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Max-Delbrück Center for Molecular Medicine

&#x65F6;&#x7A7A;&#x7EC4;&#x7EC7; DNA &#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x4E0E; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x5939; pcna &#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x539F;&#x4F4D;&#x63D0;&#x53D6;&#x548C;&#x6F02;&#x767D;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; RPA34&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5F88;&#x5C11;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426;&#x5728;&#x7AD9;&#x70B9;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E0E;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x591A;&#x8F6E;&#x7684;&#x5188;&#x5D0E;&#x4ECD;&#x7136;&#x5173;&#x8054;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x7247;&#x6BB5;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x5206;&#x6790;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x65E9;&#x5230;&#x665A;&#x4E9B;&#x65F6;&#x5019;&#x53C8;&#x8FDE;&#x7ED3;&#x8F6C;&#x6362;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x6210; nucleoplasmic &#x6C60;&#x7684;&#x8FC5;&#x901F;&#x4F20;&#x64AD;&#x5B50;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x65B0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5730;&#x76D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7AD9;&#x70B9;&#x590D;&#x5236;&#x4E86; de novo &#x7EC4;&#x88C5;&#x5728;&#x65E9;&#x5148;&#x90A3;&#x4E9B;&#x9760;&#x8FD1;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x76F8;&#x90BB;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E00;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x591A;&#x7C73;&#x8BFA;&#x9AA8;&#x724C;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#x4E2D;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;

Dna &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x5939;&#x663E;&#x793A;&#x5C0F;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x5728;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F8;&#x90BB;&#x8D77;&#x6E90;&#x96C6;&#x7FA4;&#x5E8F;&#x8D2F; de novo &#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

The spatial and temporal organization of DNA replication was investigated in living cells with a green fluorescent protein fusion to the DNA polymerase clamp PCNA. In situ extractions and photobleaching experiments revealed that PCNA, unlike RPA34, shows little if any turnover at replication sites, suggesting that it remains associated with the replication machinery through multiple rounds of Okazaki fragment synthesis. Photobleaching analyses further showed that the transition from earlier to later replicons occurs by disassembly into a nucleoplasmic pool of rapidly diffusing subcomponents and reassembly at newly activated sites. The fact that these replication sites were de novo assembled in close proximity to earlier ones suggests that activation of neighboring origins may occur by a domino effect possibly involving local changes in chromatin structure and accessibility.

DNA polymerase clamp shows little turnover at established replication sites but sequential de novo assembly at adjacent origin clusters.

L&#39;organisation spatiale et temporelle de la r&eacute;plication de l&#39;ADN a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e dans des cellules vivantes avec une fusion de la prot&eacute;ine fluorescente verte &agrave; la borne de l&#39;ADN polym&eacute;rase PCNA. Extraction in situe et des exp&eacute;riences de photoblanchiment a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que le PCNA, contrairement &agrave; RPA34, montre peu si n&#39;importe quel chiffre d&#39;affaires sur les sites de r&eacute;plication, ce qui sugg&egrave;re qu&#39;il est toujours associ&eacute; avec la machinerie de r&eacute;plication par le biais de plusieurs s&eacute;ries d&#39;Okazaki fragmente la synth&egrave;se. Analyses de photoblanchiment autres ont montr&eacute; que le passage de r&eacute;plicons ant&eacute;rieures &agrave; plus tard a lieu par d&eacute;montage dans une piscine nucl&eacute;oplasmique de diffuser rapidement des sous-composants et remontage effectu&eacute;s par les sites nouvellement activ&eacute;es. Le fait que ces sites de r&eacute;plication &eacute;taient de novo assembl&eacute; &agrave; proximit&eacute; de pr&eacute;c&eacute;dents sugg&egrave;re que l&#39;activation des origines voisines peut-&ecirc;tre &ecirc;tre r&eacute;alis&eacute;s par un effet de domino, pouvant impliquer des variations locales de la structure de la chromatine et l&#39;accessibilit&eacute;.

L&#39;ADN polym&eacute;rase pince montre petit chiffre d&#39;affaires sur les sites de r&eacute;plication &eacute;tablies mais s&eacute;quentielle de novo Assembl&eacute;e &agrave; grappes d&#39;origine adjacentes.

Die r&auml;umliche und zeitliche Organisation der DNA-Replikation wurde in lebenden Zellen mit einem gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-Fusion auf die DNA-Polymerase-Clamp PCNA untersucht. In-situ-Extraktionen und Photobleaching Experimente ergaben, dass PCNA, im Gegensatz zu RPA34, wenig bis zeigt gar Umsatz bei Replikations-Sites, was darauf hindeutet, dass es mit der Replikation-Maschine durch mehrere Runden von Okazaki verbunden bleibt Synthese Fragment. Photobleichung Analysen zeigten weiter, dass der &Uuml;bergang von der fr&uuml;heren, sp&auml;ter Replicons durch zerlegen in einen nucleoplasmic Pool schnell zu einer Diffusion der Unterkomponenten und Remontage an neu aktivierten Standorten auftritt. Die Tatsache, dass diese Replikations-Sites de Novo montiert in unmittelbarer N&auml;he zum fr&uuml;heren schl&auml;gt die Aktivierung des benachbarten Urspr&uuml;nge kann durch einen Domino-Effekt m&ouml;glicherweise mit lokale &Auml;nderungen in der Chromatin Struktur und Erreichbarkeit auftreten.

DNA-Polymerase Klemme zeigt wenig Umsatz an etablierten Replikationsstandorten aber sequenzielle de Novo Assembly im angrenzenden Ursprungs-Clustern.

L&#39;organizzazione spaziale e temporale della replica del DNA &egrave; stato studiato in cellule viventi con una fusione di proteina fluorescente verde al morsetto PCNA polimerasi del DNA. Estrazioni in situ e photobleaching esperimenti hanno rivelato che PCNA, a differenza di RPA34, Mostra poco se qualsiasi fatturato presso siti replica, suggerendo che rimane associata con il meccanismo di replica attraverso pi&ugrave; cicli di Okazaki sintesi del frammento. Photobleaching analisi hanno dimostrato ulteriormente che si verifica la transizione da replicons precedenti a seguito di smontaggio in una piscina nucleoplasmic di diffondere rapidamente sottocomponenti e rimontaggio presso siti appena attivati. Il fatto che questi siti di replica sono stati de novo assemblato in prossimit&agrave; di quelle precedenti suggerisce che attivazione delle origini vicine possa verificarsi di un effetto domino comportanti modifiche locali nella struttura della cromatina e accessibilit&agrave;.

DNA polimerasi morsetto dimostra poco fatturato stabilito replica siti ma sequenziale de novo assieme al cluster di origine adiacenti.

&#x6642;&#x7A7A;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x878D;&#x5408;&#x306E; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7; PCNA &#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;In situ &#x62BD;&#x51FA;&#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13; PCNA RPA34 &#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x4EFB;&#x610F;&#x5CA1;&#x5D0E;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x96E2;&#x8077;&#x5408;&#x6210;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x5C11;&#x3057;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5F8C;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E; replicons &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x304C;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3067;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5E83;&#x307E;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x6838;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x89E3;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066; de novo &#x305D;&#x306E;&#x8FD1;&#x96A3;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CE;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Dna &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3067;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x8D77;&#x6E90;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB; de novo &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC870;&#xC9C1; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; PCNA&#xC5D0; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD4E8;&#xC804; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; photobleaching &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; PCNA, RPA34, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xC624;&#xCE74;&#xC790;&#xD0A4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB9E4;&#xCD9C;&#xC561; &#xD569;&#xC131; &#xC870;&#xAC01; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC791;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Photobleaching &#xBD84;&#xC11D; &#xCD94;&#xAC00; &#xB098;&#xC911;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804; replicons&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD658; &#xD558;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xB9AC;&#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD655;&#xC0B0;&#xC758; nucleoplasmic &#xD480;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC774;&#xC804; &#xAC83;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xB9BD; &#xC81C;&#xC548; &#xC774;&#xC6C3; &#xAE30;&#xC6D0;&#xC758; &#xADF8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB410;&#xB2E4; chromatin &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xAC8C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC635;&#xC158;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB85C;&#xCEEC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C4;&#xBBF8;&#xB178; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dna &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xC740; &#xD68C;&#xC804;&#xC728; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xCC28; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La organizaci&oacute;n espacial y temporal de la replicaci&oacute;n del ADN fue investigada en c&eacute;lulas vivas con una fusi&oacute;n de la prote&iacute;na verde fluorescente a la abrazadera de la ADN polimerasa PCNA. Extracciones in situ y photobleaching experimentos revelaron que PCNA, a diferencia de RPA34, muestra poco si cualquier volumen de ventas en sitios de replicaci&oacute;n, lo que sugiere que es asociado con la maquinaria de replicaci&oacute;n a trav&eacute;s de m&uacute;ltiples rondas de Okazaki fragmento s&iacute;ntesis. An&aacute;lisis de photobleaching adicional demostraron que la transici&oacute;n de replicones antes para m&aacute;s tarde se produce por el desmontaje en una piscina nucleoplasm&aacute;tica de difundir r&aacute;pidamente subcomponentes y ensamblado en sitios reci&eacute;n activados. El hecho de que estos sitios de replicaci&oacute;n de novo montado en proximidad cercana a anteriores sugiere que la activaci&oacute;n de or&iacute;genes vecinos puede ocurrir por un efecto domin&oacute; que posiblemente implica cambios locales en la estructura de la cromatina y la accesibilidad.

Abrazadera de la ADN polimerasa muestra poco volumen de negocios en sitios de replicaci&oacute;n establecido pero secuencial de novo Asamblea en racimos de origen adyacentes.

