La recidiva del tumore è una delle principali cause di fallimento del regime di resezione chirurgica del GBM. Il nostro protocollo fornisce un modello unico di recidiva GBM per efficaci studi di trattamento locale delle recidive, post-ricerca. Questa tecnica fornisce un metodo conveniente e fattibile per costruire il modello post-resezione della recidiva GBM e può essere utilizzata in vari studi sulla recidiva GBM.
Inizia preparando l'animale. Tagliare il cuoio capelluto del topo di circa un centimetro lungo la linea mediana sulla fronte destra con le forbici oftalmiche. Sintonizzare l'apparato stereotassico per assicurarsi che la cucitura a spina di pesce e il punto della fontanella anteriore si trovino allo stesso livello.
Usando un batuffolo di cotone imbevuto di viola genio, segna un punto a un millimetro verso la parte anteriore, 1,8 millimetri a destra e tre millimetri verso il basso rispetto alla fontanella anteriore. Forare il punto usando un trapano mini-cranico di un millimetro di diametro. Creare un poro di circa un millimetro di diametro e un millimetro di profondità.
Rimuovere il liquido spinale cerebrale essudato con un batuffolo di cotone sterile. Quindi, aspirare cinque microlitri di sospensione di cellule tumorali con una microsiringa. Allineare verticalmente la punta dell'ago della microsiringa con il foro di perforazione del cranio e inserirla fino a quando la punta dell'ago entra nel piano del cranio per tre millimetri.
Quindi, ritrarre l'ago di 0,5 millimetri. Aprire la microsiringa e iniettare la soluzione con una velocità di un microlitro al minuto. Trattenere l'ago per 10 minuti dopo l'iniezione.
Quindi, estrarre lentamente la microsiringa e premere il punto di iniezione con un batuffolo di cotone sterile e asciutto. Suturare il cuoio capelluto con una sutura chirurgica 10-0 non assorbibile e disinfettare l'incisione. Monitorare la salute dell'animale e tenerlo in condizioni calde.
Dopo che il topo si è svegliato, spostalo di nuovo nella gabbia dell'alloggiamento. 10 giorni dopo il cuscinetto del tumore, rilevare il tumore trapiantato. Per questo, iniettare il topo per via intraperitoneale con fluoresceina di potassio e, 11 secondi dopo, visualizzare il topo con un sistema di imaging bioluminescente in vivo.
Separare il tessuto del cuoio capelluto e il cranio e controllare il foro di perforazione utilizzato per costruire il modello ortotopico di GBM intracranico. Se il foro è guarito, identificarlo usando un apparecchio stereotassico e praticare il foro come mostrato in precedenza. Espandere l'intero diametro a cinque millimetri con un trapano cranico e rimuovere il liquido spinale cerebrale essudato con un batuffolo di cotone sterile.
Focalizzare il microscopio sulla testa del mouse e regolare le impostazioni per assicurarsi che il foro di perforazione si trovi al centro del campo visivo. Tagliare le meningi con microforbici. Quindi, rimuovere parte del tessuto tumorale con una microcurette e un microbisturi al microscopio.
Interrompere l'emorragia con una garza sterile e lavare l'iniezione con soluzione fisiologica sterile. Utilizzando una siringa da un millilitro, iniettare 10 microlitri di idrogel disponibile in commercio nella cavità di resezione. Utilizzando questo protocollo, le cellule GBM sono state impiantate nel cervello dei topi e la crescita del tumore è stata testata mediante imaging bioluminescente in vivo il giorno 10.
La resezione e l'iniezione di idrogel sono state eseguite il giorno 11. La dimensione dei tumori nel modello post-resezione recidivante GBM era significativamente inferiore a quella nel modello ortotopico di GBM intracranico. Il monitoraggio della crescita tumorale residua al giorno 25 ha mostrato la recidiva dei tumori.
La colorazione H & E ha confermato che il modello post-resezione recidivante GBM è stato costruito con successo e che i tumori residui si sono ripresentati in modo significativo dopo la resezione. La cosa più importante da ricordare in questa procedura è tagliare le meningi e rimuovere parte del tessuto tumorale al microscopio.
