Iniziare a raffreddare un macinacaffè commerciale macinando circa 30-50 grammi di ghiaccio secco due volte, per 30 secondi ogni volta. Scartare la polvere di ghiaccio secco e mescolare tre grammi di spaghetti congelati a cellule di lievito con circa 30-50 grammi di ghiaccio secco nel macinacaffè preraffreddato. Sigillare la giunzione tra il tappo e il macinino con Parafilm.
Mescola la miscela di ghiaccio secco a cellule di lievito 10 volte, per 30 secondi ciascuna, lasciando intervalli di 30 secondi tra ogni giro. Trasferire la polvere di ghiaccio secco risultante in un bicchiere di plastica, utilizzando una spatola pulita e asciutta. Dopo l'evaporazione del ghiaccio secco, aggiungere 2,25 millilitri di microsfere magnetiche, o tampone MB, con inibitori della proteasi e della fosfatasi, alla polvere di cellule di lievito.
Dopo aver pipettato energicamente la miscela tampone cellulare, trasferire la sospensione cellulare in una provetta conica da 15 millilitri. Successivamente, conservare lo 0,1% di campioni dagli estratti di cellule grezze per il DNA e lo 0,05% di campioni per l'analisi delle proteine, a -20 gradi Celsius. Trasferire la sospensione cellulare rimanente in provette di reazione da due millilitri a basso legame e separare i detriti cellulari centrifugando le provette.
Una volta fatto, estrarre tutti i surnatanti in un tubo conico da 15 millilitri. Anche in questo caso, conservare lo 0,1% del surnatante a -20 gradi Celsius per il DNA e lo 0,05% del surnatante per l'analisi delle proteine. Successivamente, lavare 500 microlitri di impasto a microsfere magnetiche accoppiate a immunoglobuline G con 500 microlitri di tampone MB freddo, contenente inibitori della proteasi e della fosfatasi, due volte, per cinque minuti ciascuna, a quattro gradi Celsius, a rotazione a 20 giri/min.
Incubare le microsfere magnetiche in 500 microlitri di tampone MB freddo per un'ora a quattro gradi Celsius, a rotazione a 20 giri/min, prima di rimuovere il surnatante dalle perle utilizzando un rack magnetico. Mescolare l'impasto a microsfere magnetiche bilanciato con il lisato cellulare ottenuto in precedenza e tirato in un tubo conico da 15 millilitri. Dopo l'incubazione per due ore a quattro gradi Celsius e 20 RPM, trasferire l'intera sospensione di lisato di cellule a microsfere magnetiche in provette di reazione a basso legame.
Separare le perle magnetiche che trasportano gli anelli di cromatina di interesse dal lisato cellulare, utilizzando un rack magnetico. Trasferire il flusso rimanente da ciascuna provetta a una nuova provetta conica da 15 millilitri, prima di conservare alcuni campioni a -20 gradi Celsius per l'analisi del DNA e delle proteine. Quindi, sospendere la perlina magnetica da ciascuna provetta conica da 15 millilitri in 300 microlitri di tampone MB freddo e combinare le perle in una provetta di reazione.
Eseguire cinque lavaggi di 10 minuti ciascuno, utilizzando 750 microlitri di tampone MB freddo, contenente inibitori della proteasi e della fosfatasi, a quattro gradi Celsius, ruotando a 20 giri/min. Successivamente, eseguire il lavaggio finale con 750 microlitri di tampone MB freddo senza inibitori della proteasi e della fosfatasi. Sospendere le perle preparate in 40 microlitri di tampone MB freddo senza inibitori della proteasi e della fosfatasi.
