La lesione cerebrale traumatica è comunemente associata a compromissione della memoria. Qui, presentiamo un protocollo per valutare la memoria di lavoro spaziale dopo una lesione cerebrale traumatica, tramite un compito metrico. I principali vantaggi delle attività metriche includono la possibilità di osservazione dinamica, riproducibilità a basso costo, relativa facilità di implementazione e ambiente a basso stress.
Per valutare il punteggio di gravità neurologica dopo la lesione da percussione del fluido parasagittale, posizionare il ratto Sprague Dawley adulto al centro di un cerchio di 50 centimetri di diametro, tre volte e monitorare la sua capacità di uscire dal cerchio. Per testare una perdita di riflesso di raddrizzamento, posiziona l'animale sulla schiena nel palmo della mano e dai un punteggio di uno se il ratto è in grado di raddrizzarsi. Per testare l'emiplegia, valutare l'incapacità del ratto di resistere al posizionamento forzato.
Per testare la flessione riflessiva dell'arto posteriore, sollevare l'animale per la coda. Per testare la capacità di camminare dritto, posiziona il topo sul pavimento. Per testare il riflesso della pinna, eseguire una stimolazione leggera e tattile per osservare la retrazione dell'orecchio.
Per testare il riflesso corneale, applicare leggermente un bastoncino morbido all'occhio e misurare la risposta al battito di ciglia. Per testare il riflesso dello startle, trascina una penna sulla parte superiore della gabbia metallica e registra la risposta dell'animale. Per valutare la perdita del comportamento di ricerca in prostrazione, posiziona il ratto in un nuovo ambiente e osserva se il ratto muove i baffi, annusa o corre.
Quindi testare i riflessi degli arti per il posizionamento sugli arti anteriori sinistro e destro seguiti dagli arti posteriori sinistro e destro. Per testare l'equilibrio, eseguire un'attività di bilanciamento del fascio posizionando il ratto su un raggio largo 1,5 centimetri, per una sessione 20, 40 e superiore alla seconda. Quindi eseguire un test di camminata del raggio utilizzando tre travi di diverse larghezze.
Prima di eseguire l'attività metrica, posizionare una piattaforma circolare nera di 200 centimetri di diametro, uno spessore di un centimetro, su un tavolo alto 80 centimetri e posizionare due oggetti al centro della piattaforma, a 68 centimetri di distanza. Installare una telecamera con il software necessario per l'acquisizione, il salvataggio e l'elaborazione dei dati, ad un'altezza di 290 centimetri dal pavimento. Un giorno prima dell'analisi metti il topo sulla piattaforma per 10 minuti per abituare l'animale al nuovo ambiente.
Il giorno dell'attività, posiziona il topo all'estremità della piattaforma, equidistante dagli oggetti per un periodo di assuefazione di 15 minuti e inizia la registrazione. Alla fine del periodo di assuefazione sperimentale, trasferire il ratto in una gabbia individuale per cinque minuti e pulire la piattaforma con alcol dal cinque al dieci percento. Riduci la distanza tra gli oggetti a 34 centimetri, quindi posiziona il topo sulla piattaforma per cinque minuti mentre registri la sua attività di esplorazione.
Pulisci di nuovo la piattaforma, prima di procedere con l'animale successivo. Prima di analizzare i file video, inserire la chiave hardware del software, quindi avviare il software di monitoraggio video e aprire il modello preimpostato. Dopo aver verificato, duplicato e rinominato le impostazioni di controllo e rilevamento della prova dell'arena nel campo visivo principale, fare clic con il pulsante destro del mouse per selezionare cattura sfondo.
Nel menu sfoglia selezionare la posizione del file video da utilizzare come immagine di sfondo. Cattura l'immagine e contrassegna le aree e le zone indagate per calibrare l'immagine per l'analisi. Eseguire la stessa configurazione per le impostazioni di controllo e rilevamento della versione di prova.
Dopo aver scaricato l'elenco dei file video per l'analisi dall'elenco di prova, aggiungi i video e indica la posizione con le impostazioni richieste. Quindi selezionare l'acquisizione e avviare la prova ed esportare tutti i dati in un foglio di calcolo. Il gruppo di controllo non mostra alcun deficit neurologico, 48 ore dopo la lesione fittizia.
Dopo TBI, i deficit neurologici sono significativamente maggiori sia negli animali feriti maschi che femmine. Durante il compito metrico, il tempo di esplorazione dell'oggetto è significativamente più breve per i ratti TBI maschi rispetto ai ratti maschi operati da sham. Lo stesso modello è osservato per le femmine di TBI e le femmine di ratto sham operated.
Seguendo il compito metrico, possiamo eseguire altri metodi per la valutazione della memoria, come il labirinto di Barnes e le attività topologiche e del labirinto d'acqua. Il compito metrico consente anche ulteriori ricerche sulla compromissione della memoria in modelli comparabili di danno neurologico, come modelli di lesioni cerebrali assonali diffuse e ictus.
