La formazione di una sofisticata tecnica microchirurgica: Interposizione della vena giugulare esterna innesto nella carotide comune in Rats

Riepilogo

Iperplasia neointimale è la causa primaria di stenosi nelle vene arterializzato. Proponiamo un nuovo protocollo per cui si innesta la vena giugulare esterna destra con la tecnica bracciale in carotide comune di ratti Sprague Dawley. Il tasso di sopravvivenza è stata del 100% per il punto temporale di sacrificio.

Abstract

Iperplasia neointimale è una delle principali cause di stenosi nelle vene arterializzato che sono di grande importanza in chirurgia di bypass arterioso coronarico, in chirurgia di bypass arterioso periferico nonché in fistole arterovenose. ^1-5 La procedura sperimentale di interposizione vena innesto nella carotide comune utilizzando il bracciale-tecnica è stata applicata in diversi progetti di ricerca per esaminare l'eziologia della iperplasia neointimale e opzioni terapeutiche per affrontarlo. ^6-8 Il polsino impedisce vaso rimodellamento anastomosi e induce turbolenza all'interno dell'innesto e quindi lo sviluppo di iperplasia neointimale.

Con l'innesto di vena cava superiore è una consolidata piccolo-modello animale per l'esperimento venosa arterialization. ^9-11 Questo protocollo corrente si riferisce ad una tecnica di interposizione stabilita giugulare innesto venoso prima volta descritta da Zou et al., ^9, come pure gli altri. ^12-14 Per semplificare la procedura e di ridurre al minimo il numero di animali sperimentali necessarie, un protocollo funzionamento dettagliato di formazione video è presentato. Questo video dovrebbe aiutare il chirurgo alle prime armi di imparare sia il bracciale-tecnica e l'interposizione innesto venoso. Con la presente, la vena giugulare esterna destra è stato innestato in cuffia-tecnica nella carotide comune di 21 ratti Sprague Dawley femmine classificati in tre gruppi uguali che sono stati sacrificati al giorno 21, 42 e 84, rispettivamente. In particolare, non sono animali donatori sono necessari, in quanto auto-trapianti sono stati effettuati. Il tasso di sopravvivenza è stata del 100% per il punto temporale di sacrificio. Inoltre, il tasso di pervietà dell'innesto è stata del 60% per i primi 10 animali operati e 82% per i restanti 11 animali. Il flusso di sangue al momento del sacrificio era di 8 ± 3 ml / min. In conclusione, questo protocollo chirurgico semplifica notevolmente, ottimizza e standardizza questo complicated procedura. Dà chirurghi inesperti facile, passo-passo le istruzioni, spiegando possibili insidie, aiutandole così ad acquisire competenze in fretta ed evitare il sacrificio inutile di animali da esperimento.

Protocollo

1. Animali da esperimento

1. Ottenere un riconoscimento locale Comitato Etico per tutti gli esperimenti che verranno eseguite, in conformità con le linee guida di protezione degli animali FELASA.
2. Utilizzare femmina Sprague-Dawley disponibili per l'acquisto da qualsiasi allevatore commerciale (ad esempio, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Germania). Abbiamo usato 21 animali suddivisi in tre gruppi di 7 animali ciascuno che sono stati sacrificati a 3, 6 e 12 settimane dopo l'intervento. Al momento dell'acquisto, gli animali dovrebbero essere di 12 settimane di età e peso 250-300 g.
3. Tenere gli animali in climatizzati ambienti con una temperatura ambiente di 21 ° C, 60% di umidità relativa e di 12 ore ciclo luce-buio con libero accesso a cibo e acqua.

