Per iniziare, preparare e posizionare il ratto anestetizzato per l'elettrofisiologia. Applicare impulsi catartici monofasici a onda quadra per stimolare il nervo frenico per la registrazione delle risposte CMAP. Aumentare progressivamente l'intensità dello stimolo fino a quando l'ampiezza della risposta cessa di aumentare.
Quindi, aumentare l'intensità dello stimolo a circa il 120% del livello richiesto per una risposta massimale per garantire una stimolazione super massimale e registrare una risposta aggiuntiva. Misura e documenta le ampiezze picco-picco del CMAP in millivolt. Somministrare la stimolazione submassimale con una durata di 0,1 millisecondi a una frequenza di 1 hertz.
Aumentare gradualmente l'intensità con incrementi di 0,03 milliampere per suscitare risposte incrementali fino a raggiungere una risposta minima tutto o nessuno. Quindi, acquisisci la risposta iniziale con un'intensità di stimolo compresa tra 2 e 10 milliampere. Dopo aver salvato la prima risposta incrementale, acquisire ulteriori incrementi con intensità di stimolo progressivamente più elevate con incrementi di 0,03 milliampere.
Assicurarsi che il picco negativo iniziale delle risposte incrementali si allinei temporalmente con il picco negativo della risposta CMAP massima. Dato il coinvolgimento del diaframma nella respirazione, verificare la stabilità e l'assenza di frazionamento in ciascuna risposta incrementale per confermare la coerenza tra tre risposte duplicate. Osserva le risposte incrementali in tempo reale e sovrapponile alle registrazioni precedenti per distinguerle visivamente.
Quindi, verificare che l'ampiezza dell'incremento sia di almeno 25 microvolt. Dopo aver registrato 10 risposte incrementali, verificare che l'ampiezza di ciascun incremento non superi 1/3 dell'ampiezza totale della risposta finale. Per stimare l'ampiezza media dell'SMUP, fare la media dei valori di 10 incrementi.
Quindi, dividere l'ampiezza massima del CMAP per l'ampiezza media del SMUP per determinare il MUNE. Sette giorni dopo l'iniezione intrapleurica di CTB-SAP, MUNE è diminuito a 60 unità motorie funzionali nei ratti adulti rispetto a 74 nei ratti di controllo. L'ampiezza del CMAP è rimasta relativamente stabile, suggerendo la germinazione del collaterale come possibile meccanismo di compensazione.
Il diaframma CMAP, SMUP e MUNE sono stati misurati 28 giorni dopo l'iniezione. CMAP non ha mostrato cambiamenti degni di nota. L'aumento medio della SMUP per i ratti CTB-SAP è stato di circa il 50-60%I cambiamenti sono stati significativi nel tempo e attribuiti a CTB-SAP.
MUNE è stato ridotto di circa il 40% nei ratti CTB-SAP, indicando effetti significativi del tempo nel trattamento con CTB-SAP.
