par un mimotope seule reconnue par la majorit&#xE9; des anticorps monoclonaux VH5-51-d&#xE9;riv&#xE9;s, mais pas par des anticorps monoclonaux V3 autres. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;identification des g&#xE8;nes pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement utilis&#xE9;s par des anticorps monoclonaux neutralisants Ig peut d&#xE9;finir &#xE9;pitopes conserv&#xE9;s dans les enveloppes de virus divers. Ce sera des informations utiles pour la conception de vaccins induisant immunog&#xE8;ne de neutralisation crois&#xE9;e Abs.

L&#x26;#39;homme anti-V3 du VIH-1 Anticorps monoclonaux cod&#xE9;es par les g&#xE8;nes lambda VH5-51/VL D&#xE9;finir une structure antig&#xE9;niques conserv&#xE9;s

Bevorzugte Verwendung von Immunglobulin (Ig) Gene, die kodieren (Abs) Antik&ouml;rper gegen verschiedene Krankheitserreger wird selten beobachtet, und die Natur ihre Dominanz ist unklar im Zusammenhang mit stochastischen Rekombination der Ig-Gene. Die Hypothese, die Verwendung der Ig-Gene eingeschr&auml;nkt pr&auml;destiniert den Antik&ouml;rper Spezifit&auml;t wurde in dieser Studie 18 menschliche Anti-V3 monoklonale Abs (mAbs) generiert, die von unabh&auml;ngigen Individuen mit verschiedenen Subtypen von HIV-1, die Paarung der VH5-51 und VL Lambda-Gene bevorzugt verwendet infiziert getestet. Kristallographische Analyse der f&uuml;nf VH5-51/VL Lambda-codierte Fabs komplexiert mit verschiedenen V3-Peptiden ergab eine gemeinsame drei dimensionale (3D) Form der Antigen-Bindungsstellen, die vor allem bestimmt durch die vier bestimmenden Komplementarit&auml;t-Regionen (CDR) f&uuml;r die schweren (H) und Licht (L) Ketten: insbesondere die H1, H2, L1 und L2-Dom&auml;nen. Die CDR-H3-Dom&auml;ne nicht auf die Form der Bindung Tasche, beitragen, da es unterschiedliche L&auml;ngen, Sequenzen und Konformationen f&uuml;r jedes mAb hatte. Die gleiche Form der die Bindungsstelle wurde best&auml;tigt durch die identische R&uuml;ckgrat-Konformation ausgestellt von V3 Peptide im Komplex mit Fabs die voll der Bindung-Tasche und dieselben Schl&uuml;ssel Kontakt R&uuml;ckst&auml;nde, vor allem in den schweren und leichten Ketten von f&uuml;nf Fabs Germline codierte angepasst. Schlie&szlig;lich kam der VH5-51-Anti-V3-mAbs ein Epitop mit einer identischen 3D Struktur, die durch ein einzelnes Mimotope, anerkannt von der Mehrheit der mAbs VH5-51-abgeleitet, aber nicht von anderen V3-mAbs nachgeahmt wird. Diese Daten legen nahe, dass die Identifizierung der vorzugsweise verwendeten Ig-Gene durch Neutralisierung mAbs konservierten Epitopes in den verschiedenen Virus-Umschl&auml;gen definieren kann. N&uuml;tzliche Informationen zum Entwerfen von Impfstoff Immunogen induzierende Kreuz-Neutralisierung Abs werden.

Menschliche Anti-V3 HIV-1 monoklonale Antik&ouml;rper durch die VH5-51/VL Lambda-Gene kodiert eine konservierte Antigene Struktur definieren.