&#x5728; DNA &#x590D;&#x5236;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4E0D;&#x65AD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x843D;&#x540E;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5408;&#x6210;&#x9700;&#x8981;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x3001; &#x4E0D;&#x8FDE;&#x7EED;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x5188;&#x5D0E;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x968F;&#x540E;&#x52A0;&#x5165;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x539F;&#x4F4D;&#x8403;&#x53D6;&#x548C;&#x53CC;&#x57FA;&#x8272;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x6765;&#x6BD4;&#x8F83;&#x843D;&#x540E;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF1A; &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x5939;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F; (PCNA) &#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6211;&#x548C; Fen1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5B83;&#xFF0C;DNA &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5728;&#x590D;&#x5236;&#x7076; (RF)&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x548C; Fen1 &#x968F;&#x65F6;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;&#x52A0;&#x4E0A;&#x65F6;&#x95F4;&#x53E0;&#x52A0;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x900F;&#x9732;&#x5FEB;&#x901F;&#x4EA4;&#x6362;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x548C; Fen1 &#x5728;&#x5C04;&#x9891;&#x3001; &#x7A0B;&#x5E8F;&#x7B26;&#x5408; de novo &#x52A0;&#x8F7D;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5188;&#x5D0E;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6062;&#x590D;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F;&#x5927;&#x591A;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x90BB;&#x8FD1;&#x7684;&#x65B0;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x5C04;&#x9891;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; PCNA &#x5DE5;&#x7A0B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x7528;&#x4E8E;&#x591A;&#x4E2A;&#x5188;&#x5D0E;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5F0F;&#x5E73;&#x53F0;&#x3001; &#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x53EA;&#x77ED;&#x6682;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5173;&#x8054;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x68B0;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F;&#x5145;&#x5F53;&#x6682;&#x6001;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5F0F;&#x5E73;&#x53F0;&#x5188;&#x5D0E;&#x7247;&#x6BB5;&#x6210;&#x719F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

In DNA replication, the leading strand is synthesized continuously, but lagging strand synthesis requires the complex, discontinuous synthesis of Okazaki fragments, and their subsequent joining. We have used a combination of in situ extraction and dual color photobleaching to compare the dynamic properties of three proteins essential for lagging strand synthesis: the polymerase clamp proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and two proteins that bind to it, DNA Ligase I and Fen1. All three proteins are localized at replication foci (RF), but in contrast to PCNA, Ligase and Fen1 were readily extracted. Dual photobleaching combined with time overlays revealed a rapid exchange of Ligase and Fen1 at RF, which is consistent with de novo loading at every Okazaki fragment, while the slow recovery of PCNA mostly occurred at adjacent, newly assembled RF. These data indicate that PCNA works as a stationary loading platform that is reused for multiple Okazaki fragments, while PCNA binding proteins only transiently associate and are not stable components of the replication machinery.

PCNA acts as a stationary loading platform for transiently interacting Okazaki fragment maturation proteins.

Dans la r&eacute;plication de l&#39;ADN, le premier brin est synth&eacute;tis&eacute; en permanence, mais en retard la synth&egrave;se du brin n&eacute;cessite la synth&egrave;se complexe, discontinue des fragments d&#39;Okazaki, et leur adh&eacute;sion ult&eacute;rieure. Nous avons utilis&eacute; une combinaison d&#39;extraction in situe et le photoblanchiment bicolore pour comparer les propri&eacute;t&eacute;s dynamiques des trois prot&eacute;ines essentielles pour la synth&egrave;se du brin &agrave; la tra&icirc;ne : pince prolif&egrave;rent polym&eacute;rase cellulaire antig&egrave;ne nucl&eacute;aire (PCNA) et deux prot&eacute;ines qui se lient &agrave; lui, DNA Ligase I et Fen1. Les trois prot&eacute;ines sont localis&eacute;es &agrave; des foyers de r&eacute;plique (RF), mais contrairement au PCNA, Ligase et Fen1 ont &eacute;t&eacute; facilement extraites. Photoblanchiment double combin&eacute; avec des superpositions de temps a r&eacute;v&eacute;l&eacute; un &eacute;change rapide de Ligase et Fen1 au RF, qui est coh&eacute;rente avec un chargement de novo &agrave; chaque fragment d&#39;Okazaki, tandis que la lente reprise de PCNA est survenu principalement RF adjacent, nouvellement assembl&eacute;. Ces donn&eacute;es indiquent que le PCNA fonctionne comme une plate-forme de chargement fixe qui est r&eacute;utilis&eacute;e pour plusieurs fragments d&#39;Okazaki, PCNA prot&eacute;ines liantes seulement transitoirement associ&eacute; et ne sont pas des composants stables de la machinerie de r&eacute;plication.

PCNA agit comme une plate-forme de chargement fixe permettant d&#39;interagir de fa&ccedil;on transitoire les prot&eacute;ines de la maturation de fragment Okazaki.

Bei der DNA-Replikation der f&uuml;hrende Strang wird kontinuierlich synthetisiert, aber hinterher Strang Synthese erfordert die komplexe, diskontinuierliche Synthese von Okazaki-Fragmenten und ihrem sp&auml;teren Beitritt. Wir haben eine Kombination von in-situ-Extraktion und dual Farbe Photobleaching verwendet, um die dynamischen Eigenschaften der drei Proteine notwendig f&uuml;r r&uuml;ckst&auml;ndige Strang Synthese zu vergleichen: die Polymerase Klemme wuchernden Zelle Nukle&auml;res Antigen (PCNA) und zwei Proteine, die daran, DNA-Ligase I und Fen1 gebunden. Alle drei Proteine sind bei Replikation Herde (RF) lokalisiert, aber im Gegensatz zu PCNA, Ligase und Fen1 wurden leicht extrahiert. Dual Photobleaching kombiniert mit Zeit-Overlays ergab einen raschen Austausch von Ligase und Fen1 auf RF, die de-Novo-lade am jedes Okazaki-Fragment, vereinbar ist, w&auml;hrend die langsame Erholung der PCNA meist bei angrenzenden, neu zusammengestellten RF aufgetreten ist. Diese Daten zeigen, dass PCNA funktioniert als eine station&auml;re laden-Plattform, die f&uuml;r mehrere Okazaki-Fragmente wieder verwendet wird, w&auml;hrend PCNA bindenden Proteinen nur vor&uuml;bergehend zuordnen und sind nicht stabil die Replikation-Maschinen-Komponenten.

PCNA fungiert als eine station&auml;re Ladefl&auml;che f&uuml;r die vor&uuml;bergehend Interaktion Okazaki Fragment Reifung Proteine.

Nella replicazione del DNA, il filone principale &egrave; sintetizzato continuamente, ma in ritardo strand sintesi richiede la sintesi complessa, discontinua di frammenti di Okazaki, e la loro successiva adesione. Abbiamo utilizzato una combinazione di estrazione in situ e doppio colore photobleaching per confrontare le propriet&agrave; dinamiche delle tre proteine essenziali per la sintesi del filamento in ritardo di sviluppo: il proliferare di morsetto della polimerasi della cellula antigene nucleare (PCNA) e due proteine che si legano ad esso, ligasi del DNA I e Fen1. Tutte e tre le proteine sono localizzate a fuochi della replica (RF), ma in contrasto con PCNA, ligasi e Fen1 sono stati prontamente estratti. Dual photobleaching combinato con sovrapposizioni di tempo ha rivelato un rapido scambio di ligasi e Fen1 a RF, che &egrave; coerente con de novo caricamento in ogni frammento di Okazaki, mentre il lento recupero di PCNA principalmente si &egrave; verificato a RF adiacente, appena assemblato. Questi dati indicano che PCNA funziona come una piattaforma di carico stazionario che viene riutilizzata per molteplici frammenti di Okazaki, mentre PCNA associare proteine di legame solo transitoriamente e non sono componenti stabili del macchinario della replica.

PCNA agisce come una piattaforma di carico stazionario per interagire transitoriamente proteine maturazione della frammento di Okazaki.

DNA &#x8907;&#x88FD;&#x3001;&#x4E00;&#x6D41;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3092;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0;&#x9396;&#x5408;&#x6210;&#x5CA1;&#x5D0E;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x4E0D;&#x9023;&#x7D9A;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0;&#x9396;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A; 3 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x73FE;&#x5834;&#x62BD;&#x51FA;&#x6CD5;&#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x8272;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;: &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x5897;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x6838;&#x6297;&#x539F; (PCNA) &#x304A;&#x3088;&#x3073; 2 &#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;DNA &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3057;&#x3001;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066; Fen1 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5DE3; (RF) &#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066; Fen1 PCNA &#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6642;&#x9593;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0; PCNA &#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F; RF &#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x9593;&#x306F; de novo &#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x5CA1;&#x5D0E;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066; Fen1 RF &#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x793A;&#x3059; PCNA &#x8907;&#x6570;&#x5CA1;&#x5D0E;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5B9A;&#x5E38;&#x8377;&#x91CD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;, PCNA &#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x307F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

PCNA &#x884C;&#x70BA;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x5B9A;&#x5E38;&#x8377;&#x91CD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5CA1;&#x5D0E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x6210;&#x719F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3002;

DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC120;&#xB3C4; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xCE74;&#xC790;&#xD0A4; &#xC870;&#xAC01;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xD569;&#xB958;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;, &#xBD88;&#xC5F0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xD569;&#xC131; &#xD544;&#xC694; &#xAC00;&#xB2E5; &#xD569;&#xC131; &#xBCF4; &#xC628; &#xC7AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC138; &#xAC00;&#xB2E5; &#xD569;&#xC131; &#xBCF4; &#xC628;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xCEEC;&#xB7EC; photobleaching &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;: &#xD6A8;&#xC18C; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD575; &#xD56D; &#xC6D0; (PCNA) &#xBC0F; &#xB450; &#xB098; &#xD558; &#xACE0; fen1&#xC740; DNA &#xB9AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC81C; foci (RF)&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; PCNA, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB9AC;&#xAC00; Fen1 &#xC27D;&#xAC8C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB4C0;&#xC5BC; photobleaching &#xC2DC;&#xAC04; &#xC624;&#xBC84;&#xB808;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; PCNA&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xD68C;&#xBCF5; &#xC778;&#xC811;, &#xC0C8;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD; &#xB41C; RF&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC788;&#xB294; &#xC624;&#xCE74;&#xC790;&#xD0A4; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xB85C;&#xB4DC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xAC00; rf, fen1&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xAD50;&#xD658;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; PCNA &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC624;&#xCE74;&#xC790;&#xD0A4; &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xACE0;&#xC815; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;, PCNA &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB9CC; transiently &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xACE0;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PCNA &#xC5ED;&#xD560; transiently &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xACE0;&#xC815; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC624;&#xCE74;&#xC790;&#xD0A4; &#xC870;&#xAC01; &#xC131;&#xC219; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

En la replicaci&oacute;n del ADN, la cadena principal se sintetiza continuamente, pero quedando filamento s&iacute;ntesis requiere la s&iacute;ntesis discontinua, compleja de fragmentos de Okazaki, y su uni&oacute;n posterior. Hemos utilizado una combinaci&oacute;n de extracci&oacute;n in situ y bicolor photobleaching para comparar las propiedades din&aacute;micas de tres prote&iacute;nas esenciales para la s&iacute;ntesis del filamento del revestimiento: la abrazadera de la polimerasa proliferaci&oacute;n celular ant&iacute;geno nuclear (PCNA) y dos prote&iacute;nas que se unen a &eacute;l, ADN ligasa I y Fen1. Todos tres prote&iacute;nas se localizan en focos de replicaci&oacute;n (RF), pero a diferencia de PCNA, ligasa y Fen1 f&aacute;cilmente se extrajeron. Dual photobleaching combinado con superposiciones de tiempo revel&oacute; un intercambio r&aacute;pido de ligasa y Fen1 en RF, que concuerda con la de carga de novo en cada fragmento de Okazaki, mientras que la lenta recuperaci&oacute;n de PCNA ocurrieron principalmente en RF adyacente, reci&eacute;n montado. Estos datos indican que PCNA funciona como una plataforma de carga estacionaria que se reutiliza para m&uacute;ltiples fragmentos de Okazaki, mientras PCNA prote&iacute;nas de Uni&oacute;n s&oacute;lo transitorio asociado y no son estables componentes de la maquinaria de replicaci&oacute;n.

PCNA act&uacute;a como una plataforma de carga estacionaria para interactuar transitoriamente prote&iacute;nas de maduraci&oacute;n de fragmento de Okazaki.

SorLA &#x5DF2;&#x88AB;&#x516C;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6392;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x89C4;&#x5B9A;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (APP) &#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E3A;&#x6563;&#x53D1;&#x6027;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356; sorLA &#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9; sorLA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4FDD;&#x7559;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E3A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x8F66;&#x53A2;/&#x8DE8;-&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x524D;&#x4F53;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x5E38;&#x89C4;&#x5904;&#x7406;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C; sorLA &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x90FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E0E; GGA &#x548C; PACS-1&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E0E;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7F51;&#x7EDC;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;SorLA &#x56DE;&#x6536;&#x8F66;&#x53A2;&#x6216;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x5F02;&#x5E38;&#x9488;&#x5BF9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6545;&#x969C; APP &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x4E0D;&#x5E73;&#x8861;&#x4E2D;&#x975E; amyloidogenic &#x548C; amyloidogenic &#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A;&#x6539;&#x53D8;&#x8DEF;&#x7531;&#x7684; sorLA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837; beta &#x80BD;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

SorLA/LR11&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x9002;&#x914D;&#x5668; GGA &#x548C; PACS 1 &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;

SorLA has been recognized as a novel sorting receptor that regulates trafficking and processing of the amyloid precursor protein (APP) and that represents a significant risk factor for sporadic Alzheimer disease. Here, we investigated the cellular mechanisms that control intracellular trafficking of sorLA and their relevance for APP processing. We demonstrate that sorLA acts as a retention factor for APP in trans-Golgi compartments/trans-Golgi network, preventing release of the precursor into regular processing pathways. Proper localization and activity of sorLA are dependent on functional interaction with GGA and PACS-1, adaptor proteins involved in protein transport to and from the trans-Golgi network. Aberrant targeting of sorLA to the recycling compartment or the plasma membrane causes faulty APP trafficking and imbalance in non-amyloidogenic and amyloidogenic processing fates. Thus, our findings identified altered routing of sorLA as a major cellular mechanism contributing to abnormal APP processing and enhanced amyloid beta-peptide formation.

SorLA/LR11 regulates processing of amyloid precursor protein via interaction with adaptors GGA and PACS-1.

SorLA a &eacute;t&eacute; reconnu comme un roman, tri des r&eacute;cepteurs qui r&eacute;gule le trafic et la transformation de la prot&eacute;ine pr&eacute;curseur amylo&iuml;de (APP) et qui repr&eacute;sente un facteur de risque significatif pour la maladie d&#39;Alzheimer sporadique. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; les m&eacute;canismes cellulaires qui contr&ocirc;lent le trafic intracellulaire de sorLA et leur pertinence pour le traitement de l&#39;APP. Nous d&eacute;montrons que sorLA agit comme un facteur de r&eacute;tention pour l&#39;APP dans le r&eacute;seau de compartiments/trans-Golgi trans-Golgi, emp&ecirc;chant la lib&eacute;ration du pr&eacute;curseur vers des voies de traitement r&eacute;gulier. Bonne localisation et l&#39;activit&eacute; des sorLA d&eacute;pendent de l&#39;interaction fonctionnelle avec adaptateur prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans le transport des prot&eacute;ines vers et &agrave; partir du r&eacute;seau trans-Golgi, GGA et PACS-1. Ciblage aberrant de sorLA pour le compartiment de recyclage ou de la membrane plasmique provoque d&eacute;fectueux APP traite et d&eacute;s&eacute;quilibre non-amylo&iuml;dog&egrave;ne et amylo&iuml;dog&egrave;ne destins de traitement. Ainsi, nos r&eacute;sultats identifi&eacute;s alt&eacute;r&eacute; routage de sorLA comme un m&eacute;canisme cellulaire majeur contribuant au traitement anormal des APP et la formation de b&ecirc;ta-peptides amylo&iuml;des am&eacute;lior&eacute;e.

SorLA/LR11 r&eacute;git le traitement de la prot&eacute;ine pr&eacute;curseur amylo&iuml;de via l&#39;interaction avec les adaptateurs GGA et PACS-1.

SorLA wurde erkannt als Roman sortieren Rezeptor reguliert, die Handel und Verarbeitung von das Amyloid Vorl&auml;uferprotein (APP) und einen erheblichen Risikofaktor f&uuml;r sporadische Alzheimer-Krankheit darstellt. Hier untersuchten wir die zellul&auml;ren Mechanismen, die kontrollieren, intrazellul&auml;re Menschenhandel SorLA und ihre Relevanz f&uuml;r die APP-Verarbeitung. Wir zeigen, dass SorLA als ein Abminderungsfaktor f&uuml;r APP im Trans-Golgi-F&auml;cher/Trans-Golgi-Netzwerk fungiert Version der Vorstufe in regul&auml;ren Verarbeitung Wege zu verhindern. Korrekte Lokalisierung und Aktivit&auml;t von SorLA sind funktionale Interaktion mit GGA und PACS-1, Adapter-Proteine Proteintransport von und zu den Trans-Golgi-Netzwerk abh&auml;ngig. Aberrant Ausrichtung der SorLA die Wiederverwertung Fach oder der Plasmamembran verursacht fehlerhafte APP Drogenhandel und Ungleichgewicht in nicht-Amyloidogenic und Amyloidogenic Verarbeitung Schicksale. So ver&auml;ndert unsere Erkenntnisse identifiziert, routing von SorLA als wichtige zellul&auml;re Mechanismus zur anormalen APP-Verarbeitung und verbesserte Amyloid-Beta-Peptid-Bildung.

SorLA/LR11 regelt die Verarbeitung von Amyloid-Vorl&auml;uferprotein &uuml;ber Interaktion mit entsprechenden Adaptern GGA und PACS-1.

SorLA &egrave; stato riconosciuto come un romanzo ordinamento del recettore che regola il traffico e l&#39;elaborazione della proteina precursore dell&#39;amiloide (APP) e che rappresenta un significativo fattore di rischio per la malattia di Alzheimer sporadica. Qui, abbiamo studiato i meccanismi cellulari che controllano il traffico intracellulare di sorLA e la loro rilevanza per l&#39;elaborazione di APP. Dimostriamo che sorLA agisce come fattore di ritenzione per APP in rete compartimenti/trans-Golgi trans-Golgi, impedendo il rilascio del precursore in percorsi di elaborazione regolare. Corretta localizzazione e l&#39;attivit&agrave; di sorLA dipendono l&#39;interazione funzionale con GGA e PACS-1, adattatore proteine coinvolte nel trasporto della proteina da e verso la rete trans-Golgi. Targeting aberrante di sorLA per lo scomparto di riciclaggio o la membrana plasmatica provoca traffico APP difettoso e lo squilibrio non amiloidogenica e amiloidogeniche elaborazione destini. Cos&igrave;, i nostri risultati identificati alterato routing di sorLA come un importante meccanismo cellulare contribuendo alla trasformazione anormale di APP e formazione avanzata del peptide beta amiloide.

