Preparazione, procedure e valutazione dell'iniezione di Plasma ricco di piastrine nel trattamento dell'osteoartrite del ginocchio

Riepilogo

Osteoartrite del ginocchio è spesso visto nel reparto ortopedico. Vi presentiamo in dettaglio il processo di trattamento di osteoartrite ginocchio intero con iniezione di plasma ricco di piastrine, compresa la preparazione, le procedure e la valutazione.

Abstract

Osteoartrite del ginocchio (KOA) è una delle malattie più frequenti nel reparto ortopedico. Trattamenti non-chirurgici esistenti hanno un effetto limitato sulla riparazione della cartilagine e sulla rigenerazione ossea. Plasma ricco di piastrine (PRP) è una sostanza bioactive autologa che può riparare la lesione cartilaginea e accelerare la rigenerazione ossea in modo efficace. Tuttavia, la segnalazione di protocolli di preparazione del PRP negli studi clinici è altamente incoerente, con la maggior parte dei studi forniscono informazioni sufficienti per consentire il protocollo essere riprodotto. Descriviamo un metodo ripetibile di preparazione PRP visivamente, il trattamento di KOA tramite iniezione intra-articolare di PRP e metodi per valutare l'esito. PRP è stato preparato mediante centrifugazione di doppio manuale. Lo strato PRP era estratte dal sangue periferico e usato per l'iniezione di cavità articolare del ginocchio. Valutazioni incluse valutazioni delle concentrazioni delle piastrine del sangue e gli esiti clinici. Preparazione del PRP mediante centrifugazione manuale richiede meno apparato ed è meno costoso di plasma filtrazione o centrifugazione utilizzando attrezzature. Il tempo di centrifugazione del nostro metodo di centrifugazione doppia era 6 e 5 minuti per il rispettive centrifugazioni alle forze di 800 e 1400 x g, rispettivamente, per consentire la preparazione coerenza di standardizzata PRP. Tuttavia, un metodo manuale è suscettibile di errore dell'operatore, e preparazione di lotti PRP non è disponibile. Iniezione intra-articolare di PRP si è rivelata un efficace trattamento per l'osteoartrite del ginocchio. La procedura di trattamento intero ha meno di 30 minuti, la concentrazione di piastrine di PRP potrebbe essere standardizzata e trattamento è stato dimostrato di essere efficace quando valutata dal follow-up.

Introduzione

Osteoartrite del ginocchio (KOA) è una delle malattie più frequenti nel reparto ortopedico; 30% - 50% della gente sopra l'età di 65 anni esperienza di questa malattia¹. Allo stato attuale, l'amministrazione conservatrice di KOA comprende principalmente la somministrazione orale di anti-infiammatori non steroidei e farmaci nutrienti della cartilagine, iniezione intra-articolare di ialuronato di sodio e fisioterapia. Tuttavia, questi metodi non possono interrompere il processo di degenerazione articolare di ginocchio². I difetti della cartilagine articolare possono causare usura della superficie articolare, instabilità articolare e cambiamenti metabolici, che fanno parte della patogenesi di KOA³. Tuttavia, a causa dell'assenza di vasi sanguigni, nervi e tessuto linfoide presente nella cartilagine articolare, recupero dopo danno è difficile. Un efficace metodo di riparazione della cartilagine è particolarmente importante per il trattamento di KOA. Il trattamento di osteoclasia è anche di fondamentale importanza nel trattamento di KOA.

Plasma ricco di piastrine (PRP) è una sostanza bioactive autologa, e l'applicazione di PRP a problemi articolari viene sempre più studiato. Il razionale biologico per l'uso clinico di PRP include il suo effetto sulla distribuzione locale dei fattori di crescita e modificazione della risposta infiammatoria e suoi effetti positivi sulla proliferazione e differenziazione di cellule⁴. Dopo l'attivazione dopo l'iniezione intra-articolare, PRP rilascia α-granuli attraverso degranulazione e secerne vari fattori di crescita, tra cui il fattore di crescita derivato dalle piastrine, il fattore di crescita trasforma-β, il fattore di crescita insulino-simile, il fattore di crescita epidermico, fattore di crescita endoteliale vascolare e il fattore di crescita del fibroblasto. Questi promuovono la proliferazione degli osteoblasti e condrociti, inibiscono la degenerazione della cartilagine, rafforzare la stabilità dell'osso subcondrale e della cartilagine, regolano l'inibitore del tessuto di espressione genica della proteinasi metallica e mantenere l'equilibrio della sintesi e degradazione dei proteoglicani^5,6. Di conseguenza, PRP può riparare la lesione cartilaginea e accelerare la rigenerazione dell'osso.

