Dopo aver isolato i neutrofili dal sangue periferico umano, risospenderli in RPMI 1640 Medium in una provetta da centrifuga da 1,5 millilitri. Aggiungere un microlitro di matrice di DNA rosso permeabile alla membrana a 1,5 millilitri di sospensione di neutrofili e incubare al buio per cinque minuti. Centrifugare la sospensione di neutrofili a 2.500 g per cinque minuti a temperatura ambiente.
Dopo la centrifugazione, rimuovere la provetta contenente i neutrofili pellettati e aspirare il surnatante. Risospendere i neutrofili in un millilitro di RPMI e centrifugarlo di nuovo. Dopo l'ultimo lavaggio, risospendere i neutrofili in un millilitro di RPMI.
Aggiungere un piccolo volume di sospensione di neutrofili all'emocitometro e contarli al microscopio. Diluire la sospensione di neutrofili a 1,5 volte 10 al quinto neutrofilo per millilitro utilizzando RPMI. Aggiungere quattro microlitri di colorante di DNA verde impermeabile a membrana da uno a 100 pre-diluito a un millilitro di sospensione di neutrofili.
Erogare 100 microlitri di sospensione di neutrofili per pozzetto in una piastra a 96 pozzetti trattata con coltura tissutale trasparente. Aggiungere 100 microlitri di RPMI contenenti reagenti di stimolo con o senza inibitore nei rispettivi pozzetti. Collocare la piastra in un sistema di analisi delle cellule vive alloggiato in un incubatore di anidride carbonica al 5%.
