定位空間における非ヒト霊長類の脳を解剖

要約

ヒト以外の霊長類は脳の正常な処理の理解のための重要な並進種です。霊長類の脳の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することができます。

要約

ヒト以外の霊長類の使用は、ヒトの発達と老化の理解のための優秀な翻訳モデルを提供

プロトコル

パート1：組織の前処理

1. 組織はよくパラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。これは通常、他の臓器を収穫するために使用される標準transcardial灌流によって達成することができます。完全にexsanguinated.Thisが続いされるまで本研究では被験者は深く、（10 mg / kgを、IM）塩酸ケタミンで鎮静したペントバルビタールナトリウムの過剰投与（25 mg / kgを、IV）を使用して、安楽死させ、0.1MのPBSでtranscardially灌流5分（〜1リットル）のためのPBS中4％パラホルムアルデヒド溶液で。

パート2：固定装置ブロッキング

1. 前の定位フレームにヘッドを配置するHorsley-Clarke/interaural面のゼロの座標は、注意が必要です。これは耳の間に理論上の中間点です。この平面を測定するには、耳のバーが同じように装置に装着する必要がある、そして定位マニピュレータのアームで手術用メスの刃を配置し、耳の棒の間に中間点を測定する。これは、研究のニーズに基づいて組織をブロックする場所を決定するために重要です。これが完了すると頭蓋骨は、定位固定装置に固定のために準備する必要があります。
2. 定位フレームに頭部を置くために下顎は骨Rongeursとメスで削除する必要があります。さらに皮膚、筋肉、および結合組織は、頭蓋骨を露出させるために削除する必要があります。結合組織が頭蓋骨から削除されると、頭蓋冠を（後頭骨の表形式の部分だけでなく、頭頂葉、広告前頭葉の骨）離れ​​てチッピングすることにより、脳を公開。頭蓋冠の本実験の一部ではすべての準備は削除されました。外耳道は、定位フレームに頭部を置くためにそのままにする必要があるので完全に頭の骨を削除しないように注意してください。残りの硬膜を露出脳から削除する必要があります。頭蓋骨は今定位フレームに配置する準備が整いました。
3. 一定位手術を行うというのと同じ方法で、頭がしっかり定位固定装置に固定されているような眼、口蓋、およ​​び耳のバーを調整します。所定前方/後方（/ P）の座標に定位マニピュレータを配置し、脳の外側面にマニピュレータを移動する。徐々に完全にして内側に移動し、再度ブレードを下げ、脳からのブレードを高める、脳内にブレードを下げる。ブレードは、反対半球の外側面に達するまで、これらの2つの手順を繰り返します。これは、最初の冠状ブロックが完成。脳全体がブロックされるまで、後続のコロナのブロックに対して/ Pの軸と繰り返しでマニピュレータの1センチメートルを移動する。

パート3：頭蓋骨から脳を削除する

1. 定位フレームからヘッドを取り外して、あなたの手のひらの上で露出脳を開催。軽くcoddling手のひらサイズの脳を配置することにより、脳を保護すると、前頭葉全体で頭蓋骨の脳のこの最小限に抑える動きをして小指を配置してください。脳の軟膜表面の乾燥を防ぐために、PBSの一部が脳全体にガーゼを湿らせた置きます。しっかりと脊柱と一緒に頭蓋骨とチップ離れて、残りの後頭部や側頭骨で頭をホールド。これは、脳の基底部と外側の側面を公開します。最後に、嗅球へのアクセスを許可する任意の残りの前頭骨と鼻の骨を、削除してください。あなたが頭蓋底を削除すると、脳がわずかに動くと前頭葉が源泉の骨のギザギザのエッジに損傷を受けることができるので、それは最後の前頭骨を除去することが重要である。切り取ると、残りの硬膜を除去。慎重に、脳と頭蓋骨から無料の脳の下にメスをスライドさせ、脳の前部を持ち上げ。

パート4：測定

1. 前に凍結させることができる便利な測定値の数があります。キャリパーと脳の例については、A / P軸。さらに、特定の密度は、体積変位（表1）で重量を割った後、メスシリンダー中の水の変位による体積を測定し、脳の重量を量ることによって測定することができます。

パート5：脳をブロック終了。

1. 手術用メスの刃が脳内に挿入されたときに、通常、それは完全に脳の完全な背腹範囲に浸透するのに十分な長さがありません。脳が削除され、総測定値を取得すると、組織スライス刃を取ると脳の腹側（図2）に至るまで、脳をブロック終了。
2. ブロックを凍結する前に、それは脳のシンクまで4˚Cで維持傾斜PBS -バッファショ糖溶液（10、20、および30％）で組織をcryoprotectする必要があります。それは、通常、容器の底に沈むためにブロックの30％で10％、20％で2〜3日と追加の3-5日で一晩インキュベーションを取ります。番目の日々の変化E 30％ショ糖溶液をお勧めします。

パート6：代表的な結果

脳が頭蓋骨から削除されている回だけ行うことができます総形態的測定値の数があります。これらは、/ Pの長さ、重量、および特定の密度を（表1）が含まれます。我々は一般的に1CM（図1）を測定する6〜7ブロックに脳をブロックする。各ピースを撮影される（図2）と、さらなる研究の必要性に応じて解剖したり、段階的なショ糖溶液中で凍結のために調製することができる。

対象と	/ Pの長さ （㎜）	重さ （グラム）	水置換 （ml）を	特定の密度 （g / mlの）
O2303 - 2 - 1 - 1	64.3	28.1	24	1.171
O5180 - 1	71.3	38.7	34	1.138
O2708 - 3 - 1	62.8	28.7	26	1.104
O9184 - 4 - 2	65.3	29.5	24	1.229
N459 - 1 - 14 - 2	68.2	31.6	26	1.215
AVERAGE	66.38	31.32	26.8	1.171
STD DEV	3.38	4.33	4.17	0.052

表1 5月旧Vervetsの右半球の総形態学的測定

図1。脳をブロックするために使用される冠状面の回路図。これは、外部化された成人のベルベット脳の例です。ブロッキング手順の例。ここに縦の線は、通常、それぞれの半球から7冠状ブロックを生成する、1センチメートルで離間している。

図2。定位空間における脳組織のブロックは、各ブロックは、50μmので撮影した約200のセクションが得られます。冠状面でスライスしたときにこのサンプリング方式と皮質を介して1200以上のセクションは、小脳から取られ、追加の400から500になります。

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ディスカッション

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資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Scalpel blades	Fine Science Tools	10011-00
Scissors	Fine Science Tools	14090-11	Any surgical scissors are sufficient
Rongeurs	Fine Science Tools	16121-14
Forceps	Fine Science Tools	11027-12
Filter paper	Fisher Scientific	09-924-150
Stereotaxic Frame	Kopf Instruments
Tissue slicing blade	Thomas Scientific