SorLA/LR11 regola l&#39;elaborazione della proteina precursore dell&#39;amiloide tramite interazione con adattatori GGA e PACS-1.

SorLA &#x306F;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;APP&#xFF09; &#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5371;&#x967A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x9078;&#x5225;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;sorLA &#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x5236;&#x5FA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; sorLA &#x4FDD;&#x6301;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x70BA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x51E6;&#x7406;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068; sorLA &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B; GGA &#x3068; PACS 1 &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SorLA &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8840;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x5316;&#x3001;&#x7570;&#x5E38;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x969C;&#x5BB3;&#x304C;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x4E0D;&#x5747;&#x8861;&#x975E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8B58;&#x5225; sorLA &#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &beta; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;

SorLA/LR11 &#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; GGA &#x3068; PACS 1 &#x306E;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SorLA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804; &#xAD6C;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;)&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; Alzheimer &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC704;&#xD5D8; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC815;&#xB82C; &#xC18C;&#xC124;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC815;&#xC744; &#xBC1B;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; sorLA &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC77C;&#xBC18; &#xCC98;&#xB9AC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC804;&#xC870;&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xADF8; sorLA &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xAD6C;&#xD68D;/&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; Sorla&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; GGA &#xBC0F; PACS 1 &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xC1A1; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44; amyloidogenic amyloidogenic &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; APP &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xBD88;&#xADE0;&#xD615;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC774; &#xB098; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; Sorla&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; Sorla&#xC758; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xB77C;&#xC6B0;&#xD305; &#xBCC0;&#xACBD;.

SorLA/LR11 &#xADDC;&#xC81C; GGA &#xBC0F; PACS 1 &#xC5B4;&#xB311;&#xD130;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD55C;&#xB2E4;.

SorLA ha sido reconocido como una novela clasificaci&oacute;n del receptor que regula el tr&aacute;fico y procesamiento de la prote&iacute;na precursora del amiloide (APP) y que representa un factor de riesgo significativo para la enfermedad de Alzheimer espor&aacute;dica. Aqu&iacute;, hemos investigado los mecanismos celulares que controlan el tr&aacute;fico intracelular de sorLA y su importancia para el proceso de aplicaci&oacute;n. Demostramos que sorla act&uacute;a como un factor de retenci&oacute;n para aplicaci&oacute;n en red de trans-Golgi compartimentos/trans-Golgi, evitando la emisi&oacute;n del precursor en v&iacute;as de tratamiento regular. Localizaci&oacute;n adecuada y la actividad de sorLA son dependientes en interacci&oacute;n funcional con GGA y PACS-1, adaptador de prote&iacute;nas implicadas en el transporte de la prote&iacute;na y de la red de trans-Golgi. Orientaci&oacute;n aberrante de sorLA para el compartimiento de reciclaje o la membrana plasm&aacute;tica causa trata de aplicaci&oacute;n defectuosa y desequilibrio en no-amyloidogenic y amyloidogenic sinos de procesamiento. As&iacute;, nuestros resultados identificados alteraci&oacute;n enrutamiento de sorLA como un importante mecanismo celular contribuyendo al procesamiento anormal de la aplicaci&oacute;n y formaci&oacute;n de p&eacute;ptido beta amiloide mejorada.

SorLA/LR11 regula el procesamiento de la prote&iacute;na precursora del amiloide mediante interacci&oacute;n con adaptadores GGA y PACS-1.

&#x4E0E; Sortilin &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E; A &#x578B;&#x91CD;&#x590D; &#xFF08;SORLA&#xFF09; &#x662F;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5B83;&#x635F;&#x5BB3;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; (APP) &#x5411;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; (s) &#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; &beta; &#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x80BD;&#x548C;&#x5DEE;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x75C5; (AD) &#x60A3;&#x8005;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4EF7; Sorla &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x9677;&#x5BF9;&#x5927;&#x8111;&#x89E3;&#x5256;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x3002;&#x6839;&#x636E; APP &#x4EE3;&#x8C22;&#x4E3A; SORLA &#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x589E;&#x52A0; amyloidogenic &#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; APP &#x52A0;&#x5DE5;&#x548C;&#x52A0;&#x91CD;&#x7684;&#x6591;&#x5757;&#x6C89;&#x79EF;&#x65F6;&#x5F15;&#x5165; PDAPP &#x8868;&#x8FBE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5E94;&#x7528;&#x5947;&#x602A;&#xFF0C;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8428;&#x666E;&#x4E0E;&#x589E;&#x5F3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x8428;&#x666E;&#x795E;&#x7ECF;&#x8425;&#x517B;&#x529F;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F53;&#x5185;&#x652F;&#x6301;&#x548C;&#x9020;&#x6210;&#x7684; pro &#x53D1;&#x73B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x53D7;&#x4F53;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x6587;&#x4EF6; SORLA &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x6591;&#x5757;&#x8D1F;&#x8377;&#x63A7;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x589E;&#x52A0;&#x4E00;&#x4E9B; AD &#x60A3;&#x8005;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;

&#x4E0E; Sortilin &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E; A &#x578B;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217; (SORLA) &#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x6DC0;&#x7C89;&#x6837;&#x524D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x523A;&#x6FC0; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x795E;&#x7ECF;&#x518D;&#x751F;&#x3002;

Sortilin-related receptor with A-type repeats (SORLA) is a sorting receptor that impairs processing of amyloid precursor protein (APP) to soluble (s) APP and to the amyloid beta-peptide in cultured neurons and is poorly expressed in patients with Alzheimer disease (AD). Here, we evaluated the consequences of Sorla gene defects on brain anatomy and function using mouse models of receptor deficiency. In line with a protective role for SORLA in APP metabolism, lack of the receptor results in increased amyloidogenic processing of endogenous APP and in aggravated plaque deposition when introduced into PDAPP mice expressing mutant human APP. Surprisingly, increased levels of sAPP caused by receptor deficiency correlate with pro-found stimulation of neuronal ERK signaling and with enhanced neurogenesis, providing in vivo support for neurotrophic functions of sAPP. Our data document a role for SORLA not only in control of plaque burden but also in APP-dependent neuronal signaling and suggest a molecular explanation for increased neurogenesis observed in some AD patients.

Sortilin-related receptor with A-type repeats (SORLA) affects the amyloid precursor protein-dependent stimulation of ERK signaling and adult neurogenesis.

R&eacute;cepteur SORTILINE li&eacute;s avec les r&eacute;p&eacute;titions de type A (SORLA) est un r&eacute;cepteur de tri qui alt&egrave;re la transformation de la prot&eacute;ine pr&eacute;curseur amylo&iuml;de (APP) soluble (s) APP et les b&ecirc;ta-peptides amylo&iuml;des dans les neurones en culture et est mal exprim&eacute; chez les patients atteints de maladie d&#39;Alzheimer (ma). Ici, nous avons &eacute;valu&eacute; les cons&eacute;quences des vices g&egrave;ne Sorla sur l&#39;anatomie du cerveau et de la fonction &agrave; l&#39;aide de mod&egrave;les murins de la carence du r&eacute;cepteur. Conform&eacute;ment &agrave; un r&ocirc;le protecteur pour SORLA dans le m&eacute;tabolisme de l&#39;APP, absence du r&eacute;cepteur traduit amylo&iuml;dog&egrave;ne accru traitement de $ $ etAPP endog&egrave;ne et les d&eacute;p&ocirc;ts de plaque aggrav&eacute;e lorsque introduit dans des souris PDAPP exprimant mutant humaine env. &eacute;tonnamment, des niveaux accrus de sAPP caus&eacute;e par les r&eacute;cepteurs carence en corr&eacute;lation avec les pro-trouv&eacute; une stimulation de la signalisation neuronale de ERK et avec am&eacute;lior&eacute; la neurogen&egrave;se, soutenant in vivo des fonctions neurotrophiques du PRAS. Notre document de donn&eacute;es un r&ocirc;le pour SORLA non seulement dans le contr&ocirc;le de la charge de la plaque, mais aussi dans l&#39;APP d&eacute;pendant neuronal de signalisation et sugg&egrave;rent une explication mol&eacute;culaire de la neurogen&egrave;se accrue observ&eacute;e chez certains patients atteints de ma.

R&eacute;cepteur SORTILINE li&eacute;s avec les r&eacute;p&eacute;titions de type A (SORLA) influe sur la stimulation de d&eacute;pendant de la prot&eacute;ine pr&eacute;curseur amylo&iuml;de de la neurogen&egrave;se adulte et signalisation de ERK.

Sortilin-bezogene Rezeptor mit Typ A Wiederholungen (SORLA) ist ein Sortier-Rezeptor, der Verarbeitung von Amyloid Vorl&auml;uferprotein (APP) l&ouml;slich (s) APP und das Amyloid-Beta-Peptid in kultivierten Neuronen beeintr&auml;chtigt und ist bei Patienten mit Alzheimer-Krankheit (AD) schlecht ausgedr&uuml;ckt. Hier, werteten wir die Folgen der Sorla gen-Defekte auf Gehirn-Anatomie und Funktion mit Mausmodelle von Rezeptor-Mangel. Entsprechend eine sch&uuml;tzende Rolle f&uuml;r SORLA im APP-Stoffwechsel f&uuml;hrt Mangel des Rezeptors in erh&ouml;hter Amyloidogenic Verarbeitung von endogenen APP und versch&auml;rft Plakette Absetzung als in PDAPP M&auml;use Ausdr&uuml;cken Mutant menschlichen ca. &uuml;berraschend, umfassendere sAPP durch Rezeptor-Mangel korrelieren mit Pro-gefunden Stimulation neuronaler ERK signalisieren verursacht und mit verst&auml;rkten Neurogenese, die in-vivo Unterst&uuml;tzung f&uuml;r Neurotrophic Funktionen der sAPP eingef&uuml;hrt. Unsere Datendokument eine Rolle f&uuml;r SORLA nicht nur Kontrolle &uuml;ber Plakette Belastung, sondern auch in APP-abh&auml;ngigen neuronale Signalisierung und schlagen eine molekulare Erkl&auml;rung f&uuml;r erh&ouml;hte Neurogenese in einigen AD-Patienten beobachtet.

