二重色のF1シロイヌナズナの薬理学的分析を開始するには、7日齢のトランスジェニック苗の子葉を解剖して取り除きます。500マイクロリットルの30マイクロモルのブレフェルジンAまたはBFA溶液を1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに加えます。解剖した苗をその中に浸します。
10ミリリットルのシリンジをマイクロ遠心チューブにしっかりと取り付け、1分間真空にします。イメージングの前に、溶液中のサンプルを30分間インキュベートする前にシリンジを取り外します。次に、解剖した7日齢の苗を25ミリモルの麦汁に浸します。
浸漬したサンプルを30分間インキュベートする前に、真空を1分間適用します。トランスジェニック植物におけるERL-1輸送経路を調べると、ブレフェルジンA溶液に30分間曝露すると、BFAボディとして知られる大きなコンパートメントでERL-1-YFPが検出されることが示されました。ブレフェルジンAがERL-1の輸送をブロックできることを示し、ERL-1のリサイクルまたはエンドサイトーシスを示唆しています。
トランスジェニックをワートマニンで30分間処理すると、WM体と呼ばれるリング状の構造がERL-1-YFPによって強調されました。ERL-1-YFPが多胞体に輸送されることを示し、ERL-1が分解のために液胞への経路をたどったことを示しています。
