Этот протокол может быть использован для изучения роли генетических изменений или фармакологических вмешательств в сердечной функции и коронарном потоке в раннем постнатальном возрасте. Основным преимуществом данной методики является раннее распознавание кардиопатологий и продольных последующих исследований в гемодинамике левого желудочка и параметрах коронарного потока у разных моделей мышей. Эхокардиографические исследования на неонатальных мышах технически сложны.
Этот протокол предназначен для изучения раннего начала сердечно-сосудистых заболеваний у неонатальных мышей, что может позволить исследователям разработать соответствующие терапевтические меры. Начните с размещения геля ЭКГ на подогретой платформе электродных прокладок. Поместите полоски из алюминиевой фольги поверх электродных подушечек, чтобы расширить диапазон электродов, и закрепите их лентой.
Затем поместите гель ЭКГ поверх алюминиевых полосок. Убедитесь, что гель под полосками алюминиевой фольги не высыхает во время процедуры. Если это произойдет, добавьте больше геля для поддержания проводимости.
Поместите обезболенного щенка в лежачее положение на платформе визуализации и закрепите вырезанный палец перчатки вокруг носа щенка. Поместите лапы поверх подушечек из алюминиевой фольги и закрепите их скотчем. Убедитесь, что электрическая цепь завершена и что ЭКГ записывается.
Используйте два марлевых рулона, чтобы ультразвуковой гель оставался на месте. Поместите толстый слой предварительно подогретого ультразвукового геля поверх верхней части тела щенка. Используйте нагревательную лампу для поддержания нормальной температуры тела щенка.
Выполняйте трансторакальную эхокардиографию с помощью эхокардиографического прибора, оснащенного линейным датчиком массива при 40 мегагерцах для B-режима и при 32 мегагерцах для допплера в соответствии с протоколами эхокардиографии взрослых мышей. Поместите преобразователь в держатель с указательной отметкой к правому плечу щенка. Опустите датчик до тех пор, пока он не соприкоснется с гелем и визуализируйте отток левого желудочка в B-режиме.
Избегайте чрезмерного давления на грудную полость щенка при размещении эхопередатчика во время получения эхокардиографического изображения. Захватите вид парастернальной длинной оси левого желудочка, оттока левого желудочка и левого предсердия. Используйте M-режим на листочках аорты для измерения максимального диаметра левого предсердия при N-систоле.
Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Поверните преобразователь примерно на 90 градусов по часовой стрелке от парастернальной длинной оси, чтобы получить вид на парастернальную короткую ось. Захватите вид парастернальной короткой оси левого желудочка, чтобы измерить размеры камеры, толщину стенки, поток аорты и легочный поток.
Поместите зонд на уровень сосочковых мышц и используйте M-Mode для измерения внутренних диаметров левого желудочка и толщины стенки во время систолы и диастолы. Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Переместите датчик к основанию сердца и используйте цветной допплер для визуализации легочной артерии.
Нажмите pulse Wave Doppler для количественной оценки скорости легочного пикового потока, профилей легочного потока, времени легочного выброса и времени легочного ускорения. Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Переместите преобразователь дальше к основанию и используйте цветной допплер для визуализации аортального потока.
Используйте пульсовую допплерографию для визуализации кровотока и измерения времени выброса аорты. Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Чтобы захватить апикальный четырехкамерный вид, поместите платформу в положение Тренделенбурга, наклоните ее влево и отрегулируйте зонд для визуализации четырех камер.
Используйте цветной допплер для визуализации кровотока и пульсовую волновую допплерографию на кончике створок митрального клапана в центре отверстия митрального клапана для записи митрального потока. Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Используйте тканевый допплер на перегородочной стороне кольцевого кольца митрального клапана в четырехкамерном виде для измерения пиковой скорости релаксации миокарда в раннем диастолическом заполнении и позднем диастолическом заполнении, а также пиковой скорости систолического сокращения миокарда.
Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Захватите модифицированный вид парастернальной длинной оси, чтобы исследовать левую переднюю нисходящую коронарную артерию. Используйте модифицированный вид парастернальной длинной оси, перемещая преобразователь в боковом направлении.
Переместите зонд и используйте цветной допплер для визуализации происхождения левой главной коронарной артерии, которая генерируется из аорты. Определите левую переднюю нисходящую артерию, которая формируется из левой главной коронарной артерии и проходит между передней стенкой левого желудочка и оттоком правого желудочка. В этом положении измерьте левый передний нисходящий поток коронарной артерии, нажав пульсовую волновую допплеровскую.
Запишите данные, нажав кнопку Cine Store. Увеличьте концентрацию изофлурана до 2,5% и подождите пять минут, чтобы достичь максимального потока. Запишите данные, нажав кнопку Cine Store.
В виде парастернальной длинной оси M-Mode использовался для измерения диаметра левого предсердия. Вид парастернальной короткой оси использовался для измерения размеров камеры левого желудочка и толщины стенки, легочного потока и потока аорты. Апикальный четырехкамерный вид использовался для изучения скоростей кровотока через митральный клапан, а также скоростей расслабления и сокращения миокарда в кольце митрального клапана.
Модифицированный вид парастернальной длинной оси использовался для изучения параметров течения левой передней нисходящей коронарной артерии. Повышенные значения пиковой скорости коронарного потока, средней скорости коронарного потока и интеграла скорости/времени через пять минут после приращения изофлурана подтвердили ожидаемую реакцию на гиперемию у неонатальных мышей. Из-за небольшого размера щенков важно поддерживать их нормальную температуру тела и прикреплять полоски из алюминиевой фольги к их конечностям, чтобы добраться до электропадов и создать контур ЭКГ.