Sortilin-bezogenen Rezeptor mit Typ A Wiederholungen (SORLA) betrifft die Amyloid Vorl&auml;ufer Protein-abh&auml;ngige Stimulation der ERK Signalisierung und adulten Neurogenese.

Sortilin-related receptor con ripetizioni di tipo (SORLA) &egrave; un recettore di ordinamento che altera l&#39;elaborazione della proteina precursore dell&#39;amiloide (APP) solubile (s) APP e il peptide beta amiloide nei neuroni coltivati e scarsamente &egrave; espressa nei pazienti con malattia di Alzheimer (AD). Qui, abbiamo valutato le conseguenze dei difetti del gene Sorla sull&#39;anatomia del cervello e la funzione usando modelli murini di deficit del recettore. In linea con un ruolo protettivo per SORLA nel metabolismo APP, mancanza del recettore risultati in amiloidogeniche maggiore elaborazione di APP endogeno e nella deposizione targa aggravata quando introdotto in topi PDAPP esprimendo mutante umano APPLIC sorprendentemente, aumento dei livelli di sAPP causata da deficit del recettore in correlazione con pro-trovato stimolazione di un neurone ERK segnalazione e con migliorata neurogenesi, fornendo supporto in vivo per le funzioni di neurotrophic di sAPP. Il nostro documento di dati un ruolo non solo nel controllo dell&#39;onere di placca, ma anche in APP-dipendente neuronale SORLA di segnalazione e suggeriscono una spiegazione molecolare per aumentata della neurogenesi osservata in alcuni pazienti AD.

Sortilin-related receptor con ripetizioni di tipo (SORLA) colpisce la stimolazione dipendente dalla proteina precursore dell&#39;amiloide di neurogenesi adulta e segnalazione ERK.

&#x30BD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; A &#x578B;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; (SORLA) &#x3067;&#x306F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;APP&#xFF09; &#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; (s) &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x3068;&#x57F9;&#x990A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &beta; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5; &#xFF08;AD&#xFF09; &#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8133;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x5B66;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6B20;&#x4E4F;&#x75C7;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x95A2;&#x6570;&#x306E; Sorla &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x4FDD;&#x8B77;&#x5F79;&#x5272; SORLA &#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x7D04;&#x610F;&#x5916;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6B20;&#x4E4F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C; ERK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x65B0;&#x751F;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x6804;&#x990A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x5316;&#x5909;&#x7570; PDAPP &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x6DF1;&#x523B;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x6C88;&#x7740;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F53;&#x793E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30C9;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x8CA0;&#x62C5;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x307F;&#x306A;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092; SORLA &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E00;&#x90E8;&#x306E; AD &#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x306F;&#x3001;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; A &#x578B;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; (SORLA) &#x3067; ERK &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x6210;&#x4EBA;&#x795E;&#x7D4C;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

A &#xD615; &#xBC18;&#xBCF5; (SORLA)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; Sortilin &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804; &#xAD6C;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (APP) &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; (&#xB4E4;) &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBC0F; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544; &#xBC00; &#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; Alzheimer &#xC9C8;&#xBCD1; (&#xAD11;&#xACE0;)&#xB97C; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xC815;&#xB82C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xB1CC; &#xD574;&#xBD80;&#xD559; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; Sorla &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; SORLA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xCDB0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xACB0;&#xACFC; &#xC99D;&#xAC00; amyloidogenic &#xB0B4; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC545;&#xD654; &#xD328; &#xC99D; &#xCC29; &#xB54C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; APP. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBD80;&#xB974; &#xC168;&#xC5B4;&#xC694; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; ERK &#xC2E0;&#xD638; &#xC790;&#xADF9; &#xD504;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACB0;&#xD54D; &#xC0C1;&#xAD00;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0;&#xC640; &#xAC15;&#xD654; &#xC131;&#xCCB4;, &#xBD80;&#xB974; &#xC168;&#xC758; &#x79D1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; PDAPP &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBB38;&#xC11C; SORLA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC560;&#xD50C; &#xB9AC; &#xCF00;&#xC774; &#xC158; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC77C;&#xBD80; &#xAD11;&#xACE0; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC131;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC124;&#xBA85; &#xC81C;&#xC548;.

A &#xD615; &#xBC18;&#xBCF5; (SORLA)&#xC5D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Sortilin &#xAD00;&#xB828; ERK &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; &#xC131;&#xCCB4;&#xC758; &#xB179;&#xB9D0; &#xCCB4; &#xC804;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC885;&#xC18D; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Receptor de sortilina relacionadas con repeticiones de tipo (SORLA) es un receptor de clasificaci&oacute;n que deteriora el procesamiento de la prote&iacute;na precursora del amiloide (APP) soluble (s) de la aplicaci&oacute;n y el p&eacute;ptido beta amiloide en las neuronas cultivadas y mal se expresa en pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA). Aqu&iacute;, se evaluaron las consecuencias de defectos en genes Sorla en anatom&iacute;a del cerebro y la funci&oacute;n utilizando modelos de rat&oacute;n de deficiencia del receptor. En consonancia con un papel protector para SORLA en el metabolismo de la APP, falta del receptor resulta en amyloidogenic mayor procesamiento de aplicaci&oacute;n end&oacute;gena y en la deposici&oacute;n de la placa agravado cuando introducen en ratones PDAPP expresando a mutante humano aprox. sorprendentemente, los niveles crecientes de sAPP hab&iacute;a causada por correlativo de deficiencia del receptor con el est&iacute;mulo pro-encontr&oacute; de se&ntilde;alizaci&oacute;n de ERK neuronal y con realzadas neurog&eacute;nesis, apoyo en vivo neurotrophic funciones de sAPP. Nuestro documento de datos un papel para SORLA no s&oacute;lo en el control de carga de la placa, sino tambi&eacute;n en APP-neuronal dependiente de se&ntilde;alizaci&oacute;n y sugieren una explicaci&oacute;n molecular para la neurog&eacute;nesis aumentada observada en algunos pacientes con EA.

Receptor de sortilina relacionadas con repeticiones de tipo (SORLA) afecta a la estimulaci&oacute;n del dependiente de la prote&iacute;na precursora del amiloide de la neurog&eacute;nesis adulta y se&ntilde;alizaci&oacute;n de ERK.

&#x7CBE;&#x786E;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x7EF4;&#x6301;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8026;&#x5408;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x68B0;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x505C;&#x6EDE;&#x5728;&#x751F;&#x6D3B;&#x4E0E; aphidicolin &#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0D;&#x5927;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53C2;&#x4E0E; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x5355;&#x7EDE; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50; RPA34 &#x5728; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; DNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5F00;&#x4ECE;&#x590D;&#x5236;&#x7076;&#x4E0B; aphidicolin&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x845B; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528; uncouples &#x968F;&#x540E;&#x4F38;&#x957F;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4ECE; DNA &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5141;&#x8BB8;&#x7075;&#x6D3B;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x5E94;&#x5BF9;&#x6311;&#x6218;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2A;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x89E3;&#x8026;&#x590D;&#x5236;&#x673A;&#x68B0;&#xFF1A; &#x845B; DNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6CA1;&#x6709;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

The precise coordination of the different steps of DNA replication is critical for the maintenance of genome stability. We have probed the mechanisms coupling various components of the replication machinery and their response to polymerase stalling by inhibition of the DNA polymerases in living mammalian cells with aphidicolin. We observed little change in the behaviour of proteins involved in the initiation of DNA replication. In contrast, we detected a marked accumulation of the single stranded DNA binding factor RPA34 at sites of DNA replication. Finally, we demonstrate that proteins involved in the elongation step of DNA synthesis dissociate from replication foci in the presence of aphidicolin. Taken together, these data indicate that inhibition of processive DNA polymerases uncouples the initiation of DNA replication from subsequent elongation steps. We, therefore, propose that the replication machinery is made up of distinct functional sub-modules that allow a flexible and dynamic response to challenges during DNA replication.

Uncoupling the replication machinery: replication fork progression in the absence of processive DNA synthesis.

La coordination pr&eacute;cise des diff&eacute;rentes &eacute;tapes de la r&eacute;plication de l&#39;ADN est essentielle pour le maintien de la stabilit&eacute; du g&eacute;nome. Nous avons sond&eacute; les m&eacute;canismes de couplage des diverses composantes de la machinerie de r&eacute;plication et leur r&eacute;ponse &agrave; la polym&eacute;rase blocage par inhibition de l&#39;ADN polym&eacute;rases en cellules mammif&egrave;res vivants avec l&#39;aphidicoline. Nous avons constat&eacute; peu de changement dans le comportement des prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans l&#39;initiation de la r&eacute;plication de l&#39;ADN. En revanche, nous avons d&eacute;tect&eacute; une accumulation marqu&eacute;e de l&#39;unique brin ADN facteur obligatoire RPA34 sur les sites de r&eacute;plication de l&#39;ADN. Finalement, nous d&eacute;montrons que les prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans l&#39;&eacute;tape d&#39;&eacute;longation de la synth&egrave;se de l&#39;ADN d&eacute;solidariser foyers de r&eacute;plique en pr&eacute;sence de l&#39;aphidicoline. Pris ensemble, ces donn&eacute;es indiquent que l&#39;inhibition de l&#39;ADN polym&eacute;rase processive d&eacute;couple l&#39;initiation de la r&eacute;plication de l&#39;ADN des &eacute;tapes subs&eacute;quentes de l&#39;&eacute;longation. Nous proposons donc que la machinerie de r&eacute;plication est constitu&eacute;e de sous-modules de fonctionnels distincts qui permettent une r&eacute;ponse souple et dynamique aux d&eacute;fis au cours de la r&eacute;plication de l&#39;ADN.

