Questo protocollo può essere utilizzato per studiare il ruolo di alterazioni genetiche o interventi farmacologici nella funzione cardiaca e nel flusso coronarico nelle prime età postnatali. Il principale vantaggio di questa tecnica è il riconoscimento precoce delle cardiopatologie e degli studi di follow-up longitudinale nell'emodinamica ventricolare sinistra e nei parametri del flusso coronarico in diversi modelli di topi. Gli studi ecocardiografici nei topi neonatali sono tecnicamente impegnativi.
Questo protocollo è progettato per studiare l'insorgenza precoce delle malattie cardiovascolari nei topi neonatali che possono consentire ai ricercatori di progettare le misure terapeutiche appropriate. Inizia con il posizionamento del gel ECG sui cuscinetti degli elettrodi della piattaforma riscaldati. Posizionare strisce di alluminio sopra i cuscinetti degli elettrodi per estendere la gamma di elettrodi e fissarli con del nastro.
Successivamente, posizionare il gel ECG sopra le strisce di alluminio. Assicurarsi che il gel sotto le strisce di alluminio non si asciughi durante la procedura. Se ciò si verifica, aggiungere più gel per mantenere la conduttività.
Posizionare il cucciolo anestetizzato in posizione supina sulla piattaforma di imaging e fissare il dito guantato ritagliato intorno al naso del cucciolo. Posizionare le zampe sopra i cuscinetti di alluminio e fissarli con del nastro adesivo. Assicurarsi che il circuito elettrico sia completo e che l'ECG stia registrando.
Utilizzare due rotoli di garza per mantenere il gel ad ultrasuoni in posizione. Posizionare uno spesso strato di gel ad ultrasuoni preriscaldato sulla parte superiore del corpo del cucciolo. Utilizzare una lampada riscaldante per mantenere la normale temperatura corporea del cucciolo.
Eseguire l'ecocardiografia transtoracica utilizzando uno strumento ecocardiografico dotato di un trasduttore lineare a 40 megahertz per B-Mode e a 32 megahertz per Doppler seguendo protocolli di ecocardiografia di topi adulti. Posizionare il trasduttore nel supporto con il segno indice verso la spalla destra del cucciolo. Abbassare il trasduttore fino a quando non è in contatto con il gel e visualizzare il tratto di efflusso ventricolare sinistro in modalità B.
Evitare di esercitare una pressione eccessiva sulla cavità toracica del cucciolo quando si posiziona l'ecotrasduttore durante l'acquisizione dell'immagine ecocardiografica. Cattura la vista dell'asse lungo parasternale del ventricolo sinistro, del tratto di efflusso ventricolare sinistro e dell'atrio sinistro. Utilizzare M-Mode sui lembi aortici per misurare il diametro massimo dell'atrio sinistro a N-sistole.
Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Ruotare il trasduttore di circa 90 gradi in senso orario rispetto all'asse lungo parasternale per ottenere la vista dell'asse corto parasternale. Cattura la vista dell'asse corto parasternale del ventricolo sinistro per misurare le dimensioni della camera, lo spessore della parete, il flusso aortico e il flusso polmonare.
Posizionare la sonda a livello dei muscoli papillari e utilizzare M-Mode per misurare i diametri interni ventricolari sinistri e lo spessore della parete durante la sistole e la diastole. Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Spostare il trasduttore verso la base del cuore e utilizzare il Color Doppler per visualizzare l'arteria polmonare.
Premere Pulse Wave Doppler per quantificare la velocità del flusso di picco polmonare, i profili di flusso polmonare, il tempo di eiezione polmonare e il tempo di accelerazione polmonare. Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Spostare ulteriormente il trasduttore verso la base e utilizzare Color Doppler per visualizzare il flusso aortico.
Utilizzare Pulse Wave Doppler per visualizzare il flusso sanguigno e misurare il tempo di eiezione aortica. Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Per catturare la vista apicale a quattro camere, posizionare la piattaforma nella posizione di Trendelenburg, inclinarla verso sinistra e regolare la sonda per visualizzare le quattro camere.
Utilizzare Color Doppler per visualizzare il flusso sanguigno e Pulse Wave Doppler sulla punta dei lembi della valvola mitrale al centro dell'orifizio della valvola mitrale per registrare il flusso mitrale. Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Utilizzare Tissue Doppler sul lato settale dell'anulus della valvola mitrale in una vista a quattro camere per misurare la velocità di rilassamento miocardico di picco nel riempimento diastolico precoce e nel riempimento diastolico tardivo, nonché la velocità di contrazione miocardica sistolica di picco.
Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Cattura la vista dell'asse lungo parasternale modificata per esaminare l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. Utilizzare una vista dell'asse lungo parasternale modificata, spostando il trasduttore lateralmente.
Spostare la sonda e utilizzare Color Doppler per visualizzare l'origine dell'arteria coronaria principale sinistra che genera dall'aorta. Identificare l'arteria discendente anteriore sinistra che genera dall'arteria coronaria principale sinistra e corre tra la parete anteriore ventricolare sinistra e il tratto di efflusso ventricolare destro. In questa posizione, misurare il flusso coronarico discendente anteriore sinistro premendo Pulse Wave Doppler.
Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store. Aumentare la concentrazione di isoflurano al 2,5% e attendere cinque minuti per ottenere il flusso massimo. Registrare i dati premendo il pulsante Cine Store.
Nella vista dell'asse lungo parasternale, M-Mode è stato utilizzato per misurare il diametro dell'atrio sinistro. La vista dell'asse corto parasternale è stata utilizzata per misurare le dimensioni della camera ventricolare sinistra e lo spessore della parete, il flusso polmonare e il flusso aortico. La vista apicale a quattro camere è stata utilizzata per esaminare le velocità del flusso sanguigno attraverso la valvola mitrale, nonché le velocità di rilassamento e contrazione miocardica all'anulus della valvola mitrale.
La vista dell'asse lungo parasternale modificata è stata utilizzata per esaminare i parametri di flusso dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. L'aumento dei valori della velocità di picco del flusso coronarico, della velocità media del flusso coronarico e dell'integrale velocità/tempo cinque minuti dopo l'incremento dell'isoflurano ha confermato la risposta attesa all'iperemia nei topi neonatali. A causa delle piccole dimensioni dei cuccioli, è importante mantenere la loro normale temperatura corporea e attaccare strisce di alluminio agli arti per raggiungere gli elettropad e creare un circuito ECG.