2. Anestesia e preparazione operativa

1. Indurre anestesia generale utilizzando una scatola plexiglas collegato alla macchina per anestesia, fissato a un tasso di flusso di ossigeno di 1 L / min, e un vaporizzatore isofluorano with gas anestetico 5%.
2. Mantenere l'anestesia con il vaporizzatore isofluorano al 1,5% appena i riflessi profondi sensoriali degli animali sono soppressi.
3. Fissare i ratti in posizione supina su una piastra di riscaldamento del corpo.
4. Preparare la regione di funzionamento di ciascun animale, eliminando il pelo con una crema depilazione, dal punto di vista mandibola fino a 2 cm sotto il manubrio sterni.
5. Preparare un campo sterile chirurgica prestando attenzione alla zona chirurgica, l'area preparata sull'animale e la parte anteriore del chirurgo:
• Pulire il banco con un disinfettante.
• Preparare il sito di incisione, utilizzando più applicazioni di soluzione di lavaggio chirurgico (ad esempio clorexidina e il 70% di alcool isopropilico). Applicare la clorexidina primo, il secondo e alcol, infine, la soluzione di lavaggio.
• Indossare un camice monouso chirurgico e guanti chirurgici, o, in alternativa, guanti esami che sono stati precedentemente lavati with un disinfettante chirurgico.
6. Utilizzare strumenti di microchirurgia sterili nella procedura operativa.
7. Utilizzare un microscopio operazione (Wild Heerbrugg M650, Gais, Svizzera) 10-20-volte ingrandimento.

3. Anatomia

La figura 1 mostra l'anatomia del collo del topo:

1a) Situs prima resezione del muscolo sternocleidomastoideo destro.

1b) Situs dopo resezione del muscolo sternocleidomastoideo destro.

4. Cuff Preparazione

Tagliare le manette in una lunghezza di 3 mm a mano da un tubo di plastica (Portex, diametro interno 0,75 mm, diametro esterno 0,94 millimetri, Smiths Medical, UK). Questi polsini sono costituiti da un corpo tubolare bracciale compreso il volume totale del tubo di plastica, ed un manico polsino costituito metà del volume della cuffia. Sia il corpo e il manico bracciale bracciale deve essere ugualmente long. La maniglia bracciale è essenziale per manipolare il bracciale durante la procedura chirurgica. Dopo il bracciale si infila sopra il vaso, un morsetto mini Bulldog emessi simultaneamente sulla maniglia bracciale e il recipiente, in modo da impedire il sanguinamento, mantenere il bracciale in posizione e garantire la stabilità.

5. Bracciale Tecnica

1. Infilare il bracciale sopra il vaso.
2. Subito dopo, rovesciare la nave, tirarlo sopra l'esterno del corpo bracciale e fissarlo con una legatura di seta 7-0. In questo modo, il lume del bracciale è coperto endotelio. Successivamente, scivolare l'innesto venoso sul corpo bracciale e fissarlo con un nuovo 7-0 legatura seta. Per prevenire la formazione di trombi, è indispensabile fissare la cravatta innesto venoso molto vicino al margine bracciale per evitare il contatto con il sangue dal legame che tiene in posizione l'arteria. Questo è cruciale per l'anastomosi distale dovuta alla direzione del flusso sanguigno. Tuttavia, secondo gli autori, non è consideratoessenziale per l'anastomosi prossimale per lo stesso motivo.

6. Procedura chirurgica

6.1 Preparazione della vena giugulare esterna destra

1. Fai circa 2,5 cm di lunghezza incisione mediana cervicale diretta sopra il manubrio sterni.
2. Separare completamente a 1 cm-lungo segmento di vena giugulare esterna destra dai tessuti circostanti
3. Legare gli affluenti venosi con 7-0 punti di sutura in seta.

