Assessing Acinetobacter Biofilm Viability Count

まず、滅菌ポリスチレン12ウェルプレートの各ウェルに1ミリリットルの細菌接種物を添加します。プレートを摂氏25度で24時間インキュベートします。その後、ピペットで上清を取り除きます。

1.5ミリリットルの滅菌リン酸緩衝生理食塩水またはPBSを各ウェルに慎重に加え、再度、ピペットで上清を取り除きます。各ウェルに1ミリリットルの滅菌PBSをもう一度添加した後、取り付けたセルスクレーパーを使用してウェルの底面と壁面をこすり落とします。採取した細胞懸濁液を、10とマークされた滅菌プラスチックチューブに移し、9ミリリットルの生理食塩水と10〜20個のガラスビーズを含むネガティブチューブに移します。

チューブを最高速度で60秒間ボルテックスします。次に、1ミリリットルの細胞懸濁液を前のチューブから10とマークされた別の滅菌チューブに移し、9ミリリットルの生理食塩水を含むマイナス2チューブに移すことにより、10倍の段階希釈を行います。チューブ10からマイナス7まで段階希釈のこのプロセスを続けます。

各希釈液から100マイクロリットルを別々のアシネトバクター寒天プレートに広げます。寒天プレートを摂氏30度で24〜42時間インキュベートします。次に、10〜250の範囲のものを考慮して、各プレート上の典型的な赤いコロニーの数を手動で数えます。

A.bouvetiiを除くすべてのアシネトバクター分離株は、バイオフィルムにウェルあたり7〜8log CFUに相当する細胞を持っていました。一方、A.bouvetiiは4.4 Log CFUと細胞数がはるかに少なかった。