Tecnica real-time ad alto rendimento per quantificare la formazione di trappole extracellulari di neutrofili nei neutrofili umani

La nostra ricerca si concentra sui neutrofili, che sono essenziali per i primi soccorritori del sistema immunitario e svolgono un ruolo significativo in varie malattie. Negli ultimi due decenni, è diventato chiaro che i neutrofili contribuiscono allo sviluppo del cancro, delle malattie autoimmuni e di altre condizioni infiammatorie interrompendo l'immunoregolazione. Ciò include la formazione di trappole extracellulari neutrofile, reti, strutture simili a ragnatele che rispondono all'infiammazione e potrebbero essere prese di mira per la terapia in queste malattie.

Tuttavia, nonostante alcune molecole promettenti abbiano come bersaglio le reti, in fase di sviluppo non esiste ancora una terapia approvata che influisca specificamente su questo meccanismo. Ciò è almeno in parte attribuibile alla mancanza di un metodo di quantificazione oggettivo, imparziale, riproducibile e ad alto rendimento per la formazione della rete. Il nostro protocollo utilizza l'imaging di cellule vive a due colori per analizzare il comportamento dei neutrofili utilizzando coloranti permeabili e impermeabili alla membrana per un monitoraggio preciso della formazione della rete.

Questo metodo distingue tra neutrofili che formano reti e neutrofili sani in base all'integrità della membrana e fornisce una chiara differenziazione dei tipi di morte cellulare attraverso i cambiamenti morfologici assorbiti nell'imaging a contrasto di fase. Questo metodo supera i problemi delle tecniche precedentemente riportate per quantificare la formazione della rete e fornisce una quantificazione della rete efficiente, riproducibile e accurata in modo automatizzato. Questo metodo aiuterà nello sviluppo di farmaci mirati ai neutrofili, offrendo la possibilità di eseguire lo screening di più bersagli terapeutici contro la formazione di reti in modo ad alto rendimento.