Fabbricazione di matrice di milza decellularizzata derivata da ratti

Riepilogo

La matrice decellularizzata della milza (DSM) ha applicazioni promettenti nel campo dell'ingegneria del tessuto epatico. Questo protocollo delinea la procedura per la preparazione del DSM di ratto, che include la raccolta della milza di ratto, la loro decellularizzazione attraverso la perfusione e la valutazione del DSM risultante per confermarne le caratteristiche.

Abstract

Il trapianto di fegato è il trattamento principale per la malattia epatica allo stadio terminale. Tuttavia, la carenza e l'inadeguata qualità degli organi dei donatori richiedono lo sviluppo di terapie alternative. I fegati bioartificiali (BAL) che utilizzano la matrice epatica decellularizzata (DLM) sono emersi come soluzioni promettenti. Tuttavia, l'approvvigionamento di DLM adatti rimane impegnativo. L'uso di una matrice di milza decellularizzata (DSM) è stato esplorato come base per i BAL, offrendo un'alternativa prontamente disponibile. In questo studio, la milza di ratto è stata raccolta e decellularizzata utilizzando una combinazione di cicli di congelamento-disgelo e perfusione con reagenti di decellularizzazione. Il protocollo ha preservato le microstrutture e i componenti della matrice extracellulare (ECM) all'interno del DSM. Il processo completo di decellularizzazione ha richiesto circa 11 ore, risultando in una ECM intatta all'interno del DSM. L'analisi istologica ha confermato la rimozione dei componenti cellulari mantenendo la struttura e la composizione della MEC. Il protocollo presentato fornisce un metodo completo per ottenere il DSM, offrendo potenziali applicazioni nell'ingegneria dei tessuti epatici e nella terapia cellulare. Questi risultati contribuiscono allo sviluppo di approcci alternativi per il trattamento della malattia epatica allo stadio terminale.

Introduzione

Il trapianto di fegato rimane l'unico trattamento definitivo per la malattia epatica allo stadio terminale ^1,2,3. Tuttavia, la carenza critica e il declino della qualità degli organi dei donatori hanno aumentato la necessità di trattamenti alternativi⁴. Nel regno della medicina rigenerativa, i fegati bioartificiali (BAL) che utilizzano la matrice epatica decellularizzata (DLM) sono emersi come soluzioni promettenti ^5,6,7. Il DLM preserva la struttura epatica o....

Protocollo

Questo studio è stato approvato dal Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali dell'Università di Xi'an Jiaotong e condotto in conformità con le linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.

1. Raccolta della milza

1. Utilizzare ratti Sprague Dawley maschi del peso di 250-280 g. Ospitare i ratti in stanze con temperatura e umidità controllate e fornire loro cibo e acqua ad libitum, tranne che per il digiuno prima dell'intervento chirurgico.
2. Iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0,05 ml/kg) come analgesico 1 ora prima dell'operazione. Anestetizzare il ratto mediante ....

Discussione

I BAL rappresentano un approccio efficace per il trattamento della malattia epatica allo stadio terminale, in particolare nei casi in cui il trapianto di fegato è ostacolato dall'attuale carenza di organi da donatore⁶. Un'opzione promettente per la creazione di BAL è l'utilizzo del DLM, che preserva la MEC naturale e la struttura vascolare del fegato nativo. Tuttavia, la scarsità di DLM umano e i potenziali rischi di infezione e immunogenicità associati al DLM animale pongono limitazioni signi.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia Machine	Harvard Apparatus	tabletop	animal anesthesia
bubble trap	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	pore diameter: 5 μm	prevent air bubbles
Buprenorphine	TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd		an analgesic
Hemostatic Forceps	Shanghai Medical Instruments  Co., Ltd	J31020	surgical tool
Heparinized Saline	SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD		prevent the formation of thrombosis
Isoflurane	RWD life Science Co.		anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin	Beyotime Biotechnology Co., Ltd.	C0222	antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic Pump	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	BT100-1L
Phosphate-Buffered Saline	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	4481228	phosphoric acid buffer salt solution
Silicone Tube	Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.	2.4×0.8mm
Silk Suture	Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory	6-0 and 3-0	ligate blood vessels
Sodium Dodecyl Sulfate	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	151-21-3	ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe Pump	Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd	BeneFusion SP5	intravenous infusion
Triton X-100	Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.	9002-93-1	non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous Catheter	B. Braun Company	24G	inserting the spleen artery