先に得られたA2780セルペレットに500マイクロリットルの溶解バッファーを加えることから始め、最小開口直径2ミリメートルのカットチップを使用して穏やかに混合します。新たに調製したRNaseをミリリットルあたり20マイクログラム加え、穏やかな反転で混合します。摂氏37度で30分間インキュベートします。
インキュベーションの終わりに、プロテイナーゼKをミリリットルあたり100マイクログラムの最終濃度まで加え、穏やかに10回反転させます。摂氏55度で1時間インキュベートし、10分ごとにチューブを反転させます。500マイクロリットルのフェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール試薬をチューブにピペットで入れ、チューブを約20回静かに反転させます。
室温で15分間9, 391 gで遠心分離します。上部の水性粘性層を新しいチューブにピペットで入れます。等量のクロロホルムを加え、穏やかに反転させて混合する。
チューブを一度遠心分離した後、水層を回収する。チューブに適量の5モル塩化ナトリウムを加えて、濃度を0.2モル増加させます。チューブに2容量の100%エタノールを加え、穏やかに20回反転させます。
室温で5分間15, 871 Gで遠心分離します。上清を捨てた後、500マイクロリットルの70%エタノールを加える。同じ条件で再度遠心分離し、上清を廃棄する。
ペレットが風乾されたら、50マイクロリットルの滅菌ヌクレアーゼ遊離水を加えて再水和させます。次に、カットチップを使用してピペッティングしてDNAを混合します。UV分光光度法を使用して、DNAの濃度を測定します。
DNAを消化した後、0.8%アガロースを使用して分離します。アガロースゲルを0.25モルの塩酸溶液に室温で10分間沈め、穏やかに攪拌します。次に、ゲルを蒸留水で2回すすぎます。
DNAを変性させるには、ゲルを水酸化ナトリウムと塩化ナトリウムの溶液に浸します。次に、ゲルを蒸留水で2回すすぎます。実証されたようにDNAを中和するために、pH 7で0.5モルの塩酸と3モルの塩化ナトリウムの溶液にゲルを沈めます。
抽出器ゲノムDNAは、テロメア制限断片のさらなる下流処理へのその使用を示す良好な完全性を示した。