D&eacute;couplage de la machinerie de r&eacute;plication : progression de fourche de r&eacute;plication en l&#39;absence de synth&egrave;se de l&#39;ADN processive.

Die pr&auml;zise Koordination der verschiedenen Schritte der DNA-Replikation ist entscheidend f&uuml;r die Aufrechterhaltung der Genomstabilit&auml;t. Wir haben die Mechanismen, die verschiedenen Komponenten der Replikation-Maschinen und ihre Reaktion auf Polymerase abw&uuml;rgen durch Hemmung der DNA-Polymerasen in lebenden S&auml;ugetier-Zellen mit Aphidicolin Kupplung sondiert. Wir beobachteten kaum Ver&auml;nderungen im Verhalten der Proteine die Initiation der DNA-Replikation beteiligt. Im Gegensatz dazu erkannt wir eine deutliche Ansammlung der angeschwemmte DNA-Bindung Faktor RPA34 an Standorten der DNA-Replikation. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass die Dehnung Schritt der DNA-Synthese-Proteine von Replikation Foki in Anwesenheit von Aphidicolin distanzieren. Zusammengenommen zeigen diese Daten, dass Hemmung der prozessualen DNA-Polymerasen die Initiation der DNA-Replikation von nachfolgenden Dehnung Schritte entkoppelt. Deshalb, schlagen wir, dass die Replikation-Maschinerie aus unterschiedlichen funktionalen Modulen besteht, die eine flexible und dynamische Antwort auf Herausforderungen w&auml;hrend der DNA-Replikation zu erm&ouml;glichen.

Abkopplung der Replikation-Maschinen: Replikation Gabel Fortschreiten in Ermangelung der prozessualen DNA-Synthese.

Il coordinamento preciso i diversi passaggi della replica del DNA &egrave; fondamentale per il mantenimento della stabilit&agrave; del genoma. Noi abbiamo sondato i meccanismi di accoppiamento dei vari componenti del macchinario della replica e la loro risposta alla polimerasi di stallo da inibizione della polimerasi di DNA in cellule di mammiferi viventi con aphidicolin. Abbiamo osservato il piccolo cambiamento nel comportamento delle proteine coinvolte nell&#39;avvio della replica del DNA. Al contrario, abbiamo rilevato un marcato accumulo del singolo incagliato DNA fattore RPA34 presso i siti di replicazione del DNA. Infine, ci dimostrano che le proteine coinvolte nella fase di allungamento della sintesi del DNA si dissociano dai fuochi della replica in presenza di aphidicolin. Presi insieme, questi dati indicano che l&#39;inibizione della DNA polimerasi processive disaccoppia l&#39;iniziazione della replica del DNA da passaggi successivi allungamento. Pertanto, proponiamo che il meccanismo di replica &egrave; costituito da distinti sottomoduli funzionali che consentono una risposta flessibile e dinamica alle sfide durante la replicazione del DNA.

Disgiungere il macchinario replica: progressione di forcella replica in assenza della sintesi del DNA processive.

DNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x8ABF;&#x6574;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &alpha; &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5931;&#x901F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7CBE;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x9396; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50; RPA34 DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; DNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5DE3;&#x304B;&#x3089;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x91CF;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x304B;&#x3089;&#x306E; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x958B;&#x59CB;&#x3089;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x4E2D;&#x306B;&#x8AB2;&#x984C;&#x3078;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x304B;&#x3064;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x304C;&#x6210;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x8131;&#x5171;&#x5F79;: &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6; DNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3002;

DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC870;&#xC815; &#xAC8C;&#xB188; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C; aphidicolin&#xC640; &#xC0DD;&#xD65C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xD3F4;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC88C;&#xCD08; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC694;&#xC18C; RPA34 DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xCD95;&#xC801; &#xAC10;&#xC9C0;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; aphidicolin&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xBCF5;&#xC81C; foci&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; processive DNA &#xD3F4;&#xC758; &#xC800;&#xD574; uncouples &#xD6C4;&#xC18D; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD558;&#xC704;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC81C;&#xC548;.

&#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xACC4;: processive DNA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD589;.

La coordinaci&oacute;n precisa de los diferentes pasos de la replicaci&oacute;n del ADN es fundamental para el mantenimiento de la estabilidad del genoma. Nos hemos sondeado a los mecanismos de acoplamiento de varios componentes de la maquinaria de replicaci&oacute;n y su respuesta al estancamiento por la inhibici&oacute;n de las polimerasas de la DNA en las c&eacute;lulas mam&iacute;feras vivas con aphidicolin de la polimerasa. Observamos cambios en el comportamiento de las prote&iacute;nas implicadas en la iniciaci&oacute;n de la replicaci&oacute;n del ADN. Por el contrario, detectamos una marcada acumulaci&oacute;n del trenzado ADN vinculante factor RPA34 en sitios de replicaci&oacute;n del ADN. Finalmente, demostramos que las prote&iacute;nas implicadas en la etapa de elongaci&oacute;n de la s&iacute;ntesis de ADN se disocian de focos de replicaci&oacute;n en presencia de aphidicolin. Tomados en conjunto, estos datos indican que la inhibici&oacute;n de procesual DNA polimerasas desacopla la iniciaci&oacute;n de la replicaci&oacute;n del ADN de pasos de alargamiento posterior. Por lo tanto, proponemos que la maquinaria de replicaci&oacute;n est&aacute; compuesta por diferentes subm&oacute;dulos funcionales que permiten una respuesta flexible y din&aacute;mica a desaf&iacute;os durante la replicaci&oacute;n del ADN.

Desacoplar la maquinaria de replicaci&oacute;n: progresi&oacute;n de horquilla de replicaci&oacute;n en ausencia de s&iacute;ntesis de ADN procesual.

Glycosylphosphatidylinositol (GPI)-&#x951A;&#x5B9A; NB1 &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53; (CD177) &#x4ECB;&#x7ECD; autoantigen &#x86CB;&#x767D;&#x9176; 3 &#xFF08;PR3&#xFF09; &#x5B50;&#x96C6;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x3002;PR3 ANCA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x8840;&#x7BA1;&#x708E;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; NB1 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x80DE;&#x5185;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7279;&#x70B9;&#x7684; NB1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x662F;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;PR3 ANCA &#x5BFC;&#x81F4;&#x8131;&#x9897;&#x7C92;&#x548C;&#x8D85;&#x751F;&#x4EA7; mNB1(pos)/PR3(high) &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; mNB1(neg)/PR3(low) &#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#xFF0C;&#x800C; MPO ANCA &#x548C; fmlp &#x4E0E;&#x9020;&#x6210;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x6C89;&#x6DC0; NB1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x8F7D; Mac-1 &#xFF08;CD11b/CD18&#xFF09; &#x8DE8;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684; MS/MS &#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x6240;&#x793A;&#x3002;NB1 &#x6C89;&#x6DC0;&#x662F;&#x5C11;&#x4E3A; CD11a &#x548C; CD11c&#x3002; NB1 &#x8868;&#x660E;&#x4E0E; CD11b &#x548C; CD11a &#x76F4;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x5206;&#x6790; (SPR) &#x4E3A;&#x63A2;&#x6D4B;&#x4E0D;&#x5230;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F53;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x88AB;&#x5217;&#x4E3A; heterodimeric &#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; CD11b/CD18 (Mac-1)-&#x575A;&#x6301;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316; NB1 &#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53; NB1&#x3001; CD11b&#x3001; CD18 &#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x6B64;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5185;&#x8102;&#x7B4F; NB1&#x3001; PR3 &#x548C; Mac-1&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x4E0E; CD11b &#x548C; CD18 &#x7684;&#x6700;&#x5F3A; NB1 &#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;NB1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#x523A;&#x6FC0;&#x89E6;&#x53D1; mNB1(pos)/mPR3(high)&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8131;&#x9897;&#x7C92;&#x548C;&#x8D85;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x51CF;&#x5C11; &beta; 2-&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x914D;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x5FFD;&#x7565;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x4F7F;&#x7528; CD11b.CD11b &#x5C01;&#x9501;&#x4E5F;&#x6291;&#x5236; PR3-ANCA &#x81F4;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB; PR3 ANCA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B; NB1-Mac-1 &#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x8865;&#x4F53; Mac-1 &#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7684; NB1 &#xFF08;CD177&#xFF09;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; PR3 ANCA &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

The glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored neutrophil-specific receptor NB1 (CD177) presents the autoantigen proteinase 3 (PR3) on the membrane of a neutrophil subset. PR3-ANCA-activated neutrophils participate in small-vessel vasculitis. Since NB1 lacks an intracellular domain, we characterized components of the NB1 signaling complex that are pivotal for neutrophil activation. PR3-ANCA resulted in degranulation and superoxide production in the mNB1(pos)/PR3(high) neutrophils, but not in the mNB1(neg)/PR3(low) subset, whereas MPO-ANCA and fMLP caused similar responses. The NB1 signaling complex that was precipitated from plasma membranes contained the transmembrane receptor Mac-1 (CD11b/CD18) as shown by MS/MS analysis and immunoblotting. NB1 co-precipitation was less for CD11a and not detectable for CD11c. NB1 showed direct protein-protein interactions with both CD11b and CD11a by surface plasmon resonance analysis (SPR). However, when these integrins were presented as heterodimeric transmembrane proteins on transfected cells, only CD11b/CD18 (Mac-1)-transfected cells adhered to immobilized NB1 protein. This adhesion was inhibited by mAb against NB1, CD11b, and CD18. NB1, PR3, and Mac-1 were located within lipid rafts. In addition, confocal microscopy showed the strongest NB1 co-localization with CD11b and CD18 on the neutrophil. Stimulation with NB1-activating mAb triggered degranulation and superoxide production in mNB1(pos)/mPR3(high) neutrophils, and this effect was reduced using blocking antibodies to CD11b. CD11b blockade also inhibited PR3-ANCA-induced neutrophil activation, even when Î²2-integrin ligand-dependent signals were omitted. We establish the pivotal role of the NB1-Mac-1 receptor interaction for PR3-ANCA-mediated neutrophil activation.