6.2 Preparazione del diritto carotide comune

1. Preparare il muscolo sternocleidomastoideo e transetto in mezzo.
2. Preparare il diritto carotide comune con cura, facendo attenzione a non comprimere l'arteria e il nervo vago. Mobilitarlo dalla biforcazione carotidea fino al tronco brachiocefalico.
3. Successivamente, legare due volte in mezzo con 7-0 punti di sutura in seta prima transezione.
4. Infilare un nylon bracciale consisting di un corpo e di una maniglia (Figura 2a) sopra l'estremità distale della carotide comune, per cui è importante garantire che il manico bracciale è dietro il vaso (Figura 2b).
5. Bloccare l'estremità distale del cuffed carotide comune con un morsetto Bulldog mini esattamente sul manico bracciale per garantire la stabilità (figura 2c).
6. Successivamente, tagliare l'arteria direttamente dietro la legatura, per cui il ceppo risultante arteriosa dovrebbe essere lungo quanto il corpo bracciale.
7. Risciacquare il lume arterioso con eparina-soluzione salina (20 UI di eparina / ml 0,9% NaCl). Impostare un ciclo legatura parte nella posizione corretta per un uso successivo.
8. Tirare il moncone arterioso e scivolare come un manicotto sul corpo bracciale.
9. Successivamente, tirare l'anello di legatura e nodo saldamente.
10. Per impedire l'arteria di scivolare fuori dalla sua manica, si può attuare un trucco: afferrare sia la parete arteriosa e la sutura con la mano destra simultaneously e con la mano sinistra pinza (Figura 2d) fare il nodo (figura 2e).
11. Ripetere la stessa procedura per il moncone prossimale arteriosa (figura 2f).

6,3 venoso posizionamento dell'innesto

1. Accise di 1 cm di lunghezza segmento della vena giugulare esterna bloccato
2. Dal momento che le due arterie risvolto sono troppo distanti l'una dall'altra per l'interposizione venosa, approssimare la distanza corretta per questa procedura utilizzando un 3-0 Vicryl-sutura che si dovrebbe anello attorno ad ogni morsetto mini Bulldog.
3. Criss-cross entrambe le suture.
4. Successivamente, tirare le suture in direzioni opposte, permettendo il corretto posizionamento dei monconi risvolto arteriosi (figura 2g)
5. Sciacquare il segmento di vena con l'eparina-soluzione salina.
6. Infilare un'estremità del segmento di vena precedentemente invertito il ammanettato arteria carotide distale e fissarlo in posizione correttazione con una seta 7-0 legatura.
7. È importante notare che la circonferenza della vena deve essere completamente ed uniformemente afferrato.
8. Sciacquare il segmento di vena con l'eparina-salina-soluzione, e scivolare l'altra estremità del segmento di vena sul moncone prossimale della carotide.
9. Completare la legatura (Figura 2 ore);
10. Rimuovere le pinze Bulldog mini uno dopo l'altro, prima sul moncone distale dell'arteria carotide e poi su quello prossimale, consentendo libero flusso del sangue e la arterialization dell'innesto venoso (Figura 2i). La chirurgia è considerata riuscita se il flusso di sangue e pulsazione sono osservati entro l'innesto e l'arteria carotide comune (valutata visivamente).

6,4. Chiusura della ferita

Per la sutura continua sottocutanea, utilizzare Vicryl 4-0. Per una sutura cutanea in esecuzione, utilizzare 3-0 Vicryl.

7. Recupero e

1. Lasciate che gli animali recuperare da anestesia su un letto di carta in orizzontale sotto una lampada di riscaldamento a raggi infrarossi. Non restituire gli animali operati nella zona detenzione degli animali fino a quando tutti gli animali appaiono normali.
2. Dopo l'intervento l'amministrazione Buprenorfina (Temgesic) della concentrazione di 0,03-0,05 mg / kg di peso corporeo sc ogni 8-12 ore per 2 giorni. Buprenorfina può essere somministrato subito prima dell'induzione isofluorano.
3. Monitorare gli animali dopo l'intervento per la loro condizione generale e segni di malattia o infezioni.

8. Sangue Misura della portata

La pervietà postoperatoria del trapianto è stato dimostrato mediante misurazione del flusso sanguigno, utilizzando un flusso di ricerca Transonic sistema sanguigno di misura (Modello: TS420, Transonic Systems Europe BV, Maastricht, Paesi Bassi) con un flowprobe perivascolare (3 mm, MA3PSB). Il sistema si basa sul principio Doppler.