&Egrave; raramente osservato l&#39;utilizzo preferenziale di geni per l&#39;immunoglobulina (Ig) che codificano (Abs) di anticorpi contro vari agenti patogeni e la natura della loro posizione dominante &egrave; chiara nel contesto di stocastico ricombinazione dei geni Ig. L&#39;ipotesi che il limitato utilizzo di geni Ig predetermina l&#39;anticorpo specificit&agrave; &egrave; stato testato in questo studio di 18 Abs monoclonale umano anti-V3 (mAbs) generato da individui indipendenti infettati con diversi sottotipi di HIV-1, i quali utilizzati preferenzialmente accoppiamento dei geni lambda VH5-51 e VL. Analisi cristallografica dei cinque VH5-51/VL con codifica lambda Fabs complessato con vari peptidi V3 ha rivelato un tre tridimensionale (3D) forma comune dei siti antigene-legante principalmente determinata da quattro regioni determinazione complementarit&agrave; (CDR) per il pesante (H) e catene leggere (L): in particolare, i domini H1, H2, L1 e L2. Il dominio di CDR H3 non ha contribuito alla forma della tasca di legame, come aveva diverse lunghezze, sequenze e conformazioni per ogni mAb. La stessa forma del sito di legame &egrave; stato ulteriormente confermata dalla conformazione del backbone identico esposta da V3 peptidi nel complesso con Fabs che completamente adattato per la tasca di legame e i residui di contatti chiavi stessi, principalmente germinale-codificato nelle catene pesanti e leggere delle cinque Fabs. Infine, il VH5-51 anti-V3 mAbs riconosciuto un epitopo con un&#39;identica struttura 3D che &egrave; imitato da un singolo mimotope riconosciuto dalla maggioranza dei mAbs VH5-51-derivati ma non da altri mAbs V3. Questi dati suggeriscono che l&#39;identificazione dei geni Ig preferenzialmente utilizzati neutralizzando mAbs pu&ograve; definire epitopi conservati in buste diversi virus. Si tratta di informazioni utili per la progettazione di vaccino immunogen inducendo Abs cross-neutralizzanti.

Anti-V3 umana HIV-1 anticorpi monoclonali codificati da geni lambda VH5-51/VL definire una struttura antigenica conservata.

&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;ABS&#xFF09;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;Ig&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306A;&#x5229;&#x7528;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305A;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;Ig&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002; Ig&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x7528;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x3042;&#x3089;&#x304B;&#x3058;&#x3081;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x304C;&#x512A;&#x5148;VH5&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;HIV-1&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x975E;&#x8840;&#x7E01;&#x500B;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;18&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;V3&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;ABS&#xFF08;mAb&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;-51&#x304A;&#x3088;&#x3073;VL&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3002;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;V3&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;5 VH5-51/VL&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Fab&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;3&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;3D&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#xFF08;H&#xFF09;&#x91CD;&#x305F;&#x3081;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;CDR&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x8EFD;&#xFF08;L&#xFF09;&#x9396;&#xFF1A;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;H1&#x3001;H2&#x3001;L1&#x3068;L2&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5404;mAb&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x9577;&#x3055;&#x3001;&#x914D;&#x5217;&#x53CA;&#x3073;&#x7ACB;&#x4F53;&#x914D;&#x5EA7;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;CDR H3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x5F62;&#x72B6;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;5 Fab&#x306E;&#x91CD;&#x9396;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EFD;&#x9396;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30AD;&#x30FC;&#x63A5;&#x89E6;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30D6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;V3&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;VH5-51&#x306E;&#x6297;V3 mAb&#x306F;VH5-51&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x904E;&#x534A;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;V3&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;mimotope&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A21;&#x5023;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x548C;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5C01;&#x7B52;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x4E2D;&#x548C;&#x8179;&#x7B4B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

