双発性貧血多血症シークエンスによる胎盤の色差の評価

要約

双子貧血多血症配列(TAPS)を有する単絨毛膜双生児では、ドナー双生児とそれに対応する胎盤シェアは淡いですが、レシピエント双生児とその胎盤シェアは多候性です。ここで提示するのは、出生後のTAPS胎盤の母体側の色の違いを定量化するプロトコルです。

要約

双生児貧血多血症配列(TAPS)は、単絨毛性双生児の5%に発生し、双胎間のヘモグロビンに大きな差があることを特徴としています。TAPSの出生後の診断基準は、血液学的パラメータと胎盤特性に基づいています。出生後の胎盤検査では、貧血性双生児と多血症性双生児の胎盤領域の間の母体側の色が著しく異なることが示されています。TAPS胎盤の色差は、急性周産期胎児-胎児輸血を伴う単絨毛膜胎盤と比較して高いです。したがって、これは TAPS の追加の診断基準として使用されます。ImageJなどのソフトウェアにより、TAPS胎盤の色強度をコンピュータベースで測定することができます。ただし、TAPS胎盤の貧血成分と多血球症成分の色差を計算するための詳細な方法はまだ説明されていません。ここで紹介するプロトコルは、ImageJソフトウェアを使用してTAPS胎盤の母体側の色差を分析するための段階的な方法を提供します。

概要

TAPSは、胎児-胎児輸血症候群の慢性型であり、オリゴ-ポリヒドラムニオ配列¹の徴候を伴わない大きな双胎間ヘモグロビン(Hb)の違いを特徴としています。TAPSの主な病因は、独特な胎盤血管構造に関連しており、ごくわずかな吻合により、ドナー(貧血双生児)からレシピエント(多血球双生^児)への慢性的かつ低速の輸血が可能になります^2,3,4。TAPSの出生後診断は、Hbの大きな差と大きな網状赤血球数の差を示す血液学的検査、および/または色素による胎盤注射がごくわずかな吻合のみを示すことに基づいています⁵。しかし、網状赤血球の数は出生時に常に測定されるわけではなく、胎盤注射はほとんどの胎児医療センターで日常的に行われているわけではありません。追加の診断基準は、網状赤血球数の測定や胎盤色素の注射がない症例の診断に役立つ場合があります。ドナー双生児の淡い肌とレシピエント双生児の多肌との間には、出生時にTAPS双生児に一貫して顕著な色差が見られます。貧血性双生児と多血症の双子の胎盤領域間の母体側の同様の色差も、肉眼的検査で検出されます。

最近、この胎盤の色の違いは、出生後のTAPS診断を確認するための簡単で正確な方法として使用できるという仮説が立てられています⁶。TAPSプラセンタの色差の定量化は、プラセンタ注射と比較して時間を節約できます。さらに、TAPS 胎盤の色差の定量化は、網状赤血球の数と比較して費用対効果が高くなります。この方法で使用される材料は、臨床現場で容易に入手できるため、この方法はTAPSの診断のためのシンプルで正確な基準を提供します。このプロトコルは、TAPSを用いたモノ絨毛膜胎盤の母体側からの色差を定量化するための詳細な方法を説明しています。

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プロトコル

このプロトコルは、ライデン大学医療センターの倫理委員会によって承認され、ヒト単絨毛膜双胎盤の出生後検査は、ライデン大学医療センターの標準治療の一部です。ライデン大学医療センターでは、ヒト単絨毛膜双胎盤の出生後検査の同意取得が免除されます。

1. TAPS胎盤採取と肉眼検査

1. すべてのヒト単絨毛膜双胎盤を使用し、TAPSは任意の在胎週数で送達されます。.ヒトの単絨毛膜双胎盤をできるだけ無傷に保ちます。手動での除去が必要な場合は、単絨毛膜胎盤をできるだけ穏やかに送達します。.
   注:出生後、助産師または新生児科医は、TAPS胎盤をプラスチックの箱に移し、次に検査室に移す必要があります。
2. 最初の乳児が出産されたら、1つのクランプを使用してへその緒をクランプし、出生順序を最初のものとしてマークします。もう一方の乳児が出産されたら、2つのクランプを使用してへその緒をクランプし、出生順序を2番目としてマークします。
3. 胎盤の無傷性、臍帯挿入の種類、臍帯の数、分割膜の肉眼的検査など、胎盤を肉眼的に検査して、絨毛膜を確認します。単絨毛膜の病理学的診断のために双晶間膜を採取します。TAPS胎盤の直径は在胎週数に依存します。
   注:母体側に癒着性血栓が形成されないように、検査は出産後1週間以内に行う必要があります。
4. 必要に応じて、検査まで、胎盤を乾燥したプラスチックの箱に冷蔵(1〜4°C)保管してください。

