Organoid Culture from a Single Intestinal Stem Cell

単一のエリスロポエチン産生肝細胞受容体B2、またはFEB2陽性腸管幹細胞からオルガノイドを作製するには、FEB2発現に基づいて蛍光活性化細胞選別を行い、得られた細胞を高、中、低、陰性の4つのグループに分けます。FEB2高細胞ペレットを390Gで摂氏4度で3分間遠心分離して回収した後、ピペッティングによって単一の選別されたFEB2高細胞をECMに埋め込み、次に細胞を24ウェルプレートに1ウェルあたり40マイクロリットルのECMあたり100シングレットで播種します。ECMを重合するために、24ウェルプレートを摂氏37度と5%二酸化炭素で15分間インキュベートします。

次に、最初の2日間は、10マイクロモル行関連キナーゼまたは岩石阻害剤を含む500マイクロリットルの培養液でECMを覆い、FEB2の高い細胞を維持します。倒立顕微鏡を使用して40倍の倍率で細胞を手動で検査し、スフェロイド形成と陰窩突起のある生存可能なオルガノイドを観察します。正常な小腸を連想させる自己組織化陰窩ヴィラ構造は、単一のFEB2高細胞から再現されました。

培養5日目までにスフェロイド様構造が形成され、7日目から9日目にかけて、陰窩を形成するためのスポットの避難が起こった。