24 ore dopo l'iniezione di nanoparticella magnetica, anti-microRNA 10b, pesare il topo e calcolare il volume di d-luciferina da somministrare per un dosaggio di 150 milligrammi per chilogrammo. Preparare una siringa calibro 28 con il volume che protegge la soluzione dalla luce diretta. Una volta anestetizzato, strofinare delicatamente il topo per evitare di ferire ulteriormente il sito chirurgico e iniettare la dose di d-luciferina per via intraperitoneale.
Lasciare che il mouse si riprenda e attendere 10 minuti prima di eseguire l'imaging. Dopo aver preparato un sistema di imaging in vivo, o scanner IVIS, posizionare il tappetino nero a bassa fluorescenza sul tavolino di imaging e configurare l'array di coni per l'imaging. Nel software, fare clic su Creazione guidata immagini.
Quindi, selezionare l'imaging a bioluminescenza, seguito dal filtro aperto. Nella schermata successiva, selezionare il soggetto dell'immagine e il campo visivo. Posizionare il mouse anestetizzato in posizione prona sullo scanner IVIS.
Fare clic su Acquisisci sequenza e, utilizzando le impostazioni di esposizione automatica con una soglia minima del segnale di 3000 conteggi, acquisire un'immagine per la localizzazione delle cellule di glioblastoma U-251 marcate con luciferasi. Successivamente, nella procedura guidata di imaging, selezionare la fluorescenza, seguita da accoppia filtrata con illuminazione epi. Nella schermata successiva, selezionare la sonda Cy5.5.
Selezionare il soggetto dell'immagine e il campo visivo. Utilizzando le impostazioni di esposizione automatica con una soglia minima del segnale di 6.000 conteggi, acquisire un'immagine per la localizzazione di nanoparticelle magnetiche, anti-microRNA 10b. Posizionare il topo anestetizzato prono sul lettino per risonanza magnetica.
Immobilizzare e posizionare la testa per la scansione utilizzando una barra per morso e barre auricolari. Installare la sonda di temperatura rettale lubrificata e assicurarsi che la respirazione e il monitoraggio della temperatura funzionino. Posizionare la bobina cerebrale del mouse sopra la testa inserendo i pioli sul letto del mouse nei fori sulla bobina e fissare la bobina con del nastro adesivo in posizione per ridurre il movimento durante la scansione.
Posiziona un piccolo tappetino per la circolazione dell'acqua calda sopra la parte superiore del mouse per mantenere la temperatura corporea. Spostare il mouse e il piano di imaging in posizione per la scansione. Nel software di acquisizione, avviare la fase di configurazione dell'oscillazione per regolare e abbinare le bobine MRI.
Assicurarsi che la traccia sia centrata e il più profonda possibile. Acquisisci una scansione del cervello con localizzatore a tre piani. Utilizzando i seguenti parametri, acquisire scansioni bidimensionali pesate in T2 per rilevare il tumore.
Acquisisci una mappa b0 dell'intero cervello per calcolare uno shim localizzato utilizzando l'utilità dello shim della mappa. Usa immagini tridimensionali T2 pesate a stella per visualizzare le nanoparticelle. Con i seguenti parametri, acquisire una mappa stellare T2 per ulteriori immagini di nanoparticelle utilizzando l'immagine bidimensionale pesata in T2 come riferimento per posizionare la scansione sul tumore.
Acquisisci 10 immagini di eco positive con cinque millisecondi di spaziatura temporale dell'eco. Al punto finale sperimentale, pesare il topo e calcolare il volume di d-luciferina da somministrare per un dosaggio di 150 milligrammi per chilogrammo. Condurre l'imaging in bioluminescenza dal vivo 10 minuti dopo l'iniezione, come descritto in precedenza.
Posizionare la capsula di Petri con il cervello asportato dal topo soppresso nello scanner IVIS. Immagini del cervello con entrambe le modalità di bioluminescenza e fluorescenza utilizzando le stesse impostazioni di acquisizione dell'imaging in vivo. I segnali di fluorescenza e bioluminescenza Cy5.5 in topi iniettati con nanoparticelle magnetiche anti-microRNA 10b hanno mostrato una chiara colocalizzazione, indicando la consegna delle nanoparticelle al tumore, mentre i topi di controllo non hanno mostrato alcun segnale di fluorescenza.
L'imaging a fluorescenza ex vivo ha mostrato la localizzazione delle nanoparticelle nei principali organi di clearance, come il fegato e i reni. Una caratteristica diminuzione del segnale di risonanza magnetica pesato in T2 dimostra il potenziale delle nanoparticelle magnetiche, anti-microRNA 10b come mezzo di contrasto per la risonanza magnetica per attraversare la barriera emato-encefalica e il suo accumulo nella regione tumorale.
