Per iniziare, applica un contorno rettangolare di smalto trasparente sul vetrino. Prepara diversi vetrini per trapianti di questo tipo. Per montare l'animale anestetizzato, utilizzare una pipetta e una pompa Pasteur per trasferirlo da RPT all'agarosio a basso punto di fusione o LMA.
Quindi, trasferisci l'animale in una piccola goccia di LMA sul vetrino all'interno del contorno dello smalto. Prima che l'LMA si solidifichi, utilizzare uno spingitore per embrioni per orientare l'animale verticalmente, con il sito di inserimento dell'ago previsto a destra. E lasciare che l'agarosio si solidifichi completamente per circa cinque minuti.
Usando un bisturi, taglia una fetta verticale diritta attraverso la goccia di agarosio appena a destra dell'animale montato. Rimuovere l'agarosio sciolto dal vetrino. Utilizzando un bisturi, tagliare dei cunei dall'agarosio per esporre il sito di inserimento dell'ago.
Applicare RPT sul vetrino fino a quando le gocce di agarosio non sono completamente sommerse. E montare il vetrino preparato sul microscopio per trapianti. Abbassare l'obiettivo 40X fino a rompere la superficie del supporto e sollevarlo per mettere a fuoco l'animale donatore.
Quindi, metti a fuoco le cellule donatrici di interesse marcate in modo fluorescente. Spostare il tavolino a sinistra in preparazione per individuare l'ago da trapianto.