2.胎盤母体側の準備

1. はさみを使用して胎盤の端に沿って羊膜をトリミングします。メンブレン上の血管に注意を払い、胎盤腫瘤から血液が流出するのを防ぐために、ベラメントコード挿入が存在する場合は注意を払います。
   注:腹腔索挿入では、臍帯からの血管は、胎盤腫瘤に付着する前に羊膜の表面にある程度の距離移動します。「裸」の血管を切断すると、胎盤腫瘤からの血液が流れ出て混乱する可能性があります。
2. 胎盤葉の損傷を防ぐために、血栓を慎重に取り除きます。
3. 母側の胎盤葉を整理して、葉の間の隙間をなくします。胎盤には通常約15の葉があり、母体側で識別できます。

3. 書類作成の準備

1. 胎盤を母体側を上に向けてプラスチックパネルに置きます。
2. 胎盤の母体側を光にさらします(左側と右側に2つの同一のランプを使用して均一に分布します)。ランプは光量を調整する機能を持つものを使用してください。
3. 反射を減らすには、穏やかな光の条件でカメラ(Table of Materials)でデジタル写真を撮り、光源に直接さらさないようにします。
4. 胎盤の母体に対して垂直に写真を撮ります。

4. ImageJによるコンピュータ計測

1. ソフトウェアアイコンをクリックして、コンピューターでImageJを開きます。
2. 「ファイル」をクリックし、「開く」をクリックして胎盤の写真を開きます。必要な画像が開いたら、「画像」 | 「カラー」、次に「チャンネルツール」の順に選択して、ドロップリストから「カラー」を選択します。
   注意: ソフトウェアは、測定されたオブジェクトの色を自動的に識別できます。胎盤は赤です。ソフトウェアでは、「カラー」をクリックすると、胎盤画像が自動的に赤色スペクトルチャネルに変換されます。
3. 「フリーハンド選択」をクリックして、胎盤の母方側の異なる色の強度を目視検査することにより、多血球性双生児と貧血性双生児の多胎盤と淡い胎盤の割合をそれぞれ輪郭を描きます。
4. 「分析」をクリックします | 「ヒストグラム」。色強度ヒストグラムは、それぞれ過多領域または淡い領域を選択した後で取得します。強度ヒストグラムに表示されるモードは、選択した胎盤領域に最も存在する色を表します。
5. 貧血性双生児の色強度モードを多血球双生児の色強度モードで割ることにより、色差比を計算します。

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結果

胎盤検査は、TAPSの診断に貴重な情報を提供します。TAPS胎盤は、小さな血管吻合がほとんどないという特徴^{があります1} (図1、 図2)。TAPS胎盤のこの特徴は、TAPSの病因に関連しており、出生後の診断基準です。新生児が出生時の色と同様に、TAPSにおけるレシピエント双子の胎盤シェアは通常、暗くて多量で...

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ディスカッション

私たちの経験に基づいて最適な検査を達成するための重要なポイントには、1)特に手動による除去が必要な場合に、損傷を避けるために胎盤をできるだけ穏やかに送達すること。2)癒着性血栓の形成を避けるために、出生直後にMC胎盤を検査します(できれば数日以内に)。3)すべての血栓を穏やかに除去し、胎盤葉の損傷を防ぎます。4)MC胎盤の母体側を均一な光条件に?...

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資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
20 ml syringes	BD Plastipak	300613
Color dye	Royal Talens Schoolverf	36716010 (blue); 36715010 (green); 36712350 (yellow); 36713570 (pink)
Digital camera	Canon Inc.	ixus 125 hs
ImageJ	National Institute of Health	For Windows ImageJ bundled with 64-bit Java 1.8.0_112
Umbilical catheters	Vygon	1270.08 (8 F) 1270.08 (5 F) 1270.04 (4 F) 1270.03 (3.5 F) 1270.02 (2.5 F)