Complement receptor Mac-1 is an adaptor for NB1 (CD177)-mediated PR3-ANCA neutrophil activation.

Le glycosylphosphatidylinositol (GPI)-ancr&eacute; neutrophile sp&eacute;cifique r&eacute;cepteur NB1 (CD177) pr&eacute;sente l&#39;auto-antig&egrave;ne prot&eacute;inase 3 (PR3) sur la membrane d&#39;un sous-ensemble de neutrophil. Neutrophiles activ&eacute;s par PR3-ANCA participent &agrave; vascularite des petits vaisseaux. Car NB1 manque un domaine intracellulaire, nous avons caract&eacute;ris&eacute; les composantes de la NB1 signalisation complexes qui jouent un r&ocirc;le essentiel pour l&#39;activation du neutrophile. PR3-ANCA a entra&icirc;n&eacute; la production d&eacute;granulation et superoxyde dans les neutrophiles mNB1(pos)/PR3(high), mais pas dans le sous-ensemble de mNB1(neg)/PR3(low), alors que FTU-ANCA et fMLP a provoqu&eacute; des r&eacute;actions semblables. Le complexe de signalisation NB1 qui a &eacute;t&eacute; pr&eacute;cipit&eacute; par les membranes de plasma contenait le r&eacute;cepteur transmembranaire Mac-1 (CD11b/CD18) comme indiqu&eacute; par immunotransfert et analyse MS/MS. NB1 copr&eacute;cipitation &eacute;tait moins pour CD11a et non d&eacute;tectable pour CD11c. NB1 montr&eacute; des interactions entre prot&eacute;ines direct avec CD11a et CD11b par analyse de la r&eacute;sonance plasmonique de surface (SPR). Toutefois, lorsque ces int&eacute;grines &eacute;taient pr&eacute;sent&eacute;s comme des prot&eacute;ines transmembranaires h&eacute;t&eacute;rodim&eacute;rique sur cellules transfect&eacute;es, seul CD11b/CD18 (Mac-1)-les cellules transfect&eacute;es ont adh&eacute;r&eacute; &agrave; immobilis&eacute; NB1 prot&eacute;ine. Cette adh&eacute;rence est inhib&eacute;e par le mAb contre NB1 et CD11b, CD18. NB1, PR3 et Mac-1 sont trouvaient dans les radeaux lipidiques. En outre, la microscopie confocale a montr&eacute; la co-localisation NB1 plus forte et CD11b, CD18 sur les neutrophiles. Stimulation avec mAb NB1-activation d&eacute;clench&eacute;e production d&eacute;granulation et superoxyde dans les neutrophiles mNB1(pos)/mPR3(high), et cet effet a &eacute;t&eacute; r&eacute;duit en utilisant des anticorps bloquants CD11b. CD11b blocus inhib&eacute;e &eacute;galement induite par la PR3-ANCA neutrophiles activation, m&ecirc;me lorsque les signaux de &beta;2-int&eacute;grine ligand-d&eacute;pendants ont &eacute;t&eacute; omis. Nous &eacute;tablissons le r&ocirc;le pivot de l&#39;interaction de r&eacute;cepteur NB1-Mac-1 pour l&#39;activation du neutrophile PR3-ANCA-m&eacute;di&eacute;e.

R&eacute;cepteur du compl&eacute;ment Mac-1 est un adaptateur pour NB1 (CD177)-m&eacute;di&eacute;e par les neutrophile activation PR3-ANCA.

Die Glykosylphosphatidyl (GPI)-Neutrophilen-spezifischen Rezeptor NB1 verankert (CD177) pr&auml;sentiert das Autoantigen Proteinase 3 (PR3) auf der Membran einer neutrophil Teilmenge. PR3-ANCA aktivierte neutrophile beteiligen sich an Vaskulitis kleiner Gef&auml;&szlig;e. Da NB1 eine intrazellul&auml;re Dom&auml;ne fehlt, gekennzeichnet wir Komponenten der NB1 Signalisierung komplexe, die zentrale f&uuml;r neutrophil-Aktivierung sind. PR3-ANCA lieferte Degranulation und Superoxid-Produktion in der mNB1(pos)/PR3(high)-neutrophile, aber nicht in der mNB1(neg)/PR3(low)-Teilmenge w&auml;hrend MPO-ANCA und fMLP &auml;hnliche Reaktionen verursacht. Der Signalisierung NB1-Komplex, der aus Plasma Membranen ausgef&auml;llt wurde enthielt den Transmembran Rezeptor Mac-1 (CD11b/CD18) wie MS/MS-Analyse und Immunoblotting gezeigt. NB1 Temperaturen war weniger f&uuml;r CD11a und nicht auffindbar f&uuml;r CD11c. NB1 zeigte direkte Protein-Protein Interaktionen mit CD11b und CD11a von Oberfl&auml;chen-Plasmon-Resonanz-Analyse (SPR). Jedoch, wenn diese Integrine als Complex Transmembranproteine auf transfected Zellen, nur CD11b/CD18 (Mac-1) pr&auml;sentiert wurden-transfected Zellen verklebt auf immobilisierte NB1-Protein. Diese Haftung wurde von mAb gegen NB1, CD11b und CD18 gehemmt. NB1, PR3 und Mac-1 befanden sich innerhalb von Lipid Rafts. Dar&uuml;ber hinaus zeigte confocal Mikroskopie der st&auml;rkste NB1-Doppelhybridisierung mit CD11b und CD18 auf die Neutrophilen. Stimulation mit mAb NB1-Aktivierung ausgel&ouml;st Degranulation und Superoxid Produktion in mNB1(pos)/mPR3(high) Neutrophilen und dieser Effekt wurde reduziert blockierende Antik&ouml;rper gegen CD11b. CD11b Blockade auch gehemmt PR3-ANCA-induzierte neutrophil Aktivierung verwenden, selbst wenn &beta;2-Integrin Ligand-abh&auml;ngige Signale weggelassen wurden. Wir schaffen die Schl&uuml;sselrolle der NB1-Mac-1-Rezeptor-Interaktion f&uuml;r PR3-ANCA-vermittelter neutrophil-Aktivierung.

Komplement-Rezeptor Mac-1 ist ein Adapter f&uuml;r NB1 (CD177)-PR3-ANCA neutrophil Aktivierung vermittelt.

Il glicosilfosfatidilinositolo (GPI)-ancorata neutrofili specifico recettore NB1 (CD177) presenta il autoantigen proteinasi 3 (PR3) sulla membrana di un sottoinsieme dei neutrofili. PR3-ANCA-attivato neutrofili partecipano a vasculite dei piccoli vasi. Poich&eacute; NB1 manca un dominio intracellulare, abbiamo caratterizzato componenti il NB1 segnalazione complessi che sono cardine per l&#39;attivazione dei neutrofili. PR3-ANCA ha portato nella produzione di degranulazione e superossido nei neutrofili mNB1(pos)/PR3(high), ma non nel sottoinsieme mNB1(neg)/PR3(low), considerando che MPO-ANCA e fMLP causato risposte simili. Il complesso di segnalazione NB1 che era precipitato dal plasma membrane contenute il recettore transmembrana Mac-1 (CD11b/CD18) come mostrato da immunoblotting e MS/MS analisi. NB1 coprecipitazione era meno per CD11a e non rilevabile per CD11c. NB1 ha mostrato interazioni proteina-proteina diretto sia con CD11b e CD11a mediante analisi di risonanza plasmonica di superficie (SPR). Tuttavia, quando queste integrine sono state presentate come proteine transmembrana heterodimeric su celle transfected, solo CD11b/CD18 (Mac-1)-celle transfected aderiscono alla proteina NB1 immobilizzata. Tale adesione &egrave; stata inibita da mAb contro NB1, CD11b e CD18. NB1, PR3 e Mac-1 sono stati situati all&#39;interno di zattere lipidiche. Inoltre, microscopia confocale ha mostrato la collocazione pi&ugrave; forte NB1 con CD11b-CD18 sui neutrofili. Stimolazione con mAb NB1-attivazione innescata produzione degranulazione e superossido in mNB1(pos)/mPR3(high) neutrofili, e questo effetto &egrave; stato ridotto mediante blocco anti-CD11b. CD11b blocco inibita anche PR3-ANCA-indotta del neutrofilo attivazione, anche quando sono stati omessi &beta;2-integrina segnali ligando-dipendente. Stabiliamo il ruolo fondamentale dell&#39;interazione recettore NB1-Mac-1 per l&#39;attivazione dei neutrofili PR3-ANCA-mediata.

Recettore del complemento Mac-1 &egrave; un adattatore per NB1 (CD177)-mediata attivazione neutrofili PR3-ANCA.

