Выделение CD4 + Т-клеток от мышей лимфатических узлов с помощью Miltenyi MACS очистки

Резюме

Выделение лимфоцитов с использованием набора Miltenyi ПДК является надежным способом очищают клетки от целых лимфоидной гомогенатах ткани. Клетки очищали с использованием системы Miltenyi, как правило, ≥ 96% чистой. Здесь мы демонстрируем, шаги, предпринятые для изоляции CD4 + Т-клеток, одна из многих комплектов, предлагаемых Miltenyi.

Аннотация

Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделения позволяет либо положительного отбора (или элементов истощения), а также негативный отбор. Здесь мы показываем негативный отбор нетронутой или наивны CD4 + Т-клетки. Используя этот стандартный протокол мы обычно очищают клетки, которые ≥ 96% чистой CD4 + / CD3 +. Этот протокол используется в сочетании с Dissection протокол и 2-Фотон изображений периферических лимфатических узлов у мышей опубликована в выпуске 7 Юпитера, для очистки Т-клеток и другие типы клеток, чтобы восприимчиво передачу для работы с изображениями целей. Хотя мы не продемонстрировали FACS анализ в этом видео протокол, настоятельно рекомендуется проверить общую чистоту изолированных клеток с использованием соответствующих антител с помощью FACS. Кроме того, мы демонстрируем нестерильный способ выделения Т-клеток. Если стерильные клетки необходимы для конкретного конечного пользователя приложения, убедитесь, что сделали все продемонстрировали процедур в капюшоне культуры ткани при стандартных стерильных условиях. Спасибо за внимание и удачи в ваших собственных экспериментов!

протокол

Пожалуйста, прочитайте и следуйте протокол, входящий в комплект Miltenyi или на сайте http://www.miltenyibiotec.com/ .

Обсуждение

Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделе?...

Материалы

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
MACS Buffer	Reagent	None	None	Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation	Reagent	Miltenyi	130-090-860	For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Reagent			For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish	Other	Corning Cell Culture Surfaces	430588	Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer	Tool	BD Falcon	352350	Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe	Tool	Tyco Healthcare	8881516051	Used in the preparation of a single cell suspension.
10x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)	Reagent	Invitrogen	14200-075	For use in RBC lysis.
Sterile Water	Reagent	Sigma	W4502	For use in RBC lysis.