1. 樹脂の読み込み

1. 100 mL ペプチド合成容器 2 chlorotrityl 塩化 (CTC) 樹脂 (1.1 ミリ モル/g、0.360 g、0.400 mmol) を追加します。N の下で 30 分間、膨張するようにし、20 mL DMF 追加_2.
2. 真空下でビーズをドレインし、10 mL の DMF を追加します。
3. 500 mg fmoc 保護翼 OH を追加 (1.60 m モル) と 2.5 mL i -Pr₂エタネルセプトと N₂ 15 分のミックス。
4. 真空下で溶媒をドレインし、15 分間 fmoc 保護翼ああで読み込みを繰り返します。
5. 真空下で溶媒をドレインし 10 ml DMFunder N₂ビーズを洗浄し、真空 3 下でドレイン x。

2. 難病 fmoc 保護グループ

1. DMF で 10 mL 20 %4 methylpiperidine を追加して 15 分間 N₂の下でビーズをかき混ぜます。
2. 真空下で溶媒をドレインし、難病を繰り返します。
3. 3、真空下で N₂ドレイン下 10 mL DMF でビーズを洗う x。

3. カイザー テストを実行します。

1. カイザー テストを実行 1-2 滴の溶液 (0.5 mL 0.01 M KCN、24.5 mL ピリジン)、ソリューション B を追加 (1 g ニンヒドリン、20 mL のn-ブタノール)、およびソリューション C (20 g のフェノール、10 mL のn-ブタノール) 2 つの試験管にそれぞれ。他は反応を監視しながら、1 つのテスト チューブはコントロールになります。
2. 反応試験管と 110 ° c. に 2 つの試験管を加熱する反応容器から樹脂のいくつかのビーズを追加します。
3. 難病が完了すると、試験管の内容は濃い青/紫の色になります。難病が不完全または障害が発生した、ソリューションが黄色のままになります。コントロール テスト チューブと反応テスト チューブを比較します。

4. 次のビルディング ブロックの結合

1. 真空下で溶媒をドレインします。
2. 10 mL のNとビーズを洗う-メチル-2-ピロリドン N₂真空下で溶媒を下水管の下。
3. 次の結合を開始する追加 10 mL NMP、620 mgFmoc Phe-オハイオ州 (1.6 モル)、610 mg HBTU (1.6 モル) と 2.5 mLi -Pr₂エタネルセプト、バブルの N₂ 30 分の下に樹脂ができ。
4. 真空下で溶媒をドレインします。
5. 3、真空下で N₂ドレイン下 10 mL DMF でビーズを洗う x。
6. カイザーを実行 (手順 3.1 3.3 参照) をテスト カップリングの完成を見る。ビーズや試験管でのソリューションは、黄色いはずです。

5. 樹脂をペプチドの切断

1. 2.1 2.3 の手順を使用して残りの fmoc 保護グループを切断します。
2. 真空下で溶媒を排出後は、ガレージと 3 h の N₂バブル 40 mL 胸の谷間ソリューション (95 %tfa、2.5% H₂O、2.5% のヒント) を追加します。
3. ペプチド合成装置に新しい受信フラスコを置き、新しいフラスコに真空下で目的のペプチドを含む theTFA 溶液を排水します。

6. 沈殿物とペプチドの solation

1. 4 円錐バイアルに TFA 溶液を分離し、ペプチドを沈殿させる各バイアルに 25 mL の冷たいエーテル (− 20 ° C) を追加します。
2. 遠心分離機のバイアル (3,000 rpm、0-4 ° C) 20 分の円錐形の瓶から残りの TFA とエーテルの溶液を捨て、白色固体として必要なジペプチドを余裕にペプチド沈殿物に集中します。