Il risultato dell'iniezione di PRP è influenzato da vari fattori, tra cui il sito di campionamento⁷, il tipo di centrifuga preparazione metodo⁸e l'uso di anticoagulanti⁹ e attivatori¹⁰. Ci sono circa 3 tipi metodi centrifughi per preparare PRP. Centrifugazione manuale, centrifugazione basati su attrezzature o tecniche di filtrazione del plasma sono disponibili, anche se i metodi manuali e basati su attrezzature sono il più comunemente usati. Il metodo manuale richiede l'apparecchiatura almeno, è comodo, è a basso costo ed è semplice da eseguire (Figura 1). PRP è preparato dalla performance di centrifugazione manuale due volte. Anticoagulante e sangue periferico misti sono centrifugate per separare emociti da piastrine del sangue e del plasma. Dopo aver scartato i globuli rossi sullo strato inferiore, il liquido supernatante viene centrifugato per re-separazione, dividendolo in plasma surnatante della piastrina-poveri, middle PRP e subnatant residui globuli rossi. Lo strato intermedio è utilizzato per l'iniezione di cavità articolare del ginocchio (se la quantità è insufficiente, può essere recuperata parte del surnatante). Valutazioni del metodo comprendono le valutazioni della concentrazione di piastrine nel sangue e gli esiti clinici.

La segnalazione di protocolli di preparazione del PRP negli studi clinici è altamente incoerente, e la maggior parte degli studi non forniscono informazioni sufficienti per consentire il protocollo essere riprodotti¹¹. Qui, descriviamo un metodo riproducibile della preparazione di PRP e trattamento di KOA con iniezione intra-articolare di PRP, con valutazione del risultato. Criteri di inclusione erano pazienti con osteoartrite del ginocchio che hanno dolore povero per semplice farmaco analgesico (come il paracetamolo) e il trattamento conservatore. Criteri di esclusione ha incluso pazienti con disordine di drenaggio venoso di ritorno o linfatico; pazienti con infezioni articolari del ginocchio; pazienti con dermatosi o infezione nella zona dell'iniezione; pazienti con febbre; pazienti con funzione coagulante anomalia; pazienti con gravi malattie cardiovascolari. La procedura di trattamento intero dura meno di 30 minuti, e la concentrazione di piastrine di PRP è dimostrata di raggiungere una misura standardizzata. La sua efficacia è dimostrato valutando i risultati durante il follow-up vicino.

Protocollo

I metodi descritti sono stati approvati dal Comitato etica di Guangdong General Hospital.

1. ottenere PRP mediante centrifugazione manuale

1. Preparare il paziente in posizione supina in una sala operatoria sterile a flusso laminare con una confortevole temperatura ed umidità ambiente: temperatura ambiente è di 22 ° C e umidità della stanza è 60%.
2. Utilizzare una siringa da 1 mL per disegnare 0,2 mL di eparina sodica (2 mL = 12.500 U) e quindi inumidire una siringa da 50 mL.
   Nota: 3 mL di citrato di sodio è anche tipica in questo passaggio per sostituire l'eparina sodica.
3. Rig un laccio emostatico, sterilizzare il gomito 2 - 3 volte e usare la siringa da 50 mL umida per disegnare 30 mL di sangue periferico dalla vena del gomito.
4. Eseguire la prima centrifugazione.
   1. Dividere in parti uguali in due provette da centrifuga sterile 50 mL sangue periferico.
   2. Mettere due tubi a rotori orizzontali e poi nella centrifuga, in condizioni asettiche.
   3. Centrifuga per 6 minuti a 800 x g.
   4. Prendere i rotori orizzontali fuori, indossare guanti sterili e prendere due provette da centrifuga.
   5. Osservare le stratificazioni per assicurarsi che il sangue periferico è stratificato in due strati.
   6. Utilizzare una siringa pulita 10 mL per raccogliere il liquido supernatante da questi due provette in una provetta da centrifuga pulita.
5. Eseguire la seconda centrifugazione.
   1. Utilizzare una siringa pulita 10 mL per aggiungere una quantità equivalente di acqua sterile o soluzione fisiologica normale in un'altra provetta da centrifuga pulita per equilibrio. Mettere i tubi in rotori orizzontali. Contrassegnare l'uno con il liquido surnatante di cerotto adesivo.
   2. Centrifugare per 5 minuti a 1400 x g.
   3. Prendere i rotori orizzontali fuori, e osservando le stratificazioni controllano che il liquido del tubo contrassegnato è suddiviso in tre strati.
   4. Utilizzare una siringa 10 mL disegnare 4 mL di liquido dallo strato centrale granulare delle cellule (leucocita-ricco, PRP strato) e lo strato inferiore del surnatante. Se la quantità di strato intermedio è sufficiente, basta disegnare 4ml da quello.
   5. Mettere 0,4 mL di liquido in una provetta sterile da anticoagulazione (K₂EDTA, 3,6 mg) per la valutazione, lasciando 3,6 mL di liquido rimanente nella siringa.
      Nota: Il protocollo può essere messo in pausa qui.

