Processing Murine Small Intestine for Crypt Isolation

安楽死させた動物から小腸を分離することから始めて、組織をペトリ皿に移します。実験用ハサミとピンセットを使用して、小腸から脂肪組織を取り除きます。次に、小腸をいくつかのセグメントに切断します。

5ミリリットルの注射器を使用して、5ミリリットルの冷たいPBS-抗生物質で小腸を洗い流し、管腔の内容物を取り除きます。実験用ハサミを使用して組織を縦に切り開きます。次に、振とうしながら冷たいPBS-抗生物質で手動で洗浄します。

実験用ハサミを使用して、腸の部分を約5ミリメートル×5ミリメートルの大きさに切ります。ピペットを使用して、収集した破片を50ミリリットルのチューブに移します。次に、組織片を含むチューブに25ミリリットルの冷たいPBS-抗生物質を加え、チューブを前後に10回振って、組織断片から腸の内容物を洗い流します。

洗浄後にバッファーを吸引します。これで、組織片を陰窩分離する準備が整いました。