9. Risultati rappresentativi

Per faithfully mantenendo le istruzioni di cui sopra, la durata media delle operazioni chirurgiche era di circa 65 min. Gli animali presentato una eccellente condizione fisica e preso peso come previsto durante l'intero esperimento: al punto iniziale di funzionamento il peso degli animali 312 ± 20,39 g. Al punto sacrificio tempo di 3 settimane dopo l'intervento il peso degli animali 325,2 ± 28,7 g, a 6 settimane 333 ± 39,9 g e a 12 settimane 362,22 ± 29 g.

Non sono state osservate infezioni al sito di funzionamento e senza piaghe sviluppati. Le ferite di funzionamento guarita completamente al momento previsto. Il controllo neurologico non ha mostrato segni di infarto cerebrale o deficienza motoria. Il seguito era un punto importante poiché gli animali sono stati operati nella carotide e una delle due vene giugulari esterne è stato rimosso e utilizzato come auto-trapianto. Non ci sono reazioni allergiche alla terapia postoperatoria alleviare il dolore sono stati osservati.

> Tutti gli animali sono stati vigili e sociale in tutto l'intero esperimento. Le loro abitudini in materia di ricevere cibo e acqua è rimasto invariato per tutto il tempo.

Il tasso di sopravvivenza di tutti gli esperimenti è stata del 100% per il punto temporale di sacrificio. Il tasso di pervietà dell'innesto è stata del 60% per i primi 10 animali operati e di conseguenza 82% per i restanti 11 animali. La pervietà del graft totale era del 71%. Il flusso di sangue negli innesti venosi arterializzato stata misurata per il punto temporale di sacrificio e era 8 ± 3 ml / min senza differenze statisticamente significative tra i punti sacrificio tre tempo.

Figura 1. Anatomia del collo del ratto. 1a) Situs prima resezione del muscolo sternocleidomastoideo destro. 1b) Situs dopo resezione del muscolo sternocleidomastoideo destro.

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. Figura 2 immagini microscopiche intraoperatori: a) polsino costituito bracciale-corpo e polsino-maniglia; b) bracciale slittato sopra l'estremità distale della carotide comune; c) bloccaggio del moncone distale cuffed arteria carotide comune; d) eversione il moncone arteria carotide comune sul bracciale, e) assicurare la estroflesso moncone arteria carotide comune con una legatura, f) situs dopo eversione di entrambi i comuni con risvolto monconi distali e prossimali delle arterie carotidi, g) criss-cross tecnica di ravvicinamento dei due ammanettato comuni ceppi carotide; h) situs previa interposizione venosa, i) situs dopo la riperfusione del graft interposizione venosa.

Figura 3. Rappresentazione schematica del situsdopo la riperfusione del graft interposizione venosa. Clicca qui per ingrandire la figura .

Discussione

Interposizione di un innesto di vena giugulare esterna nella carotide comune è una tecnica di microchirurgia sofisticata. Questo video aiuta il chirurgo novizio padroneggiare questa tecnica nel minor tempo possibile con un dispendio inferiore di animali da esperimento.

Anestesia inalatoria è la scelta migliore per questa operazione, in quanto evita una fase anestesia eccessivamente profonda, può essere ben controllata e permette al chirurgo di tempo sufficiente per operare. Inoltre il rat...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Intrecciato di seta nero 7-0	Ethicon Products	892100
Vicryl 3-0	Ethicon Products	J285G
Vicryl 4-0	Ethicon Products	J284G
Portex non sterile tubi di nylon 0,75 mm, 0,94 millimetri fine-Bore polietilene (polietilene) Tubi	Portex UK	800/200/175/100
Isofluorano 5%			Qualsiasi genericon
Eparina			Qualsiasi genericon
0,9% soluzione salina			Qualsiasi genericon
Buprenorfina			Qualsiasi genericon