VH5-51/VL&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;V3 HIV-1&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; (Abs)&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; (Ig) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD2B9;&#xD61C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC70;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC6B0; &#xC131;&#xC740; Ig &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD655;&#xB960;&#xC801; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85;. Ig &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC81C;&#xD55C; &#xAC00;&#xC124; predetermines &#xD56D; &#xCCB4; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1, &#xBAA8;&#xB450;&#xB294; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; VH5-51&#xC640; VL &#xB78C;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC30D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD558;&#xC704; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; 18 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-V3 &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB85C; &#xB110; Abs (mAbs)&#xC758; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. 5 VH5-51/VL &#xB78C;&#xB2E4; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD339; complexed &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; V3 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640;&#xC758; crystallographic &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; (H)&#xACFC; &#xBE5B; (L) &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 4 &#xAC1C;&#xC758; complementarity &#xACB0;&#xC815; &#xC601;&#xC5ED; (CDR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBB36;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xBAA8;&#xC591;: &#xD2B9;&#xD788;, H1, H2, L1 &#xBC0F; L2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE38;&#xC774;, &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xAC01; mAb &#xC704;&#xD55C; conformations &#xD588;&#xB2E4; CDR H3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC758; &#xBAA8;&#xC591;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBAA8;&#xC591; &#xCD94;&#xAC00; V3 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC640; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xD339;&#xC758; &#xBB34; &#xAC81; &#xACE0; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC0AC;&#xC2AC;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xD0A4; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xD339;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBC31;&#xBCF8; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, VH5-51 &#xC548;&#xD2F0;-V3 mAbs &#xB2E8;&#xC77C; mimotope &#xB2E4;&#xB978; V3 mAbs &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; VH5 51 &#xD30C;&#xC0DD; Mabs&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC0AC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; epitope &#xC778;&#xC2DD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; mAbs &#xC911;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Ig &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBD09;&#xD22C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; epitopes&#xB97C; &#xC815;&#xC758;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xC911;&#xD654; &#xBCF5; &#xADFC;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xBC31;&#xC2E0; immunogen &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-V3 HIV-1 &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; VH5-51/VL &#xB78C;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El uso preferente de inmunoglobulina (Ig) los genes que codifican los anticuerpos (Acs) contra varios pat&#xF3;genos rara vez se observa y la naturaleza de su dominio es claro en el contexto de la recombinaci&#xF3;n de los genes de Ig estoc&#xE1;stico. La hip&#xF3;tesis de que el uso restringido de genes de Ig predetermina la especificidad del anticuerpo se prob&#xF3; en este estudio de 18 humanos anti-V3 Abs monoclonales (mAb) generados a partir de individuos no relacionados infectados con varios subtipos de VIH-1, todos los cuales preferentemente utilizados emparejamiento de la VH5 -51 y los genes VL lambda. El an&#xE1;lisis cristalogr&#xE1;fico de cinco VH5-51/VL lambda codificados Fab complejos con varios p&#xE9;ptidos V3 revel&#xF3; un com&#xFA;n tres dimensiones (3D) la forma de los sitios de uni&#xF3;n ant&#xED;geno-determinada principalmente por la complementariedad de la determinaci&#xF3;n de cuatro regiones (CDR) de la pesada (H) y ligeras (L) las cadenas: espec&#xED;ficamente, el H1, H2, L1 y L2 dominios. El CDR H3 dominio no contribuyen a la forma del bolsillo de uni&#xF3;n, ya que ten&#xED;a diferentes longitudes, secuencias y conformaciones para cada AcMo. La misma forma del sitio de uni&#xF3;n se confirm&#xF3; adem&#xE1;s por la conformaci&#xF3;n columna vertebral id&#xE9;ntica exhibida por V3 p&#xE9;ptidos en el complejo con Fab que plenamente adaptados a la uni&#xF3;n de bolsillo y los mismos residuos clave de contacto, principalmente la l&#xED;nea germinal-codificada en las cadenas pesada y ligera de cinco Fabs . Finalmente, los VH5-51 anti-V3 mAbs reconocen un ep&#xED;topo con una estructura id&#xE9;ntica 3D que se simula por una sola mimotopo reconocido por la mayor&#xED;a de los mAbs VH5-51-derivados, pero no por otros mAbs V3. Estos datos sugieren que la identificaci&#xF3;n de genes de Ig preferentemente utilizados por mAb neutralizantes puede definir ep&#xED;topes conservados en los sobres de virus diversos. Esta informaci&#xF3;n ser&#xE1; &#xFA;til para el dise&#xF1;o de vacunas que inducen inmun&#xF3;geno neutralizantes cruzados Abs.

Xunqing Jiang

Department of Biochemistry and Molecular Pharmacology

New York University School of Medicine

Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Xunqing Jiang

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New York University School of Medicine

Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Department of Biochemistry and Molecular Pharmacology