Decellularizzazione della milza di ratto per creare una matrice della milza per l'ingegneria del fegato

Per iniziare, congelare e scongelare una milza di ratto congelata tre volte per lisare le cellule della milza. Su un banco pulito, installa una pompa peristaltica, un serbatoio da due litri, un tubo in silicone con un diametro interno di 2,4 millimetri e una trappola per bolle. Riempire il sistema di perfusione con acqua deionizzata.

Tienilo in funzione per 10 minuti. Trasferire con cura la milza raccolta nel contenitore pieno di acqua deionizzata. Quindi, collegare il tubo di silicone al catetere venoso che è stato inserito nell'arteria splenica.

Eseguire la perfusione con acqua deionizzata, soluzioni SDS allo 0,1%, Triton X-100 all'1% e PBS. Riempi una provetta da centrifuga da 50 millilitri con PBS contenente il 10% di penicillina streptomicina. Trasferire la matrice della milza decellularizzata nel PBS.

Conservalo a meno 20 gradi Celsius fino a ulteriori esperimenti. La completa decellularizzazione della milza è stata raggiunta in circa 11 ore. Il colore è gradualmente passato dal rosso intenso a un rosso chiaro modellato, e infine a un aspetto bianco traslucido, con la morfologia complessiva rimasta intatta.