&#x4E00;&#x7A2E; (GPI)-&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x56FA;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; NB1 &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; (CD177) &#x306F;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x819C;&#x4E0A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6297;&#x539F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A3;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3 (PR3) &#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PR3 ANCA &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x708E;&#x3067;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NB1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;NB1 &#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MPO-ANCA &#x3068; fMLP &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; PR3 ANCA mNB1(pos)/PR3(high) &#x597D;&#x4E2D;&#x7403; mNB1(neg)/PR3(low) &#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x8131;&#x9846;&#x7C92;&#x3068;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x6C88;&#x6FB1;&#x3057;&#x305F; NB1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; Mac-1 &#xFF08;CD11b/CD18) MS/MS &#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NB1 zno-al_2o_3 CD11a &#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x89E3;&#x6790; (SPR) CD11b &#x3068; CD11a &#x76F4;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; CD11c&#x3002; NB1 &#x7528;&#x691C;&#x77E5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C11;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x3064;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x767A;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x3001;&#x552F;&#x4E00; CD11b/CD18 (Mac-1) &#x4E0A;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;-transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x4ED8;&#x7740;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316; NB1&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x63A5;&#x7740; NB1&#x3001;CD11b&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; CD18 &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066; mAb &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NB1&#x3001;PR3&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Mac 1 &#x8102;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6700;&#x5F37; NB1 &#x5927;&#x8178;&#x83CC; CD11b &#x3068; CD18 &#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MNB1(pos)/mPR3(high) &#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x8131;&#x9846;&#x7C92;&#x3068;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x751F;&#x7523; NB1 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; mAb &#x3067;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F; &beta; 2 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3082;&#x7701;&#x7565;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6D3B;&#x6027; PR3 &#x8A98;&#x8D77; ANCA CD11b&#x3002; CD11b &#x5C01;&#x9396;&#x3082;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NB1 Mac 1 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; PR3 ANCA &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x88DC;&#x4F53;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; Mac 1 &#x3067;&#x3059; NB1 &#x7528;&#x306E;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; (CD177)-PR3 ANCA &#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

Glycosylphosphatidylinositol (GPI)-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; neutrophil &#xD2B9;&#xC815; NB1 &#xACE0;&#xC815; (CD177) &#xD638; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xB9C9;&#xC5D0; autoantigen &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; 3 (PR3)&#xB97C; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. PR3 ANCA &#xD65C;&#xC131;&#xD654; neutrophils &#xC18C;&#xD615; &#xC120;&#xBC15; vasculitis &#xCC38;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NB1 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xACB0;&#xC5EC;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; nb1&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC788;&#xB294;. MPO ANCA&#xC640; fMLP &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; PR3 ANCA mNB1(neg)/PR3(low) &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0;&#xB9CC; mNB1(pos)/PR3(high) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; degranulation &#xBC0F; &#xCD08;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xACB0;&#xACFC;. MS/MS &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; immunoblotting&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xCF30; &#xB358;&#xB294; NB1 &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB9E5;-1 (CD11b/CD18) &#xD3EC;&#xD568;. NB1 co-precipitation CD11a &#xBC0F; CD11c. NB1 &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xBD84;&#xC11D; (SPR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; cd11b&#xC640; CD11a &#xC9C1;&#xC811; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; &#xB35C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; integrins transfected &#xC138;&#xD3EC;, &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; CD11b/CD18 (Mac-1) heterodimeric &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xD45C; &#xB410;&#xB2E4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;,-transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0; NB1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC900;&#xC218; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC811;&#xCC29; NB1, CD11b, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; CD18 Mab&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. NB1, PR3, &#xB9E5; 1 &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB5CF;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD574; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC740; neutrophil&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; NB1 co-localization&#xC744; cd11b&#xC640; CD18 &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. MAb NB1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xBC1C; degranulation mNB1(pos)/mPR3(high) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &beta;2 integrin &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xC0DD;&#xB7B5; &#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; CD11b. CD11b &#xB610;&#xD55C; &#xC800;&#xD574; &#xBD09;&#xC1C4; PR3 ANCA &#xC720;&#xB3C4; &#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xCC28;&#xB2E8; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; PR3 ANCA &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; NB1-&#xB9E5;-1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC644;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB9E5; 1&#xC740; nb1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; (CD177)-&#xC911;&#xC7AC; PR3 ANCA &#xD638; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

La glicosilfosfatidilinositol (GPI)-anclado neutr&oacute;filo espec&iacute;ficos receptor CB1 (CD177) presenta el autoant&iacute;geno proteinasa 3 (PR3) en la membrana de un subconjunto de neutr&oacute;filo. Neutr&oacute;filos activados PR3-ANCA participan en vasculitis de vasos peque&ntilde;os. Desde NB1 carece de un dominio intracelular, caracterizamos los componentes de la NB1 se&ntilde;alizaci&oacute;n complejos que son fundamentales para la activaci&oacute;n de neutr&oacute;fila. ANCA-PR3 dio lugar en la producci&oacute;n de super&oacute;xido y degranulaci&oacute;n en los neutr&oacute;filos mNB1(pos)/PR3(high), pero no en el subconjunto de mNB1(neg)/PR3(low), mientras que MPO-ANCA y fMLP causaron respuestas similares. El complejo de se&ntilde;alizaci&oacute;n NB1 que sal&iacute;a directamente de las membranas de plasma contiene el receptor transmembrana Mac-1 (CD11b/CD18) como se muestra por immunoblotting y an&aacute;lisis MS/MS. NB1 co-precipitaci&oacute;n fue menor para CD11a y no detectables para CD11c. NB1 demostrada las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na directa con CD11b y CD11a por an&aacute;lisis de resonancia de plasm&oacute;n superficial (SPR). Sin embargo, cuando estas integrinas se presentaron como heterodim&eacute;ricos glicoprote&iacute;nas en c&eacute;lulas transfected, &uacute;nico CD11b/CD18 (Mac-1)-c&eacute;lulas transfected adhirieron a la prote&iacute;na de NB1 inmovilizada. Esta adhesi&oacute;n fue inhibida por mAb contra NB1, CD11b y CD18. NB1, PR3 y Mac-1 se encuentra dentro de las balsas lip&iacute;dicas. Adem&aacute;s, la microscopia confocal demostr&oacute; la co-localizaci&oacute;n de NB1 m&aacute;s fuerte con CD11b y CD18 en el neutr&oacute;filo. Estimulaci&oacute;n con mAb NB1-activaci&oacute;n activa producci&oacute;n degranulaci&oacute;n y super&oacute;xido en neutr&oacute;filos mNB1(pos)/mPR3(high), y este efecto fue reducido usando anticuerpos contra bloqueo CD11b. CD11b bloqueo tambi&eacute;n inhibida inducida por ANCA-PR3 a Activaci&oacute;n Neutr&oacute;fila, incluso cuando se omitieron los se&ntilde;ales de &beta;2-integrina dependiente de ligando. Establecemos el papel fundamental de la interacci&oacute;n del receptor CB1-Mac-1 para Activaci&oacute;n Neutr&oacute;fila mediada por ANCA-PR3.

Receptor de complemento Mac-1 es un adaptador para NB1 (CD177)-mediada por la Activaci&oacute;n Neutr&oacute;fila ANCA-PR3.

Cellular communication constitutes a fundamental mechanism of life, for instance by permitting transfer of information through synapses in the nervous system and by leading to activation of cells during the course of immune responses. Monitoring cell-cell interactions within living adult organisms is crucial in order to draw conclusions on their behavior with respect to the fate of cells, tissues and organs. Until now, there is no technology available that enables dynamic imaging deep within the tissue of living adult organisms at sub-cellular resolution, i.e. detection at the level of few protein molecules. Here we present a novel approach called multi-beam striped-illumination which applies for the first time the principle and advantages of structured-illumination, spatial modulation of the excitation pattern, to laser-scanning-microscopy. We use this approach in two-photon-microscopy--the most adequate optical deep-tissue imaging-technique. As compared to standard two-photon-microscopy, it achieves significant contrast enhancement and up to 3-fold improved axial resolution (optical sectioning) while photobleaching, photodamage and acquisition speed are similar. Its imaging depth is comparable to multifocal two-photon-microscopy and only slightly less than in standard single-beam two-photon-microscopy. Precisely, our studies within mouse lymph nodes demonstrated 216% improved axial and 23% improved lateral resolutions at a depth of 80 µm below the surface. Thus, we are for the first time able to visualize the dynamic interactions between B cells and immune complex deposits on follicular dendritic cells within germinal centers (GCs) of live mice. These interactions play a decisive role in the process of clonal selection, leading to affinity maturation of the humoral immune response. This novel high-resolution intravital microscopy method has a huge potential for numerous applications in neurosciences, immunology, cancer research and developmental biology. Moreover, our striped-illumination approach is able to improve the resolution of any laser-scanning-microscope, including confocal microscopes, by simply choosing an appropriate detector.

High-resolution intravital microscopy.

This study describes a simple technique that improves a recently developed 3D sub-diffraction imaging method based on three-photon absorption of commercially available quantum dots. The method combines imaging of biological samples via tri-exciton generation in quantum dots with deconvolution and spectral multiplexing, resulting in a novel approach for multi-color imaging of even thick biological samples at a 1.4 to 1.9-fold better spatial resolution. This approach is realized on a conventional confocal microscope equipped with standard continuous-wave lasers. We demonstrate the potential of multi-color tri-exciton imaging of quantum dots combined with deconvolution on viral vesicles in lentivirally transduced cells as well as intermediate filaments in three-dimensional clusters of mouse-derived neural stem cells (neurospheres) and dense microtubuli arrays in myotubes formed by stacks of differentiated C2C12 myoblasts.

Simple method for sub-diffraction resolution imaging of cellular structures on standard confocal microscopes by three-photon absorption of quantum dots.

Anje Sporbert

Max Delbrück Center for Molecular Medicine

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers