Rilevamento di 3-nitrotirosina in ambienti atmosferici tramite un alto rendimento liquido rivelatore elettrochimico cromatografia sistema

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella ricerca ambientale sulla nitrapyrina e la 3-nitrotirosina. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un metodo unico e altamente sensibile per rilevare la 3-nitrotirosina sui filtri del campione d'aria. Per raccogliere particelle totali sospese o particelle di dimensioni inferiori a sette micron, pesare prima un filtro al quarzo binder 3 e fissarlo su un campionatore d'aria ad alto volume. Coprire il filtro con un selettore di dimensioni delle particelle per raccogliere PM7 o lasciare il filtro scoperto alle particelle totali sospese raccolte. Eseguire il campionatore d'aria a 1000 litri al minuto continuamente per sette giorni. Caricare i prefiltri in un'unità di classificazione delle dimensioni e installare l'unità di classificazione delle dimensioni e un filtro di backup sul campionatore d'aria a basso volume. Eseguire il campionatore d'aria a 116 cucciolate al minuto in modo continuo per sette giorni per raccogliere PM2,5 sul filtro di backup. Al termine del campionamento, registrare il volume totale del flusso. Pesare il filtro e calcolare il peso delle particelle raccolte. Sigillare il filtro in un sacchetto di plastica e conservarlo a 30 gradi Celsius.Preparare successivamente 500 microlitri di cocktail di proteasi e tampone di acetato non specifici 6X e posizionarlo in una membrana di dalasi con un taglio del peso molecolare di 5000 dalton. Immergere la membrana riempita in 1 L del tampone di acetato e mescolarla a 4 gradi Celsius per 24-36 ore, sostituendo il tampone ogni 12 ore per rimuovere indogeni 3-nitrotirosina e nitrito.Quindi misurare la concentrazione proteica nella soluzione di proteasi dializzato con un test proteico dell'acido bicinchoninico. Successivamente rimuovere un filtro dal congelatore e lasciare riscaldare a temperatura ambiente mentre è ancora sigillato nella borsa. Quindi punzonare fino a cinque cerchi larghi 6 millimetri dall'area coperta di particolato del filtro e posizionare i cerchi in un tubo di micro centrifuga da 1,5 millilitri. Preparare 300 microlitri di tampone di acetato contenenti 50