CD4 +ミルテニーMACS精製を使用してマウスのリンパ節からT細胞の分離

要約

ミルテニーMACのキットを用いてリンパ球の分離は、全体のリンパ組織のホモジネートから細胞を浄化するために信頼性の高い方法です。国内でのみ有効のシステムを使用して精製した細胞は通常、≥96パーセント純粋です。ここで、我々は、CD4 + T細胞、ミルテニーが提供する多くのキットのいずれかを特定するために行った手順を示します。

要約

一次ソースからの細胞の分離には多くの複雑なプロトコルにするために必要なステップです。ミルテニーは、ヒト、非ヒト霊長類、ラットと、我々がここで説明するように、マウスを含め、いくつかの生物から細胞を単離するキットを提供しています。磁気ビーズをベースの細胞分離には、ポジティブ選択（または細胞の枯渇）と同様に負の選択のどちらかが可能になります。ここで、我々はそのまままたはNA VEのCD4 +ヘルパーT細胞の負の選択を示しています。この標準プロトコルを使用して、我々は通常、≥96パーセント純粋なCD4 + / CD3 +である細胞を精製する。このプロトコルは、プロトコルの解剖と養子のイメージングを目的として転送するT細胞と他の細胞型の浄化のために、Joveの第7号に掲載されたマウスの末梢リンパ節の2光子イメージングと組み合わせて使用​​されます。我々はこのプロトコルのビデオでFACS分析を示すしなかったが、それは非常にFACSを経由して適切な抗体を用いて単離された細胞の全体的な純度をチェックすることをお勧めします。さらに、我々はT細胞の分離の非滅菌方法を示しています。無菌細胞が特定のエンドユーザーのアプリケーションに必要な場合は、標準的な無菌条件下で組織培養フードに示した手順のすべてを行ってください。独自の実験を見て、幸運をありがとう！

プロトコル

で国内でのみ有効キットまたはオンラインに含まれるプロトコル読み、その指示に従ってくださいhttp://www.miltenyibiotec.com/を 。

ディスカッション

一次ソースからの細胞の分離には多くの複雑なプロトコルにするために必要なステップです。ミルテニーは、ヒト、非ヒト霊長類、ラットと、我々がここで説明するように、マウスを含め、いくつかの生物から細胞を単離するキットを提供しています。磁気ビーズをベースの細胞分離には、ポジティブ選択（または細胞の枯渇）と同様に負の選択のどちらかが可能になります。ここで、我々はそのまままた?...

資料

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
MACS Buffer	Reagent	None	None	Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation	Reagent	Miltenyi	130-090-860	For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Reagent			For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish	Other	Corning Cell Culture Surfaces	430588	Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer	Tool	BD Falcon	352350	Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe	Tool	Tyco Healthcare	8881516051	Used in the preparation of a single cell suspension.
10x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)	Reagent	Invitrogen	14200-075	For use in RBC lysis.
Sterile Water	Reagent	Sigma	W4502	For use in RBC lysis.