2. amministrazione intra-articolare di PRP

1. Lasciate che la bugia paziente supina sul tavolo operatorio e piegare il ginocchio a 90 gradi.
2. Individuare il sito di puntura al margine inferiore della rotula e 1 cm dal legamento patellar laterale. Utilizzare un pennarello per segnare il sito.
3. Eseguire la sterilizzazione di pelle sul sito della puntura tre volte con anerdian III, indossare guanti sterili e coprire con un asciugamano-foro asettico.
4. Posizionare la siringa parallelo al plateau tibia e quindi eseguire la puntura con un angolo di 45 gradi. Inserire completamente l'ago nella pelle.
5. Iniettare il 3,6 mL di PRP dalla siringa della cavità articolare del ginocchio.
6. Copertura della posizione di puntura con garza sterile e fissarla con cerotto adesivo.
7. Applicare una pressione sulla ferita per 10 minuti. Osservare per qualsiasi reazione avversa grave per 30 minuti.
8. Amministrare un totale di tre iniezioni a intervalli mensili.
   Nota: Il protocollo può essere messo in pausa qui.

3. valutazione postoperatoria dell'iniezione di PRP

1. Valutare la concentrazione di piastrine nel sangue nel PRP.
   1. Utilizzare i 0,4 mL di PRP da tubo di anticoagulazione (K₂EDTA, 3,6 mg).
   2. Analizzare la concentrazione di piastrine di PRP utilizzando un analizzatore automatico delle cellule del sangue.
2. Valutare il risultato postoperatorio dell'iniezione PRP.
   1. Con una consultazione 1 giorno prima di ciascuno dei tre trattamenti, condurre ulteriori follow-up 1 giorno dopo ogni trattamento, 3 giorni dopo ogni trattamento, 1 settimana dopo ogni trattamento, 1 mese dopo il terzo trattamento, 3 mesi dopo il terzo trattamento e 6 mesi dopo il terzo trattamento.
   2. Utilizzare una scala analogica visiva (VAS), la Western Ontario e McMaster Università osteoartrite indice (WOMAC), Knee Society Punteggio (KSS) e Lysholm ginocchio funzionale scala per valutare l'effetto postoperatorio.

Risultati

Di conseguenza, la conta piastrinica di PRP ha raggiunto una concentrazione standard livello di 1121 x 10³/µL. Abbiamo condotto le indagini di follow-up 15 descritte nel protocollo su un paziente maschio di 55 anni con inizio KOA. Era ovvio che risultato clinico iniziale era soddisfacente dopo la somministrazione intra-articolare di PRP (Figura 2). Tuttavia, l'efficacia di medio-lungo termine era leggermente inferiore. Un effetto analgesico marcat...

Discussione

La concentrazione di piastrine nel sangue umano normale è tra 150.000 / µ l e 350.000 / µ l, e si ritiene generalmente che la concentrazione di piastrine di PRP dovrebbe raggiungere 1.000.000 / µ l, che è di 3 a 5 volte le concentrazioni normali⁹. Secondo il sistema di gerarchia di zampa, si ritiene che PRP ha alcun effetto evidente quando la concentrazione di piastrine nel sangue è inferiore a tre volte la concentrazione normale, mentre PRP ha un effetto inibitorio quando la sua concentrazi...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Centrifuge	Eppendorf	5702
Centrifuge tube	CORNING	430828
Horizontal rotor	Eppendorf	LL080
Anerdian III	Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD	310173	Disinfect the skin
1ml Syringe	KDL  Medical Equipment Co., LTD	0.4*13 RWLB
10ml Syringe	KDL  Medical Equipment Co., LTD	1.2*38 TWSB
50ml Syringe	KDL  Medical Equipment Co., LTD	0.7*32 TWLB
Medical Tourniquet	Changzhou Jinli Latex Products Co., LTD	0087-2011
Single-use sterile rubber surgical gloves	Shanghai jinxiang Latex Products Co., LTD	17060
Disposable Draw Blood Needle	KDL  Medical Equipment Co., LTD	0.55*20 L(II) RWLB
Heparin Sodium Injection	SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD	1706101	2ml:12500U
Jifro Hand Antiseptic Rinse Free Gel	Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD	311793
Medical Cotton Swab	Foshan Kangzheng Medical Supplies Co., LTD	KZ3-12	Disinfect the skin
10ml Normal Saline	Jiangxi Shuangshi Pharmecutical Co., LTD	140211458
Automatic Blood Cell Analyzer	Beckman Coulter	LH-750
Hole-towe			Sterile
Anticoagulation Tube(Blood Collection Tubes, K2E 3.6mg)	Becton, Dickinson and Company	CNL17-COO56	Store in a cool dry place within 4 to 25 degrees Celcius
Tweezers	RWD LIFE SCIENCE	F12006-10
Sterile Gauze	Guangdong Ze Chang Trade Co., LTD	170915
Adhesive Plaster	3M Transpore	1527C-0
Skin Marker Pen	Guangzhou Mingjia Medical Device Manufacturing Co., LTD	10110