Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification

Zusammenfassung

Isolation von Lymphozyten mit der Miltenyi MACs Kit ist eine zuverlässige Methode, um Zellen aus ganzen lymphatischen Gewebe-Homogenaten zu reinigen. Cells unter Verwendung der Miltenyi-System sind in der Regel ≥ 96% rein. Hier zeigen wir, welche Schritte unternommen wurden, um CD4 + T-Zellen, einer der vielen Kits von Miltenyi angeboten isolieren.

Zusammenfassung

Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in der Regel zu reinigen Zellen, die ≥ 96% reine CD4 + / CD3 + sind. Dieses Protokoll ist in Verbindung mit dem Protokoll Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen in Heft 7 des Jupiter veröffentlicht, für die Reinigung von T-Zellen und anderen Zelltypen zu adoptiv für bildgebende Zwecke übertragen werden. Obwohl wir nicht zeigen, FACS-Analyse in diesem Protokoll video, ist es dringend empfohlen, die gesamte Reinheit der isolierten Zellen mit den entsprechenden Antikörpern via FACS überprüfen. Darüber hinaus zeigen wir die nicht-sterile Methode der T-Zell-Isolierung. Wenn sterile Zellen für Ihre Endbenutzer-Anwendung benötigt werden, sollten Sie alle bewiesen Verfahren in der Gewebekultur Haube unter Standard-sterilen Bedingungen zu tun. Wir danken Ihnen für das Ansehen und viel Glück mit Ihrem eigenen Experimenten!

Protokoll

Bitte lesen und befolgen das Protokoll in der Miltenyi-Kit oder online unter einbezogen http://www.miltenyibiotec.com/ .

Diskussion

Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wi...

Materialien

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
MACS Buffer	Reagent	None	None	Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation	Reagent	Miltenyi	130-090-860	For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Reagent			For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish	Other	Corning Cell Culture Surfaces	430588	Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer	Tool	BD Falcon	352350	Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe	Tool	Tyco Healthcare	8881516051	Used in the preparation of a single cell suspension.
10x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)	Reagent	Invitrogen	14200-075	For use in RBC lysis.
Sterile Water	Reagent	Sigma	W4502	For use in RBC lysis.